Name: microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

Este trabalho foi financiado pelos Institutos Nacionais de Saúde, números de subvenções R01NS100954 e R01NS099188.

Todos os procedimentos experimentais aqui descritos foram realizados de acordo com as diretrizes dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH), conforme aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade Metodista do Sul.
1. Revestindo a matriz multieletrísda (MEA) para gravação
<ol><li>Faça um buffer de borate de 25 mM.<ol>
<li>Dissolver 0,953 g de Na2B4O7·10 H2O em 80 mL de água destilada.</li>
		<li>Ajuste ...

Praticar e dominar o processo de dissecção de SAN é imprescindível, uma vez que o tecido é frágil e o tecido saudável é necessário para uma gravação bem sucedida. Durante a dissecção da SAN, a orientação correta é essencial para obter a região adequada do tecido. No entanto, a orientação original do coração pode ser facilmente perdida durante o processo de dissecção, o que complica esse esforço. Portanto, para garantir a orientação adequada à esquerda e à direita, o atria deve ser inspecionado...

O coração é um órgão complexo governado por influências cardíacas-intrínsecas e extrínsecas, como as que se originam no cérebro. O nódulo sinoatrial (SAN) é uma região definida no coração que abriga as células marcapasso (também conhecidas como células sinoatrial, ou células SA) responsáveis pela iniciação e perpetuação dos batimentos cardíacos mamíferos1,2. A frequência cardíaca intrínseca é a taxa impulsionada pelas células marcapasso sem influência por outras influências cardíacas ou neuro-humorais, mas medidas tradicionais de frequência cardíaca em humanos e animais vivos, como eletrocardiogramas, refletem tanto o marca-passo quanto as influências neurais no coração. A influência neural mais notável nas células SA é do sistema nervoso autônomo, que modula constantemente padrões de disparo para atender aos requisitos fisiológicos do corpo3. Apoiando essa ideia, projeções simpáticas e parassimpáticas podem ser encontradas perto da SAN4. O sistema nervoso cardíaco intrínseco (ICNS) é outra importante influência neural onde plexi ganglioado, especificamente na ária direita, inerva e regula a atividade da SAN5,6.
Entender os déficits de pacemaking é clinicamente importante, pois a disfunção pode fundamentar muitos distúrbios cardíacos, bem como contribuir para o risco de outras complicações. A síndrome do seio doente (SSS) é uma categoria de doenças caracterizadas pela disfunção do nódulo sinoatrial que impede o bom funcionamento do ritmo7,8. SSS pode apresentar sinus bradycardia, pausas sinusas, parada sinusal, bloco de saída sinoatrial, e bradidinathmias alternadas e taquiarritmias9 e pode levar a complicações, incluindo aumento do risco de derrame embólico e morte súbita8,10. Aqueles com síndrome de Brugada, uma doença cardíaca marcada pela fibrilação ventricular com risco aumentado de morte cardíaca súbita, correm maior risco de eventos arrhitogênicos se também tiverem disfunção comorbóide de SAN11,12. A disfunção sinoatrial também pode ter consequências fisiológicas além do coração. Por exemplo, a SSS tem sido observada para desencadear convulsões em um paciente devido à hipoperfusão cerebral13.
Para identificar déficits de pacemaking sinoatrial, as frequências cardíacas intrínsecas precisam ser determinadas medindo a atividade da SAN sem a influência do sistema nervoso autônomo ou fatores humorísticos. Clinicamente, isso pode ser aproximado pelo bloqueio autônomo farmacológico14,mas essa mesma técnica também pode ser aplicada em modelos mamíferos para estudar a função cardíaca intrínseca15,16. Embora essa abordagem bloqueie uma grande parte das influências neurais contribuintes e permita o exame cardíaco in vivo, ela não elimina completamente todas as influências extrínsecas no coração. Outra técnica de pesquisa usada para estudar a função cardíaca intrínseca em modelos animais são as gravações cardíacas isoladas usando corações perfumados langendorff, que normalmente envolvem medidas usando eletrogramas, ritmo ou matrizes multieletrínois epicáridas17,18,19,20. Embora essa técnica seja mais específica para a função cardíaca, pois envolve a remoção do coração do corpo, as medidas ainda podem ser influenciadas por mecanismos autoregulatórios mecano-elétricos que podem influenciar as medições intrínsecas da frequência cardíaca21. As gravações cardíacas isoladas também podem ser influenciadas pela regulação autônoma através do ICNS5,6,22,23. Além disso, manter uma temperatura fisiologicamente relevante do coração, que é fundamental para as medidas de função cardíaca, pode ser difícil em abordagens cardíacas isoladas20. Um método mais direto para estudar a função SAN é isolar especificamente o tecido SAN e medir sua atividade. Isso pode ser realizado através de tiras SAN (tecido SAN isolado) ou células-passo isoladas de SAN24,25. Ambos requerem um alto grau de treinamento técnico, já que a SAN é uma região muito pequena e altamente definida, e o isolamento celular representa um desafio ainda maior, pois a dissociação pode prejudicar a saúde geral da célula se não for realizada corretamente. Além disso, essas técnicas requerem habilidades eletrofisiológicas especializadas para registrar com sucesso a partir do tecido ou células usando microeletrodos de gravação individuais.
Neste protocolo, descrevemos uma técnica para registrar o SAN in vitro usando uma matriz de microeletríndia (MEA) para obter medições intrínsecas da frequência cardíaca. Essa abordagem tem a vantagem de tornar registros eletrofisiológicos altamente específicos acessíveis a pesquisadores sem habilidades eletrofisiológicas intensivas. Os MEAs já foram utilizados para estudar a função cardiomiócito nas culturas de cardiomiócito primário26,27,28,29,30,31,32, folhas cardíacas33,34,35,36,37,38,39, e montagems inteiras de tecido40, 41,42,43,44,45,46,47. Trabalhos anteriores também foram feitos para examinar os potenciais de campo no tecidoSAN 41,42. Aqui, fornecemos uma metodologia para usar o MEA para registrar e analisar as taxas de disparo de SAN intrínsecas murinas. Também descrevemos como essa técnica pode ser usada para testar efeitos farmacológicos de drogas em taxas de disparo intrínsecos de SAN, fornecendo um experimento amostral mostrando os efeitos de 4-aminopirridina (4-AP), um bloqueador de canal K+ canal fechado por tensão. Usando marcos anatômicos definidos, podemos registrar com precisão a SAN sem ter que realizar as extensas dissecções teciduais ou isolamentos celulares necessários em outros métodos. Embora o MEA possa ser proibitivo de custos, as gravações fornecem medidas altamente específicas e confiáveis de pacemaking que podem ser usadas em uma vasta gama de aplicações de pesquisa clínica e fisiológica.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminopyridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A78403-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm Petri Dishes</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1C</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1D</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16060-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&#183;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2, 5% CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Scissors, 4&#34;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition PC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Jenco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #2 Laminectomy Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Chamber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>49WF30</td>
			<td>Used for mouse euthanization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harp Anchor Kit</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>&#160;SHD-22CL/15 WI 64-0247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>SA48-4</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td>
			<td>NDC 63739-953-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light for Dissection Microscope</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>MI150DG 660000391014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>208337-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Head Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64HE1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Main Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64MD1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Cap</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KCAP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Pipe Holder Kit</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KPK02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 ThermoConnector</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-CP04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>&#160;Warner Instruments</td>
			<td>640246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode array (MEA)</td>
			<td>Alpha Med Scientific</td>
			<td>MED-R515A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobius Software</td>
			<td>WitWerx Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Specific software for the MED64</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320-500</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Ultigiene</td>
			<td>NDC 50989-885-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1751733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-298</td>
			<td>1/8&#39;&#39; Interior Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S671-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgruard Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14074-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets (3mL graduated)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice

O nódulo sinoatrial (SAN), localizado no átrio direito, contém as células marcapasso do coração, e a disfunção desta região pode causar taquicardia ou bradicardia. A identificação confiável de defeitos cardíacos de pacemaking requer a medição de frequências cardíacas intrínsecas, impedindo em grande parte a influência do sistema nervoso autônomo, que pode mascarar déficits de taxas. Os métodos tradicionais para analisar a função de marca-passo cardíaco intrínseco incluem bloqueio autônomo induzido por drogas para medir as frequências cardíacas in vivo, registros cardíacos isolados para medir as frequências cardíacas intrínsecas e registros sinoatrial de células-chave de remendo de células-passo sinoatrial para medir as taxas de disparo potenciais de ação espontânea. No entanto, essas técnicas mais tradicionais podem ser tecnicamente desafiadoras e difíceis de executar. Aqui, apresentamos uma nova metodologia para medir a taxa de disparo cardíaco intrínseco realizando gravações de matriz de microeletrínda (MEA) de preparações de nós sinoatrial de conjunto inteiro de camundongos. Os MEAs são compostos de múltiplos microeletrodos dispostos em um padrão semelhante à grade para gravação de potenciais de campo extracelular in vitro. O método descrito aqui tem a vantagem combinada de ser relativamente mais rápido, simples e mais preciso do que abordagens anteriores para registrar frequências cardíacas intrínsecas, ao mesmo tempo em que permite um interrogatório farmacológico fácil.

Depois de permitir que o tecido se aclimate no prato por 15 minutos, 10 traços de um min são registrados. Nosso protocolo atual registra atividade por mais de uma hora, mas registramos padrões estáveis de disparo por ≥4 h em dados não mostrados aqui. Se uma preparação experimental for boa para a coleta de dados, cada canal de gravação deve exibir formas de onda recorrentes consistentes e espaçadas uniformemente (ou seja, picos) de forma uniforme para um determinado canal(Figura 11D</stron...

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Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

Este protocolo visa descrever uma nova metodologia para medir a taxa de disparo cardíaco intrínseco usando o registro de matriz de microeletrínda de todo o tecido do nódulo sinoatrial para identificar defeitos de marcação de ritmo em camundongos. Agentes farmacológicos também podem ser introduzidos neste método para estudar seus efeitos no ritmo intrínseco.

Microelectrode Array Gravação da Taxa de Disparo de Nó Sinoatrial para identificar defeitos intrínsecos de marcação cardíaca em camundongos

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

Medir a frequência cardíaca intrínseca é um importante indicador de saúde cardíaca. Esta técnica mede com precisão essa taxa, excluindo a maioria das influências confusas no nó sinoatrial. O registro mea de frequência cardíaca intrínseca captura dados precisos de taxa de disparo semelhantes a gravações unicelulares sem treinamento extenso de eletrofisiologia.Os indivíduos que utilizam essa técnica podem ter dificuldade em obter preparações saudáveis de tecidos em experimentos iniciais, por isso praticam a dissecção e otimizam os buffers e as configurações de coleta de dados antes de iniciar a coleta real de dados. Demonstrando o procedimento estarão os doutores Man Si e Praveen Kumar, pesquisadores de pós-doutorado no meu laboratório. Comece segurando a pele do rato eutanizado com um hemostato e use uma tesoura cirúrgica para fazer uma incisão transversal na pele logo abaixo do fundo da caixa torácica do arco costal esquerdo para o arco costal direito.Use uma tesoura cirúrgica para cortar o peritônio e separar cuidadosamente o fígado do diafragma sem cortar o fígado para evitar sangramento excessivo. Incise o diafragma ao longo do tórax para expor a cavidade torácica. Use a tesoura cirúrgica para cortar as paredes laterais da caixa torácica das bordas dos arcos costais até as clavículas para expor o coração e, em seguida, use uma agulha de seringa calibre 23 para fixar a caixa torácica sobre o ombro.Use uma pipeta de transferência para soltar a solução quente heparinizada completa de Tyrode no coração para mantê-la úmida. Segure os pulmões com fórceps graefe extra finos e corte a traqueia com uma tesoura cirúrgica para remover os pulmões. Para remover o coração, segure o ápice do coração com fórceps graefe extra finos e corte a aorta e a veia cava inferior com uma tesoura cirúrgica.Transfira o coração para uma placa de Petri contendo elastômero de silicone curado e use uma pipeta de transferência para banhar o coração com dois a três mililitros de solução completa de Tyrode heparinizada quente. Coloque o ápice do coração no prato com um pino de dissecção. Segure a veia cava inferior com o a fórceps de laminectomia Dumont 2.Insira uma agulha de seringa de calibre 22 através da cava vena inferior e superior para localizar sua posição no átrio direito, que também identifica a posição aproximada do nó sinoatrial. Segure o apêndice atrial direito com fórceps de laminectomia Dumont 2, e coloque um pino de dissecção através do apêndice atrial direito para mantê-lo no lugar. Repita o mesmo procedimento para o apêndice atrial esquerdo e remova a agulha de seringa que abrange a cavae vena.Use a tesoura Castroviejo para remover o ápice do coração fazendo uma incisão transversal através dos ventrículos para liberar o sangue do coração, em seguida, lave o coração adicionando a solução quente heparinizada completa de Tyrode. Use a tesoura Castroviejo para cortar ao longo do septo atrioventricular até que a ária seja separada dos ventrículos e mantenha a incisão mais próxima do ventrículo. Corte ao longo do septo interarterial para remover o átrio esquerdo.Coloque os pinos de dissecção na periferia do átrio direito para deixá-lo liso. Remova qualquer gordura, vasos ou tecido restantes do átrio usando a tesoura Castroviejo e localize o nó sinoatrial no átrio direito. Adicione a solução da Tyrode ao modelo de solução de entrada e ligue o fluxo de gás carbógeno para oxigenar a solução do Tyrode.Defina a bomba peristáltica para 25 RPM, o que dá uma taxa de fluxo de dois mililitros por minuto. Depois de ligar a bomba, certifique-se de que o buffer não está vazando do sistema e coloque o controlador de temperatura em 37 graus Celsius. Use o Dumont 55 fórceps para transferir o tecido dissecado da placa de Petri dissecando para a grade de matriz de microeletrodos.Posicione suavemente o tecido com um pincel macio para sobrepor a região do nó sinoatrial da grade de eletrodos. Em seguida, coloque a malha sobre o tecido usando os fórceps ósseos ou quaisquer fórceps curvos. Usando os fórceps ósseos, posicione a âncora da harpa na malha para manter tudo no lugar.Disponha o prato de matriz de microeletrodes na placa do conector. Coloque cuidadosamente a tampa de perfusão no prato de matriz de microeletrídula sem perturbar a âncora da fatia de harpa e fixar a lacuna de perfusão com fita. Ligue o amplificador e configure um fluxo de trabalho para a gravação no software.Selecione beat_recording. modelo moflo. Abra-o e defina o número de vestígios, duração do traço, intervalo de rastreamento, tensão de entrada, taxa de amostragem e outros parâmetros de gravação de acordo com as condições de gravação desejadas.Clique no botão gravar e reproduzir para iniciar a gravação e adquirir dados para 10 traços de duração de um minuto com dois minutos de intervalos entre os traços. Pause a bomba e troque a tubulação de entrada da bomba da solução de gravação normal para a solução de Tyrode contendo a droga desejada de escolha. Reinicie a bomba e retome a gravação.Uma vez que a solução de Tyrode infundida com drogas tenha atingido o tecido, registos da mesma maneira que feito anteriormente para as gravações da linha de base. Tire uma foto final do posicionamento do tecido na matriz de microeletrodos. Abra o arquivo de dados gravado salvo no modelo de análise de frequência beat do software de análise.Clique na reprodução e permita que toda a gravação seja executada para visualização de dados e, em seguida, atribua parâmetros de análise apropriados. Selecione os canais a serem incluídos na análise e defina os valores de limiar de amplitude maxima ou amplitude da amplitude desejados para identificação automatizada de pico de forma de onda. Clique no ícone de reprodução novamente para refazer o conjunto de dados e confirmar que os parâmetros de análise são apropriados para uma extração de pico.Para análise, identifique os três traços consecutivos mais estáveis que apresentam uma taxa de espancamento estável para cada traço na maioria dos canais durante o período de base do experimento e outros três traços estáveis consecutivos durante o período de exposição à droga. Clique no ícone de reprodução e gravação para iniciar a análise. Os dados foram coletados de um rato suíço preto de 45 dias para a medição da frequência do nódulo sinoatrial.As formas de onda com diferentes formas e amplitudes foram observadas em diferentes canais e todos os canais apresentaram intervalos interspike idênticos e frequências de disparo. No entanto, o grau de contato tecidual com o eletrodo também pode influenciar as características da forma de onda, como amplitude. Dos 10 traços registrados, foram escolhidos os três canais consecutivos com frequência de batida estável e intervalo de interspike para análise posterior.Os padrões de pico extraídos ruins devem estar ausentes, mas se presentes são influenciados pelo ruído ou instáveis. As formas de onda que correspondem a batimentos cardíacos individuais refletem atividade de pacemaking cardíaco intrínseco. O sistema de matriz de microeletrodos permite fácil aplicação de agentes medicamentosos para analisar os efeitos farmacológicos.A taxa de disparo intrínseca de três vestígios selecionados em todos os 64 canais foi encontrada em aproximadamente 320 batidas por minuto nos dados amostrais. A introdução de 4-aminopirimidina aumentou os intervalos de interspike como esperado, o que diminuiu a frequência de batidas de 320 para 210 batidas por minuto. Para coletar dados confiáveis para análise, é importante confirmar que o tecido é saudável durante o registro, verificando se os traços são estáveis e atendem aos critérios padrão.Os MEAs podem ser usados para registrar atividade cardíaca em outras regiões do coração, permitindo uma caracterização detalhada específica da região que é favorável a estudar os efeitos da manipulação genética e farmacológica.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Medicina

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Infarto do miocárdio em ratos neonatais, um modelo de regeneração cardíaca

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