Name: microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00
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Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud, números de subvención R01NS100954 y R01NS099188.

Todos los procedimientos experimentales descritos aquí se han llevado a cabo de acuerdo con las directrices de los Institutos Nacionales de Salud (NIH), según lo aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad Metodista del Sur.
1. Recubrimiento de la matriz multielectrodo (MEA) para la grabación
<ol><li>Haga un búfer de borato de 25 mM.<ol>
<li>Disolver 0,953 g de Na2B4O7·10 H2O en 80 mL de agua de...

Practicar y dominar el proceso de disección de SAN es imperativo ya que el tejido es frágil y el tejido sano es necesario para una grabación exitosa. Durante la disección san, la orientación correcta es esencial para obtener la región adecuada del tejido. Sin embargo, la orientación original del corazón puede perderse fácilmente durante el proceso de disección, lo que complica este esfuerzo. Por lo tanto, para garantizar la orientación adecuada de izquierda a derecha, las aurículas deben inspeccionarse visual...

El corazón es un órgano complejo gobernado por influencias cardíaco-intrínsecas y extrínsecas como las que se originan en el cerebro. El nódulo sinoauricular (SAN) es una región definida en el corazón que alberga las células marcapasos (también conocidas como células sinoauriculares o células SA) responsables de la iniciación y perpetuación de los latidos del corazón de los mamíferos1,2. La frecuencia cardíaca intrínseca es la velocidad impulsada por las células marcapasos sin influencia de otras influencias cardíacas o neuro-humorales, pero las medidas tradicionales de la frecuencia cardíaca en humanos y animales vivos, como los electrocardiogramas, reflejan tanto el marcapasos como las influencias neuronales en el corazón. La influencia neuronal más notable en las células SA es del sistema nervioso autónomo, que modula constantemente los patrones de disparo para satisfacer los requisitos fisiológicos del cuerpo3. Apoyando esta idea, se pueden encontrar proyecciones simpáticas y parasimpáticas cerca del SAN4. El sistema nervioso cardíaco intrínseco (ICNS) es otra influencia neuronal importante donde los plexios ganglionados, específicamente en las aurículas derechas, inervan y regulan la actividad del SAN5,6.
Comprender los déficits de marcapasos es clínicamente importante, ya que la disfunción puede ser la base de muchos trastornos cardíacos, así como contribuir al riesgo de otras complicaciones. El síndrome del seno enfermo (SSS) es una categoría de enfermedades caracterizadas por la disfunción del nódulo sinoauricular que impide el marcapasos adecuado7,8. El SSS puede presentarse con bradicardia sinusal, pausas sinusales, paro sinusal, bloqueo de la salida sinoauricular y bradiaritmias y taquiarritmias alternas9 y puede conducir a complicaciones que incluyen un mayor riesgo de accidente cerebrovascular embólico y muerte súbita8,10. Las personas con síndrome de Brugada, un trastorno cardíaco marcado por fibrilación ventricular con un mayor riesgo de muerte súbita cardíaca, tienen un mayor riesgo de eventos arritmogénicos si también tienen disfunción SAN comórbida11,12. La disfunción sinoauricular también puede tener consecuencias fisiológicas más allá del corazón. Por ejemplo, se ha observado que el SSS desencadena convulsiones en un paciente debido a la hipoperfusión cerebral13.
Para identificar los déficits de marcapasos sinoauriculares, las frecuencias cardíacas intrínsecas deben determinarse midiendo la actividad de la SAN sin la influencia del sistema nervioso autónomo o los factores humorales. Clínicamente, esto puede ser aproximado por bloqueo autonómico farmacológico14,pero esta misma técnica también puede ser aplicada en modelos de mamíferos para estudiar la función cardíaca intrínseca15,16. Si bien este enfoque bloquea una gran parte de las influencias neuronales que contribuyen y permite el examen cardíaco in vivo, no elimina por completo todas las influencias extrínsecas en el corazón. Otra técnica de investigación utilizada para estudiar la función cardíaca intrínseca en modelos animales son los registros cardíacos aislados utilizando corazones perfundidos por Langendorff, que generalmente implican mediciones utilizando electrogramas, estimulación o matrices de multielectrodos epicárdicos17,18,19,20. Si bien esta técnica es más específica para la función cardíaca, ya que implica la eliminación del corazón del cuerpo, las mediciones aún pueden estar influenciadas por mecanismos autorreguladores mecano-eléctricos que podrían influir en las mediciones intrínsecas de la frecuencia cardíaca21. Las grabaciones cardíacas aisladas también pueden estar influenciadas por la regulación autonómica a través delCIE 5,6,22,23. Además, mantener una temperatura fisiológicamente relevante del corazón, que es crítica para las mediciones de la función cardíaca, puede ser difícil en aproximaciones cardíacas aisladas20. Un método más directo para estudiar la función de SAN es aislar específicamente el tejido SAN y medir su actividad. Esto se puede lograr a través de tiras san (tejido SAN aislado) o células de marcapasos SAN aisladas24,25. Ambos requieren un alto grado de capacitación técnica, ya que el SAN es una región muy pequeña y altamente definida, y el aislamiento celular plantea un desafío aún mayor, ya que la disociación puede dañar la salud general de la célula si no se realiza correctamente. Además, estas técnicas requieren habilidades electrofisiológicas expertas para registrar con éxito desde el tejido o las células utilizando microelectrodos de registro individuales.
En este protocolo, describimos una técnica para registrar el SAN in vitro mediante el uso de una matriz de microelectrodos (MEA) para obtener mediciones intrínsecas de la frecuencia cardíaca. Este enfoque tiene la ventaja de hacer que los registros electrofisiológicos altamente específicos sean accesibles para los investigadores que carecen de habilidades electrofisiológicas intensivas. Los AMUMA se han utilizado previamente para estudiar la función de los cardiomiocitos en cultivos de cardiomiocitos primarios26,27,28,29,30,31,32,hojas cardíacas33,34,35,36,37,38,39y montajes de tejido entero40, 41,42,43,44,45,46,47. También se han realizado trabajos previos para examinar los potenciales de campo en el tejido SAN41,42. Aquí, proporcionamos una metodología para usar el MEA para registrar y analizar las tasas de disparo de SAN intrínsecas murinas. También describimos cómo esta técnica se puede utilizar para probar los efectos farmacológicos de los fármacos sobre las tasas de disparo intrínsecas de SAN proporcionando un experimento de muestra que muestra los efectos de la 4-aminopiridina (4-AP), un bloqueador de canales K+ controlado por voltaje. Utilizando puntos de referencia anatómicos definidos, podemos registrar con precisión el SAN sin tener que realizar las extensas disecciones de tejido o aislamientos celulares requeridos en otros métodos. Si bien el MEA puede ser prohibitivo, las grabaciones proporcionan medidas altamente específicas y confiables de marcapasos que se pueden usar en una amplia gama de aplicaciones de investigación clínica y fisiológica.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminopyridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A78403-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm Petri Dishes</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1C</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1D</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16060-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&#183;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2, 5% CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Scissors, 4&#34;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition PC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Jenco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #2 Laminectomy Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Chamber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>49WF30</td>
			<td>Used for mouse euthanization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harp Anchor Kit</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>&#160;SHD-22CL/15 WI 64-0247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>SA48-4</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td>
			<td>NDC 63739-953-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light for Dissection Microscope</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>MI150DG 660000391014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>208337-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Head Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64HE1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Main Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64MD1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Cap</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KCAP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Pipe Holder Kit</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KPK02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 ThermoConnector</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-CP04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>&#160;Warner Instruments</td>
			<td>640246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode array (MEA)</td>
			<td>Alpha Med Scientific</td>
			<td>MED-R515A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobius Software</td>
			<td>WitWerx Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Specific software for the MED64</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320-500</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Ultigiene</td>
			<td>NDC 50989-885-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1751733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-298</td>
			<td>1/8&#39;&#39; Interior Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S671-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgruard Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14074-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets (3mL graduated)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice

El nódulo sinoauricular (SAN), ubicado en la aurícula derecha, contiene las células marcapasos del corazón, y la disfunción de esta región puede causar taquicardia o bradicardia. La identificación confiable de los defectos cardíacos de marcapasos requiere la medición de las frecuencias cardíacas intrínsecas mediante la prevención en gran medida de la influencia del sistema nervioso autónomo, que puede enmascarar los déficits de tasa. Los métodos tradicionales para analizar la función intrínseca del marcapasos cardíaco incluyen bloqueo autónomo inducido por medicamentos para medir las frecuencias cardíacas in vivo, registros cardíacos aislados para medir las frecuencias cardíacas intrínsecas y registros de tira sinoauricular o pinza de parche de una sola célula de células de marcapasos sinoauriculares para medir las tasas de disparo potencial de acción espontánea. Sin embargo, estas técnicas más tradicionales pueden ser técnicamente desafiantes y difíciles de realizar. Aquí, presentamos una nueva metodología para medir la velocidad de disparo cardíaco intrínseca mediante la realización de registros de matriz de microelectrodos (MEA) de preparaciones de ganglios sinoauriculares de montaje completo de ratones. Los AMUMA están compuestos por múltiples microelectrodos dispuestos en un patrón similar a una cuadrícula para registrar potenciales de campo extracelular in vitro. El método descrito en este documento tiene la ventaja combinada de ser relativamente más rápido, más simple y más preciso que los enfoques anteriores para registrar las frecuencias cardíacas intrínsecas, al tiempo que permite un fácil interrogatorio farmacológico.

Después de permitir que el tejido se aclimate en el plato durante 15 minutos, se registran 10 rastros de un minuto. Nuestro protocolo actual registra la actividad durante más de una hora, pero hemos registrado patrones de disparo estables durante ≥4 h en datos no publicados que no se muestran aquí. Si una preparación experimental es buena para la recopilación de datos, cada canal de grabación debe exhibir formas de onda recurrentes consistentes y espaciadas uniformemente (es decir, picos) de forma uniforme para u...

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Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

Este protocolo tiene como objetivo describir una nueva metodología para medir la velocidad de disparo cardíaco intrínseca utilizando el registro de la matriz de microelectrodos de todo el tejido del ganglio sinoauricular para identificar defectos de marcapasos en ratones. Los agentes farmacológicos también se pueden introducir en este método para estudiar sus efectos sobre el marcapasos intrínseco.

Registro de la matriz de microelectrodos de la tasa de disparo del nódulo sinoauricular para identificar defectos intrínsecos de marcapasos cardíacos en ratones

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

La medición de la frecuencia cardíaca intrínseca es un indicador importante de la salud cardíaca. Esta técnica mide con precisión esta tasa mientras excluye la mayoría de las influencias de confusión en el nódulo sinoauricular. El registro MEA de la frecuencia cardíaca intrínseca captura datos precisos de la velocidad de disparo similares a los registros de una sola célula sin un entrenamiento electrofisiológico extenso.Las personas que usan esta técnica pueden tener dificultades para obtener preparaciones de tejido sano en los primeros experimentos, así que practique la disección y optimice los búferes y la configuración de recopilación de datos antes de comenzar la recopilación de datos reales. Demostrando el procedimiento estarán los doctores Man Si y Praveen Kumar, investigadores postdoctorales en mi laboratorio. Comience sosteniendo la piel del ratón eutanasiado con un hemostático y use tijeras quirúrgicas para hacer una incisión transversal en la piel justo debajo de la parte inferior de la caja torácica desde el arco costal izquierdo hasta el arco costal derecho.Use tijeras quirúrgicas para abrir el peritoneo y separe cuidadosamente el hígado del diafragma sin cortar el hígado para evitar el sangrado excesivo. Incite el diafragma a lo largo del tórax para exponer la cavidad torácica. Use las tijeras quirúrgicas para cortar las paredes laterales de la caja torácica desde los bordes de los arcos costales hasta las clavículas para exponer el corazón, luego use una aguja de jeringa de calibre 23 para fijar la caja torácica sobre el hombro.Use una pipeta de transferencia para dejar caer la solución completa de Tyrode heparinizada caliente sobre el corazón para mantenerlo húmedo. Sostenga los pulmones con pórceps Graefe extra finos y arte la tráquea con tijeras quirúrgicas para extirpar los pulmones. Para extraer el corazón, sostenga el ápice del corazón con pórceps Graefe extra finos y corte la aorta y la vena cava inferior con tijeras quirúrgicas.Transfiera el corazón a una placa de Petri que contenga elastómero de silicona curado y use una pipeta de transferencia para bañar el corazón con dos o tres mililitros de solución completa de Tyrode heparinizada caliente. Conecte el ápice del corazón al plato con un pasador de disección. Sostenga la vena cava inferior con las pórceps de laminectomía Dumont 2.Inserte una aguja de jeringa de calibre 22 a través de la vena cava inferior y superior para ubicar su posición en la aurícula derecha, que también identifica la posición aproximada del nódulo sinoauricular. Sostenga el apéndice auricular derecho con pinzas de laminectomía Dumont 2 y coloque un pasador de disección a través del apéndice auricular derecho para mantenerlo en su lugar. Repita el mismo procedimiento para el apéndice auricular izquierdo y, a continuación, retire la aguja de la jeringa que abarca la vena cava.Use tijeras Castroviejo para eliminar el ápice del corazón haciendo una incisión transversal a través de los ventrículos para liberar la sangre del corazón, luego lave el corazón agregando una solución completa de Tyrode heparinizada caliente. Use tijeras Castroviejo para cortar a lo largo del tabique auriculoventricular hasta que las aurículas se separen de los ventrículos y mantengan la incisión más cerca del ventrículo. Corte a lo largo del tabique interarterial para eliminar la aurícula izquierda.Coloque los pasadores de disección en la periferia de la aurícula derecha para que que queden planos. Retire cualquier resto de grasa, vasos o tejido de la aurícula con las tijeras Castroviejo y localice el nódulo sinoauricular en la aurícula derecha. Agregue la solución de Tyrode al modelo de solución de entrada y active el flujo de gas carbógeno para oxigenar la solución de Tyrode.Configure la bomba peristáltica a 25 RPM, lo que da un caudal de dos mililitros por minuto. Después de arrancar la bomba, asegúrese de que el amortiguador no tenga fugas del sistema y ajuste el controlador de temperatura a 37 grados centígrados. Utilice las pórceps Dumont 55 para transferir el tejido diseccionado de la placa de Petri de disección a la rejilla de matriz de microelectrodos.Coloque suavemente el tejido con un pincel suave para superponer la región del nódulo sinoauricular de la rejilla del electrodo. Luego coloque la malla sobre el tejido usando las pórceps óseas o cualquier pórceps curvo. Usando las forrzas óseas, coloque el ancla del arpa en la malla para mantener todo en su lugar.Coloque el plato de matriz de microelectrodos en la placa conectora. Coloque cuidadosamente la tapa de perfusión en el plato de matriz de microelectrodos sin perturbar el anclaje de la rodaja de arpa y asegure el espacio de perfusión con cinta adhesiva. Encienda el amplificador y configure un flujo de trabajo para la grabación en el software.Seleccione beat_recording. plantilla moflo. Ábralo y establezca el número de trazas, la duración de la traza, el intervalo de traza, el voltaje de entrada, la frecuencia de muestreo y otros parámetros de grabación de acuerdo con las condiciones de grabación deseadas.Haga clic en el botón de grabación y reproducción para iniciar la grabación y adquirir datos para 10 trazas de un minuto de duración con dos minutos de intervalos entre las trazas. Detenga la bomba y cambie el tubo de entrada de la bomba de la solución de grabación normal a la solución de Tyrode que contiene el medicamento deseado de su elección. Reinicie la bomba y reanude la grabación.Una vez que la solución de Tyrode con infusión de fármaco haya llegado al tejido, registre 10 trazas de la misma manera que se hizo anteriormente para los registros de referencia. Tome una imagen final del posicionamiento del tejido en la matriz de microelectrodos. Abra el archivo de datos grabados guardados en la plantilla de análisis de frecuencia de latido del software de análisis.Haga clic en la reproducción y permita que se ejecute toda la grabación para la visualización de datos y luego asigne los parámetros de análisis apropiados. Seleccione los canales que se incluirán en el análisis y establezca los valores máximos de amplitud o umbral de amplitud mínima deseados para la identificación automatizada del pico de la forma de onda. Haga clic de nuevo en el icono de reproducción para volver a ejecutar el conjunto de datos y confirmar que los parámetros de análisis son adecuados para una extracción de picos.Para el análisis, identifique los tres rastros consecutivos más estables que exhiben una tasa de latido estable para cada rastro en la mayoría de los canales durante el período de referencia del experimento y otros tres rastros estables consecutivos durante el período de exposición al medicamento. Haga clic en el icono de reproducción y grabación para iniciar el análisis. Los datos se recopilaron de un ratón suizo negro macho de tipo salvaje de 45 días de edad para la medición de la frecuencia de latido del nodo sinoauricular.Las formas de onda con diferentes formas y amplitudes se observaron en diferentes canales y todos los canales mostraron intervalos de intercalación idénticos y frecuencias de disparo. Sin embargo, el grado de contacto del tejido con el electrodo también puede influir en las características de la forma de onda, como la amplitud. De las 10 trazas registradas, se eligieron los tres canales consecutivos con frecuencia de latido estable e intervalo entre canales para un análisis posterior.Los malos patrones de picos extraídos deben estar ausentes, pero si están presentes están influenciados por el ruido o son inestables. Las formas de onda que corresponden a los latidos cardíacos individuales reflejan la actividad intrínseca de marcapasos cardíacos. El sistema de matriz de microelectrodos permite una fácil aplicación de agentes farmacológicos para analizar los efectos farmacológicos.Se encontró que la velocidad de disparo intrínseca de tres trazas seleccionadas en los 64 canales era de aproximadamente 320 latidos por minuto en los datos de muestreo. La introducción de 4-aminopirimidina aumentó los intervalos entre intervalos como se esperaba, lo que disminuyó la frecuencia de latido de 320 a 210 latidos por minuto. Para recopilar datos confiables para el análisis, es importante confirmar que el tejido está sano durante el registro verificando que los rastros sean estables y cumplan con los criterios estándar.Los AMUMA se pueden utilizar para registrar la actividad cardíaca en otras regiones del corazón, lo que permite una caracterización detallada específica de la región que es susceptible de estudiar los efectos de la manipulación genética y farmacológica.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Investigación

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Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

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Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Entrega de mediada por Virus adeno-asociado de CRISPR para Gene cardiaco en ratones

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Autonomic Function Following Concussion in Youth Athletes: An Exploration of Heart Rate Variability Using 24-hour Recording Methodology

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Transdermal Measurement of Glomerular Filtration Rate in Mice

Transdérmica de medición de la tasa de filtración Glomerular en los ratones

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