Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81973607 و 81573992).

تتوافق التحقيقات الموصوفة مع المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام المختبر التابعة للمجلس الوطني للبحوث وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات بجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي. عند إجراء التجارب ، يلزم استخدام معاطف المختبر وقفازات النتريل التي تستخدم لمرة واحدة والنظ...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

إعداد محلول كيميائي نباتي هو الأساس لتطبيقه في الجسم الحي. في هذا البروتوكول ، تم توضيح تحضير محلول نارينجينين باستخدام مذيبات مختلفة ، مثل الإيثانول ، DMSO ، Tween 80 ، و 0.9٪ PS. يحتاج المحلول في حالة الذوبان تماما إلى مزيد من المراقبة من خلال السماح له بالبقاء في درجة حرارة الغرفة لبضع ساعا?...

مع زيادة الدراسات المتعلقة باستخدام المركبات الكيميائية النباتية لفحص الأدوية ، فإن مناهج إعداد المحاليل الكيميائية النباتية لتقييم آثارها المثلى تستحق الاهتمام بها. يجب مراعاة العديد من الجوانب مثل منهجية الذوبان والجرعة والتركيز عند تحضير المركب1.
يستخدم الذوبان القائم على المذيبات على نطاق واسع لإعداد المركب العضوي1. تشمل المذيبات شائعة الاستخدام الماء والزيت وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) والميثانول والإيثانول وحمض الفورميك والمراهقين والجلسرين وما إلى ذلك2. على الرغم من أن التعليق بمواد غير مذابة يكون مقبولا عندما يتم إعطاء المركب عن طريق التجويف المعدي ، إلا أن المذاب المذاب بالكامل أمر بالغ الأهمية للإعطاء عن طريق الوريد. نظرا لأن محلول الزيت والتعليق والمستحلب يمكن أن يسبب انسدادات شعرية ، يقترح وجود محلول مائي لإعداد المركب ، خاصة عند إعطاء الحقن في الوريد والعضل وداخل الصفاق3.
يختلف نطاق الجرعة الفعالة بين المركبات وحتى بين الأمراض التي تعالج بنفس المركب. تعتمد تحديد الجرعة الفعالة والآمنة والتركيز على الأدبيات والتجارب الأولية4. هنا ، يتم توضيح إعداد مركب naringenin كمثال.
تمت دراسة Naringenin (4،5،7-trihydroxy-flavanone) ، وهو مركب بوليفينول ، في علاج الأمراض ل hepatoprotective5 ، ومضاد لمرض السكر6 ، ومضاد للالتهابات7 ، وأنشطة مضادة للأكسدة8. بالنسبة للتطبيقات في الجسم الحي ، يشيع استخدام تناول نارينجينين عن طريق الفم. أفادت الدراسات السابقة عن تحضير محلول نارينجينين في 0.5٪ -1٪ كربوكسي ميثيل السليلوز ، وجرعة 0.5٪ ميثيل سلولوز ، و 0.01٪ DMSO ، ومحلول ملحي فسيولوجي (PS) عند 50-100 مجم / كجم ، يتم إعطاؤه عن طريق التجويف الفموي9،10،11،12. إلى جانب ذلك ، أبلغت دراسات أخرى عن مكملات نارينجينين مع تشاو بنسبة 3٪ (بالوزن / الوزن) للتناول الفموي بجرعة 3.6 جم / كجم / يوم13,14. وقد أبلغت الدراسات أيضا عن استخدام الإيثانول (0.5٪ v / v) و PS و DMSO لإذابة نارينجينين للحقن داخل الصفاق عند 10-50 مجم / كجم15،16،17،18. في دراسة لصرع الفص الصدغي ، تلقت الفئران حقنة نارينجينين معلقة في 0.25٪ كربوكسي ميثيل السليلوز المذاب في PS19. على الرغم من أن هذه الدراسات تشير إلى استخدام مذيبات مختلفة لإعداد محاليل نارينجينين ، إلا أنه لم يتم الإبلاغ عن مزيد من التفاصيل ، مثل حالة الذوبان واستجابة الحيوان.
يقدم هذا البروتوكول إجراء لإعداد محلول نارينجينين للتطبيق في الجسم الحي في هشاشة العظام الناجمة عن مرض السكري. يتضمن تحضير محلول الحقن تحضير المذيبات والمركبات وتقدير الجرعة وعملية الذوبان والترشيح. تم تحديد الجرعة بناء على أبحاث الأدبيات والتجارب الأولية من خلال مراقبة الفئران بعد إعطاء الحقن كل يوم لمدة 3 أيام وتعديل الجرعة وفقا لسلوكيات الفئران. تم إعطاء التركيز النهائي المختار (20 مغ / كغ من وزن الجسم) داخل الصفاق 5 أيام في الأسبوع لمدة 8 أسابيع في نظام غذائي غني بالدهون والفئران السكرية التي يسببها الستربتوزوتوسين (STZ)20,21. تم تقييم آثار نارينجينين في هشاشة العظام السكري عن طريق اختبار الجلوكوز في الدم ، والتصوير المقطعي المحوسب الدقيق ، وتلطيخ حمض الفوسفاتيز المقاوم للطرطرات (TRAP) ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA).
بشكل عام ، لوحظ أن نارينجينين في نطاق تركيز 40-400 ملغم / مل لم يذوب تماما في الإيثانول أو DMSO أو 5٪ (الإيثانول أو DMSO) بالإضافة إلى 95٪ PS (v / v). ومع ذلك ، يذوب نارينجينين تماما في خليط من 3.52٪ DMSO و 3.52٪ توين 80 و 92.96٪ PS. سيساعد الإجراء التفصيلي الباحثين على تحضير المركب كمحلول حقن للتطبيق في الجسم الحي .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

يعد تحضير محلول مركب (كيميائي نباتي) خطوة يتم التغاضي عنها ولكنها حاسمة قبل تطبيقه في دراسات مثل فحص الأدوية. الذوبان الكامل للمركب ضروري للاستخدام الآمن والنتائج المستقرة نسبيا. هنا ، يتم عرض بروتوكول لإعداد محلول نارينجينين وإدارته داخل الصفاق في نظام غذائي عالي الدهون ونموذج السكري الناجم عن الستربتوزوتوسين (STZ) كمثال. تم استخدام كمية صغيرة من نارينجينين (3.52-6.69 مجم) لاختبار ذوبانه في المذيبات ، بما في ذلك الإيثانول وثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) و DMSO بالإضافة إلى Tween 80 المعاد تشكيله في محلول ملحي فسيولوجي (PS) ، على التوالي. يتم تحديد الذوبان الكامل للمركب من خلال مراقبة لون المحلول ، أو وجود رواسب بعد الطرد المركزي (2000 × جم لمدة 30 ثانية) ، أو السماح للمحلول بالوقوف لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT). بعد الحصول على مركب مستقر / محلول كيميائي نباتي ، يمكن تحضير التركيز / الكمية النهائية للمركب المطلوب للدراسات في الجسم الحي في محلول مخزون مذيب فقط (بدون PS) ، ثم تخفيفه / خلطه مع PS حسب الرغبة. تم تقييم التأثيرات المضادة لهشاشة العظام للنارينجينين في الفئران (الإعطاء داخل الصفاق عند 20 مغ/كغ من وزن الجسم، 2 مغ/مل) عن طريق قياس نسبة الجلوكوز في الدم، وكتلة العظام (التصوير المقطعي المحوسب الدقيق)، ومعدل ارتشاف العظام (تلطيخ TRAP وELISA). سيستفيد الباحثون الذين يبحثون عن مستحضرات مفصلة للمحلول العضوي / الكيميائي النباتي من هذه التقنية.

تم العثور على وزن الجسم للفئران السكرية التي تتغذى على نظام غذائي عالي الدهون و STZ لينخفض بالمقارنة مع المجموعات الضابطة من 0-8 أسابيع بعد العلاج STZ. كان فقدان الوزن للفئران المعالجة بنارينجينين كبيرا مقارنة بالفئران غير المعالجة (مجموعة STZ) في الأسبوع 4. تم إعطاء مجموعات التحكم ومجموعات STZ ب?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

هنا ، يقدم البروتوكول تحضير محلول نارينجينين للإعطاء داخل الصفاق في الجسم الحي . يذوب نارينجينين بالكامل في خليط من ثنائي ميثيل سلفوكسيد وتوين 80 والمالحة. تم تقييم التأثيرات المضادة لهشاشة العظام للنارينجينين عن طريق اختبار الجلوكوز في الدم ، وتلطيخ الفوسفاتيز الحمضي المقاوم للطرطرات ، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم.

تحضير محلول نارينجينين للتطبيق في الجسم الحي

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

مع تزايد الدراسات المتعلقة بالمكونات الكيميائية النباتية لنهج فحص الأدوية لإعداد محلول كيميائي نباتي لتقييم التأثيرات المثلى ، كنت أولي اهتماما لمزايا هذا البروتوكول كعملية بسيطة وتكلفة منخفضة. سيفيد هذا البروتوكول الباحثين الذين يتعاملون مع فحص الأدوية في علم الأدوية. نقترح البدء بكمية صغيرة من مركب كيميائي نباتي للتجارب الأولية ، مع مراعاة تكلفة الاستهلاك.ثانيا ، يوصى باستخدام حقنة الأنسولين على حقنة عادية لتحضير ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في الإيثانول ، قم بوزن 3.52 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب 2 ملليلتر. قم بتدوير الأنبوب بسرعة لتسوية المسحوق في قاع الأنبوب. بعد ذلك ، أضف 8.8 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى الأنبوب لتحضير محلول بنسبة 0.5٪.ثم أضف 79.2 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى الأنبوب لتحضير محلول 5٪. بعد ذلك، أضف 1.672 ملليلتر من محلول ملحي فسيولوجي بنسبة 0.9٪ إلى الأنبوب الذي يحتوي على محلول 5٪. هذا سوف ينتج مستحلب.ثم رفضت أجهزة الطرد المركزي الأنبوب للتحقق مما إذا كان النارينجينين يذوب تماما في المحلول. قد تظهر رواسب بيضاء من نارينجينين غير المذاب في المحلول. بعد ذلك ، لتحضير 2 ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في DMSO ، قم بوزن 3.95 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب 2 ملليلتر.بعد الدوران السريع ، أضف 9.8 ملليلتر من DMSO إلى الأنبوب لتحضير محلول 8.5٪. ثم أضف 88.2 ميكرولتر من DMSO إلى الأنبوب لتحضير محلول 5٪. بعد ذلك ، أضف 1.877 ملليلتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ إلى المحلول.سيؤدي ذلك إلى مستحلب. الطرد المركزي الحل للتحقق مما إذا كان نارينجينين قد تم إذابته تماما. قد تظهر الرواسب البيضاء للنارينجينين غير المذاب في المحلول.بعد ذلك ، لتحضير ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في توين 80 و DMSO ، قم بوزن 6.69 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب سعة خمسة ملليلتر. قم بتدوير الأنبوب بسرعة ، وأضف 117.7 ميكرولتر من DMSO لتحضير محلول 3.5٪. ثم أضف 117.7 ميكرولتر من توين 80 إلى المحلول للحصول على تركيز 3.5٪ توين 80 و 3.5٪ DMSO.أضف هذا المحلول ببطء إلى أنبوب آخر سعة خمسة ملليلتر يحتوي على 3109.6 ميكرولتر من محلول ملحي 0.9٪ ورجه جيدا للحصول على محلول نارينجينين واضح. بعد ساعتين ، سيبقى المحلول واضحا دون أي رواسب مرئية. لإدارة محلول نارينجينين ، ارفع فأرا أسود من طراز C57 يبلغ من العمر خمسة أسابيع من قاعدة ذيله وضعه على سطح صلب مع وضع ذيله للخلف برفق.بعد ذلك ، أمسك الرقبة خلف الأذنين بالإبهام الأيسر والسبابة وضع الذيل بين الإصبع الصغير والإصبع. حافظ على الماوس في وضع ضعيف مع نهايته الخلفية مرتفعة قليلا. لحقن محلول نارينجينين ، أمسك الجلد على ظهر الفأر بحيث يكون جلد البطن مشدودا.ثم ادفع الإبرة إلى الربع السفلي الأيمن أو الأيسر من البطن بزاوية 10 درجات. لتجنب ضرب المثانة أو الكبد أو الأعضاء الداخلية الأخرى. قم بتشغيل الإبرة تحت الجلد في اتجاه الجمجمة لمدة ثلاثة إلى خمسة ملليمترات ، ثم أدخلها بزاوية 45 درجة في تجويف البطن.بمجرد مرور الإبرة عبر جدار البطن ، ادفع المحلول ببطء. بعد الحقن ، اسحب الإبرة ببطء ، وقم بتدويرها قليلا لمنع التسرب. لإجراء اختبار جلوكوز الدم ، افتح شرائط الاختبار وحدد التاريخ.قم بعمل ثقب صغير على الوريد الجانبي للذيل بوخز إبرة قياس 25 واضغط على قطرة دم. بعد مسح قطرة الدم بالمناديل الورقية ، اضغط على قطرة دم أخرى واجتمعها على حافة شريط الاختبار. قراءة وتسجيل النتيجة المعروضة على جهاز قياس الجلوكوز.انخفض وزن الجسم في النظام الغذائي عالي الدهون الذي تم تغذيته والفئران المصابة بالسكري الناجم عن الستربتوزوتوسين مقارنة بفئران المجموعة الضابطة من صفر إلى ثمانية أسابيع بعد العلاج بالستربتوزوتوسين. في الأسبوع الرابع ، كان فقدان الوزن للفئران المعالجة بنارينجينين كبيرا مقارنة بالفئران غير المعالجة. ارتفع مستوى الجلوكوز في الدم في الفئران المصابة بالسكري بشكل كبير في غضون شهر واحد بعد تحريض الستربتوزوتوسين.بعد شهرين ، انخفض تلقائيا إلى المستوى الذي لوحظ قبل شهرين. في المقابل ، خفض علاج نارينجينين مستويات الجلوكوز في الدم بنسبة 51.8٪ في شهر واحد و 34.8٪ في شهرين مقارنة ب STZ. بالمقارنة مع الضوابط ، أظهرت الفئران المصابة بالسكري الناجم عن الستربتوزوتوسين فقدان العظام كما يتضح من انخفاض حجم العظام حسب حجم الأنسجة وعدد الترابيكولا.وفي الوقت نفسه ، أنقذ علاج نارينجينين بشكل كبير فقدان العظام. تم زيادة نشاط ناقضة العظم الذي أظهره عدد ناقضة العظم لكل منطقة عظمية تربيقية في الفئران المصابة بالسكري على الرغم من عدم ملاحظة أي دلالة إحصائية بين نماذج السيطرة والمرض. يظهر هنا تلطيخ TRAP للعظام التربيقية والخلايا الآكلة للعظم للسيطرة والفئران التي يسببها الستربتوزوتوسين.علاج نارينجينين قلل بشكل كبير من أنشطة ناقضة العظم. في الحيوانات المصابة بالسكري ، تم رفع الببتيد الطرفي C من الكولاجين من النوع الأول بنسبة 68.09٪ وارتفع البروببتيد N-terminal من النوع الأول Pro-Collagen بنسبة 204.88٪ مما يشير إلى زيادة كبيرة في معدل ارتشاف العظام. ومع ذلك ، قلل علاج نارينجينين بشكل كبير من كلا مؤشري معدل ارتشاف العظام.لذلك من الصعب ماصة جرعة دقيقة. قطع الطرف يجعل السحب أسهل وأكثر دقة. بدلا من ذلك ، يمكن تحويل الحجم المطلوب إلى كتلة ، والتي يمكن تحويلها لاحقا بسهولة.يجب أن يظل وقت صيام جميع الحيوانات قبل كل تجربة جلوكوز المثانة هو الشيء خلال التجربة بأكملها.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

توصيف الآليات الجزيئية لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الأشعة فوق البنفسجية المستحثة الساد

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

القياس عن بعد داخل الرحم لقياس ماوس مقلص الضغط<em&gt; في فيفو</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

الإجراءات في يحفز الزرق<em&gt; في فيفو</em&gt; نموذج الفأر وجبل لالجامع إعداد الشبكية

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

تحليل الأمثل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; كبدي تشحم

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

إعداد الأدوية العشبية: إير-زيان ديكوتيون و إير-زيان التي تحتوي على مصل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; التجارب

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

خطوات الإعداد لقياس مفاعليه في الماوس الشرايين الشبكية السابقين فيفو

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

الدماغ كل تجزئة وتحليل التغيير-نقطة من الدماغ التشريحية التصوير بالرنين المغناطيسي – التطبيق في مرض هنتنغتون بريمانيفيست

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...