Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (81973607 og 81573992).

De beskrevne undersøgelser var i overensstemmelse med retningslinjerne for pleje og brug af forsøgsdyr fra National Research Council og blev godkendt af Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Animal Care and Use Committee. Ved udførelse af eksperimenterne kræves laboratoriefrakker, engangsnitrilhandsker og beskyttelsesbriller af sikkerhedsmæssige årsager.
1. Fremstilling af opløsningsmidler og estimering af naringenin, der er nødvendig til in vivo-anvendelse
<ol...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

Fremstillingen af fytokemisk opløsning er grundlaget for dens anvendelse in vivo. I denne protokol blev fremstillingen af naringeninopløsning demonstreret ved anvendelse af forskellige opløsningsmidler, såsom ethanol, DMSO, Tween 80 og 0,9% PS. Opløsningen i fuldstændig opløst tilstand skal overvåges yderligere ved at lade den forblive ved stuetemperatur i nogle længere timer og derefter filtreres, før den bruges in vivo.
Bestemmelse af opløsningsmiddel er et kriti...

Med stigende undersøgelser vedrørende brugen af fytokemiske forbindelser til lægemiddelscreening er tilgange til fremstilling af fytokemiske løsninger til evaluering af deres optimale virkninger værd at være opmærksomme på. Mange aspekter såsom opløsningsmetoden, dosering og koncentration skal overvejes ved fremstilling af forbindelsen1.
Opløsningsmiddelbaseret opløsning anvendes i vid udstrækning til fremstilling af organiske forbindelser1. De almindeligt anvendte opløsningsmidler omfatter vand, olie, dimethylsulfoxid (DMSO), methanol, ethanol, myresyre, Tween, glycerin osv.2. Selvom en suspension med uopløste stoffer er acceptabel, når forbindelsen administreres ved gastrisk sonde, er et fuldt opløst opløst stof kritisk for intravenøs administration. Da olieopløsning, suspension og emulsion kan forårsage kapillærembolier, foreslås en vandig opløsning til sammensat præparation, især ved administration af intravenøse, intramuskulære og intraperitoneale injektioner3.
Det effektive dosisområde varierer mellem forbindelser og endda blandt sygdomme behandlet med samme forbindelse. Bestemmelse af den effektive og den sikre dosis og koncentrationen afhænger af litteratur og indledende forsøg4. Her demonstreres fremstillingen af forbindelsen naringenin som et eksempel.
Naringenin (4,5,7-trihydroxy-flavanon), en polyfenolisk forbindelse, er blevet undersøgt i sygdomsbehandling for dets hepatoprotektive5, antidiabetika6, antiinflammatoriske7 og antioxidantaktiviteter8. Til in vivo-applikationer anvendes oral administration af naringenin almindeligvis. Tidligere undersøgelser rapporterede fremstilling af naringeninopløsning i 0,5% -1% carboxymethylcellulose, 0,5% methylcellulosedosis, 0,01% DMSO og fysiologisk saltvand (PS) ved 50-100 mg / kg, administreret ved oral sonde 9,10,11,12. Desuden har andre undersøgelser rapporteret at supplere naringenin med chow ved 3% (wt / wt) til oral indtagelse i en dosis på 3,6 g / kg / d13,14. Undersøgelser har også rapporteret ved hjælp af ethanol (0,5% v / v), PS og DMSO til opløsning af naringenin til intraperitoneal injektion ved 10-50 mg / kg15,16,17,18. I en undersøgelse af temporal lobe epilepsi modtog mus en injektion af naringenin suspenderet i 0,25% carboxymethylcellulose opløst i PS19. Selvom disse undersøgelser rapporterer brugen af forskellige opløsningsmidler til fremstilling af naringeninopløsninger, er der ikke rapporteret yderligere detaljer, såsom opløsningsstatus og dyrerespons.
Denne protokol indfører en procedure til fremstilling af naringeninopløsning til in vivo-anvendelse i diabetisk induceret osteoporose. Fremstillingen af injektionsopløsningen inkluderer fremstilling af opløsningsmidler og forbindelser, doseringsestimering, opløsningsproces og filtrering. Doseringen blev bestemt ud fra litteraturforskning og foreløbige eksperimenter ved at overvåge mus efter administration af injektioner hver dag i 3 dage og ændre doseringen i henhold til museadfærd. Den endelige valgte koncentration (20 mg/kg legemsvægt) blev administreret intraperitonealt 5 dage om ugen i 8 uger i en fedtrig diæt og streptozotocin (STZ)-inducerede diabetiske mus20,21. Virkningerne af naringenin i diabetisk osteoporose blev evalueret ved blodglukosetest, mikro-CT, tartratresistent syrephosphatase (TRAP) farvning og enzymbundet immunosorbentassay (ELISA).
Samlet set blev det observeret, at naringenin i et koncentrationsinterval på 40-400 mg/ml ikke opløses fuldstændigt i hverken ethanol eller DMSO eller 5% (ethanol eller DMSO) plus 95% PS (v/v). Naringenin opløstes imidlertid fuldstændigt i en blanding af 3,52% DMSO, 3,52% Tween 80 og 92,96% PS. Den detaljerede procedure vil hjælpe forskere med at forberede forbindelsen som en injektionsopløsning til in vivo-anvendelse .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

Fremstillingen af en sammensat (fytokemisk) opløsning er et overset, men kritisk trin forud for dets anvendelse i undersøgelser såsom lægemiddelscreening. Den fuldstændige opløselighed af forbindelsen er nødvendig for sikker anvendelse og relativt stabile resultater. Her demonstreres en protokol til fremstilling af naringeninopløsning og dens intraperitoneale administration i en fedtfattig diæt og streptozotocin (STZ) -induceret diabetisk model som et eksempel. En lille mængde naringenin (3,52-6,69 mg) blev anvendt til at teste dets opløselighed i opløsningsmidler, herunder henholdsvis ethanol, dimethylsulfoxid (DMSO) og DMSO plus Tween 80 rekonstitueret i fysiologisk saltvand (PS). Fuldstændig opløselighed af forbindelsen bestemmes ved at observere opløsningens farve, tilstedeværelsen af bundfald efter centrifugering (2000 x g i 30 s) eller lade opløsningen stå i 2 timer ved stuetemperatur (RT). Efter opnåelse af en stabil forbindelse/fytokemisk opløsning kan den endelige koncentration/mængde af forbindelsen, der kræves til in vivo-undersøgelser , fremstilles i en opløsningsmiddel-only (ingen PS) stamopløsning og derefter fortyndes/blandes med PS efter ønske. De antidiabetiske osteoporotiske virkninger af naringenin hos mus (intraperitoneal administration ved 20 mg/kg legemsvægt, 2 mg/ml) blev vurderet ved måling af blodsukker, knoglemasse (mikro-CT) og knogleresorptionshastighed (TRAP-farvning og ELISA). Forskere, der leder efter detaljerede organiske / fytokemiske opløsningspræparater, vil drage fordel af denne teknik.

Kropsvægten af de fedtfattige diætfodrede og STZ-inducerede diabetiske mus viste sig at falde sammenlignet med kontrolgrupperne fra 0-8 uger efter STZ-behandling. Vægttabet hos naringeninbehandlede mus var signifikant sammenlignet med de ikke-behandlede mus (STZ-gruppen) i uge 4. Kontrol- og STZ-grupperne blev administreret med samme mængde PS (tabel 1). Blodsukkerniveauet hos diabetiske mus steg dramatisk inden for 1 måned efter STZ-induktion. Det faldt derefter automatisk til et niveau, der blev o...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Her præsenterer protokollen fremstillingen af naringeninopløsning til in vivo intraperitoneal administration. Naringenin er fuldt opløst i en blanding af dimethylsulfoxid, Tween 80 og saltvand. De antidiabetika osteoporotiske virkninger af naringenin blev vurderet ved blodglukosetest, tartratresistent syrefosfatasefarvning og enzymbundet immunosorbentassay.

Fremstilling af Naringenin-opløsning til in vivo-applikation

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Med stigende undersøgelser vedrørende de fytokemiske komponenter til lægemiddelscreeningsmetoder til fremstilling af fytokemisk løsning til evaluering af optimale effekter, var jeg opmærksom på fordelene ved denne protokol som enkel betjening og lave omkostninger. Denne protokol vil gavne de forskere, der beskæftiger sig med lægemiddelscreening af farmakologi. Vi foreslår at starte med en lille mængde fytokemisk forbindelse til indledende eksperimenter i betragtning af forbrugsomkostningerne.For det andet anbefales det at bruge en insulinsprøjte over en almindelig sprøjte For at forberede en to milligram pr. milliliter naringeninopløsning i ethanol skal du veje 3,52 milligram naringeninpulver og tilføje det til et to milliliter rør. Drej hurtigt røret for at sætte pulveret i bunden af røret. Derefter tilsættes 8,8 mikroliter 100% ethanol til røret for at fremstille en 0,5% opløsning.Tilsæt derefter 79,2 mikroliter 100% ethanol til røret for at fremstille en 5% opløsning. Derefter tilsættes 1.672 ml 0,9% fysiologisk saltvand til røret indeholdende 5%-opløsningen. Dette vil producere en emulsion.Derefter nægtede centrifuge røret for at kontrollere, om naringenin er fuldstændigt opløst i opløsningen. Hvide bundfald af uopløst naringenin kan forekomme i opløsningen. For at forberede en to milligram pr. milliliter naringeninopløsning i DMSO skal du derefter veje 3,95 milligram naringeninpulver og tilsætte det i et to milliliter rør.Efter et hurtigt spin tilsættes 9,8 ml DMSO til røret for at forberede 8,5% opløsning. Tilsæt derefter 88,2 mikroliter DMSO til røret for at forberede en 5% opløsning. Derefter tilsættes 1.877 ml 0,9% saltvand til opløsningen.Dette vil resultere i en emulsion. Centrifuge opløsningen for at kontrollere, om naringenin er helt opløst. Hvide bundfald har uopløst naringenin kan forekomme i opløsningen.For at forberede en to milligram pr. milliliter naringeninopløsning i Tween 80 og DMSO skal du derefter veje 6,69 milligram naringeninpulver og tilsætte det i et fem milliliter rør. Drej hurtigt røret ned, og tilsæt 117,7 mikroliter DMSO for at forberede en 3,5% opløsning. Derefter tilsættes 117,7 mikroliter Tween 80 til opløsningen for at opnå en 3,5% Tween 80 og 3,5% DMSO-koncentration.Tilsæt langsomt denne opløsning til et andet fem milliliter rør indeholdende 3109,6 mikroliter 0,9% saltvand og ryst godt for at opnå en klar naringeninopløsning. Efter to timer forbliver opløsningen klar uden synlige bundfald. For at administrere naringenin-opløsningen skal du løfte en fem uger gammel C57 sort seks hanmus ved bunden af halen og placere den på en solid overflade, der placerer halen forsigtigt tilbage.Tag derefter fat i nakken bag ørerne med venstre tommelfinger og pegefinger og placer halen mellem lille- og ringfingeren. Hold musen i liggende stilling med den bageste ende let forhøjet. For at injicere naringeninopløsningen skal du tage fat i huden på musens ryg, så maveskindet er stramt.Skub derefter nålen ind i den nederste højre eller venstre kvadrant i maven i en 10-graders vinkel. for at undgå at ramme blæren, leveren eller andre indre organer. Kør nålen subkutant i kranial retning i tre til fem millimeter, og indsæt den derefter i en 45-graders vinkel i bukhulen.Når nålen passerer gennem mavemuren, skal du langsomt skubbe opløsningen. Efter injektionen trækkes nålen langsomt ud og roterer den lidt for at forhindre lækage. For at udføre en blodglukosetest skal du åbne teststrimlerne og markere datoen.Lav en lille punktering på lateral halevenen med en 25-gauge nålestik og pres en dråbe blod ud. Efter at have tørret bloddråben med silkepapir, skal du presse en anden dråbe blod ud og samle den på kanten af teststrimlen. Læs og registrer resultatet, der vises på glukosemåleren.Kropsvægten af den fedtfattige diæt, der blev fodret, og streptozotocin-inducerede diabetiske mus blev reduceret sammenlignet med kontrolgruppemus nul til otte uger efter en streptozotocinbehandling. I den fjerde uge var vægttabet hos naringeninbehandlede mus signifikant sammenlignet med ikke-behandlede mus. Blodglukoseniveauet hos diabetiske mus steg dramatisk inden for en måned efter streptozotocininduktion.Efter to måneder faldt det automatisk til et niveau, der blev observeret for to måneder siden. I modsætning hertil sænkede naringeninbehandling blodsukkerniveauet med 51,8% efter en måned og 34,8% efter to måneder sammenlignet med STZ. Sammenlignet med kontrollerne udviste de streptozotocin-inducerede diabetiske mus knogletab som angivet ved et fald i knoglevolumen efter vævsvolumen og antallet af trabecula.I mellemtiden reddede naringeninbehandling knogletabet betydeligt. Osteoklastaktivitet vist ved osteoklasttal pr. trabekulært knogleområde blev øget hos diabetiske mus, selvom der ikke blev observeret nogen statistisk signifikans mellem kontrol- og sygdomsmodellerne. TRAP-farvning af trabekulær knogle og osteoklaster af kontrol og streptozotocin-inducerede mus er vist her.Naringenin behandling signifikant nedsat osteoklast aktiviteter. Hos diabetiske dyr blev det C-terminale telopeptid af type et kollagen forhøjet med 68,09%, og det N-terminale propeptid af type et Pro-kollagen blev forhøjet med 204,88%, hvilket indikerer en dramatisk stigning i knogleresorptionshastigheden. Imidlertid reducerede naringeninbehandling signifikant begge indikatorer for knogleresorptionshastigheden.Så det er udfordrende at pipettere nøjagtig dosering. At skære spidsen af gør pipettering lettere og mere præcis. Alternativt kan det krævede volumen konverteres til en masse, som let kan være senere.Fastetiden for alle dyr før hvert blæreglukoseforsøg skal forblive tingen under hele forsøget.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Karakterisering af molekylære<em&gt; In vivo</em&gt; UVR Induced Cataract

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaukom-inducerende Procedure i en<em&gt; In vivo</em&gt; Rat Model og Whole-mount Retina Forberedelse

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Generation af Microtumors Brug 3D Menneskelig Biogel Kultur System og Patient-afledte glioblastomaceller for Kinomic Profilering and Drug respons Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Udtømning af Mouse Celler fra Humane tumorxenoplantater Markant Forbedrer Downstream Analyse af Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimeret Analyse af<em&gt; In vivo</em&gt; og<em&gt; In vitro</em&gt; Nedsat Steatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse af urtemedicin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-indeholdende Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; In Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Forberedelsestrinnene til måling af reaktivitet i mus Retinal arterioler Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Hele-hjerne segmentering og Change-point analyse af anatomiske hjerne MRI-program i premanifeste Huntington's chorea

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Klargøring af Gushukang (GSK) granulat til in vivo-og in vitro-forsøg

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...