Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81973607 en 81573992).

De beschreven onderzoeken voldeden aan de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren van de National Research Council en werden goedgekeurd door de Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Animal Care and Use Committee. Bij het uitvoeren van de experimenten zijn laboratoriumjassen, nitril wegwerphandschoenen en brillen vereist voor veiligheidsdoeleinden.
1. Bereiding van oplosmiddelen en schatting van naringenine die nodig is voor in vivo toepassing
<ol...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

De bereiding van fytochemische oplossing is de basis voor de toepassing ervan in vivo. In dit protocol werd de bereiding van naringenine-oplossing aangetoond met behulp van verschillende oplosmiddelen, zoals ethanol, DMSO, Tween 80 en 0,9% PS. De oplossing in volledig opgeloste toestand moet verder worden gecontroleerd door deze enkele uren op kamertemperatuur te laten blijven en vervolgens te filteren voordat deze in vivo wordt gebruikt.
Oplosmiddelbepaling is een cruciale s...

Met toenemende studies over het gebruik van fytochemische verbindingen voor geneesmiddelenscreening, zijn benaderingen om fytochemische oplossingen voor te bereiden om hun optimale effecten te evalueren de moeite waard om aandacht aan te besteden. Veel aspecten zoals de oplossingsmethodologie, dosering en concentratie moeten worden overwogen bij het bereiden van de verbinding1.
Oplossing op basis van oplosmiddelen wordt veel gebruikt voor de bereiding van organische verbindingen1. De meest gebruikte oplosmiddelen zijn water, olie, dimethylsulfoxide (DMSO), methanol, ethanol, mierenzuur, Tween, glycerine, enz. 2. Hoewel een suspensie met onopgeloste stoffen aanvaardbaar is wanneer de verbinding wordt toegediend via een maagsonde, is een volledig opgeloste opgeloste opgeloste stof van cruciaal belang voor intraveneuze toediening. Aangezien olieoplossing, suspensie en emulsie capillaire embolie kunnen veroorzaken, wordt een waterige oplossing voor samengestelde bereiding voorgesteld, vooral bij het toedienen van intraveneuze, intramusculaire en intraperitoneale injecties3.
Het effectieve dosisbereik varieert tussen verbindingen en zelfs tussen ziekten die met dezelfde verbinding worden behandeld. De bepaling van de effectieve en de veilige dosis en de concentratie zijn afhankelijk van literatuur en voorbereidende experimenten4. Hier wordt de bereiding van de verbinding naringenine als voorbeeld gedemonstreerd.
Naringenine (4,5,7-trihydroxy-flavanon), een polyfenolische verbinding, is bestudeerd bij de behandeling van ziekten voor zijn hepatoprotectieve5, antidiabetica6, ontstekingsremmende7 en antioxiderende activiteiten8. Voor in vivo toepassingen wordt de orale toediening van naringenine vaak gebruikt. Eerdere studies meldden de bereiding van naringenine-oplossing in 0,5% -1% carboxymethylcellulose, 0,5% methylcellulosedosis, 0,01% DMSO en fysiologische zoutoplossing (PS) bij 50-100 mg / kg, toegediend door orale maagsonde 9,10,11,12. Bovendien hebben andere studies gemeld dat naringenine wordt aangevuld met chow met 3% (wt /wt) voor orale inname in een dosis van 3,6 g / kg / d13,14. Studies hebben ook gemeld dat ethanol (0,5% v/v), PS en DMSO worden gebruikt om naringenine op te lossen voor intraperitoneale injectie bij 10-50 mg/kg 15,16,17,18. In een studie van temporale kwab epilepsie kregen muizen een injectie van naringenine gesuspendeerd in 0,25% carboxymethylcellulose opgelost in PS19. Hoewel deze studies het gebruik van verschillende oplosmiddelen melden om naringenine-oplossingen te bereiden, zijn verdere details, zoals de oplossende status en de respons van dieren, niet gemeld.
Dit protocol introduceert een procedure voor het bereiden van naringenine-oplossing voor in vivo toepassing bij diabetisch geïnduceerde osteoporose. De bereiding van de injectieoplossing omvat het bereiden van oplosmiddelen en verbindingen, doseringsschatting, oplossingsproces en filtratie. De dosering werd bepaald op basis van literatuuronderzoek en voorbereidende experimenten door muizen te controleren na het dagelijks toedienen van injecties gedurende 3 dagen en de dosering aan te passen aan het gedrag van de muis. De uiteindelijk gekozen concentratie (20 mg/kg lichaamsgewicht) werd intraperitoneaal toegediend 5 dagen per week gedurende 8 weken in een vetrijk dieet en streptozotocine (STZ)-geïnduceerde diabetische muizen20,21. De effecten van naringenine bij diabetische osteoporose werden geëvalueerd door bloedglucosetesten, micro-CT, tartraatresistente zuurfosfatase (TRAP) kleuring en enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Over het algemeen werd waargenomen dat naringenine in een concentratiebereik van 40-400 mg / ml niet volledig oploste in ethanol of DMSO of 5% (ethanol of DMSO) plus 95% PS (v / v). Naringenine loste echter volledig op in een mengsel van 3,52% DMSO, 3,52% Tween 80 en 92,96% PS. De gedetailleerde procedure zal onderzoekers helpen om de verbinding voor te bereiden als een injectieoplossing voor in vivo toepassing.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

De bereiding van een samengestelde (fytochemische) oplossing is een over het hoofd geziene maar kritieke stap voorafgaand aan de toepassing ervan in studies zoals geneesmiddelenscreening. De volledige oplosbaarheid van de verbinding is noodzakelijk voor een veilig gebruik en relatief stabiele resultaten. Hier wordt een protocol voor het bereiden van naringenine-oplossing en de intraperitoneale toediening ervan in een vetrijk dieet en streptozotocine (STZ) -geïnduceerd diabetisch model als voorbeeld gedemonstreerd. Een kleine hoeveelheid naringenine (3,52-6,69 mg) werd gebruikt om de oplosbaarheid ervan te testen in oplosmiddelen, waaronder ethanol, dimethylsulfoxide (DMSO) en DMSO plus Tween 80 gereconstitueerd in fysiologische zoutoplossing (PS), respectievelijk. Volledige oplosbaarheid van de verbinding wordt bepaald door de kleur van de oplossing te observeren, de aanwezigheid van neerslag na centrifugatie (2000 x g gedurende 30 s), of de oplossing 2 uur bij kamertemperatuur (RT) te laten staan. Na het verkrijgen van een stabiele verbinding/fytochemische oplossing kan de uiteindelijke concentratie/hoeveelheid van de verbinding die nodig is voor in vivo onderzoek worden bereid in een oplosmiddel-only (geen PS) stamoplossing en vervolgens worden verdund/gemengd met PS naar wens. De antidiabetische osteoporotische effecten van naringenine bij muizen (intraperitoneale toediening bij 20 mg/kg lichaamsgewicht, 2 mg/ml) werden beoordeeld door het meten van bloedglucose, botmassa (micro-CT) en botresorptiesnelheid (TRAP-kleuring en ELISA). Onderzoekers die op zoek zijn naar gedetailleerde organische / fytochemische oplossingspreparaten zullen baat hebben bij deze techniek.

Het lichaamsgewicht van de vetrijke dieet-gevoede en STZ-geïnduceerde diabetische muizen bleek af te nemen in vergelijking met dat van de controlegroepen van 0-8 weken na STZ-behandeling. Het gewichtsverlies van met naringenine behandelde muizen was significant in vergelijking met de niet-behandelde muizen (STZ-groep) in week 4. De controle- en STZ-groepen werden toegediend met hetzelfde volume PS (tabel 1). De bloedglucosespiegel bij diabetische muizen steeg dramatisch binnen 1 maand na STZ-inductie. H...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Hier presenteert het protocol de bereiding van naringenine-oplossing voor in vivo intraperitoneale toediening. Naringenine is volledig opgelost in een mengsel van dimethylsulfoxide, Tween 80 en zoutoplossing. De antidiabetische osteoporotische effecten van naringenine werden beoordeeld door bloedglucosetesten, tartraatresistente zure fosfatasekleuring en enzymgebonden immunosorbenttest.

Bereiding van naringenineoplossing voor in vivo toepassing

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Met toenemende studies over de fytochemische componenten voor geneesmiddelenscreeningbenaderingen om fytochemische oplossingen voor te bereiden voor evaluatie van optimale effecten, besteedde ik aandacht aan de voordelen van dit protocol als eenvoudige bediening en lage kosten. Dit protocol zal ten goede komen aan de onderzoekers die zich bezighouden met de geneesmiddelenscreening van farmacologie. We raden aan om te beginnen met een kleine hoeveelheid fytochemische verbinding voor voorlopige experimenten, rekening houdend met de consumptiekosten.Ten tweede wordt het gebruik van een insulinespuit boven een gewone spuit aanbevolen Om een twee milligram per milliliter naringenine-oplossing in ethanol te bereiden, weegt u 3,52 milligram naringeninepoeder en voegt u het toe aan een buis van twee milliliter. Draai snel de buis om het poeder op de bodem van de buis te laten bezinken. Voeg vervolgens 8,8 microliter 100% ethanol toe aan de buis om een 0,5% oplossing te bereiden.Voeg vervolgens 79,2 microliter 100% ethanol toe aan de buis om een 5% -oplossing te bereiden. Voeg vervolgens 1,672 milliliter van 0,9% fysiologische zoutoplossing toe aan de buis met de 5% oplossing. Dit zal een emulsie produceren.Vervolgens weigerde de centrifuge de buis om te controleren of het naringenine volledig in de oplossing is opgelost. Witte neerslagen van onopgelost naringenine kunnen in de oplossing voorkomen. Om vervolgens een twee milligram per milliliter naringenine-oplossing in DMSO te bereiden, weegt u 3,95 milligram naringeninepoeder en voegt u het toe aan een buis van twee milliliter.Voeg na een snelle draai 9,8 milliliter DMSO toe aan de buis om 8,5% oplossing te bereiden. Voeg vervolgens 88,2 microliter DMSO toe aan de buis om een 5% -oplossing te bereiden. Voeg vervolgens 1,877 milliliter van 0,9% zoutoplossing toe aan de oplossing.Dit zal resulteren in een emulsie. Centrifugeer de oplossing om te controleren of het naringenine volledig is opgelost. Witte neerslagen hebben onopgeloste naringenine kan in de oplossing voorkomen.Om vervolgens een twee milligram per milliliter naringenine-oplossing in Tween 80 en DMSO te bereiden, weegt u 6,69 milligram naringeninepoeder en voegt u het toe aan een buis van vijf milliliter. Draai snel de buis naar beneden en voeg 117,7 microliter DMSO toe om een oplossing van 3,5% te bereiden. Voeg vervolgens 117,7 microliter Tween 80 toe aan de oplossing om een 3,5% Tween 80- en 3,5% DMSO-concentratie te bereiken.Voeg deze oplossing langzaam toe aan een andere buis van vijf milliliter met 3109,6 microliter zoutoplossing van 0,9% en schud goed om een heldere naringenine-oplossing te verkrijgen. Na twee uur blijft de oplossing helder zonder zichtbare neerslag. Om de naringenine-oplossing toe te dienen, tilt u een vijf weken oude C57 zwarte zes mannelijke muis op bij de basis van zijn staart en plaatst u deze op een stevig oppervlak dat zijn staart voorzichtig naar achteren positioneert.Pak vervolgens het nekvel van de nek achter de oren vast met de linkerduim en wijsvinger en plaats de staart tussen de kleine en ringvinger. Houd de muis in rugligging met het achterste uiteinde iets verhoogd. Om de naringenine-oplossing te injecteren, pakt u de huid op de rug van de muis zodat de buikhuid strak is.Duw vervolgens de naald in het kwadrant rechtsonder of linksonder in de buik in een hoek van 10 graden. om te voorkomen dat de blaas, lever of andere inwendige organen worden geraakt. Laat de naald drie tot vijf millimeter subcutaan in een schedelrichting lopen en steek hem vervolgens in een hoek van 45 graden in de buikholte.Zodra de naald door de buikwand gaat, duwt u de oplossing langzaam in. Na de injectie trok u de naald langzaam naar buiten en draaide deze iets om lekkage te voorkomen. Om een bloedglucosetest uit te voeren, opent u de teststrips en markeert u de datum.Maak een kleine punctie op de laterale staartader met een naaldprik van 25 gauge en knijp er een druppel bloed uit. Nadat u de druppel bloed met tissuepapier hebt afgeveegd, knijpt u er nog een druppel bloed uit en verzamelt u deze aan de rand van de teststrip. Lees en noteer het resultaat dat op de glucosemeter wordt weergegeven.Het lichaamsgewicht van het vetrijke dieet gevoede en streptozotocine-geïnduceerde diabetische muizen was afgenomen in vergelijking met dat van controlegroepmuizen nul tot acht weken na een streptozotocinebehandeling. In de vierde week was het gewichtsverlies van met naringenine behandelde muizen significant in vergelijking met niet-behandelde muizen. De bloedglucosespiegel bij de diabetische muizen steeg dramatisch binnen een maand na streptozotocine-inductie.Na twee maanden daalde het automatisch tot een niveau dat twee maanden geleden werd waargenomen. Daarentegen verlaagde de behandeling met naringenine de bloedglucosespiegels met 51,8% na één maand en 34,8% na twee maanden in vergelijking met STZ. Vergeleken met controles vertoonden de streptozotocine-geïnduceerde diabetische muizen botverlies zoals aangegeven door een afname van het botvolume door weefselvolume en het aantal trabecula.Ondertussen heeft de behandeling met naringenine het botverlies aanzienlijk gered. Osteoclastactiviteit aangetoond door osteoclast aantal per trabeculair botgebied was verhoogd bij diabetische muizen, hoewel er geen statistische significantie werd waargenomen tussen de controle- en de ziektemodellen. TRAP-kleuring van trabeculair bot en osteoclasten van controle- en streptozotocine-geïnduceerde muizen wordt hier getoond.Behandeling met naringenine verminderde de osteoclastenactiviteiten aanzienlijk. Bij de diabetische dieren was het C-terminale telopeptide van type één collageen verhoogd met 68,09% en het N-terminale propeptide van type één Pro-Collageen was verhoogd met 204,88%, wat wijst op een dramatische toename van de botresorptiesnelheid. De behandeling met naringenine verminderde echter significant beide indicatoren van de botresorptiesnelheid.het is dus een uitdaging om een nauwkeurige dosering te pipetteren. Het afsnijden van de punt maakt pipetteren eenvoudiger en nauwkeuriger. Als alternatief kan het vereiste volume worden omgezet in een massa, die later gemakkelijk kan worden omgezet.De vastentijd van alle dieren voor elk blaasglucose-experiment moet tijdens het hele experiment het ding blijven.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Karakterisering van moleculaire mechanismen van<em&gt; In vivo</em&gt; UVR Induced Cataract

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MRI voor mobiele Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intra-uteriene Telemetrie naar Mouse Contractiele druk te meten<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoom-inducerende Procedure in een<em&gt; In Vivo</em&gt; Rat Model en Whole-mount Retina Voorbereiding

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Genereren van Microtumors Met behulp van 3D Human Biogel Cultuur System en Patient afgeleide glioblastoma Cellen voor Kinomic Profiling and Drug Response Testen

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Uitputting van de Muis Cellen van geënte, humane tumoren verbetert Downstream Analyse van Target Cellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Geoptimaliseerd Analyse van<em&gt; In Vivo</em&gt; en<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Voorbereiding van kruidengeneeskunde: Er-Xian Decoction en Er-Xian-Serum voor<em&gt; In Vivo</em&gt; En<em&gt; In Vitro</em&gt; Experimenten

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Voorbereiding stappen voor meting van reactiviteit in muis retinale arteriolen Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

Geheel-hersenen segmentatie en verandering-punt analyse van anatomische hersenen MRI — toepassing in Premanifest de ziekte van Huntington

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...