Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81973607 ו-81573992).

החקירות המתוארות תאמו את ההנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המועצה הלאומית למחקר ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית. בעת ביצוע הניסויים, מעילי מעבדה, כפפות ניטריל חד פעמיות ומשקפי מגן נדרשים למטרות בטיחות.
1. הכנת ממסים ו...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

הכנת הפתרון הפיטוכימי היא הבסיס ליישומו in vivo. בפרוטוקול זה, הכנת תמיסת נרינגנין הודגמה על ידי שימוש בממיסים שונים, כגון אתנול, DMSO, Tween 80 ו- 0.9% PS. הפתרון במצב מומס לחלוטין צריך להיות מנוטר עוד יותר על ידי מתן אפשרות להישאר בטמפרטורת החדר במשך כמה שעות ממושכות, ולאחר מכן מסונן לפני השימוש <e...

עם מחקרים הולכים וגוברים הנוגעים לשימוש בתרכובות פיטוכימיות לבדיקת תרופות, כדאי לתת תשומת לב לגישות להכנת פתרונות פיטוכימיים להערכת ההשפעות האופטימליות שלהם. יש לקחת בחשבון היבטים רבים כגון מתודולוגיית הפירוק, המינון והריכוז בעת הכנת התרכובת1.
פירוק מבוסס ממס נמצא בשימוש נרחב להכנת תרכובת אורגנית1. הממסים הנפוצים כוללים מים, שמן, דימתיל סולפוקסיד (DMSO), מתנול, אתנול, חומצה פורמית, טווין, גליצרין וכו'2. אף על פי שתרחיף עם חומרים לא פתורים מקובל כאשר התרכובת ניתנת על ידי gavage קיבה, מומס מומס לחלוטין הוא קריטי עבור מתן תוך ורידי. מאז תמיסת שמן, השעיה, ותחליב יכול לגרום תסחיפים נימיים, תמיסה מימית להכנת תרכובת מומלץ, במיוחד בעת מתן זריקות תוך ורידי, תוך שרירי, intraperitoneal3.
טווח המינון האפקטיבי משתנה בין תרכובות ואפילו בין מחלות שטופלו באותה תרכובת. קביעת המינון היעיל והבטוח והריכוז תלויים בספרות ובניסויים ראשוניים4. כאן, הכנת המתחם naringenin מודגם כדוגמה.
Naringenin (4,5,7-trihydroxy-flavanone), תרכובת פוליפנולית, נחקרה בטיפול במחלות עבור פעילויות hepatoprotective5, אנטי סוכרתי6, אנטי דלקתיות7, ונוגד חמצון8. עבור יישומי in vivo, מתן אוראלי של naringenin הוא נפוץ בשימוש. מחקרים קודמים דיווחו על הכנת תמיסת נרינגנין ב-0.5%-1% קרבוקסימתיל צלולוז, 0.5% מינון מתילצלולוז, 0.01% DMSO, ותמיסת מלח פיזיולוגית (PS) במינון 50-100 מ"ג/ק"ג, הניתנת על ידי גבאג'פומי 9,10,11,12. חוץ מזה, מחקרים אחרים דיווחו על נטילת תוסף נרינגנין עם צ'או ב-3% (wt/wt) לצריכה פומית במינון של 3.6 גרם/ק"ג/ד'13,14. מחקרים דיווחו גם על שימוש באתנול (0.5% v/v), PS ו-DMSO כדי להמיס נרינגנין להזרקה תוך-צפקית במינון 10-50 מ"ג/ק"ג15,16,17,18. במחקר על אפילפסיה של האונה הרקתית, עכברים קיבלו זריקה של נרינגנין שהושהתה ב-0.25% קרבוקסימתיל צלולוז מומס ב-PS19. אף על פי שמחקרים אלה מדווחים על שימוש בממסים שונים להכנת תמיסות נרינגנין, לא דווח על פרטים נוספים, כגון מצב המסה ותגובה של בעלי חיים.
פרוטוקול זה מציג הליך להכנת תמיסת נרינגנין ליישום in vivo באוסטאופורוזיס הנגרמת על ידי סוכרת. הכנת תמיסת ההזרקה כוללת הכנת ממסים ותרכובות, הערכת מינון, תהליך פירוק וסינון. המינון נקבע על סמך מחקרים ספרותיים וניסויים ראשוניים על ידי ניטור עכברים לאחר מתן זריקות מדי יום במשך 3 ימים ושינוי המינון בהתאם להתנהגויות העכברים. הריכוז הסופי שנבחר (20 מ"ג/ק"ג b.w.) ניתן תוך צפק 5 ימים בשבוע במשך 8 שבועות בתזונה עתירת שומן ועכברים סוכרתיים הנגרמים על ידי סטרפטוזוטוצין (STZ)20,21. ההשפעות של נרינגנין באוסטאופורוזיס סוכרתי הוערכו על ידי בדיקות גלוקוז בדם, מיקרו-CT, צביעת חומצה פוספטאז עמידה לטרטרט (TRAP) ובדיקת אימונוסורבנט הקשורה לאנזים (ELISA).
באופן כללי, נצפה כי נרינגנין בטווח ריכוזים של 40-400 מ"ג/מ"ל לא התמוסס לחלוטין באתנול או ב-DMSO או ב-5% (אתנול או DMSO) בתוספת 95% PS (v/v). עם זאת, נרינגנין התמוסס לחלוטין בתערובת של 3.52% DMSO, 3.52% טווין 80 ו-92.96% PS. ההליך המפורט יסייע לחוקרים להכין את התרכובת כפתרון הזרקה ליישום in vivo .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

הכנת תמיסה תרכובת (פיטוכימית) היא שלב מתעלם אך קריטי לפני יישומה במחקרים כגון בדיקת תרופות. ההסתגרות המלאה של התרכובת נחוצה לשימושה הבטוח ולתוצאותיה היציבות יחסית. כאן, פרוטוקול להכנת תמיסת נרינגנין וניהול תוך-צפקית שלה בתזונה עתירת שומן ומודל סוכרתי המושרה על ידי סטרפטוזוטוצין (STZ) מודגם כדוגמה. כמות קטנה של נרינגנין (3.52-6.69 מ"ג) שימשה לבדיקת המסיסות שלו בממסים, כולל אתנול, דימתיל-סולפוקסיד (DMSO) ו-DMSO בתוספת Tween 80 ששוחזר במי מלח פיזיולוגיים (PS), בהתאמה. סולוביזציה מלאה של התרכובת נקבעת על ידי התבוננות בצבע התמיסה, נוכחות של משקעים לאחר צנטריפוגה (2000 x g במשך 30 שניות), או מתן אפשרות לתמיסה לעמוד במשך שעתיים בטמפרטורת החדר (RT). לאחר קבלת תרכובת/תמיסה פיטוכימית יציבה, ניתן להכין את הריכוז/הכמות הסופיים של התרכובת הנדרשת למחקרי in vivo בתמיסת מלאי ממס בלבד (ללא PS), ולאחר מכן לדלל/לערבב עם PS לפי הצורך. ההשפעות האוסטיאופורוטיות האנטי-סוכרתיות של נרינגנין בעכברים (מתן תוך-צפק במינון 20 מ"ג/ק"ג b.w., 2 מ"ג/מ"ל) הוערכו על-ידי מדידת רמת הגלוקוז בדם, מסת העצם (מיקרו-CT) וקצב ספיגת העצם (מכתים TRAP ו-ELISA). חוקרים המחפשים תכשירים מפורטים לתמיסות אורגניות/פיטוכימיות יפיקו תועלת מטכניקה זו.

נמצא כי משקל גופם של עכברים סוכרתיים שניזונו מתזונה עתירת שומן ו-STZ ירד בהשוואה לזה של קבוצות הביקורת בין 0-8 שבועות לאחר הטיפול ב-STZ. הירידה במשקל של עכברים שטופלו בנרינגנין הייתה משמעותית בהשוואה לעכברים שלא טופלו (קבוצת STZ) בשבוע 4. קבוצות הבקרה וה-STZ נוהלו באותו נפח של PS (טבלה 1). רמת...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

כאן, הפרוטוקול מציג את הכנת הפתרון naringenin עבור ניהול intraperitoneal in vivo. נרינגנין מומס במלואו בתערובת של דימתיל-סולפוקסיד, טווין 80 ותמלחות. ההשפעות האוסטאופורוטיות האנטי-סוכרתיות של נרינגנין הוערכו על ידי בדיקות גלוקוז בדם, צביעת חומצה פוספטאז עמידה בפני טרטרט ובדיקת אימונוסורבנט הקשורה לאנזימים.

הכנת פתרון נרינגנין ליישום In Vivo

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

עם מחקרים הולכים וגוברים הנוגעים לרכיבים הפיטוכימיים לגישות לסינון תרופות להכנת פתרון פיטוכימי להערכת ההשפעות האופטימליות, נתתי תשומת לב ליתרונות של פרוטוקול זה כפעולה פשוטה ועלות נמוכה. פרוטוקול זה יועיל לחוקרים העוסקים בבדיקת תרופות של פרמקולוגיה. אנו מציעים להתחיל עם כמות קטנה של תרכובת פיטוכימית לניסויים ראשוניים, בהתחשב בעלות הצריכה.שנית, מומלץ להשתמש במזרק אינסולין על מזרק רגיל להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר באתנול, לשקול 3.52 מיליגרם של אבקת נרינגנין ולהוסיף אותה לצינור של שני מיליליטר. סובבו במהירות את הצינור כדי ליישב את האבקה בתחתית הצינור. לאחר מכן, להוסיף 8.8 microliters של 100% אתנול לצינור כדי להכין פתרון 0.5%.לאחר מכן להוסיף 79.2 microliters של 100% אתנול לצינור כדי להכין פתרון 5%. לאחר מכן, להוסיף 1.672 מיליליטר של 0.9% מלח פיזיולוגי לצינור המכיל את הפתרון 5%. זה יפיק תחליב.ואז צנטריפוגה סירבה לצינור לבדוק אם הנרינגנין מומס לחלוטין בתמיסה. משקעים לבנים של נרינגנין לא מפוענח עשויים להופיע בתמיסה. לאחר מכן, כדי להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר ב- DMSO, שקלו 3.95 מיליגרם של אבקת נרינגנין והוסיפו אותה לצינור של שני מיליליטר.לאחר סיבוב מהיר, הוסף 9.8 מיליליטר של DMSO לצינור כדי להכין 8.5% פתרון. לאחר מכן הוסף 88.2 מיקרוליטר של DMSO לצינור כדי להכין פתרון של 5%. לאחר מכן, להוסיף 1.877 מיליליטר של 0.9% מלוחים לתמיסה.התוצאה תהיה תחליב. צנטריפוגה הפתרון כדי לבדוק אם naringenin הוא מומס לחלוטין. משקעים לבנים יש naringenin undissolved עשוי להופיע בפתרון.לאחר מכן, כדי להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר בטווין 80 וב- DMSO, שקלו 6.69 מיליגרם של אבקת נרינגנין והוסיפו אותה לצינור של חמישה מיליליטר. סובב במהירות את הצינור, והוסף 117.7 מיקרוליטר של DMSO כדי להכין פתרון של 3.5%. לאחר מכן הוסיפו 117.7 מיקרוליטרים של Tween 80 לתמיסה כדי להשיג ריכוז של 3.5% Tween 80 ו-3.5% DMSO.לאט לאט להוסיף את הפתרון הזה עוד חמישה מיליליטר צינור המכיל 3109.6 microliters של 0.9% מלוחים ולנער היטב כדי לקבל תמיסת naringenin ברור. לאחר שעתיים, הפתרון יישאר ברור ללא משקעים נראים לעין. כדי לתת את תמיסת הנרינגנין, הרם עכבר שחור בן חמישה שבועות C57 שישה זכרים בבסיס זנבו והנח אותו על משטח מוצק הממקם את זנבו לאחור בעדינות.לאחר מכן, תפסו את קשקוש הצוואר מאחורי האוזניים עם האגודל השמאלי והאצבע המורה והניחו את הזנב בין האצבע הקטנה לאצבע הטבעת. שמור את העכבר במצב שכיבה כשהקצה האחורי שלו מוגבה מעט. כדי להזריק את תמיסת naringenin, לתפוס את העור על הגב של העכבר, כך העור הבטן מתוח.לאחר מכן דחפו את המחט לרביע הימני התחתון או השמאלי של הבטן בזווית של 10 מעלות. כדי למנוע פגיעה בשלפוחית השתן, בכבד או באיברים פנימיים אחרים. הפעל את המחט תת עורית בכיוון גולגולתי במשך שלושה עד חמישה מילימטרים, ולאחר מכן הכנס אותו בזווית של 45 מעלות לתוך חלל הבטן.ברגע שהמחט עוברת דרך דופן הבטן, לאט לאט לדחוף את הפתרון. לאחר ההזרקה, משך באיטיות את המחט החוצה, סובב אותה מעט כדי למנוע דליפה. כדי לבצע בדיקת גלוקוז בדם, פתח את רצועות הבדיקה וסמן את התאריך.בצע נקב קטן על וריד הזנב לרוחב עם דקירת מחט 25 מד לסחוט טיפת דם. לאחר ניגוב טיפת הדם בנייר טישו, סחטו טיפת דם נוספת ואספו אותה בקצה רצועת הבדיקה. קרא והקלט את התוצאה המוצגת על מד הסוכר.משקל הגוף של עכברי סוכרת עתירי שומן שניזונו מסטרפטוזוטוצין ירד בהשוואה לזה של עכברי קבוצת הביקורת אפס עד שמונה שבועות לאחר טיפול בסטרפטוזוטוצין. בשבוע הרביעי, הירידה במשקל של עכברים שטופלו בנרינגנין הייתה משמעותית בהשוואה לעכברים שלא טופלו. רמת הגלוקוז בדם בעכברים הסוכרתיים עלתה באופן דרמטי תוך חודש לאחר השראת סטרפטוזוטוצין.לאחר חודשיים, הוא ירד אוטומטית לרמה שנצפתה לפני חודשיים. לעומת זאת, הטיפול בנרינגנין הוריד את רמות הגלוקוז בדם ב-51.8% בחודש אחד וב-34.8% בחודשיים בהשוואה ל-STZ. בהשוואה לקבוצת הביקורת, העכברים הסוכרתיים הנגרמים על ידי סטרפטוזוטוצין הציגו אובדן עצם כפי שצוין על ידי ירידה בנפח העצם לפי נפח הרקמה ומספר הטרבקולה.בינתיים, הטיפול בנרינגנין הציל משמעותית את אובדן העצם. פעילות אוסטאוקלסט שהוכחה על ידי מספר אוסטאוקלסטים לכל אזור עצם טרבקולרית הייתה מוגברת בעכברים סוכרתיים, אם כי לא נצפתה מובהקות סטטיסטית בין מודלי הבקרה לבין מודלי המחלה. מכתים TRAP של עצם טרבקולרית ואוסטאוקלסטים של שליטה ועכברים הנגרמים על ידי סטרפטוזוטוצין מוצגים כאן.הטיפול בנרינגנין הפחית באופן משמעותי את פעילות האוסטאוקלסט. אצל בעלי החיים הסוכרתיים, הטלופפטיד C-terminal של קולגן מסוג 1 הועלה ב-68.09% והפרופפטיד N-terminal של פרו-קולגן מסוג 1 הועלה ב-204.88% מה שמצביע על עלייה דרמטית בשיעור ספיגת העצם. עם זאת, הטיפול בנרינגנין ירד באופן משמעותי בשני האינדיקטורים של קצב ספיגת העצם.כך שזה מאתגר לפטפט מינון מדויק. חיתוך הקצה הופך את הפיפטינג לקל ומדויק יותר. לחלופין, ניתן להמיר את הנפח הנדרש למסה, אשר יכולה להיות מאוחרת יותר בקלות.זמן הצום של כל בעלי החיים לפני כל ניסוי גלוקוז בשלפוחית השתן חייב להישאר הדבר במהלך הניסוי כולו.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

אפיון מנגנונים מולקולריים של<em&gt; בחי</em&gt; UVR מושרה קטרקט

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

גלאוקומה וישכנע נוהל בבית<em&gt; In vivo</em&gt; מודל עכברוש ואת כל הר רשתית הכנה

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

ניתוח אופטימלי של<em&gt; In vivo</em&gt; ו<em&gt; במבחנה</em&gt; כבדית steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

הכנה של צמחי מרפא: Er-Xian מרתח ו Er-Xian המכיל בסרום עבור<em&gt; בויבו</em&gt;<em&gt; במבחנה</em&gt; ניסויים

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

שלבי הכנה מדידה של תגובתיות ב העכבר רבים ברשתית Vivo לשעבר

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

מוח-כל פילוח וניתוח נקודת השינוי האנטומי במוח MRI – היישום ב- Premanifest של מחלת הנטינגטון

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...