Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

この研究は、中国国家自然科学財団(81973607および81573992)の支援を受けました。

記載されている調査は、国家研究評議会の実験動物の世話と使用に関するガイドラインに準拠しており、上海中医薬大学の動物管理および使用委員会によって承認されました。実験を行う際には、安全のために白衣、使い捨てニトリル手袋、ゴーグルが必要です。
1. in vivo 応用に必要な溶媒の調製とナリンゲニンの推定
<ol><li>次の溶媒を準備します:Tween-80(最終濃...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

植物化学溶液の調製は、 インビボでのその適用の基礎である。このプロトコルでは、ナリンゲニン溶液の調製は、エタノール、DMSO、Tween 80、および0.9%PSなどの異なる溶媒を使用することによって実証されました。完全に溶解した状態の溶液は、室温で長時間放置し、 その後、in vivoで使用する前にろ過して、さらに監視する必要があります。
溶媒測定は、?...

薬物スクリーニングのための植物化学物質の使用に関する研究の増加に伴い、それらの最適な効果を評価するために植物化学溶液を調製するアプローチは注目に値する。化合物1を調製する際には、溶解方法、投与量、濃度などの多くの側面を考慮する必要があります。
溶媒系溶解は、有機化合物調製1に広く用いられている。一般的に使用される溶媒には、水、油、ジメチルスルホキシド(DMSO)、メタノール、エタノール、ギ酸、トゥイーン、グリセリンなどが含まれます2。化合物を胃管投与する場合は、未溶解物質を含む懸濁液が許容されますが、静脈内投与には完全に溶解した溶質が重要です。.油性溶液、懸濁液、およびエマルジョンは毛細血管塞栓症を引き起こす可能性があるため、特に静脈内、筋肉内、腹腔内注射を投与する場合は、化合物調製用の水溶液が推奨されます3。
有効用量範囲は化合物間、および同じ化合物で治療された疾患間でも異なります。.有効用量および安全用量および濃度の決定は、文献および予備実験に依存する4。ここでは、化合物ナリンゲニンの調製が一例として実証される。
ポリフェノール化合物であるナリンゲニン(4,5,7-トリヒドロキシフラバノン)は、肝保護活性5、抗糖尿病6、抗炎症7、および抗酸化活性8の疾患治療で研究されています。インビボ用途では、ナリンゲニンの経口投与が一般的に使用されます。以前の研究では、0.5%〜1%カルボキシメチルセルロース、0.5%メチルセルロース用量、0.01%DMSO、および生理食塩水(PS)でナリンゲニン溶液を50〜100 mg / kgで調製し、経口強制投与で投与したと報告されています9,10,11,12。.その上、他の研究は、3.6 g / kg / d13,14の用量で経口摂取のために3%(wt / wt)でチャウチャウでナリンゲニンを補給することを報告しています。研究では、エタノール(0.5%v / v)、PS、およびDMSOを使用して、腹腔内注射用のナリンゲニンを10〜50 mg / kgで溶解することも報告されています15,16,17,18。側頭葉てんかんの研究では、マウスはPS19に溶解した0.25%カルボキシメチルセルロースに懸濁したナリンゲニンの注射を受けた。これらの研究では、ナリンゲニン溶液を調製するためのさまざまな溶媒の使用が報告されていますが、溶解状態や動物の反応などの詳細は報告されていません。.
このプロトコルは、糖尿病誘発性骨粗鬆症におけるin vivo適用のためのナリンゲニン溶液を調製するための手順を導入する。注射液の調製には、溶媒および化合物の調製、投与量推定、溶解プロセス、および濾過が含まれる。投与量は、文献研究および予備実験に基づいて、毎日3日間注射を投与した後にマウスを監視し、マウスの行動に応じて投与量を変更することにより決定した。最終的に選択された濃度(20 mg / kg b.w.)は、高脂肪食およびストレプトゾトシン(STZ)誘発糖尿病マウス20,21で週5日、8週間腹腔内投与されました。糖尿病性骨粗鬆症におけるナリンゲニンの効果は、血糖値検査、マイクロCT、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ(TRAP)染色、および酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)によって評価されました。
全体として、40〜400 mg / mLの濃度範囲のナリンゲニンは、エタノールまたはDMSOまたは5%(エタノールまたはDMSO)と95%PS(v / v)のいずれにも完全に溶解しないことが観察されました。しかしながら、ナリンゲニンは3.52%DMSO、3.52%トゥイーン80、および92.96%PSの混合物に完全に溶解した。詳細な手順は、研究者が in vivo アプリケーション用の注射溶液として化合物を調製するのに役立ちます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
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</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

化合物(ファイトケミカル)溶液の調製は、薬物スクリーニングなどの研究に適用する前に見過ごされていますが重要なステップです。化合物の完全な可溶化は、その安全な使用および比較的安定した結果のために必要です。ここでは、高脂肪食およびストレプトゾトシン(STZ)誘発糖尿病モデルにおけるナリンゲニン溶液およびその腹腔内投与を調製するためのプロトコルが例として実証される。少量のナリンゲニン(3.52〜6.69 mg)を使用して、エタノール、ジメチルスルホキシド(DMSO)、および生理食塩水(PS)で再構成されたDMSOとTween 80を含む溶媒への可溶化をテストしました。化合物の完全な可溶化は、溶液の色、遠心分離後の沈殿物の存在(2000 x g で30秒間)、または溶液を室温(RT)で2時間放置することによって決定されます。安定した化合物/ファイトケミカル溶液を得た後、 in vivo 研究に必要な化合物の最終濃度/量を溶媒のみ(PSなし)のストック溶液で調製し、必要に応じてPSで希釈/混合することができます。マウスにおけるナリンゲニンの抗糖尿病性骨粗鬆症効果(20 mg / kg b.w.、2 mg / mLでの腹腔内投与)は、血糖値、骨量(マイクロCT)、および骨吸収率(TRAP染色およびELISA)を測定することによって評価されました。.詳細な有機/植物化学溶液調製物を探している研究者は、この技術の恩恵を受けるでしょう。

高脂肪食給餌およびSTZ誘発糖尿病マウスの体重は、STZ治療後0〜8週間から対照群の体重と比較して減少することが見出された。ナリンゲニン投与マウスの体重減少は、4週目の非処置マウス(STZ群)と比較して有意であった。対照群およびSTZ群には、同じ容量のPSを投与した(表1)。糖尿病マウスの血糖値は、STZ誘導後1か月以内に劇的に上昇しました。その後、動物モデルが確立された...

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Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

ここで、プロトコルは、 インビボ 腹腔内投与のためのナリンゲニン溶液の調製を提示する。ナリンゲニンは、ジメチルスルホキシド、トゥイーン80、および生理食塩水の混合物に完全に溶解します。ナリンゲニンの抗糖尿病性骨粗鬆症効果は、血糖値検査、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ染色、および酵素結合免疫吸着アッセイによって評価されました。

in vivoアプリケーションのためのナリンゲニン溶液の調製

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

最適な効果を評価するためのファイトケミカル溶液を調製するための薬剤スクリーニングアプローチのためのファイトケミカル成分に関する研究が増えるにつれ、私はこのプロトコルの利点を簡単な操作と低コストとして注目していました。このプロトコルは、薬理学の薬物スクリーニングを扱う研究者に利益をもたらします。消費コストを考慮して、予備実験のために少量の植物化学物質から始めることをお勧めします。第二に、通常の注射器の上にインスリン注射器を使用することをお勧めしますエタノール中の1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するには、3.52ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを2ミリリットルのチューブに加えます。チューブをすばやく回転させて、チューブの底に粉末を沈殿させます。次に、8.8マイクロリットルの100%エタノールをチューブに加えて、0.5%溶液を調製します。次に、79.2マイクロリットルの100%エタノールをチューブに加えて、5%溶液を調製します。次に、1.672ミリリットルの0.9%生理食塩水を5%溶液を含むチューブに加える。これにより、エマルジョンが生成されます。次に、遠心分離機は、ナリンゲニンが溶液に完全に溶解しているかどうかを確認するためにチューブを拒否しました。溶解していないナリンゲニンの白い沈殿物が溶液中に現れることがあります。次に、DMSOで1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するために、3.95ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを2ミリリットルのチューブに加えます。すばやく回転した後、9.8ミリリットルのDMSOをチューブに加えて、8.5%溶液を調製します。次に、88.2マイクロリットルのDMSOをチューブに加えて、5%溶液を調製します。次に、1.877ミリリットルの0.9%生理食塩水を溶液に加えます。これにより、エマルジョンが得られます。溶液を遠心分離して、ナリンゲニンが完全に溶解しているかどうかを確認します。ナリンゲニンが溶解していない白色沈殿物が溶液中に現れることがある。次に、Tween 80およびDMSOで1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するために、6.69ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを5ミリリットルのチューブに加える。チューブをすばやく回転させ、117.7マイクロリットルのDMSOを加えて3.5%溶液を調製します。次に、117.7マイクロリットルのトゥイーン80を溶液に加えて、3.5%トゥイーン80および3.5%DMSO濃度を達成します。この溶液を3109.6マイクロリットルの0.9%生理食塩水を含む別の5ミリリットルのチューブにゆっくりと加え、よく振って透明なナリンゲニン溶液を得る。2時間後、溶液は目に見える沈殿物なしで透明なままになります。ナリンゲニン溶液を投与するには、5週齢のC57ブラック6オスマウスを尾の付け根で持ち上げ、尾をそっと後ろに向け、固体の表面に置きます。次に、左手の親指と人差し指で耳の後ろの首筋をつかみ、小指と薬指の間に尻尾を置きます。マウスを仰臥位に保ち、後端をわずかに持ち上げます。ナリンゲニン溶液を注入するには、腹部の皮膚が緊張するようにマウスの背中の皮膚をつかみます。次に、針を腹部の右下または左の象限に10度の角度で押し込みます。膀胱、肝臓、その他の内臓にぶつからないようにするため。針を頭蓋方向に3〜5ミリメートル皮下に走らせてから、腹腔内に45度の角度で挿入します。針が腹壁を通過したら、ゆっくりと溶液を押します。注射後、針をゆっくりと引き出し、漏れを防ぐためにわずかに回転させます。血糖値テストを実行するには、テストストリップを開いて日付をマークします。25ゲージの針刺しで外側尾静脈に小さな穴を開け、一滴の血を絞り出します。ティッシュペーパーで一滴の血液を拭いた後、もう一滴の血液を絞り出し、テストストリップの端に集めます。血糖値計に表示される結果を読んで記録します。高脂肪食給餌およびストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスの体重は、ストレプトゾトシン処置後0〜8週間で対照群マウスのそれと比較して減少した。第4週において、ナリンゲニン処置マウスの体重減少は、非処置マウスと比較して有意であった。糖尿病マウスの血糖値は、ストレプトゾトシン誘導後1ヶ月以内に劇的に上昇した。2か月後、2か月前に観察されたレベルに自動的に減少しました。対照的に、ナリンゲニン治療は、STZと比較して、血糖値を1か月で51.8%、2か月で34.8%低下させました。対照と比較して、ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスは、組織体積および小柱の数による骨体積の減少によって示されるように骨量減少を示した。一方、ナリンゲニン治療は骨量減少を有意に救った。糖尿病マウスでは骨梁面積当たりの破骨細胞数で示した破骨細胞活性は増加したが、対照モデルと疾患モデルとの間に統計学的有意性は認められなかった。コントロールおよびストレプトゾトシン誘導マウスの骨梁および破骨細胞のTRAP染色をここに示す。ナリンゲニン治療は破骨細胞の活性を有意に低下させた。糖尿病動物では、1型コラーゲンのC末端テロペプチドが68.09%上昇し、1型プロコラーゲンのN末端プロペプチドが204.88%上昇し、骨吸収率が劇的に増加したことを示しています。しかし、ナリンゲニン治療は骨吸収率の両方の指標を有意に低下させた。そのため、正確な投与量をピペットで固めることは困難です。チップを切断すると、ピペッティングがより簡単かつ正確になります。あるいは、必要な体積を質量に変換することができ、後で簡単に変換することができます。各膀胱グルコース実験前のすべての動物の絶食時間は、実験全体を通して物のままでなければならない。

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

の分子機構のキャラクタリゼーション<emインビボ&gt;</em&gt; UVR誘発性白内障

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

細胞追跡のためのin vivoでの19 F MRI における

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

マウス収縮圧力を測定するために子宮内テレメトリ<em&gt;インビボ</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

緑内障誘導の手順<em&gt;インビボ</em&gt;ラットモデルと全体のマウント網膜準備

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomicプロファイリングと薬物反応検査のための3D人間バイオゲル培養システムと患者由来の神経膠芽腫細胞を用いた微小腫瘍の発生

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

の最適化分析<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;脂肪肝

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

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漢方薬の準備：Er-Xian煎じ薬とEr-Xian含有血清<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;実験

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

マウス網膜細動脈Ex Vivoでの反応性の測定の準備手順

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

全体脳セグメンテーションと解剖学的脳 MRI の変化点分析-Premanifest ハンチントン病のアプリケーション

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...