Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81973607 및 81573992)의 지원을 받았습니다.

설명 된 조사는 국가 연구위원회의 실험 동물 관리 및 사용 지침을 준수했으며 상하이 중국 전통 의학 대학 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다. 실험을 수행할 때 안전을 위해 실험실 코트, 일회용 니트릴 장갑 및 고글이 필요합니다.
1. 생체 내 적용에 필요한 용매의 제조 및 나린제닌의 추정
<ol><li>다음 용매를 준비하십시오 : 트윈 -80 (최종 농도 범위 : 0.5 ...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. 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U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

식물 화학 용액의 제조는 생체 내에서의 적용을위한 기초입니다. 이 프로토콜에서, 나린제닌 용액의 제조는 에탄올, DMSO, Tween 80 및 0.9% PS와 같은 상이한 용매를 사용하여 입증되었다. 완전히 용해된 상태의 용액은 몇 시간 동안 실온에 유지되도록 하여 추가로 모니터링한 다음 생체 내에서 사용하기 전에 여과해야 합니다.
용매 측정은 이 프로토콜에서 중요한 단...

약물 스크리닝을위한 식물 화학 화합물의 사용에 관한 연구가 증가함에 따라 최적의 효과를 평가하기 위해 식물 화학 용액을 준비하는 접근법에주의를 기울일 가치가 있습니다. 용해 방법, 투여량 및 농도와 같은 많은 측면이 화합물1을 제조할 때 고려되어야 한다.
용매 기반 용해는 유기 화합물 제조1에 널리 사용됩니다. 일반적으로 사용되는 용매에는 물, 오일, 디메틸 설폭 사이드 (DMSO), 메탄올, 에탄올, 포름산, 트윈, 글리세린 등이 포함됩니다2. 화합물이 위 위관영양에 의해 투여될 때 용해되지 않은 물질이 포함된 현탁액이 허용되지만, 완전히 용해된 용질은 정맥내 투여에 중요합니다. 오일 용액, 현탁액 및 에멀젼은 모세관 색전증을 유발할 수 있으므로, 특히 정맥 내, 근육 내 및 복강 내 주사를 투여 할 때 화합물 제조를위한 수용액이 제안됩니다3.
유효 용량 범위는 화합물마다 다르며 동일한 화합물로 치료되는 질병 사이에서도 다양합니다. 유효 및 안전한 용량과 농도의 결정은 문헌 및 예비 실험4에 의존한다. 여기서, 나린제닌 화합물의 제조가 예로서 입증된다.
폴리페놀 화합물인 나린제닌(4,5,7-트리하이드록시-플라바논)은 간 보호5, 항당뇨병6, 항염증제7 및 항산화 활성8에 대한 질병 치료에 연구되었습니다. 생체 내 적용의 경우, 나린제닌의 경구 투여가 일반적으로 사용됩니다. 이전 연구에서는 경구 위관 영양 9,10,11,12로 투여되는 50-100mg/kg의 0.5%-1% 카르복시메틸셀룰로오스, 0.5% 메틸셀룰로오스 용량, 0.01% DMSO 및 생리식염수(PS)에 나린제닌 용액을 준비하는 것을 보고했습니다. 게다가, 다른 연구에서는 3g/kg/d 3.6의 용량으로 경구 섭취를 위해13,14%(wt/wt)의 차우로 나린제닌을 보충했다고 보고했습니다. 연구에서는 에탄올 (0.5 % v / v), PS 및 DMSO를 사용하여 10-50 mg / kg15,16,17,18에서 복강 내 주사 용 나린 제닌을 용해시키는 것으로보고되었습니다. 측두엽 간질에 대한 연구에서, 마우스는 PS19에 용해 된 0.25 % 카르복시 메틸 셀룰로오스에 현탁 된 나린 제닌을 주사 받았다. 이러한 연구에서는 나린제닌 용액을 준비하기 위해 다른 용매를 사용했다고 보고하지만 용해 상태 및 동물 반응과 같은 자세한 내용은 보고되지 않았습니다.
이 프로토콜은 당뇨병 유발 골다공증에서 생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액을 제조하는 절차를 소개합니다. 주사액의 제조는 용매 및 화합물의 제조, 투여량 추정, 용해 공정 및 여과를 포함한다. 투여량은 문헌 연구 및 예비 실험을 기반으로 3일 동안 매일 주사를 투여한 후 마우스를 모니터링하고 마우스 행동에 따라 투여량을 수정하여 결정하였다. 최종 선택된 농도 (20 mg / kg BW)는 고지방 식단과 스트렙토 조 토신 (STZ) 유발 당뇨병 마우스20,21에서 8 주 동안 주당 5 일 복강 내 투여되었습니다. 당뇨병성 골다공증에서 나린제닌의 효과는 혈당 검사, 마이크로 CT, 주석산 내성 산 포스파타제(TRAP) 염색 및 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA)에 의해 평가되었습니다.
전반적으로, 40-400 mg / mL의 농도 범위에서 나린 제닌은 에탄올 또는 DMSO 또는 5 % (에탄올 또는 DMSO)와 95 % PS (v / v)에 완전히 용해되지 않는 것으로 관찰되었다. 그러나, 나린제닌은 3.52% DMSO, 3.52% 트윈 80, 및 92.96% PS의 혼합물에 완전히 용해되었다. 자세한 절차는 연구자가 생체 내 적용을 위한 주사 용액으로 화합물을 준비하는 데 도움이 될 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

화합물(파이토케미컬) 용액의 제조는 약물 스크리닝과 같은 연구에 적용되기 전에 간과되지만 중요한 단계입니다. 화합물의 완전한 가용화는 안전한 사용과 비교적 안정적인 결과를 위해 필요합니다. 여기서, 고지방 식이에서 나린제닌 용액을 제조하고 이의 복강내 투여를 위한 프로토콜과 스트렙토조토신(STZ) 유도 당뇨병 모델을 예로 들 수 있다. 소량의 나린제닌(3.52-6.69mg)을 사용하여 각각 에탄올, 디메틸설폭사이드(DMSO) 및 DMSO 플러스 생리 식염수(PS)로 재구성한 트윈 80을 포함한 용매에서 가용화를 테스트했습니다. 화합물의 완전한 가용화는 용액의 색상, 원심 분리 후 침전물의 존재 여부 (30 초 동안 2000 x g ) 또는 용액을 실온 (RT)에서 2 시간 동안 방치함으로써 결정된다. 안정한 화합물 / 식물 화학 용액을 얻은 후, 생체 내 연구에 필요한 화합물의 최종 농도 / 양은 용매 전용 (PS 없음) 스톡 용액에서 제조 한 다음 원하는대로 PS와 희석 / 혼합 할 수 있습니다. 마우스에서 나린제닌의 항당뇨병 골다공증 효과(20mg/kg BW, 2mg/mL에서 복강 내 투여)는 혈당, 골량(micro-CT) 및 골 흡수율(TRAP 염색 및 ELISA)을 측정하여 평가했습니다. 상세한 유기/식물화학 용액 준비를 원하는 연구원은 이 기술의 이점을 누릴 수 있습니다.

고지방 식이 및 STZ 유발 당뇨 마우스의 체중은 STZ 처리 후 0-8주에서 대조군과 비교하였을 때 감소하는 것으로 나타났다. 나린제닌 처리된 마우스의 체중 감소는 4주차에 처리되지 않은 마우스(STZ 그룹)에 비해 유의했습니다. 대조군과 STZ 그룹은 동일한 부피의 PS를 투여하였다(표 1). 당뇨병 마우스의 혈당 수치는 STZ 유도 후 1 개월 이내에 극적으로 증가했습니다. 그런 다음 동물 모델?...

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Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

여기서, 상기 프로토콜은 생체내 복강 내 투여를 위한 나린제닌 용액의 제조를 제시한다. 나린제닌은 디메틸설폭사이드, 트윈 80 및 식염수의 혼합물에 완전히 용해된다. 나린제닌의 항당뇨병성 골다공증 효과는 혈당 검사, 주석산 내성 산 포스파타제 염색 및 효소 결합 면역 흡착 분석에 의해 평가되었습니다.

생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액의 제조

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

최적의 효과 평가를 위해 식물 화학 용액을 제조하기위한 약물 스크리닝 접근법을위한 식물 화학 성분에 대한 연구가 증가함에 따라이 프로토콜의 장점은 간단한 조작과 저렴한 비용이었습니다. 이 프로토콜은 약리학의 약물 스크리닝을 다루는 연구자에게 도움이 될 것입니다. 소비 비용을 고려하여 예비 실험을 위해 소량의 식물 화학 화합물로 시작하는 것이 좋습니다.둘째, 일반 주사기 위에 인슐린 주사기를 사용하는 것이 좋습니다 에탄올에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하려면 3.52 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가하십시오. 튜브를 빠르게 돌려 튜브 바닥에 분말을 정착시킵니다. 다음으로 8.8 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 0.5 % 용액을 준비합니다.그런 다음 79.2 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로, 1.672 % 용액이 들어있는 튜브에 0.9 % 생리 식염수 5 밀리리터를 첨가하십시오. 이것은 에멀젼을 생성합니다.그런 다음 원심 분리기는 나린 제닌이 용액에 완전히 용해되었는지 확인하기 위해 튜브를 거부했습니다. 용해되지 않은 나린 제닌의 백색 침전물이 용액에 나타날 수 있습니다. 다음으로, DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하기 위해, 3.95 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가한다.빠른 회전 후 9.8ml의 DMSO를 튜브에 추가하여 8.5 % 용액을 준비합니다. 그런 다음 88.2 마이크로 리터의 DMSO를 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로 1.877 밀리리터의 0.9 % 식염수를 용액에 첨가하십시오.이로 인해 에멀젼이 생성됩니다. 용액을 원심분리하여 나린제닌이 완전히 용해되었는지 확인합니다. 용해되지 않은 백색 침전물이 용액에 나린제닌이 나타날 수 있습니다.다음으로, Tween 80 및 DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하고, 6.69 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 5 밀리리터 튜브에 첨가한다. 튜브를 빠르게 스핀다운하고 117.7마이크로리터의 DMSO를 추가하여 3.5% 용액을 준비합니다. 그런 다음 117.7 마이크로 리터의 트윈 80을 용액에 첨가하여 3.5 % 트윈 80 및 3.5 % DMSO 농도를 얻습니다.이 용액을 3109.6 마이크로 리터의 0.9 % 식염수가 들어있는 다른 5 밀리리터 튜브에 천천히 첨가하고 잘 흔들어 투명한 나린 제닌 용액을 얻습니다. 2 시간 후, 용액은 눈에 보이는 침전물없이 깨끗하게 유지됩니다. 나린제닌 용액을 투여하려면 5주 된 C57 검은 수컷 6마리 쥐의 꼬리 밑부분을 들어 올려 꼬리를 부드럽게 뒤로 젖히는 단단한 표면에 놓습니다.그런 다음 왼쪽 엄지 손가락과 검지로 귀 뒤의 목 자국을 잡고 꼬리를 새끼 손가락과 약지 사이에 놓습니다. 뒤쪽 끝이 약간 올라간 상태에서 마우스를 앙와위 자세로 유지하십시오. 나린제닌 용액을 주입하려면 복부 피부가 팽팽해지도록 마우스 등의 피부를 잡습니다.그런 다음 바늘을 복부의 오른쪽 아래 또는 왼쪽 사분면에 10도 각도로 밀어 넣습니다. 방광, 간 또는 기타 내부 장기에 부딪히지 않도록하십시오. 바늘을 두개골 방향으로 3-5 밀리미터 동안 피하 실행 한 다음 복강 내로 45도 각도로 삽입하십시오.바늘이 복벽을 통과하면 천천히 용액을 밀어냅니다. 주사 후 바늘을 천천히 당겨 누출을 방지하기 위해 약간 회전시킵니다. 혈당 검사를 수행하려면 테스트 스트립을 열고 날짜를 표시하십시오.25 게이지 바늘 찌름으로 측면 꼬리 정맥에 작은 구멍을 뚫고 피 한 방울을 짜냅니다. 티슈 페이퍼로 혈액 방울을 닦은 후 다른 혈액 방울을 짜내고 테스트 스트립 가장자리에 모으십시오. 혈당 측정기에 표시된 결과를 읽고 기록하십시오.스트렙토조토신이 유발된 고지방 사료를 급여한 당뇨 마우스의 체중은 스트렙토조토신 처리 후 8주째 대조군 마우스에 비해 감소하였다. 4주차에 나린제닌 처리된 마우스의 체중 감소는 처리되지 않은 마우스에 비해 유의했습니다. 당뇨병 마우스의 혈당 수치는 스트렙토 조토 신 유도 후 1 개월 이내에 극적으로 증가했습니다.2 개월 후 2 개월 전에 관찰 된 수준으로 자동 감소했습니다. 대조적으로, 나린제닌 치료는 STZ에 비해 혈당 수치를 한 달에 51.8%, 두 달에 34.8% 낮췄습니다. 대조군과 비교하여, 스트렙토 조토신 유도 당뇨병 마우스는 조직 부피 및 섬유주 수에 의한 뼈 부피의 감소로 나타난 바와 같이 골 손실을 나타냈다.한편, 나린제닌 치료는 뼈 손실을 크게 구했습니다. 섬유주 뼈 면적당 파골세포 수에 의해 나타난 파골세포 활성은 대조군과 질환 모델 사이에 통계적 유의성이 관찰되지 않았지만, 당뇨병 마우스에서 증가하였다. 대조군 및 스트렙토조토신 유도 마우스의 섬유주 뼈 및 파골세포의 TRAP 염색이 여기에 표시됩니다.나린제닌 치료는 파골세포 활동을 유의하게 감소시켰다. 당뇨병 동물에서 1형 콜라겐의 C-말단 텔로펩타이드는 68.09%, 제1형 프로콜라겐의 N-말단 프로펩타이드는 204.88% 상승하여 골 흡수율이 급격히 증가했습니다. 그러나 나린제닌 치료는 골 흡수율의 두 지표를 모두 유의하게 감소시켰습니다.따라서 정확한 복용량을 피펫팅하는 것은 어렵습니다. 팁을 절단하면 피펫팅이 더 쉽고 정확해집니다. 또는 필요한 부피를 질량으로 변환 할 수 있으며 나중에 쉽게 변환 할 수 있습니다.각 방광 포도당 실험 전에 모든 동물의 공복 시간은 전체 실험 동안 그대로 유지되어야 한다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

의 분자 메커니즘의 특성<em&gt; 생체에</em&gt; UVR 유도 백내장

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

연구

의학

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

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세포 추적을위한 생체 19 F MRI에서

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

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자궁 원격 측정은 마우스 수축 압력을 측정하는<em&gt; 생체</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

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녹내장 유도 절차<em&gt; 생체</em&gt; 쥐 모델 및 전체 마운트 망막 준비

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomic 프로파일 의약품 응답 테스트를위한 3D 인간의를 Biogel 문화 시스템을 사용 Microtumors 및 환자 유래 아교 모세포종 세포의 생성

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

의 최적화 분석<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 체외</em&gt; 간 지방증

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em&gt; In Vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

마우스 망막 Arterioles Ex Vivo 에서 반응의 측정을 위한 준비 단계

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

전체 두뇌 세분화 및 해 부 뇌 MRI의 변화 포인트 분석-Premanifest Huntington의 질병에 응용

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...