Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (81973607 og 81573992).

Undersøkelsene som ble beskrevet var i samsvar med retningslinjene for pleie og bruk av laboratoriedyr fra National Research Council og ble godkjent av Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Animal Care and Use Committee. Når du utfører forsøkene, er laboratoriefrakker, engangshansker i nitril og vernebriller nødvendig for sikkerhetsformål.
1. Tilberedning av løsemidler og estimering av naringenin som kreves for in vivo påføring
<ol><li>Forbered følgende løsn...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

Fremstillingen av fytokjemisk løsning er grunnlaget for dets anvendelse in vivo. I denne protokollen ble fremstillingen av naringeninoppløsning demonstrert ved bruk av forskjellige løsningsmidler, som etanol, DMSO, Tween 80 og 0,9% PS. Oppløsningen i fullstendig oppløst status må overvåkes ytterligere ved å la den forbli ved romtemperatur i noen lengre timer, og deretter filtreres før den brukes in vivo.
Bestemmelse av løsemidler er et kritisk trinn i denne protokol...

Med økende studier om bruk av fytokjemiske forbindelser for narkotika screening, tilnærminger til å forberede fytokjemiske løsninger for å evaluere deres optimale effekter er verdt å gi oppmerksomhet til. Mange aspekter som oppløsningsmetodikk, dosering og konsentrasjon skal vurderes ved fremstilling av forbindelsen1.
Løsningsmiddelbasert oppløsning er mye brukt til fremstilling av organiske forbindelser1. De vanlige løsningsmidlene inkluderer vann, olje, dimetylsulfoksid (DMSO), metanol, etanol, maursyre, Tween, glyserin, etc2. Selv om en suspensjon med uoppløste stoffer er akseptabel når forbindelsen administreres ved gastrisk gavage, er et fullstendig oppløst løsemiddel kritisk for intravenøs administrering. Siden oljeløsning, suspensjon og emulsjon kan forårsake kapillæremboli, foreslås en vandig løsning for sammensatt fremstilling, spesielt ved administrering av intravenøse, intramuskulære og intraperitoneale injeksjoner3.
Det effektive doseområdet varierer mellom forbindelser og til og med blant sykdommer behandlet med samme forbindelse. Bestemmelse av effektiv og sikker dose og konsentrasjon er avhengig av litteratur og foreløpige eksperimenter4. Her er fremstillingen av forbindelsen naringenin demonstrert som et eksempel.
Naringenin (4,5,7-trihydroksy-flavanon), en polyfenolisk forbindelse, har blitt studert i sykdomsbehandling for sin hepatoprotektive5, antidiabetiske6, antiinflammatoriske7 og antioksidantaktiviteter8. For in vivo applikasjoner brukes ofte oral administrering av naringenin. Tidligere studier rapporterte fremstilling av naringeninoppløsning i 0,5% -1% karboksymetylcellulose, 0,5% metylcellulosedose, 0,01% DMSO og fysiologisk saltvann (PS) ved 50-100 mg / kg, administrert av oral gavage 9,10,11,12. Dessuten har andre studier rapportert å supplere naringenin med chow ved 3% (wt / wt) for oralt inntak i en dose på 3,6 g / kg / d13,14. Studier har også rapportert bruk av etanol (0,5% v / v), PS og DMSO for å oppløse naringenin for intraperitoneal injeksjon ved 10-50 mg / kg15,16,17,18. I en studie av temporal lobe epilepsi fikk mus en injeksjon av naringenin suspendert i 0,25% karboksymetylcellulose oppløst i PS19. Selv om disse studiene rapporterer bruk av forskjellige løsningsmidler for å fremstille naringeninløsninger, har ytterligere detaljer, som oppløsningsstatus og dyrerespons, ikke blitt rapportert.
Denne protokollen introduserer en prosedyre for fremstilling av naringeninløsning for in vivo påføring ved diabetisk indusert osteoporose. Fremstillingen av injeksjonsoppløsningen inkluderer fremstilling av løsningsmidler og forbindelser, doseringsestimering, oppløsningsprosess og filtrering. Dosen ble bestemt basert på litteraturforskning og foreløpige eksperimenter ved å overvåke mus etter administrering av injeksjoner hver dag i 3 dager og modifisere doseringen i henhold til museadferd. Den endelige valgte konsentrasjonen (20 mg/kg kroppsvekt) ble administrert intraperitonealt 5 dager per uke i 8 uker i et fettrikt kosthold og streptozotocin (STZ)-induserte diabetiske mus20,21. Effekten av naringenin ved diabetisk osteoporose ble evaluert ved blodglukosetesting, mikro-CT, tartratresistent syrefosfatase (TRAP) farging og enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA).
Totalt ble det observert at naringenin i et konsentrasjonsområde på 40-400 mg/ml ikke ble fullstendig oppløst i verken etanol eller DMSO eller 5 % (etanol eller DMSO) pluss 95 % PS (v/v). Imidlertid oppløste naringenin helt i en blanding av 3,52% DMSO, 3,52% Tween 80 og 92,96% PS. Den detaljerte prosedyren vil hjelpe forskere til å forberede forbindelsen som en injeksjonsløsning for in vivo applikasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

Fremstillingen av en sammensatt (fytokjemisk) løsning er et oversett, men kritisk skritt før det brukes i studier som narkotikascreening. Den komplette oppløseliggjøringen av forbindelsen er nødvendig for sikker bruk og relativt stabile resultater. Her er en protokoll for fremstilling av naringeninoppløsning og dens intraperitoneale administrering i et fettfattig kosthold og streptozotocin (STZ) -indusert diabetisk modell vist som et eksempel. En liten mengde naringenin (3,52-6,69 mg) ble brukt til å teste dets oppløselighet i løsningsmidler, inkludert etanol, dimetylsulfoksid (DMSO) og DMSO pluss Tween 80 rekonstituert i fysiologisk saltvann (PS). Fullstendig oppløsning av forbindelsen bestemmes ved å observere fargen på løsningen, tilstedeværelsen av utfellinger etter sentrifugering (2000 x g i 30 s), eller la løsningen stå i 2 timer ved romtemperatur (RT). Etter å ha oppnådd en stabil forbindelse/fytokjemisk løsning, kan den endelige konsentrasjonen/mengden av forbindelsen som kreves for in vivo-studier fremstilles i en løsemiddelbasert (ingen PS) stamløsning, og deretter fortynnes/blandes med PS etter ønske. De antidiabetiske osteoporotiske effektene av naringenin hos mus (intraperitoneal administrering ved 20 mg/kg kroppsvekt, 2 mg/ml) ble vurdert ved å måle blodsukker, benmasse (mikro-CT) og benresorpsjonshastighet (TRAP-farging og ELISA). Forskere som leter etter detaljerte organiske / fytokjemiske løsningspreparater, vil dra nytte av denne teknikken.

Kroppsvekten til de fettfattige diettmatede og STZ-induserte diabetiske musene ble funnet å redusere sammenlignet med kontrollgruppene fra 0-8 uker etter STZ-behandling. Vekttapet til naringeninbehandlede mus var signifikant sammenlignet med de ikke-behandlede musene (STZ-gruppen) ved uke 4. Kontroll- og STZ-gruppen ble gitt med samme ps-volum (tab 1). Blodsukkernivået hos diabetiske mus økte dramatisk innen 1 måned etter STZ-induksjon. Den ble deretter automatisk redusert til et nivå observert for ...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Her presenterer protokollen fremstilling av naringeninoppløsning for in vivo intraperitoneal administrering. Naringenin er fullstendig oppløst i en blanding av dimetylsulfoksid, Tween 80 og saltvann. De antidiabetiske osteoporotiske effektene av naringenin ble vurdert ved blodglukosetesting, tartratresistent syrefosfatasefarging og enzymbundet immunosorbentanalyse.

Fremstilling av Naringenin-oppløsning for in vivo-påføring

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Med økende studier om fytokjemiske komponenter for narkotika screening tilnærminger for å forberede fytokjemisk løsning for evaluering av optimale effekter, var jeg oppmerksom på fordelene med denne protokollen som enkel drift og lave kostnader. Denne protokollen vil være til nytte for forskerne som arbeider med legemiddelscreening av farmakologi. Vi foreslår at du starter med en liten mengde fytokjemisk forbindelse for foreløpige eksperimenter, med tanke på forbrukskostnaden.For det andre anbefales det å bruke en insulinsprøyte over en vanlig sprøyte For å tilberede en to milligram per milliliter naringeninoppløsning i etanol, veier 3,52 milligram naringeninpulver og tilsett det til et to milliliter rør. Spinn røret raskt for å bosette pulveret i bunnen av røret. Deretter tilsettes 8,8 mikroliter 100% etanol til røret for å lage en 0,5% løsning.Tilsett deretter 79,2 mikroliter 100% etanol til røret for å lage en 5% løsning. Deretter tilsettes 1,672 milliliter 0,9% fysiologisk saltvann til røret som inneholder 5%-løsningen. Dette vil produsere en emulsjon.Deretter nektet sentrifugen røret for å sjekke om naringeninet er fullstendig oppløst i løsningen. Hvite utfellinger av uoppløst naringenin kan forekomme i løsningen. Deretter, for å forberede en to milligram per milliliter naringeninoppløsning i DMSO, veier 3,95 milligram naringeninpulver og tilsett det i et to milliliter rør.Etter et raskt spinn, tilsett 9,8 milliliter DMSO til røret for å forberede 8,5%løsning. Tilsett deretter 88,2 mikroliter DMSO til røret for å lage en 5% løsning. Deretter tilsettes 1, 877 milliliter 0, 9% saltvann til løsningen.Dette vil resultere i en emulsjon. Sentrifuge løsningen for å sjekke om naringenin er helt oppløst. Hvite utfellinger har uoppløst naringenin kan vises i løsningen.Deretter, for å forberede en to milligram per milliliter naringeninoppløsning i Tween 80 og DMSO, veier 6,69 milligram naringeninpulver og tilsett det i et fem milliliter rør. Spinn raskt ned i røret, og tilsett 117,7 mikroliter DMSO for å lage en 3,5%løsning. Tilsett deretter 117,7 mikroliter Tween 80 til løsningen for å oppnå en 3,5% Tween 80 og 3,5% DMSO-konsentrasjon.Tilsett sakte denne løsningen til et annet fem milliliter rør som inneholder 3109,6 mikroliter 0,9% saltvann og rist godt for å oppnå en klar naringeninløsning. Etter to timer vil løsningen forbli klar uten synlige utfellinger. For å administrere naringeninløsningen, løft en fem uker gammel C57 svart seks hannmus ved foten av halen og plasser den på en solid overflate som plasserer halen forsiktig tilbake.Deretter tar du tak i halsen bak ørene med venstre tommel og pekefinger og plasserer halen mellom lille- og ringfingeren. Hold musen i en liggende stilling med den bakre enden litt forhøyet. For å injisere naringeninoppløsningen, ta tak i huden på musens rygg slik at bukhuden er stram.Skyv deretter nålen inn i nedre høyre eller venstre kvadrant av magen i en 10-graders vinkel. for å unngå å treffe blæren, leveren eller andre indre organer. Kjør nålen subkutant i kranial retning i tre til fem millimeter, og sett den deretter i en 45 graders vinkel inn i bukhulen.Når nålen passerer gjennom bukveggen, skyv oppløsningen sakte. Etter injeksjonen trekkes kanylen sakte ut og roterer den litt for å forhindre lekkasje. For å utføre en blodsukkertest, åpne teststrimlene og merk datoen.Lag en liten punktering på den laterale halevenen med en 25-gauge nålpinne og klem ut en dråpe blod. Etter å ha tørket bloddråpen med silkepapir, klem ut en annen dråpe blod og samle den på kanten av teststrimmelen. Les av og registrer resultatet som vises på glukosemåleren.Kroppsvekten til dietten med høyt fettinnhold og streptozotocin-induserte diabetiske mus ble redusert sammenlignet med kontrollgruppemus null til åtte uker etter streptozotocinbehandling. I den fjerde uken var vekttapet til naringeninbehandlede mus signifikant sammenlignet med ikke-behandlede mus. Blodsukkernivået hos diabetiske mus økte dramatisk innen en måned etter streptozotocinininduksjon.Etter to måneder gikk den automatisk ned til et nivå observert for to måneder siden. I motsetning til dette senket naringeninbehandling blodsukkernivået med 51,8% ved en måned og 34,8% ved to måneder sammenlignet med STZ. Sammenlignet med kontroller viste de streptozotocin-induserte diabetiske musene bentap som indikert av en reduksjon i beinvolumet etter vevvolum og antall trabecula.I mellomtiden reddet naringeninbehandling betydelig bentapet. Osteoklastaktivitet vist ved osteoklasttall per trabekulært benområde ble økt hos diabetiske mus, selv om det ikke ble observert statistisk signifikans mellom kontroll- og sykdomsmodellene. TRAP-farging av trabekulær bein og osteoklaster av kontroll og streptozotocin-induserte mus er vist her.Naringenin-behandling reduserte osteoklastaktivitetene betydelig. Hos diabetiske dyr ble det C-terminale telopeptidet av type ett kollagen forhøyet med 68,09 % og det N-terminale propeptidet av type ett Prokollagen ble forhøyet med 204,88 %, noe som indikerer en dramatisk økning i benresorpsjonsraten. Imidlertid reduserte naringeninbehandling signifikant begge indikatorene på benresorpsjonshastigheten.Så det er utfordrende å pipette nøyaktig dosering. Avskjæring av tuppen gjør pipetteringen enklere og mer nøyaktig. Alternativt kan det nødvendige volumet konverteres til en masse, som senere enkelt kan gjøres.Fastetiden til alle dyr før hvert blæreglukoseeksperiment må forbli tingen under hele forsøket.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Karakterisering av molekylære mekanismer for<em&gt; In vivo</em&gt; UVR Induced Cataract

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterin Telemetri å måle Mouse kontraktile Trykk<em&gt; I Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaukom-induserende prosedyre i en<em&gt; I Vivo</em&gt; Rat Model og Whole-mount Retina Forberedelse

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Generering av Microtumors Bruke 3D Menneskelig Biogel Kultur System og pasient-avledet glioblastom celler for Kinomic Profilering and Drug Response Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Nedbryting av museceller fra menneske tumorxenotransplantater forbedrer Nedstrøms Analyse av Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimalisert Analyse av<em&gt; I Vivo</em&gt; og<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse av urtemedisin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-holdig Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; I Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Forberedelsene for måling av reaktivitet i musen Retinal arterioler Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

Hele-hjerne segmentering og viser analyse av anatomiske hjernen MRI-programmet i Premanifest Huntingtons sykdom

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...