Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81973607 e 81573992).

As investigações descritas estavam em conformidade com as Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Conselho Nacional de Pesquisa e foram aprovadas pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai. Ao realizar os experimentos, jalecos, luvas nitrílicas descartáveis e óculos de proteção são necessários para fins de segurança.
1. Preparação de solventes e estimativa da naringenina necessária para aplicação in...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. 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U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

A preparação de solução fitoquímica é a base para a sua aplicação in vivo. Neste protocolo, o preparo da solução de naringenina foi demonstrado por meio do uso de diferentes solventes, como etanol, DMSO, Tween 80 e PS a 0,9%. A solução em estado completamente dissolvido precisa ser monitorada ainda mais, permitindo que permaneça à temperatura ambiente por algumas horas prolongadas e, em seguida, filtrada antes de ser usada in vivo.
A determinação de solventes ...

Com o aumento dos estudos sobre o uso de compostos fitoquímicos para triagem de medicamentos, vale a pena dar atenção às abordagens para preparar soluções fitoquímicas para avaliar seus efeitos ótimos. Muitos aspectos, como a metodologia de dissolução, dosagem e concentração, devem ser considerados ao preparar o composto1.
A dissolução à base de solvente é amplamente utilizada para a preparação de compostos orgânicos1. Os solventes comumente usados incluem água, óleo, dimetilsulfóxido (DMSO), metanol, etanol, ácido fórmico, Tween, glicerina, etc2. Embora uma suspensão com substâncias não dissolvidas seja aceitável quando o composto é administrado por gavagem gástrica, um soluto totalmente dissolvido é crítico para administração intravenosa. Como a solução oleosa, a suspensão e a emulsão podem causar embolias capilares, sugere-se uma solução aquosa para o preparo de compostos, especialmente quando se administram injeções intravenosas, intramusculares e intraperitoneais3.
A faixa de dose efetiva varia entre os compostos e até mesmo entre as doenças tratadas com o mesmo composto. As determinações da dose efetiva e segura e da concentração dependem da literatura e de experimentos preliminares4. Aqui, a preparação do composto naringenina é demonstrada como um exemplo.
A naringenina (4,5,7-trihidroxi-flavanona), um composto polifenólico, tem sido estudada no tratamento da doença por suas atividades hepatoprotetoras5, antidiabéticas6, anti-inflamatórias7 e antioxidantes8. Para aplicações in vivo, a administração oral de naringenina é comumente usada. Estudos prévios relataram o preparo de solução de naringenina em carboximetilcelulose a 0,5%-1%, dose de metilcelulose a 0,5%, DMSO a 0,01% e solução salina fisiológica (PS) a 50-100 mg/kg, administrada por gavagem oral 9,10,11,12. Além disso, outros estudos relataram a suplementação de naringenina com ração a 3% (em peso/m) para ingestão oral na dose de 3,6 g/kg/d13,14. Estudos também relataram o uso de etanol (0,5% v/v), PS e DMSO para dissolver naringenina para injeção intraperitoneal a 10-50 mg/kg15,16,17,18. Em um estudo de epilepsia do lobo temporal, camundongos receberam uma injeção de naringenina suspensa em carboximetilcelulose a 0,25% dissolvida em PS19. Embora esses estudos relatem o uso de diferentes solventes para preparar soluções de naringenina, mais detalhes, como o estado de dissolução e a resposta animal, não foram relatados.
Este protocolo introduz um procedimento para preparar solução de naringenina para aplicação in vivo na osteoporose induzida por diabetes. A preparação da solução injetável inclui a preparação de solventes e compostos, estimativa de dosagem, processo de dissolução e filtração. A dosagem foi determinada com base em pesquisas bibliográficas e experimentos preliminares, monitorando camundongos após a administração de injeções todos os dias durante 3 dias e modificando a dosagem de acordo com os comportamentos dos camundongos. A concentração final escolhida (20 mg/kg de p.c.) foi administrada por via intraperitoneal 5 dias por semana durante 8 semanas em uma dieta rica em gordura e camundongos diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ)20,21. Os efeitos da naringenina na osteoporose diabética foram avaliados por meio de testes de glicose no sangue, micro-TC, coloração de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e ensaio imunoenzimático (ELISA).
No geral, observou-se que a naringenina em uma faixa de concentração de 40-400 mg/mL não se dissolveu completamente em etanol ou DMSO ou 5% (etanol ou DMSO) mais 95% PS (v/v). No entanto, a naringenina se dissolveu completamente em uma mistura de 3,52% de DMSO, 3,52% de Tween 80 e 92,96% de PS. O procedimento detalhado ajudará os pesquisadores a preparar o composto como uma solução de injeção para aplicação in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

A preparação de uma solução composta (fitoquímica) é uma etapa negligenciada, mas crítica, antes de sua aplicação em estudos como a triagem de medicamentos. A solubilização completa do composto é necessária para o seu uso seguro e resultados relativamente estáveis. Aqui, um protocolo para o preparo de solução de naringenina e sua administração intraperitoneal em uma dieta rica em gordura e modelo diabético induzido por estreptozotocina (STZ) é demonstrado como exemplo. Uma pequena quantidade de naringenina (3,52-6,69 mg) foi usada para testar sua solubilização em solventes, incluindo etanol, dimetilsulfóxido (DMSO) e DMSO mais Tween 80 reconstituído em solução salina fisiológica (PS), respectivamente. A solubilização completa do composto é determinada observando a cor da solução, a presença de precipitados após a centrifugação (2000 x g por 30 s) ou permitindo que a solução permaneça por 2 h à temperatura ambiente (RT). Após a obtenção de um composto estável/solução fitoquímica, a concentração/quantidade final do composto necessária para estudos in vivo pode ser preparada numa solução-mãe apenas com solvente (sem PS) e, em seguida, diluída/misturada com PS conforme desejado. Os efeitos osteoporóticos antidiabéticos da naringenina em camundongos (administração intraperitoneal a 20 mg/kg de p.c., 2 mg/mL) foram avaliados pela medição da glicemia, massa óssea (micro-TC) e taxa de reabsorção óssea (coloração TRAP e ELISA). Os pesquisadores que procuram preparações detalhadas de soluções orgânicas / fitoquímicas se beneficiarão dessa técnica.

Verificou-se que o peso corporal dos camundongos diabéticos alimentados com dieta rica em gordura e induzidos por STZ diminuiu quando comparado com o dos grupos controle de 0-8 semanas após o tratamento com STZ. A perda de peso dos ratos tratados com naringenina foi significativa em comparação com os ratos não tratados (grupo STZ) na semana 4. Os grupos controle e STZ foram administrados com o mesmo volume de PS (Tabela 1). O nível de glicose no sangue em ratos diabéticos aumentou drasticamente de...

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Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Aqui, o protocolo apresenta o preparo da solução de naringenina para administração intraperitoneal in vivo. A naringenina é totalmente dissolvida em uma mistura de dimetilsulfóxido, Tween 80, e solução salina. Os efeitos osteoporóticos antidiabéticos da naringenina foram avaliados por teste de glicose no sangue, coloração de fosfatase ácida resistente ao tartarato e ensaio de imunoabsorção enzimática.

Preparação da Solução Naringenin para Aplicação In Vivo

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Com o aumento dos estudos que dizem respeito aos componentes fitoquímicos para abordagens de triagem de fármacos para preparar solução fitoquímica para avaliação de efeitos ótimos, fui dando atenção às vantagens deste protocolo como operação simples e de baixo custo. Este protocolo beneficiará os pesquisadores que lidam com a triagem de drogas da farmacologia. Sugere-se começar com uma pequena quantidade de composto fitoquímico para experimentos preliminares, considerando o custo de consumo.Em segundo lugar, recomenda-se o uso de uma seringa de insulina sobre uma seringa regular Para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em etanol, pese 3,52 miligramas de pó de naringenina e adicione-a a um tubo de dois mililitros. Gire rapidamente o tubo para assentar o pó no fundo do tubo. Em seguida, adicione 8,8 microlitros de etanol a 100% ao tubo para preparar uma solução a 0,5%.Em seguida, adicione 79,2 microlitros de etanol a 100% ao tubo para preparar uma solução a 5%. Em seguida, adicione 1,672 mililitros de solução salina fisiológica a 0,9% ao tubo que contém a solução a 5%. Isso produzirá uma emulsão.Em seguida, a centrífuga recusou o tubo para verificar se a naringenina está completamente dissolvida na solução. Precipitados brancos de naringenina não dissolvida podem aparecer na solução. Em seguida, para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em DMSO, pese 3,95 miligramas de pó de naringenina e adicione-o a um tubo de dois mililitros.Após um giro rápido, adicione 9,8 mililitros de DMSO ao tubo para preparar a solução a 8,5%. Em seguida, adicione 88,2 microlitros de DMSO ao tubo para preparar uma solução a 5%. Em seguida, adicione 1,877 mililitros de solução salina a 0,9% à solução.Isso resultará em uma emulsão. Centrifugar a solução para verificar se a naringenina está completamente dissolvida. Precipitados brancos têm naringenina não dissolvida pode aparecer na solução.Em seguida, para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em Tween 80 e DMSO, pese 6,69 miligramas de pó de naringenina e adicione-o em um tubo de cinco mililitros. Gire rapidamente o tubo e adicione 117,7 microlitros de DMSO para preparar uma solução a 3,5%. Em seguida, adicione 117,7 microlitros de Tween 80 à solução para obter uma concentração de 3,5% Tween 80 e 3,5% DMSO.Adicione lentamente esta solução a outro tubo de cinco mililitros contendo 3109,6 microlitros de solução salina a 0,9% e agite bem para obter uma solução clara de naringenina. Após duas horas, a solução permanecerá límpida sem quaisquer precipitados visíveis. Para administrar a solução de naringenina, levante um rato C57 preto de seis machos C57 de cinco semanas de idade pela base de sua cauda e coloque-o em uma superfície sólida posicionando sua cauda para trás suavemente.Em seguida, segure o scruff do pescoço atrás das orelhas com o polegar esquerdo e o dedo indicador e posicione a cauda entre o dedo pequeno e anelar. Mantenha o rato em decúbito dorsal com a sua extremidade posterior ligeiramente elevada. Para injetar a solução de naringenina, segure a pele nas costas do rato para que a pele abdominal fique tensa.Em seguida, empurre a agulha para o quadrante inferior direito ou esquerdo do abdômen em um ângulo de 10 graus. para evitar atingir a bexiga, fígado ou outros órgãos internos. Passe a agulha por via subcutânea em uma direção craniana por três a cinco milímetros e, em seguida, insira-a em um ângulo de 45 graus na cavidade abdominal.Uma vez que a agulha passa através da parede abdominal, empurre lentamente a solução. Após a injeção, puxou lentamente a agulha para fora, girando-a ligeiramente para evitar vazamentos. Para realizar um teste de glicose no sangue, abra as tiras de teste e marque a data.Faça uma pequena punção na veia lateral da cauda com uma picada de agulha de calibre 25 e esprema uma gota de sangue. Depois de limpar a gota de sangue com papel de seda, esprema outra gota de sangue e colete-a na borda da tira de teste. Leia e registre o resultado exibido no medidor de glicose.O peso corporal da dieta rica em gordura alimentada e dos ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina foi diminuído em comparação com o dos ratos do grupo controle de zero a oito semanas após um tratamento com estreptozotocina. Na quarta semana, a perda de peso de camundongos tratados com naringenina foi significativa em comparação com camundongos não tratados. O nível de glicose no sangue nos ratos diabéticos aumentou drasticamente dentro de um mês após a indução da estreptozotocina.Após dois meses, diminuiu automaticamente para um nível observado há dois meses. Em contraste, o tratamento com naringenina reduziu os níveis de glicose no sangue em 51,8% em um mês e 34,8% em dois meses em comparação com STZ. Em comparação com os controles, os camundongos diabéticos induzidos por estreptozotocina exibiram perda óssea, conforme indicado por uma diminuição no volume ósseo por volume de tecido e no número de trabéculas.Enquanto isso, o tratamento com naringenina resgatou significativamente a perda óssea. A atividade dos osteoclastos, demonstrada pelo número de osteoclastos, por área óssea trabecular, foi aumentada em camundongos diabéticos, embora não tenha sido observada significância estatística entre os modelos controle e doença. A coloração TRAP de osso trabecular e osteoclastos de controle e camundongos induzidos por estreptozotocina é mostrada aqui.O tratamento com naringenina diminuiu significativamente as atividades dos osteoclastos. Nos animais diabéticos, o telopeptídeo C-terminal do colágeno tipo um foi elevado em 68,09% e o propeptídeo N-terminal do tipo um Pro-Collagen foi elevado em 204,88%, indicando um aumento dramático na taxa de reabsorção óssea. No entanto, o tratamento com naringenina diminuiu significativamente ambos os indicadores da taxa de reabsorção óssea.por isso é um desafio pipetar dosagem precisa. Cortar a ponta torna a pipetagem mais fácil e precisa. Alternativamente, o volume necessário pode ser convertido em uma massa, que pode ser posterior facilmente.O tempo de jejum de todos os animais antes de cada experimento de glicose na bexiga deve permanecer a coisa durante todo o experimento.

Research

JoVE Journal

Medicine

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