Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81973607 и 81573992).

Описанные исследования соответствовали Руководству по уходу за лабораторными животными и их использованию Национальным исследовательским советом и были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Шанхайского университета традиционной китайской медицины. При проведении э...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

Приготовление фитохимического раствора является основой для его применения in vivo. В этом протоколе получение раствора нарингенина было продемонстрировано с использованием различных растворителей, таких как этанол, DMSO, Tween 80 и 0,9% PS. Раствор в полностью растворенном состоянии необх?...

В связи с расширением исследований, касающихся использования фитохимических соединений для скрининга лекарственных средств, следует обратить внимание на подходы к приготовлению фитохимических растворов для оценки их оптимального воздействия. Многие аспекты, такие как методология растворения, дозировка и концентрация, должны учитываться при приготовлении соединения1.
Растворение на основе растворителя широко используется для получения органических соединений1. Обычно используемые растворители включают воду, масло, диметилсульфоксид (DMSO), метанол, этанол, муравьиную кислоту, Tween, глицерин и т.д.2. Хотя суспензия с нерастворенными веществами приемлема, когда соединение вводится желудочным раствором, полностью растворенное растворенное вещество имеет решающее значение для внутривенного введения. Поскольку масляный раствор, суспензия и эмульсия могут вызывать капиллярные эмболии, предлагается водный раствор для приготовления соединения, особенно при введении внутривенных, внутримышечных и внутрибрюшинных инъекций3.
Эффективный диапазон доз варьируется между соединениями и даже между заболеваниями, обработанными одним и тем же соединением. Определение эффективной и безопасной дозы и концентрации зависит от литературы и предварительных экспериментов4. Здесь в качестве примера демонстрируется препарат соединения нарингенин.
Нарингенин (4,5,7-тригидрокси-флаванон), полифенольное соединение, был изучен при лечении заболевания по его гепатопротекторной5, антидиабетической6, противовоспалительной7 и антиоксидантной активности8. Для применения in vivo обычно используется пероральное введение нарингенина. В предыдущих исследованиях сообщалось о приготовлении раствора нарингенина в 0,5%-1% карбоксиметилцеллюлозы, 0,5% дозы метилцеллюлозы, 0,01% ДМСО и физиологического физиологического раствора (PS) в 50-100 мг/кг, вводимого пероральным приемом 9,10,11,12. Кроме того, в других исследованиях сообщалось о добавлении нарингенина чау в 3% (масс./мас.) для перорального приема в дозе 3,6 г/кг/сут13,14. Исследования также сообщали об использовании этанола (0,5% v/v), PS и DMSO для растворения нарингенина для внутрибрюшинной инъекции при 10-50 мг/кг 15,16,17,18. В исследовании эпилепсии височной доли мыши получали инъекцию нарингенина, суспендированного в 0,25% карбоксиметилцеллюлозы, растворенной в PS19. Хотя в этих исследованиях сообщается об использовании различных растворителей для приготовления растворов нарингенина, дальнейшие подробности, такие как статус растворения и реакция животных, не были сообщены.
Этот протокол вводит процедуру приготовления раствора нарингенина для применения in vivo при диабетическом остеопорозе. Приготовление раствора для инъекций включает приготовление растворителей и соединений, оценку дозировки, процесс растворения и фильтрацию. Дозировка была определена на основе литературных исследований и предварительных экспериментов путем мониторинга мышей после введения инъекций каждый день в течение 3 дней и изменения дозировки в соответствии с поведением мыши. Окончательную выбранную концентрацию (20 мг/кг веса тела) вводили внутрибрюшинно 5 дней в неделю в течение 8 недель в диете с высоким содержанием жиров и индуцированным стрептозотоцином (STZ)-индуцированными диабетическими мышами20,21. Эффекты нарингенина при диабетическом остеопорозе оценивались с помощью тестирования глюкозы в крови, микро-КТ, окрашивания тартраторезистентной кислотной фосфатазы (TRAP) и иммуноферментного анализа (ИФА).
В целом было отмечено, что нарингенин в диапазоне концентраций 40-400 мг/мл полностью не растворялся ни в этаноле, ни в ДМСО, ни в 5% (этанол или ДМСО) плюс 95% PS (v/v). Однако нарингенин полностью растворяют в смеси 3,52% ДМСО, 3,52% Tween 80 и 92,96% PS. Подробная процедура поможет исследователям приготовить соединение в виде инъекционного раствора для применения in vivo .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

Приготовление соединения (фитохимического) раствора является упущенным, но критическим этапом до его применения в таких исследованиях, как скрининг лекарств. Полная солюбилизация соединения необходима для его безопасного использования и относительно стабильных результатов. Здесь в качестве примера показан протокол приготовления раствора нарингенина и его внутрибрюшинного введения в диете с высоким содержанием жиров и диабетическая модель, индуцированная стрептозотоцином (СТЗ). Небольшое количество нарингенина (3,52-6,69 мг) использовалось для проверки его солюбилизации в растворителях, включая этанол, диметилсульфоксид (ДМСО) и ДМСО плюс Tween 80, восстановленный в физиологическом растворе (PS), соответственно. Полную солюбилизацию соединения определяют наблюдением за цветом раствора, наличием осадков после центрифугирования (2000 х г в течение 30 с) или разрешением раствору стоять в течение 2 ч при комнатной температуре (РТ). После получения стабильного соединения/фитохимического раствора конечную концентрацию/количество соединения, необходимое для исследований in vivo , можно приготовить в растворе только для растворителя (без PS), а затем разбавить/смешать с PS по желанию. Антидиабетические остеопоротические эффекты нарингенина у мышей (внутрибрюшинное введение при 20 мг/кг веса тела, 2 мг/мл) оценивали путем измерения уровня глюкозы в крови, костной массы (микро-КТ) и скорости резорбции кости (окрашивание TRAP и ИФА). Исследователи, ищущие подробные органические / фитохимические препараты растворов, выиграют от этого метода.

Было обнаружено, что масса тела мышей с высоким содержанием жиров и диабетом, и вызванных STZ, снижается по сравнению с массой тела контрольных групп через 0-8 недель после лечения STZ. Потеря веса мышей, получавших нарингенин, была значительной по сравнению с необработанными мышами (группа ...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Здесь в протоколе представлен препарат раствора нарингенина для внутрибрюшинного введения in vivo . Нарингенин полностью растворен в смеси диметилсульфоксида, Tween 80 и физиологического раствора. Антидиабетические остеопоротические эффекты нарингенина оценивали с помощью тестирования глюкозы в крови, окрашивания тартраторезистентной кислотной фосфатазы и иммуноферментного анализа.

Приготовление раствора нарингенина для применения in vivo

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

В связи с ростом исследований, касающихся фитохимических компонентов для скрининга лекарственных средств, подходов к приготовлению фитохимического раствора для оценки оптимальных эффектов, я обращал внимание на преимущества этого протокола, такие как простота эксплуатации и низкая стоимость. Этот протокол принесет пользу исследователям, занимающимся скринингом лекарств фармакологии. Мы предлагаем начать с небольшого количества фитохимического соединения для предварительных экспериментов, учитывая стоимость потребления.Во-вторых, с помощью инсулинового шприца над обычным шприцем рекомендуется приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в этаноле, взвесить 3,52 миллиграмма порошка нарингенина и добавить его в двухмиллилитровую трубку. Быстро раскрутите трубку, чтобы оседнуть порошок в нижней части трубки. Далее добавляют в пробирку 8,8 микролитра 100% этанола для приготовления 0,5% раствора.Затем добавляют в пробирку 79,2 микролитра 100% этанола для приготовления 5% раствора. Далее добавляют 1,672 миллилитра 0,9% физиологического раствора в трубку, содержащую 5%-ный раствор. Это приведет к образованию эмульсии.Тогда центрифуга отказалась от трубки проверить, полностью ли растворен нарингенин в растворе. В растворе могут появиться белые осадки нерастворенированного нарингенина. Затем, чтобы приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в ДМСО, взвесьте 3,95 миллиграмма порошка нарингенина и добавьте его в двухмиллилитровую трубку.После быстрого отжима добавьте в трубку 9,8 миллилитра ДМСО для приготовления 8,5% раствора. Затем добавляют в пробирку 88,2 микролитра ДМСО для приготовления 5%-ного раствора. Далее в раствор добавляют 1,877 миллилитра 0,9% физиологического раствора.Это приведет к эмульсии. Центрифугируйте раствор, чтобы проверить, полностью ли растворен нарингенин. Белые осадки с нерастворенным нарингенином могут появиться в растворе.Затем, чтобы приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в Tween 80 и DMSO, взвесьте 6,69 миллиграмма порошка нарингенина и добавьте его в пятимиллилитровую трубку. Быстро раскрутите трубку и добавьте 117,7 микролитров ДМСО для приготовления 3,5% раствора. Затем добавляют 117,7 микролитра Tween 80 к раствору для достижения концентрации 3,5% Tween 80 и 3,5% DMSO.Медленно добавляют этот раствор в еще пять миллилитровых пробирок, содержащих 3109,6 микролитра 0,9% физиологического раствора, и хорошо встряхивают, чтобы получить прозрачный раствор нарингенина. Через два часа раствор останется прозрачным без каких-либо видимых осадков. Чтобы ввести раствор нарингенина, поднимите пятинедельную черную шестилетнюю мышь C57 у основания ее хвоста и поместите ее на твердую поверхность, осторожно расположив хвост назад.Далее обхватите шею за уши большим и указательным пальцами левой руки и расположите хвост между маленьким и безымянным пальцем. Держите мышь в положении лежа на спине со слегка приподнятым задним концом. Чтобы ввести раствор нарингенина, захватите кожу на спине мыши так, чтобы кожа живота была подтянутой.Затем протолкните иглу в правый нижний или левый квадрант живота под углом 10 градусов. чтобы избежать попадания в мочевой пузырь, печень или другие внутренние органы. Проведите иглу подкожно в черепном направлении на три-пять миллиметров, затем вставьте ее под углом 45 градусов в брюшную полость.Как только игла пройдет через брюшную стенку, медленно протолкните раствор. После инъекции медленно вытащили иглу наружу, слегка повернув ее, чтобы предотвратить утечку. Чтобы выполнить тест на глюкозу в крови, откройте тест-полоски и отметьте дату.Сделайте небольшой прокол на боковой хвостовой вене с помощью укола иглой 25-го калибра и выдавите каплю крови. Вытирая каплю крови папиросной бумагой, выжмите еще одну каплю крови и соберите ее на краю тест-полоски. Считывание и запись результата, отображаемого на глюкометре.Масса тела мышей с сахарным диабетом с высоким содержанием жиров и вызванной стрептозотоцином была снижена по сравнению с массой мышей контрольной группы от нуля до восьми недель после лечения стрептозотоцином. На четвертой неделе потеря веса мышей, получавших нарингенин, была значительной по сравнению с мышами, не получавшими лечение. Уровень глюкозы в крови у мышей с диабетом резко повысился в течение одного месяца после индукции стрептозотоцина.Через два месяца он автоматически снизился до уровня, наблюдавшегося два месяца назад. Напротив, лечение нарингенином снизило уровень глюкозы в крови на 51,8% через один месяц и на 34,8% через два месяца по сравнению с STZ. По сравнению с контрольной группой, у мышей с диабетом, индуцированной стрептозотоцином, наблюдалась потеря костной массы, о чем свидетельствует уменьшение объема кости по объему ткани и количеству трабекул.Между тем, лечение нарингенином значительно спасло потерю костной массы. Активность остеокластов, показанная числом остеокластов на область трабекулярной кости, была увеличена у мышей с диабетом, хотя статистической значимости между контрольной и болезненной моделями не наблюдалось. Здесь показано ОКРАШИВАНИЕ TRAP трабекулярной кости и остеокластов контрольных и стрептозотоцин-индуцированных мышей.Лечение нарингенином значительно снижало активность остеокластов. У животных с диабетом С-концевой телопептид коллагена первого типа был повышен на 68,09%, а N-концевой пропептид про-коллагена первого типа был повышен на 204,88%, что указывает на резкое увеличение скорости резорбции кости. Однако лечение нарингенином значительно снижало оба показателя скорости резорбции кости.таким образом, трудно пипетку точной дозировки. Отрезание наконечника делает пипетку проще и точнее. Альтернативно, требуемый объем может быть преобразован в массу, которая может быть легко впоследствии.Время голодания всех животных перед каждым экспериментом с глюкозой в мочевом пузыре должно оставаться неизменным в течение всего эксперимента.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Характеристика молекулярных механизмов<em&gt; В естественных условиях</em&gt; UVR индуцированной катаракты

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

В естественных условиях 19 F МРТ для отслеживания сотовых

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Внутриматочная телеметрии измерить мышь сократительной давления<em&gt; В Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Глаукома индуцирующего процедуры в<em&gt; В Vivo</em&gt; Крыса модель и всего монтажа Retina Подготовка

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Генерация Microtumors Использование 3D человека биогель системы культуры и терпеливый происхождения клеток глиобластомы для Kinomic профилирование и тестирования реагирования на наркотики

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Оптимизированный анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; и<em&gt; In Vitro</em&gt; Стеатоз печени

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Подготовка травяной медицины: Er-Xian Decoction и Er-Xian-содержащая сыворотка для<em&gt; В Виво</em&gt; И<em&gt; In Vitro</em&gt; Эксперименты

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Шаги подготовки для измерения реактивности в мыши артериол сетчатки Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

Целом мозг сегментации и изменения Пойнт анализ анатомических мозга МРТ — применение в Premanifest болезни Гентингтона

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...