Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81973607 y 81573992).

Las investigaciones descritas se ajustaron a las Directrices para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio del Consejo Nacional de Investigación y fueron aprobadas por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai. Al realizar los experimentos, se requieren batas de laboratorio, guantes de nitrilo desechables y gafas para fines de seguridad.
1. Preparación de disolventes y estimación de naringenina necesaria para la aplicación in v...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. 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J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. 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U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

La preparación de la solución fitoquímica es la base para su aplicación in vivo. En este protocolo, la preparación de la solución de naringenina se demostró mediante el uso de diferentes disolventes, como etanol, DMSO, Tween 80 y PS al 0,9%. La solución en estado completamente disuelto debe controlarse aún más permitiendo que permanezca a temperatura ambiente durante algunas horas prolongadas y luego filtrada antes de usarse in vivo.
La determinación del disolvente...

Con el aumento de los estudios sobre el uso de compuestos fitoquímicos para la detección de fármacos, vale la pena prestar atención a los enfoques para preparar soluciones fitoquímicas para evaluar sus efectos óptimos. Muchos aspectos, como la metodología de disolución, la dosis y la concentración, deben considerarse al preparar el compuesto1.
La disolución a base de solvente es ampliamente utilizada para la preparación de compuestos orgánicos1. Los disolventes comúnmente utilizados incluyen agua, aceite, dimetilsulfóxido (DMSO), metanol, etanol, ácido fórmico, Tween, glicerina, etc2. Aunque una suspensión con sustancias no disueltas es aceptable cuando el compuesto se administra por sonda gástrica, un soluto completamente disuelto es crítico para la administración intravenosa. Dado que la solución de aceite, la suspensión y la emulsión pueden causar embolias capilares, se sugiere una solución acuosa para la preparación del compuesto, especialmente cuando se administran inyecciones intravenosas, intramusculares e intraperitoneales3.
El rango de dosis efectivas varía entre compuestos e incluso entre enfermedades tratadas con el mismo compuesto. Las determinaciones de la dosis efectiva y segura y de la concentración dependen de la literatura y de los experimentos preliminares4. Aquí, la preparación del compuesto naringenina se demuestra como ejemplo.
La naringenina (4,5,7-trihidroxiflavanona), un compuesto polifenólico, se ha estudiado en el tratamiento de enfermedades por sus actividades hepatoprotectoras5, antidiabéticas6, antiinflamatorias7 y antioxidantes8. Para aplicaciones in vivo, la administración oral de naringenina se utiliza comúnmente. Estudios previos informaron la preparación de una solución de naringenina en 0,5% -1% de carboximetilcelulosa, dosis de metilcelulosa al 0,5%, DMSO al 0,01% y solución salina fisiológica (PS) a 50-100 mg / kg, administrada por sonda oral 9,10,11,12. Además, otros estudios han reportado suplementar naringenina con comida al 3% (peso / peso) para la ingesta oral a una dosis de 3,6 g / kg / día13,14. Los estudios también han reportado el uso de etanol (0,5% v/v), PS y DMSO para disolver naringenina para inyección intraperitoneal a dosis de 10-50 mg/kg15,16,17,18. En un estudio de epilepsia del lóbulo temporal, los ratones recibieron una inyección de naringenina suspendida en carboximetilcelulosa al 0,25% disuelta en PS19. Aunque estos estudios informan el uso de diferentes disolventes para preparar soluciones de naringenina, no se han informado más detalles, como el estado de disolución y la respuesta animal.
Este protocolo introduce un procedimiento para preparar una solución de naringenina para su aplicación in vivo en la osteoporosis inducida por diabéticos. La preparación de la solución inyectable incluye la preparación de disolventes y compuestos, la estimación de la dosis, el proceso de disolución y la filtración. La dosis se determinó en base a la investigación bibliográfica y experimentos preliminares mediante el monitoreo de ratones después de administrar inyecciones todos los días durante 3 días y modificando la dosis de acuerdo con los comportamientos del ratón. La concentración final elegida (20 mg/kg p.v.) se administró por vía intraperitoneal 5 días a la semana durante 8 semanas en ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina (STZ)20,21. Los efectos de la naringenina en la osteoporosis diabética se evaluaron mediante pruebas de glucosa en sangre, micro-CT, tinción de fosfatasa ácida resistente al tartrato (TRAP) y ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).
En general, se observó que la naringenina en un rango de concentración de 40-400 mg / ml no se disolvió completamente en etanol o DMSO o 5% (etanol o DMSO) más 95% PS (v / v). Sin embargo, la naringenina se disolvió completamente en una mezcla de 3,52% DMSO, 3,52% Tween 80 y 92,96% PS. El procedimiento detallado ayudará a los investigadores a preparar el compuesto como una solución de inyección para la aplicación in vivo .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
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	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

La preparación de una solución compuesta (fitoquímica) es un paso pasado por alto pero crítico antes de su aplicación en estudios como la detección de fármacos. La solubilización completa del compuesto es necesaria para su uso seguro y resultados relativamente estables. Aquí, se demuestra como ejemplo un protocolo para preparar solución de naringenina y su administración intraperitoneal en un modelo diabético inducido por estreptozotocina (STZ) y dieta alta en grasas y estreptozotocina. Se utilizó una pequeña cantidad de naringenina (3,52-6,69 mg) para probar su solubilización en disolventes, incluyendo etanol, dimetilsulfóxido (DMSO) y DMSO más Tween 80 reconstituido en solución salina fisiológica (PS), respectivamente. La solubilización completa del compuesto se determina observando el color de la solución, la presencia de precipitados después de la centrifugación (2000 x g durante 30 s) o dejando reposar la solución durante 2 h a temperatura ambiente (RT). Después de obtener un compuesto estable/solución fitoquímica, la concentración/cantidad final del compuesto requerida para los estudios in vivo puede prepararse en una solución madre de disolvente solamente (sin PS), y luego diluirse/mezclarse con PS según se desee. Los efectos osteoporóticos antidiabéticos de naringenina en ratones (administración intraperitoneal a 20 mg/kg p.v., 2 mg/ml) se evaluaron midiendo la glucosa en sangre, la masa ósea (micro-CT) y la tasa de resorción ósea (tinción TRAP y ELISA). Los investigadores que buscan preparaciones detalladas de soluciones orgánicas / fitoquímicas se beneficiarán de esta técnica.

Se encontró que el peso corporal de los ratones diabéticos alimentados con dieta alta en grasas e inducidos por STZ disminuyó en comparación con el de los grupos de control de 0 a 8 semanas después del tratamiento con STZ. La pérdida de peso de los ratones tratados con naringenina fue significativa en comparación con los ratones no tratados (grupo STZ) en la semana 4. Los grupos control y STZ fueron administrados con el mismo volumen de PS (Tabla 1). El nivel de glucosa en sangre en ratones diabé...

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Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Aquí, el protocolo presenta la preparación de la solución de naringenina para la administración intraperitoneal in vivo . Naringenina se disuelve completamente en una mezcla de dimetilsulfóxido, Tween 80 y solución salina. Los efectos osteoporóticos antidiabéticos de la naringenina se evaluaron mediante pruebas de glucosa en sangre, tinción de fosfatasa ácida resistente al tartrato y ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.

Preparación de la solución de naringenina para aplicación in vivo

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Con el aumento de los estudios relacionados con los componentes fitoquímicos para los enfoques de detección de fármacos para preparar la solución fitoquímica para la evaluación de los efectos óptimos, estaba prestando atención a las ventajas de este protocolo como operación simple y bajo costo. Este protocolo beneficiará a los investigadores que se ocupan de la detección de medicamentos de la farmacología. Sugerimos comenzar con una pequeña cantidad de compuesto fitoquímico para experimentos preliminares, considerando el costo de consumo.En segundo lugar, se recomienda usar una jeringa de insulina sobre una jeringa regular Para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en etanol, pese 3.52 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de dos mililitros. Gire rápidamente el tubo para asentar el polvo en la parte inferior del tubo. A continuación, agregue 8.8 microlitros de etanol al 100% al tubo para preparar una solución al 0.5%.Luego agregue 79.2 microlitros de etanol al 100% al tubo para preparar una solución al 5%. A continuación, agregue 1.672 mililitros de solución salina fisiológica al 0.9% al tubo que contiene la solución al 5%. Esto producirá una emulsión.Luego, la centrífuga rechazó el tubo para verificar si la naringenina está completamente disuelta en la solución. Pueden aparecer precipitados blancos de naringenina no disuelta en la solución. Luego, para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en DMSO, pese 3.95 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de dos mililitros.Después de un giro rápido, agregue 9.8 mililitros de DMSO al tubo para preparar una solución al 8.5%. Luego agregue 88.2 microlitros de DMSO al tubo para preparar una solución al 5%. A continuación, agregue 1.877 mililitros de solución salina al 0.9% a la solución.Esto dará como resultado una emulsión. Centrifuga la solución para comprobar si la naringenina está completamente disuelta. Los precipitados blancos tienen naringenina no disuelta pueden aparecer en la solución.Luego, para preparar una solución de naringenina de dos miligramos por mililitro en Tween 80 y DMSO, pese 6.69 miligramos de polvo de naringenina y agréguela a un tubo de cinco mililitros. Gire rápidamente el tubo y agregue 117.7 microlitros de DMSO para preparar una solución al 3.5%. Luego agregue 117.7 microlitros de Tween 80 a la solución para alcanzar una concentración de 3.5% Tween 80 y 3.5% DMSO.Agregue lentamente esta solución a otro tubo de cinco mililitros que contenga 3109.6 microlitros de solución salina al 0.9% y agite bien para obtener una solución clara de naringenina. Después de dos horas, la solución permanecerá clara sin precipitados visibles. Para administrar la solución de naringenina, levante un ratón macho C57 negro de cinco semanas de edad por la base de su cola y colóquelo sobre una superficie sólida colocando suavemente su cola hacia atrás.A continuación, agarre el cuello detrás de las orejas con el pulgar izquierdo y el índice y coloque la cola entre el dedo meñique y el anular. Mantenga el ratón en posición supina con su extremo posterior ligeramente elevado. Para inyectar la solución de naringenina, agarre la piel de la espalda del ratón para que la piel abdominal esté tensa.Luego empuje la aguja en el cuadrante inferior derecho o izquierdo del abdomen en un ángulo de 10 grados. para evitar golpear la vejiga, el hígado u otros órganos internos. Pase la aguja por vía subcutánea en una dirección craneal de tres a cinco milímetros, luego insértela en un ángulo de 45 grados en la cavidad abdominal.Una vez que la aguja pase a través de la pared abdominal, empuje lentamente la solución. Después de la inyección, sacó lentamente la aguja, girándola ligeramente para evitar fugas. Para realizar una prueba de glucosa en sangre, abra las tiras reactivas y marque la fecha.Haga una pequeña punción en la vena lateral de la cola con un pinchazo de aguja de calibre 25 y exprima una gota de sangre. Después de limpiar la gota de sangre con papel de seda, exprima otra gota de sangre y recójala en el borde de la tira reactiva. Lea y registre el resultado que se muestra en el medidor de glucosa.El peso corporal de la dieta alta en grasas alimentada y los ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina disminuyó en comparación con el de los ratones del grupo de control de cero a ocho semanas después de un tratamiento con estreptozotocina. En la cuarta semana, la pérdida de peso de los ratones tratados con naringenina fue significativa en comparación con los ratones no tratados. El nivel de glucosa en sangre en los ratones diabéticos aumentó dramáticamente dentro de un mes después de la inducción de estreptozotocina.Después de dos meses, disminuyó automáticamente a un nivel observado hace dos meses. Por el contrario, el tratamiento con naringenina redujo los niveles de glucosa en sangre en un 51,8% al mes y en un 34,8% a los dos meses en comparación con STZ. En comparación con los controles, los ratones diabéticos inducidos por estreptozotocina exhibieron pérdida ósea como lo indica una disminución en el volumen óseo por volumen de tejido y el número de trabécula.Mientras tanto, el tratamiento con naringenina rescató significativamente la pérdida ósea. La actividad de los osteoclastos mostrada por el número de osteoclastos por área ósea trabecular aumentó en ratones diabéticos, aunque no se observó significación estadística entre los modelos control y de enfermedad. Aquí se muestra la tinción TRAP de hueso trabecular y osteoclastos de ratones control e inducidos por estreptozotocina.El tratamiento con naringenina disminuyó significativamente las actividades de los osteoclastos. En los animales diabéticos, el telopéptido C-terminal del colágeno tipo uno se elevó en un 68,09% y el propéptido N-terminal del Pro-colágeno tipo uno se elevó en un 204,88%, lo que indica un aumento dramático en la tasa de resorción ósea. Sin embargo, el tratamiento con naringenina disminuyó significativamente ambos indicadores de la tasa de resorción ósea.Por lo tanto, es difícil pipetear la dosis precisa. Cortar la punta hace que el pipeteo sea más fácil y preciso. Alternativamente, el volumen requerido se puede convertir en una masa, que puede ser más tarde fácilmente.El tiempo de ayuno de todos los animales antes de cada experimento de glucosa en la vejiga debe seguir siendo lo mismo durante todo el experimento.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

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Caracterización de los mecanismos moleculares de la<em&gt; En vivo</em&gt; Catarata inducida por RUV

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