Name: preparation of naringenin solution for in vivo application
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973607 ve 81573992) tarafından desteklenmiştir.

Açıklanan araştırmalar, Ulusal Araştırma Konseyi'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Kılavuzlara uygun olarak tanımlandı ve Şangay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı. Deneyler yapılırken, güvenlik amacıyla laboratuvar önlükleri, tek kullanımlık nitril eldivenler ve gözlükler gereklidir.
1. İn vivo uygulama için gerekli çözücülerin hazırlanması ve naringenin tahmini...

<ol>
	<li>Stoye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvents.">Solvents.</a> Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , (2000).</li><li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis.">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals:+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses.">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li><li>Hern&#225;ndez-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases:+Molecular+mechanisms.">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li><li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidiabetic+properties+of+naringenin:+A+citrus+fruit+polyphenol.">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li><li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin,+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects:+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19.">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li><li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid:+Naringenin.">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li><li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice.">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li><li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone,+naringenin,+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats.">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li><li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK.">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition &amp; Diabetes. 9 (1), 28 (2019).</li><li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers,+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat's+brain.">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li><li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-/-+mice.">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li><li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+prevents+obesity,+hepatic+steatosis,+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21.">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li><li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats.">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li><li>Sirovina, D., Or&#353;oli&#263;, N., Gregorovi&#263;, G., Kon&#269;i&#263;, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice:+a+preliminary+study.">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li><li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-diabetic,+anti-inflammatory,+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus.">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition &amp; Food Research. 63 (19), 1900224 (2019).</li><li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats:+favorable+modulation+of+oxidative+stress,+inflammation+and+nitric+oxide.">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li><li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors.">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li><li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications.">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li><li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Pharmaceutical Excipients. , (2003).</li><li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats.">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li><li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db/db+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus.">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li><li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models.">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li><li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ethanol/water+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts.">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393 (2015).</li><li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE/RP+process+on+carm&#233;n&#232;re+pomace+extracts.">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carm&#233;n&#232;re pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), (2019).</li><li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+solvents+(including+alcohol).">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li><li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion,+body+temperature,+and+activity.">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li><li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds.">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science &amp; Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li><li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide.">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li><li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+(DMSO)+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation.">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li><li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents.">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li></ol>

Fitokimyasal çözeltinin hazırlanması, in vivo uygulamasının temelidir. Bu protokolde, naringenin çözeltisinin hazırlanması, etanol, DMSO, Ara% 80 ve% 0.9 PS gibi farklı çözücüler kullanılarak gösterilmiştir. Tamamen çözünmüş durumdaki çözeltinin, uzun saatler boyunca oda sıcaklığında kalmasına izin verilerek daha fazla izlenmesi ve daha sonra in vivo kullanılmadan önce filtrelenmesi gerekir.
Solvent tayini bu protokolde kritik bir adımdır. Bi...

Fitokimyasal bileşiklerin ilaç taramasında kullanımı ile ilgili artan çalışmalarla, optimal etkilerini değerlendirmek için fitokimyasal çözeltiler hazırlama yaklaşımlarına dikkat edilmesi gerekmektedir. Çözünme metodolojisi, dozaj ve konsantrasyon gibi birçok husus, bileşik1'i hazırlarken dikkate alınmalıdır.
Solvent bazlı çözünme, organik bileşik hazırlama1 için yaygın olarak kullanılmaktadır. Yaygın olarak kullanılan çözücüler arasında su, yağ, dimetil sülfoksit (DMSO), metanol, etanol, formik asit, Ara, gliserin, vb.2 bulunur. Bileşik gastrik gavage tarafından uygulandığında çözünmemiş maddeler içeren bir süspansiyon kabul edilebilir olsa da, tamamen çözünmüş bir çözünmüş solut intravenöz uygulama için kritik öneme sahiptir. Yağ çözeltisi, süspansiyon ve emülsiyon kılcal embolilere neden olabileceğinden, özellikle intravenöz, intramüsküler ve intraperitoneal enjeksiyonlar uygulanırken bileşik hazırlama için sulu bir çözelti önerilmektedir3.
Etkili doz aralığı, bileşikler arasında ve hatta aynı bileşikle tedavi edilen hastalıklar arasında değişir. Etkili ve güvenli doz ve konsantrasyonun belirlenmesi literatüre ve ön deneylere bağlıdır4. Burada, bileşik naringeninin hazırlanması örnek olarak gösterilmiştir.
Polifenolik bir bileşik olan Naringenin (4,5,7-trihidroksi-flavanon), hepatoprotektif5, antidiyabetik6, anti-enflamatuar7 ve anti-oksidan aktiviteleri8 için hastalık tedavisinde incelenmiştir. İn vivo uygulamalar için, naringeninin oral uygulaması yaygın olarak kullanılır. Önceki çalışmalarda, oral gavage 9,10,11,12 ile uygulanan% 0.5-1 karboksimetil selüloz,% 0.5 metilselüloz dozu,% 0.0 DMSO ve% 0.5 metilselüloz dozunda,% 0.01 DMSO ve% 0.0 ila fizyolojik salin (PS) içinde naringenin çözeltisinin hazırlandığı bildirilmiştir. Ayrıca, diğer çalışmalar, 3.6 g / kg / d13,14'lük bir dozda oral alım için% 3'te (wt / wt) chow ile naringenin takviyesi yapıldığını bildirmiştir. Çalışmalar ayrıca 10-50 mg/ kg 15,16,17,18'de intraperitoneal enjeksiyon için naringenini çözmek için etanol (% 0.5 v / v), PS ve DMSO kullandığını bildirmiştir. Temporal lob epilepsisi ile ilgili bir çalışmada, farelere PS19'da çözünmüş% 0.25 karboksimetil selüloz içinde askıya alınmış bir naringenin enjeksiyonu verildi. Bu çalışmalar naringenin çözeltileri hazırlamak için farklı çözücülerin kullanıldığını bildirmesine rağmen, çözünme durumu ve hayvan tepkisi gibi daha fazla ayrıntı bildirilmemiştir.
Bu protokol, diyabetik kaynaklı osteoporozda in vivo uygulama için naringenin çözeltisi hazırlamak için bir prosedür sunar. Enjeksiyon çözeltisinin hazırlanması, çözücülerin ve bileşiklerin hazırlanmasını, dozaj tahminini, çözünme işlemini ve filtrasyonu içerir. Dozaj, literatür araştırmasına ve ön deneylere dayanarak, 3 gün boyunca her gün enjeksiyon uygulandıktan sonra farelerin izlenmesi ve dozajın fare davranışlarına göre değiştirilmesiyle belirlendi. Son seçilen konsantrasyon (20 mg / kg b.w.), yüksek yağlı bir diyet ve streptozotosin (STZ) ile indüklenen diyabetik fareler20,21'de 8 hafta boyunca haftada 5 gün intraperitoneal olarak uygulandı. Naringeninin diyabetik osteoporozdaki etkileri kan şekeri testi, mikro-BT, tartarat dirençli asit fosfataz (TRAP) boyama ve enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) ile değerlendirildi.
Genel olarak, 40-400 mg / mL konsantrasyon aralığında naringeninin etanol veya DMSO veya% 5 (etanol veya DMSO) artı% 95 PS (v / v) içinde tamamen çözünmediği gözlendi. Bununla birlikte, naringenin% 3.52 DMSO,% 3.52 Tween 80 ve% 92.96 PS karışımında tamamen çözüldü. Ayrıntılı prosedür, araştırmacıların bileşiği in vivo uygulama için bir enjeksiyon çözeltisi olarak hazırlamalarına yardımcı olacaktır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL&#160; microtubes</td>
			<td>Corning Science (Wujiang) Co.</td>
			<td>23218392</td>
			<td>Holding liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA ASP 300S</td>
			<td>Dehydrate samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood glucose test strips</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>4130392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MIULAB</td>
			<td>Minute centrifuge</td>
			<td>Centrifugal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydrator</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA&#160; ASP300S</td>
			<td>Dehydration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E918BA0041</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA assay kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>Mouse COL1(Collagen Type I) ELISA Kit: E-EL-M0325c 
			Mouse&#160; CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c 
			Mouse PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c 
			Mouse PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009218</td>
			<td>Co-Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol monoethyl ether</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>A501118-0500</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10009617</td>
			<td>Decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Merck Millpore LTD.</td>
			<td>Millex-GP, 0.22 &#181;m</td>
			<td>filter solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10000218</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose meter</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson (China) Medical Equipment Co.</td>
			<td>One Touch Ultra Vue</td>
			<td>Serial number:COJJG8GW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinder</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>Tissuelyser-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td>
			<td>D005</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td>
			<td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td>
			<td>Intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-(+) tartaric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>100220008</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>sz61</td>
			<td>Observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>LEICA RM 2135</td>
			<td>Section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>&#160;Mini-6KC</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naphthol AS-BI phosphate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>BCBS3419</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naringenin</td>
			<td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co.,Ltd</td>
			<td>102764</td>
			<td>Solute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding station</td>
			<td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td>
			<td>LEICA&#160; EG 1150 H, LEICA&#160; EG 1150 C</td>
			<td>Embed&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pararosaniline base</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E112BA0045</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>2&#8211;20 &#181;L, 100&#8211;1000 &#181;L, 20&#8211;200 &#181;L</td>
			<td>&#160; transferre Liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader</td>
			<td>BioTek Instruments USA, Inc.</td>
			<td>BioTek CYTATION 3 imaging reader</td>
			<td>ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin</td>
			<td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>saline (0.9 PS)</td>
			<td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,Ltd</td>
			<td>A6E1323</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate anhydrous</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium nitrite</td>
			<td>Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd</td>
			<td>10020018</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-80</td>
			<td>Sangon Biotech (Shanghai ) Co.,Ltd.</td>
			<td>E819BA0006</td>
			<td>Emulsifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia beads</td>
			<td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td>
			<td>11079125z 454g</td>
			<td>Grinding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of naringenin solution for in vivo application

Bir bileşik (fitokimyasal) çözeltinin hazırlanması, ilaç taraması gibi çalışmalarda uygulanmasından önce göz ardı edilen ancak kritik bir adımdır. Bileşiğin tamamen çözünmesi, güvenli kullanımı ve nispeten kararlı sonuçları için gereklidir. Burada, naringenin çözeltisinin hazırlanması için bir protokol ve yüksek yağlı bir diyette intraperitoneal uygulaması ve streptozotosin (STZ) ile indüklenen diyabetik model örnek olarak gösterilmiştir. Sırasıyla fizyolojik salinde (PS) yeniden oluşturulan etanol, dimetilsülfoksit (DMSO) ve DMSO artı Tween 80 dahil olmak üzere çözücülerde çözünmesini test etmek için az miktarda naringenin (3.52-6.69 mg) kullanıldı. Bileşiğin tam çözünmesi, çözeltinin rengini, santrifüjlemeden sonra çökeltilerin varlığını (30 s için 2000 x g) veya çözeltinin oda sıcaklığında (RT) 2 saat durmasına izin vererek belirlenir. Kararlı bir bileşik / fitokimyasal çözelti elde edildikten sonra, in vivo çalışmalar için gerekli olan bileşiğin nihai konsantrasyonu / miktarı, sadece çözücü (PS içermeyen) bir stok çözeltisinde hazırlanabilir ve daha sonra istenildiği gibi PS ile seyreltilebilir / karıştırılabilir. Naringeninin farelerde antidiyabetik osteoporotik etkileri (20 mg/kg b.w., 2 mg/mL'de intraperitoneal uygulama) kan şekeri, kemik kütlesi (mikro-BT) ve kemik rezorpsiyon hızı (TRAP boyama ve ELISA) ölçülerek değerlendirildi. Ayrıntılı organik / fitokimyasal çözelti preparatları arayan araştırmacılar bu teknikten yararlanacaktır.

Yüksek yağlı diyetle beslenen ve STZ ile indüklenen diyabetik farelerin vücut ağırlığının, STZ tedavisinden 0-8 hafta sonra kontrol gruplarınınkine kıyasla azaldığı bulunmuştur. Naringenin ile tedavi edilen farelerin kilo kaybı, 4. haftada tedavi edilmeyen farelere (STZ grubu) kıyasla anlamlıydı. Kontrol ve STZ grupları aynı hacimde PS ile uygulandı (Tablo 1). Diyabetik farelerde kan şekeri seviyesi, STZ indüksiyonundan sonraki 1 ay içinde çarpıcı bir şekilde artmıştır....

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application at JoVE.com

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Burada protokol, in vivo intraperitoneal uygulama için naringenin solüsyonunun hazırlanmasını sunmaktadır. Naringenin, dimetilsülfoksit, Aradaki 80 ve salin karışımında tamamen çözülür. Naringeninin antidiyabetik osteoporotik etkileri kan şekeri testi, tartarat dirençli asit fosfataz boyama ve enzime bağlı immünosorbent testi ile değerlendirildi.

In Vivo Uygulama için Naringenin Solüsyonunun Hazırlanması

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

Optimal etkilerin değerlendirilmesi için fitokimyasal çözelti hazırlamak üzere ilaç tarama yaklaşımları için fitokimyasal bileşenler ile ilgili artan çalışmalarla, bu protokolün basit çalışma ve düşük maliyet olarak avantajlarına dikkat çekiyordum. Bu protokol, farmakolojinin ilaç taraması ile ilgilenen araştırmacılara fayda sağlayacaktır. Tüketim maliyetini göz önünde bulundurarak, ön deneyler için az miktarda fitokimyasal bileşikle başlamanızı öneririz.İkincisi, normal bir şırınga üzerinde bir insülin şırıngası kullanılması önerilir Etanolde mililitre naringenin çözeltisi başına iki miligram hazırlamak için, 3.52 miligram naringenin tozu tartın ve iki mililitrelik bir tüpe ekleyin. Tozu tüpün dibine yerleştirmek için tüpü hızla döndürün. Daha sonra,% 0.5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 8.8 mikrolitre% 100 etanol ekleyin.Daha sonra% 5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 79.2 mikrolitre% 100 etanol ekleyin. Daha sonra,% 5'lik çözeltiyi içeren tüpe 1.672 mililitre% 0.9 fizyolojik salin ekleyin. Bu bir emülsiyon üretecektir.Daha sonra santrifüj, naringeninin çözelti içinde tamamen çözülüp çözülmediğini kontrol etmek için tüpü reddetti. Çözeltide çözülmemiş naringeninin beyaz çökeltileri görünebilir. Daha sonra, DMSO'da mililitre başına iki miligram naringenin çözeltisi hazırlamak için, 3.95 miligram naringenin tozu tartın ve iki mililitrelik bir tüpe ekleyin.Hızlı bir dönüşten sonra,% 8.5'lik çözelti hazırlamak için tüpe 9.8 mililitre DMSO ekleyin. Ardından% 5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 88.2 mikrolitre DMSO ekleyin. Daha sonra, çözeltiye 1.877 mililitre% 0.9 salin ekleyin.Bu bir emülsiyonla sonuçlanacaktır. Naringeninin tamamen çözülüp çözülmediğini kontrol etmek için çözeltiyi santrifüj edin. Beyaz çökeltiler çözünmemiş naringenine sahiptir çözeltide görünebilir.Daha sonra, Tween 80 ve DMSO'da mililitre başına iki miligram naringenin çözeltisi hazırlamak için, 6.69 miligram naringenin tozu tartın ve beş mililitrelik bir tüpe ekleyin. Tüpü hızla aşağı doğru döndürün ve% 3.5'lik bir çözelti hazırlamak için 117.7 mikrolitre DMSO ekleyin. Daha sonra% 3.5 Aralık 80 ve% 3.5 DMSO konsantrasyonu elde etmek için çözeltiye 117.7 mikrolitre Ara 80 ekleyin.Bu çözeltiyi yavaşça 3109.6 mikrolitre% 0.9 salin içeren beş mililitrelik başka bir tüpe ekleyin ve berrak bir naringenin çözeltisi elde etmek için iyice çalkalayın. İki saat sonra, çözelti görünür çökelti olmadan berrak kalacaktır. Naringenin çözeltisini uygulamak için, beş haftalık bir C57 siyah altı erkek fareyi kuyruğunun tabanından kaldırın ve kuyruğunu yavaşça geriye doğru konumlandıran sağlam bir yüzeye yerleştirin.Daha sonra, sol baş parmak ve işaret parmağı ile kulakların arkasındaki boynun tırnağını kavrayın ve kuyruğu küçük ve yüzük parmağı arasında konumlandırın. Fareyi, arka ucu hafifçe yükseltilmiş şekilde sırtüstü pozisyonda tutun. Naringenin çözeltisini enjekte etmek için, farenin sırtındaki cildi kavrayın, böylece karın derisi gerginleşir.Daha sonra iğneyi karnın sağ alt veya sol kadranına 10 derecelik bir açıyla itin. mesane, karaciğer veya diğer iç organlara çarpmamak için. İğneyi deri altından üç ila beş milimetre boyunca kafatası yönünde çalıştırın, ardından karın boşluğuna 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.İğne karın duvarından geçtikten sonra, çözeltiyi yavaşça itin. Enjeksiyondan sonra, sızıntıyı önlemek için hafifçe döndürerek iğneyi yavaşça dışarı çekti. Bir kan şekeri testi yapmak için, test şeritlerini açın ve tarihi işaretleyin.Yanal kuyruk damarında 25 gauge iğne dikeni ile küçük bir delinme yapın ve bir damla kan sıkın. Kan damlasını kağıt mendille sildikten sonra, başka bir damla kan sıkın ve test şeridinin kenarında toplayın. Glikoz ölçüm cihazında görüntülenen sonucu okuyun ve kaydedin.Beslenen yüksek yağlı diyetin ve streptozotosin kaynaklı diyabetik farelerin vücut ağırlığı, streptozotosin tedavisinden sıfır ila sekiz hafta sonra kontrol grubu farelere kıyasla azalmıştır. Dördüncü haftada, naringenin ile tedavi edilen farelerin kilo kaybı, tedavi edilmemiş farelere kıyasla anlamlıydı. Diyabetik farelerde kan şekeri seviyesi, streptozotosin indüksiyonundan sonraki bir ay içinde çarpıcı bir şekilde artmıştır.İki ay sonra, otomatik olarak iki ay önce gözlemlenen bir seviyeye düştü. Buna karşılık, naringenin tedavisi, STZ'ye kıyasla kan şekeri seviyelerini bir ayda% 51.8 ve iki ayda% 34.8 oranında düşürdü. Kontrollerle karşılaştırıldığında, streptozotosin ile indüklenen diyabetik fareler, kemik hacminde doku hacmi ve trabecula sayısına göre bir azalma ile belirtildiği gibi kemik kaybı sergiledi.Bu arada, naringenin tedavisi kemik kaybını önemli ölçüde kurtardı. Trabeküler kemik alanı başına osteoklast sayısı ile gösterilen osteoklast aktivitesi diyabetik farelerde artmış ancak kontrol ve hastalık modelleri arasında istatistiksel bir anlamlılık gözlenmemiştir. Trabeküler kemik ve kontrol osteoklastlarının ve streptozotosin kaynaklı farelerin TRAP boyaması burada gösterilmiştir.Naringenin tedavisi osteoklast aktivitelerini önemli ölçüde azaltmıştır. Diyabetik hayvanlarda, tip bir kollajenin C-terminal telopepti% 68.09 ve tip bir Pro-Kollajen'in N-terminal propeptidi% 204.88 oranında yükselmiştir, bu da kemik rezorpsiyon hızında dramatik bir artışa işaret etmektedir. Bununla birlikte, naringenin tedavisi, kemik rezorpsiyon hızının her iki göstergesini de önemli ölçüde azaltmıştır.bu nedenle doğru dozajda pipet yapmak zordur. Ucun kesilmesi pipetlemeyi daha kolay ve daha doğru hale getirir. Alternatif olarak, gerekli hacim daha sonra kolayca yapılabilecek bir kütleye dönüştürülebilir.Her mesane glikoz deneyinden önce tüm hayvanların açlık süresi, tüm deney boyunca bir şey olarak kalmalıdır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

Moleküler Mekanizmalarının Karakterizasyonu<em&gt; In vivo</em&gt; UVR İsteyerek Katarakt

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Rahim içi Telemetri Fare Kontraktil Basıncını Ölçmek<em&gt; İn Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomic Profil Yöntemi ve İlaç Tepki Testi için 3D İnsan BIOGEL Kültür Sisteminin Kullanılması Microtumors ve Hasta kaynaklı Glioblastom Hücreleri Üretimi

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Bitkisel Tıbbın Hazırlanması: Er-Xian Kaynatma ve Er-Xian içeren Serum<emIn vivo</emVe<em&gt; In vitro</em&gt; Deneyler

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRI&#8212;Application in Premanifest Huntington's Disease

Whole-brain Segmentation and Change-point Analysis of Anatomical Brain MRIÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚ÂApplication in Premanifest Huntington's Disease

Bütün beyin segmentasyon ve değişim noktası analizi anatomik beyin MR'ı — uygulama Premanifest Huntington hastalığı

Recent advances in MRI offer a variety of useful markers to identify neurodegenerative diseases. In Huntington&#39;s disease (HD), regional brain atrophy ...