Name: development of a lateral flow immunochromatographic strip for rapid and quantitative detection of small molecule compounds
Uploaded: 2021-11-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds at JoVE.com

Эта работа была поддержана Специальными фондами фундаментальных исследований высших учебных заведений, связанных с центральными департаментами. Мы ценим поддержку Группы фундаментальных исследований классических рецептов Пекинского университета китайской медицины.

Все процедуры, выполненные в этом исследовании, были одобрены Комитетом по этике Пекинского университета китайской медицины (номер одобрения 2017BZYYL00120).
1. Получение и характеристика коллоидного золота
ПРИМЕЧАНИЕ: Для коллоидного синтеза золота, по?...

<ol>
	<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane-based+lateral+flow+immunochromatographic+strip+with+nanoparticles+as+reporters+for+detection:+A+review.">Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review.</a> Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).</li><li>Chang, H. -. F., Wang, J. -. Q., Wang, B., Deng, A. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immune+chromatographic+assay+for+rapid+and+simultaneous+detection+of+levonorgestrel+and+methylprednisolone+in+water+samples.">An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples.</a> Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).</li><li>Lai, J. J., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+lateral-flow+immunoassay+(LFIA)+diagnostics+via+biomarker+enrichment+for+mHealth.">Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth.</a> Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).</li><li>Zhang, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+colloidal+gold-based+lateral-flow+immunoassay+for+the+rapid+simultaneous+detection+of+clenbuterol+and+ractopamine+in+swine+urine.">Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine.</a> Analytical &amp; Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).</li><li>Kranthi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+colloidal-gold+based+lateral-flow+immunoassay+kit+for+'quality-control'+assessment+of+pyrethroid+and+endosulfan+formulations+in+a+novel+single+strip+format.">Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format.</a> Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).</li><li>Qian, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+immunochromatographic+strip+for+rapid+detection+of+capsid+protein+antigen+p27+of+avian+leukosis+virus.">Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus.</a> Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+flow+immunoassay+devices+for+testing+saliva+and+other+liquid+samples+and+methods+of+use+of+same.">Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same.</a> US Patent. , (2003).</li><li>Mio&#269;evi&#263;, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Lateral+Flow+Assays+for+Salivary+Biomarker+Assessment:+A+Review.">Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review.</a> Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).</li><li>Lisa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+based+dipstick+immunoassay+for+the+rapid+detection+of+dichlorodiphenyltrichloroethane:+an+organochlorine+pesticide.">Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide.</a> Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+Antibody-Europium+Conjugate-Based+Lateral+Flow+Time-Resolved+Fluoroimmunoassay+for+Quantitative+Determination+of+T-2+Toxin+in+Cereals+and+Feed.">Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed.</a> Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).</li><li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+synthesis+of+high-quality+CuInZnxS2+x+core/shell+nanocrystals+and+their+application+for+detection+of+C-reactive+protein.">Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).</li><li>Xiang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+double+antibody+sandwich-lateral+flow+immunoassay+for+the+rapid+and+simple+detection+of+hepatitis+C+virus.">A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus.</a> International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).</li><li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+dot-based+immunochromatography+test+strip+for+rapid,+quantitative+and+sensitive+detection+of+alpha+fetoprotein.">Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 30 (1), 145 (2011).</li><li>Song, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+fluorescent+lateral-flow+immunoassay+for+hepatitis+B+virus+genotyping.">Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping.</a> Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+dot-based+lateral-flow+immunoassay+for+rapid+detection+of+rhein+using+specific+egg+yolk+antibodies.">Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Lateral-Flow+Immunoassay+for+the+Quantum+Dot-based+Detection+of+GsRerarin.">Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin.</a> Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Clinical+Application+of+a+Rapid+IgM-IgG+Combined+Antibody+Test+for+SARS-CoV-2+Infection+Diagnosis.">Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis.</a> Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).</li><li>Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+application+value+analysis+of+the+2019-coronary+virus+disease+was+analyzed+by+the+whole+blood+Sars-COV+2+specific+antibody+detection.">The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection.</a> Natural Science Edition. 42, (2020).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Monoclonal+Antibodies+Against+Natural+Products.">Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products.</a> Journal of Visualized Experiments. , e57116 (2019).</li><li>Sai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Enzyme-Linked+Immunosorbent+Assay+and+Immunoaffinity+Column+Chromatography+for+Saikosaponin+d+Using+an+Anti-Saikosaponin+d+Monoclonal+Antibody.">Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody.</a> Planta Medica. 82, 432-439 (2016).</li><li>Yue, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Highly+Sensitive+Immunochromatographic+Strip+Test+for+Rapid+and+Quantitative+Detection+of+Saikosaponin+d.">A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d.</a> Molecules. 23 (2), 338 (2018).</li><li>Qu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Lateral-Flow+Immunoassay+for+the+Quantum+Dot-based+Detection+of+Puerarin.">Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin.</a> Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+dot-based+lateral-flow+immunoassay+for+rapid+detection+of+rhein+using+specific+egg+yolk+antibodies.">Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).</li></ol>

В этой работе мы представляем протокол получения mAbs против малых молекул, полученных из натурального продукта. Основные шаги и вопросы, требующие внимания в процедуре, были изложены, и мы продемонстрировали полезность этого протокола на примере SSD с малыми молекулами. Примеры спектров,...

Мембранные иммунохроматографические полоски бокового потока (ICS) являются полезными инструментами для недорогого и быстрого обнаружения. Нитроцеллюлозная мембрана в качестве носителя и коллоидное золото в качестве маркеров иммунохроматографических быстродиагностических реагентов являются наиболее часто используемым методом POCT (point of care testing), и объем тестирования проекта шире. Из их первоначального применения в мониторинге во время беременности их применение было расширено для контроля состояния свертываемой крови1,2,травмы миокарда3,ветеринарии4,остатков пестицидов5,инфекционных заболеваний6 и концентраций препарата. Можно оценить больше типов образцов, включая мочу, слюну, цельную кровь, сыворотку и другие жидкости организма7,8,9.
В последние годы были разработаны многочисленные новые анализы для выявления биомаркеров в диагностике расстройств, включая ВЭЖХ, UPLC, LC-MS и ELISA, которые являются чувствительными и точными, достоверными и специфическими. Однако эти методы требуют сложных инструментов, сложной предварительной обработки и трудоемких обработок9. Следовательно, разработка более быстрой и удобной диагностической стратегии в месте оказания медицинской помощи для самостоятельного обнаружения лекарственных активных соединений в режиме реального времени является неотложной10,11.
Популярность АСУ ТП, особенно для распространенных тестов, обусловлена их простотой использования, так как они не требуют профессионалов или сложных инструментальных установок12. Другими словами, люди, не имеющие специальной подготовки, могут оперировать полосками или самотестами13. Результаты теста могут быть получены за 5 минут, что означает, что его можно использовать для осмотра на месте14. Более того, по нашим расчетам, стоимость полосок может быть ниже 115 юаней,а это значит, что тесты недорого продвигать16. Следовательно, ICS является относительно точным, простым и недорогим одноразовым устройством. ICS на основе коллоидного золота17,18 также применяются при быстром выявлении COVID-19.
Принцип ICS можно разделить на сэндвич ICS и конкурентный ICS. Рисунок 1А представляет собой принципиальную схему сэндвич-ICS, которая в основном используется для обнаружения макромолекулярных веществ, таких как белки, включая опухолевые маркеры, воспалительные факторы и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ, антиген ранней беременности). В этом методе используют парные антитела, нацеленные на разные эпитопы антигена, а захватное антитело сушат на мембране NC в качестве тестовой линии. Меченое антитело сушат на конъюгированной прокладке, а в качестве контрольной линии используют вторичное антитело.
Рисунок 1B представляет собой принципиальную схему конкурирующих АСУ ТП, которая в основном используется для обнаружения маломолекулярных веществ (MWCO < 2000 Da). Антиген покрытия фиксируют на мембране NC в качестве тестовой линии, а меченое антитело сушат на конъюгированной прокладке. Во время обнаружения образец и меченое антитело протекают через линию обнаружения под капиллярным действием, а покрытый антиген конкурентно связывает свободный антиген в образце и развивает красный цвет на линии обнаружения.
Недавно мы описали процедуру генерации моноклональных антител против натуральных продуктов19. В этой работе мы разработали новый анализ бокового потока на основе подготовленного анти-SSD mA20 для быстрого обнаружения на месте. Результаты показывают, что иммунохроматографический анализ является незаменимым и удобным инструментом для обнаружения соединений, полученных из натурального продукта.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62754/62754fig01.jpg"> Рисунок 1 Принципиальная схема иммунохроматографического анализа (А)Сэндвич иммунохроматографические тест-полоски. (B) Косвенные конкурентные иммунные хроматографические тест-полоски. Эта цифра была изменена с Zhang et al.,201821. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62754/62754fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chloroauric acid solution (HAuCl4)</td>
			<td>Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory</td>
			<td>JY-SJ102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge tube 15 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge tube 50 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA plates, 96 well</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>655101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Sinopharm</td>
			<td>H5072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass fibre membranes</td>
			<td>Jieyi</td>
			<td>XQ-Y6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat-anti-mouse IgG antibody</td>
			<td>applygen</td>
			<td>C1308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrocellulose membranes</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>millipore 180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ovalbumin</td>
			<td>Beijing BIODEE</td>
			<td>5008-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG20000</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>RNBC6325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 10mL</td>
			<td>COSTAR</td>
			<td>4488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette 25mL</td>
			<td>FALCON</td>
			<td>357525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>semi-rigid PVC sheets</td>
			<td>Jieyi</td>
			<td>JY-C104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td>Beijing Chemical Works</td>
			<td>C1034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium periodate</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>BW-G0008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-GMBS</td>
			<td>Perbio Science Germany</td>
			<td>22324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TipOne Tips 1,000 &#181;L</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1111-2021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>77-86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a lateral flow immunochromatographic strip for rapid and quantitative detection of small molecule compounds

Мембранные иммунохроматографические полоски бокового потока (ICS) являются полезными инструментами для недорогой самодиагностики и эффективно применяются для обнаружения токсинов, физиологических индексов и клинических биомаркеров. В этом протоколе мы предоставляем подробное описание шагов по разработке быстрого, чувствительного и количественного бокового иммуноанализа (с использованием AuNPs в качестве маркера и mAbs в качестве зонда). Методика описывает получение и характеристику коллоидного золота, синтез конъюгата AuNP-mAb, сборку иммунохроматографической полосы, методологическое исследование анализа. Результаты показали, что конечные полоски могут быть дополнительно использованы для быстрой и удобной самодиагностики малой молекулы, что может обеспечить альтернативный инструмент в быстром и точном анализе физиологических и биологических показателей.

Характеристика коллоидного золота Приготовленные коллоидные растворы золота были бордово-красного цвета. Анализы ТЕА использовались для определения морфологии и формы AuNPs(рисунок 2A-D). Фиг.2А и Фиг.2В показывают, что ч?...

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds at JoVE.com

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

Разработка боковой проточной иммунохроматографической полосы для быстрого и количественного обнаружения маломолекулярных соединений

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...

Процедура описывает получение коллоидного золота и сборку иммунохроматографических полосок. Во-первых, хлорауровая кислота и цитрат натрия использовались для синтеза коллоидного золота. Цитрат натрия добавляли в раствор хлорауроновой кислоты и кипятили для получения коллоидного золота с соответствующим размером частиц.Синтез, коллоидное коллоидное антитело золота конъюгировано. После центрифугирования коллоидные частицы золота растворяли в соответствующем растворе, а затем повторно суспендировали для получения коллоидного раствора золота. Погрузьте стеклянную мембрану в сопряжение, чтобы подготовить сопряженную прокладку.Капайте искусственный антиген и вторичные антитела на мембрану NC в виде линии Т и линии С. Прикрепите мембрану с ЧПУ, абсорбивную мембрану, прокладку для образцов и мембрану из стекловолокна к плите ПВХ соответственно. Нарежьте собранный картонный картонат на полоску шириной 3,5 миллиметра.Кондитерский полнопроцентный раствор хлорида золота и 1%раствор цитрата натрия соответственно. Включите магнитную мешалку и поместите колбу на смеситель. Добавьте 120 миллилитров дистиллированной воды в колбу с круглым дном и нагрейте ее до кипения на термостатической магнитной мешалке.Держите кипение и быстро добавьте 0,5 миллилитра полнопроцентной хлорауровой кислоты и пять миллилитров 1% цитрата натрия. Продолжайте нагревать в течение пяти-10 минут. Наблюдайте, как цвет раствора меняется от бледно-желтого до винно-красного.Выключите питание термостатического магнитного смесителя, охладите до комнатной температуры и поместите смесь в чистую бутылку. Хранить при четырех градусах по Цельсию. Наночастицы золота показывают эффект Тиндалла.Размер и морфологию наночастиц золота определяли с помощью ультрафиолетовой спектроскопии и визуализации просвечивающих электронных микроскопов. Добавьте 100 микролитров раствора натрия хлорида в восемь пробирок. Отрегулируйте растворы коллоидного золота до рН от 5 до 12, используя 0,1 моль на литр карбоната калия.Добавьте 100 микролитров коллоидного раствора золота в восемь пробирок, содержащих хлорид натрия. Постоять на столбе через несколько минут после смешивания. Наблюдайте за изменением цвета каждого раствора трубки и записывайте трубку, которая остается красной.Выберите значение pH с наименьшим количеством добавленного карбоната калия и стабильным цветом раствора в качестве оптимального значения pH для приготовления сопряжения. Адаптирован тот же подход. Наблюдается изменение цвета и запись трубки, которая остается красной.Выберите количество антител с наименьшей концентрацией mAB и стабильным цветом раствора в качестве оптимального количества mAB. Возьмите 10 миллилитров раствора коллоидного золота и используйте 0,1 моль на литр карбоната калия, чтобы отрегулировать раствор до оптимального значения рН. Медленно добавьте SSd mABs с соответствующей концентрацией и встряхните при комнатной температуре в течение 30 минут.Центрифугировать смесь при 2000 об/мин в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Удалите осадок, содержащий примеси осажденного коллоидного золота. Центрифугировать смесь при 10 000 об/мин в течение 40 минут.Выбросьте супернатант. Осадок представляет коллоидный mAB конъюгат mAB коллоидного золота. Добавьте соляную кислоту Tris, BSA, Tween 20 и PEG 20 000, затем хорошо перемешайте для приготовления буфера повторной суспензии.Добавьте буфер повторного суспендения и отсоединит осадок. Полоса мембранного материала, включая стеклянную целлюлозную мембрану, полиэфирную целлюлозную мембрану и плиту ПВХ. Мембранный материал, нужно отслеживать и оценивать с помощью стерильного микроскопа, чтобы избавиться от неоднородности.Во-первых, поместите мембрану NC на плиту ПВХ в двух сантиметрах от края секционного конца доски. Во-вторых, опустите два миллиграмма на миллилитр SSd-BSA на мембрану NC в двух сантиметрах от верхнего края в качестве тестовой линии и сбросьте 1,5 миллиграмма на миллилитр золотого антимышеского IgG на мембрану NC в двух сантиметрах от нижнего края в качестве контрольной линии. Прикрепите абсорбивную прокладку к листу ПВХ над мембраной NC и перекрывайте мембрану NC на два миллиметра.Обрежьте стекловолокнистую мембрану до пяти сантиметров в длину и двух сантиметров в ширину и используйте в качестве сопряженной прокладки. Погрузите стеклянно-волоконную мембрану в конъюгированный раствор наночастиц золота mAB. Замочите на некоторое время, чтобы сделать поглощение наночастиц золота mAB.Высушите широкую мембрану в инкубаторе при 37 градусах. Вставить предварительно обработанный сопряженный подушечек под мембрану НК и длина перекрытия с мембраной НК должна составлять 0,1 сантиметра. Обрежьте мембрану Fusion3 до 1,8 сантиметра в длину и 3,5 сантиметра в ширину и используйте в качестве образца.Затем поместите прокладку для образцов на доску ПВХ и перекройте сопряженную прокладку на два миллиметра. Нарежьте, соберите картон на полосы шириной 3,5 миллиметра с помощью режущего станка и компактно используя систему периодического ламинирования. Наконец, поместите тест-полоски в оболочку.Запечатайте их в пакет из алюминиевой фольги, содержащий адсорбционный материал, и храните вдали от света. В настоящее время ICS собрана. Опустите 50 микролитров раствора образца на отверстие для образца, чтобы наблюдать за процессом хроматографии.Затем проанализируйте полоски с помощью портативного считывателя полос. Машина может обеспечить соотношение испытательной линии к управляю. Оцените специфичность, чувствительность, повторяемость и стабильность теста ICS.Были прочитаны подготовленные растворы коллоидного золота. Анализы просвечивающих электронных микроскопов показали, что частицы были многогранной формы и равномерно распределены со средним диаметром 14 нанометров. Изображения просвечивающего электронного микроскопа с высоким разрешением показали непрерывную картину бахромы с интервалом 0,117 нанометра наночастиц золота.Ультрафиолетовое видимое поглощение указывало на то, что различные размеры коллоидных частиц золота могут быть получены путем изменения пропорции цитрата натрия и хлораурисовой кислоты. В количественном эксперименте полоски с результатами теста сайкосапонина D сканировали с помощью портативного считывателя ICS. Мы рассчитали стандартную кривую, связав неконцентраты сайкосапонина D с соответствующей абсорбцией при каждой концентрации.После методологического исследования метод может быть применен для количественного и полукачественный детектирования соединений малых молекул. Эта процедура включает в себя получение коллоидного золота, синтез конъюгата наночастиц золота mAB, сборку полосы и методологическое исследование. Данная работа содержит подробный протокол разработки иммунохроматографической полосы для использования в быстром и количественном обнаружении малых молекул.После просмотра этого видео я надеюсь, что у вас есть хорошее понимание для приготовления иммунохроматографической полосы. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Highly Sensitive and Rapid Fluorescence Detection with a Portable FRET Analyzer

Высокочувствительных и быстрое обнаружение флуоресценция с помощью портативного анализатора FRET

Recent improvements in F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) sensors have enabled their use to detect various small molecules including ions and ...

Isolation of High-density Lipoproteins for Non-coding Small RNA Quantification

Выделение липопротеидов высокой плотности для Некодирующих малых РНК квантификации

The diversity of small non-coding RNAs (sRNA) is rapidly expanding and their roles in biological processes, including gene regulation, are emerging. Most ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Идентификация малая молекула-связывающих белков в нативной клеточной среде с помощью Live-клеток фотоаффинное мечение

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

Способ идентификации низкомолекулярных соединений ингибиторов белок-белкового взаимодействия между HCN1 и TRIP8b

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

Enhanced Sample Multiplexing of Tissues Using Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging (cPILOT)

Enhanced Sample Multiplexing of Tissues Using Combined Precursor Isotopic Labeling and Isobaric Tagging cPILOT

Enhanced Sample мультиплексирование тканей с использованием комбинированного прекурсорами изотопной метки и изобарической Tagging (cPILOT)

There is an increasing demand to analyze many biological samples for disease understanding and biomarker discovery. Quantitative proteomics strategies ...

A Simple, Robust, and High Throughput Single Molecule Flow Stretching Assay Implementation for Studying Transport of Molecules Along DNA

Простая, прочная и высокая пропускная способность одной молекулы потока растяжения Assay осуществления для изучения транспорт молекул вдоль ДНК

We describe a simple, robust and high throughput single molecule flow-stretching assay for studying 1D diffusion of molecules along DNA. In this assay, ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

Надежные сравнение уровня белка через ткани и на протяжении развития с использованием стандартизированных количественных западный Blotting

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

Активированный перекрестный связаны Агароуз для быстрого развития аффинити Хроматография resins - Захват антител как пример

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

Полу-высокой пропускной адаптации NADH-связанных АТПас анализ для скрининга малых ингибиторы молекулы

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

Single Cell Analysis Of Transcriptionally Active Alleles By Single Molecule FISH

Одноклеточный анализ транскрипционно активных аллелей одной молекулой FISH

Gene transcription is an essential process in cell biology, and allows cells to interpret and respond to internal and external cues. Traditional bulk ...