Name: generation of human brain organoids for mitochondrial disease modeling
Uploaded: 2021-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human Brain Organoids for Mitochondrial Disease Modeling at JoVE.com

نشكر ميريام بونينج على الدعم الفني. نعترف بالدعم المقدم من دويتشه فوردشونجسجيمينشافت (DFG) (PR1527/5-1 إلى A.P.) وS spark ومعهد برلين للصحة (BIH) (صناديق التحقق من صحة BIH إلى A.P.) ، ويونايتد مؤسسة أمراض الميتوكوندريا (UMDF) (منحة الاتحاد الدولي لمتلازمة لي ل A.P.)، مستشفى دوسلدورف الجامعي (Forschungskommission UKD إلى A.P.)، ووزارة التعليم والبحوث الاتحادية الألمانية (BMBF) (e: بيو الشباب المحقق منح AZ 031L0211 إلى A.P.). تم دعم العمل في مختبر C.R.R. من قبل DFG (FOR 2795 "نقاط الاشتباك العصبي تحت الضغط"، Ro 2327/13-1).

ملاحظة: قد يتطلب استخدام iPSCs البشرية موافقة أخلاقية. استمدت مراكز الرقابة الصحية الدولية المستخدمة في هذه الدراسة من أفراد مكافحة صحيين بعد الموافقة الأخلاقية المحلية (#2019-681). يجب أن يتم تنفيذ جميع إجراءات زراعة الخلايا تحت غطاء محرك السيارة ثقافة الخلية العقيمة، وتطهير بعناية جميع الكوا?...

<ol>
	<li>Koopman, W. J., Willems, P. H., Smeitink, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogenic+mitochondrial+disorders.">Monogenic mitochondrial disorders.</a> New England Journal of Medicine. 366 (12), 1132-1141 (2012).</li><li>Gorman, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+diseases.">Mitochondrial diseases.</a> Nature Review Disease Primers. 2, 16080 (2016).</li><li>Vafai, S. B., Mootha, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+disorders+as+windows+into+an+ancient+organelle.">Mitochondrial disorders as windows into an ancient organelle.</a> Nature. 491 (7424), 374-383 (2012).</li><li>Carelli, V., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA:+impacting+central+and+peripheral+nervous+systems.">Mitochondrial DNA: impacting central and peripheral nervous systems.</a> Neuron. 84 (6), 1126-1142 (2014).</li><li>Russell, O. M., Gorman, G. S., Lightowlers, R. N., Turnbull, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+diseases:+hope+for+the+future.">Mitochondrial diseases: hope for the future.</a> Cell. 181 (1), 168-188 (2020).</li><li>Weissig, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+development+for+the+therapy+of+mitochondrial+diseases.">Drug development for the therapy of mitochondrial diseases.</a> Trends in Molecular Medicine. 26 (1), 40-57 (2020).</li><li>Tyynismaa, H., Suomalainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+mitochondrial+DNA+defects+and+their+relevance+for+human+disease.">Mouse models of mitochondrial DNA defects and their relevance for human disease.</a> EMBO Reports. 10 (2), 137-143 (2009).</li><li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+rescue+in+pluripotent+cells+from+patients+with+mtDNA+disease.">Metabolic rescue in pluripotent cells from patients with mtDNA disease.</a> Nature. 524 (7564), 234-238 (2015).</li><li>Galera-Monge, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunction+and+calcium+dysregulation+in+Leigh+syndrome+induced+pluripotent+stem+cell+derived+neurons.">Mitochondrial dysfunction and calcium dysregulation in Leigh syndrome induced pluripotent stem cell derived neurons.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (9), 3191 (2020).</li><li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alleviation+of+neuronal+energy+deficiency+by+mTOR+inhibition+as+a+treatment+for+mitochondria-related+neurodegeneration.">Alleviation of neuronal energy deficiency by mTOR inhibition as a treatment for mitochondria-related neurodegeneration.</a> Elife. 5, 13378 (2016).</li><li>Lorenz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPSC-derived+neural+progenitors+are+an+effective+drug+discovery+model+for+neurological+mtDNA+disorders.">Human iPSC-derived neural progenitors are an effective drug discovery model for neurological mtDNA disorders.</a> Cell Stem Cell. 20 (5), 659-674 (2017).</li><li>Inak, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+induced+pluripotent+stem+cell-based+drug+discovery+for+mitochondrial+disease.">Concise review: induced pluripotent stem cell-based drug discovery for mitochondrial disease.</a> Stem Cells. 35 (7), 1655-1662 (2017).</li><li>Chiaradia, I., Lancaster, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+organoids+for+the+study+of+human+neurobiology+at+the+interface+of+in+vitro+and+in+vivo.">Brain organoids for the study of human neurobiology at the interface of in vitro and in vivo.</a> Nature Neuroscience. 23 (12), 1496-1508 (2020).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cerebral+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nature Protocol. 9 (10), 2329-2340 (2014).</li><li>Liput, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+and+approaches+for+analyzing+the+role+of+mitochondria+in+health,+development+and+disease+using+human+cerebral+organoids.">Tools and approaches for analyzing the role of mitochondria in health, development and disease using human cerebral organoids.</a> Developmental Neurobiology. , (2021).</li><li>Winanto, K. Z. J., Soh, B. S., Fan, Y., Ng, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+cultures+of+MELAS+neural+cells+reveal+hyperactive+Notch+signaling+that+impacts+neurodevelopment.">Organoid cultures of MELAS neural cells reveal hyperactive Notch signaling that impacts neurodevelopment.</a> Cell Death and Disease. 11 (3), 182 (2020).</li><li>Romero-Morales, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPSC-derived+cerebral+organoids+model+features+of+Leigh+Syndrome+and+reveal+abnormal+corticogenesis.">Human iPSC-derived cerebral organoids model features of Leigh Syndrome and reveal abnormal corticogenesis.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>Inak, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+metabolic+programming+impairs+early+neuronal+morphogenesis+in+neural+cultures+and+an+organoid+model+of+Leigh+syndrome.">Defective metabolic programming impairs early neuronal morphogenesis in neural cultures and an organoid model of Leigh syndrome.</a> Nature Communications. 12 (1), 1929 (2021).</li><li>Falk, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurodevelopmental+manifestations+of+mitochondrial+disease.">Neurodevelopmental manifestations of mitochondrial disease.</a> Journal of Developmental &amp; Behavioral Pediatrics. 31 (7), 610-621 (2010).</li><li>Velasco, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individual+brain+organoids+reproducibly+form+cell+diversity+of+the+human+cerebral+cortex.">Individual brain organoids reproducibly form cell diversity of the human cerebral cortex.</a> Nature. 570 (7762), 523-527 (2019).</li><li>Pfiffer, V., Prigione, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+bioenergetic+profile+of+human+pluripotent+stem+cells.">Assessing the bioenergetic profile of human pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1264, 279-288 (2015).</li><li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Colman, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse.">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100386 (2021).</li><li>Menacho, C., Prigione, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+mitochondrial+diversity+in+brain+function:+from+animal+models+to+human+brain+organoids.">Tackling mitochondrial diversity in brain function: from animal models to human brain organoids.</a> International Journal of Biochemestry &amp; Cell Biology. 123, 105760 (2020).</li><li>Del Dosso, A., Urenda, J. P., Nguyen, T., Quadrato, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upgrading+the+physiological+relevance+of+human+brain+organoids.">Upgrading the physiological relevance of human brain organoids.</a> Neuron. 107 (6), 1014-1028 (2020).</li></ol>

تصف هذه الورقة الجيل القابل للاستنساخ من الأعضاء العضوية البشرية المشتقة من الدماغ iPSC واستخدامها لنمذجة أمراض الميتوكوندريا. يتم تعديل البروتوكول الموضح هنا استنادا إلى work20 المنشورة مسبقا. وإحدى المزايا الرئيسية لهذا البروتوكول هي أنه لا يتطلب التضمين اليدوي لكل عضو عضوي ف...

أمراض الميتوكوندريا تمثل أكبر فئة من الأخطاء الجنينية من التمثيل الغذائي1. وهي ناجمة عن الطفرات الوراثية التي تعطل عمليات الميتوكوندريا المختلفة، بما في ذلك الفوسفور التأكسدي (OXPHOS)2، وتجميع سلسلة الجهاز التنفسي، وديناميات الميتوكوندريا، ونسخ الحمض النووي الميتوكوندريا أو النسخ المتماثل3. تتأثر الأنسجة ذات متطلبات الطاقة بشكل خاص بخلل الميتوكوندريا4. وبناء على ذلك، فإن المرضى الذين يعانون من أمراض الميتوكوندريا عادة ما يطورون مظاهر عصبية مبكرة.
لا توجد حاليا علاجات متاحة للأطفال المصابين بأمراض الميتوكوندريا5. عائق رئيسي لتطوير المخدرات من أمراض الميتوكوندريا هو عدم وجود نماذج فعالة تلخيص مسار المرض البشري6. العديد من النماذج الحيوانية التي تمت دراستها حاليا لا تظهر العيوب العصبية الموجودة في المرضى7. وبالتالي ، فإن الآليات الكامنة وراء أمراض الخلايا العصبية لأمراض الميتوكوندريا لا تزال غير مفهومة تماما.
الدراسات الحديثة ولدت iPSCs من المرضى المتضررين من أمراض الميتوكوندريا واستخدمت هذه الخلايا للحصول على خلايا عصبية خاصة بالمرضى. على سبيل المثال، تم العثور على العيوب الوراثية المرتبطة بمرض الميتوكوندريا، متلازمة لي، تسبب انحرافات في الجيوجيات الحيوية الخلوية8،9، تخليق البروتين10، والكالسيوم homeostasis9،11. قدمت هذه التقارير أدلة ميكانيكية مهمة على ضعف الخلايا العصبية التي تحدث في أمراض الميتوكوندريا ، مما يمهد الطريق لاكتشاف الأدوية لهذه الأمراض المستعصية12.
الثقافات ثنائية الأبعاد (ثنائية الأبعاد) ، ومع ذلك ، لا تمكن من التحقيق في التعقيد المعماري والتنظيم الإقليمي للأجهزة ثلاثية الأبعاد13. وتحقيقا لهذه الغاية، فإن استخدام الأعضاء العضوية ثلاثية الأبعاد في الدماغ المستمدة من iPSCs14 الخاصة بالمرضى قد يسمح للباحثين بالحصول على معلومات إضافية مهمة وبالتالي المساعدة في تشريح كيفية تأثير أمراض الميتوكوندريا على تطور الجهاز العصبي ووظيفته15. بدأت الدراسات التي تستخدم الأعضاء المشتقة من الدماغ iPSC للتحقيق في أمراض الميتوكوندريا في الكشف عن المكونات العصبية النمائية لأمراض الميتوكوندريا.
أظهرت الأجهزة العضوية في الحبل الشوكي التي تحمل طفرات مرتبطة بمرض الميتوكوندريا واعتلال الدماغ الميتوكوندريا وحمض اللاكتيك ومتلازمة الحلقات الشبيهة بالسكتة الدماغية (MELAS) وجود خلل في تكوين الأعصاب وتمايز الخلايا العصبية الحركية المتأخر16. أظهرت الأجهزة العضوية القشرية المشتقة من المرضى الذين يعانون من مرض الميتوكوندريا ، متلازمة لي ، انخفاضا في الحجم ، وعيوبا في توليد البراعم الظهارية العصبية ، وفقدان العمارة القشرية17. أظهرت أعضاء الدماغ من مرضى متلازمة لي أن عيوب المرض تبدأ على مستوى خلايا السلف العصبية ، والتي لا يمكن أن تلتزم بعملية التمثيل الغذائي للميتوكوندريا ، مما يسبب تفريع الخلايا العصبية الشاذة والمورفوجينيس18. وهكذا، قد تمثل السلف العصبية هدفا علاجيا خلويا لأمراض الميتوكوندريا، وقد تدعم الاستراتيجيات التي تعزز وظيفتها الميتوكوندريا التطور الوظيفي للجهاز العصبي.
قد يساعد استخدام الأعضاء العضوية في الدماغ في الكشف عن المكونات العصبية النمائية لأمراض الميتوكوندريا. تعتبر أمراض الميتوكوندريا بشكل رئيسي تنكس عصبي مبكر5. ومع ذلك ، توجد عيوب نمائية عصبية أيضا في المرضى المتضررين من أمراض الميتوكوندريا ، بما في ذلك تأخر النمو وضعف الإدراك19. قد تساعد الأعضاء العضوية الدماغية الخاصة بمرضى معينين في معالجة هذه الجوانب وتوضيح كيفية تأثير أمراض الميتوكوندريا على نمو الدماغ البشري. يمكن أن يلعب خلل الميتوكوندريا أيضا دورا مسببا للأمراض في الأمراض العصبية الأخرى الأكثر شيوعا ، مثل مرض الزهايمر ومرض باركنسون ومرض هنتنغتون4. وبالتالي ، فإن توضيح تأثير عيوب الميتوكوندريا في النمو العصبي باستخدام أعضاء الدماغ قد يكون مفيدا أيضا لدراسة تلك الأمراض. تصف هذه الورقة بروتوكولا مفصلا لتوليد أعضاء الدماغ القابلة للاستنساخ التي يمكن استخدامها لإجراء نمذجة الأمراض لأمراض الميتوكوندريا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31350-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Affinity Designer</td>
			<td>Serif (Europe) Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Layout software; Vector graphics editor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-guinea pig</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>SAB4600033-250UL</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-31571</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimycin A</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1397-94-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;-Tubulin III (TUJ-1)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8578</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Argon Laser</td>
			<td>Melles Griot</td>
			<td></td>
			<td>Any other Laser, e.g., diode lasers emitting 488 is fine, too</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A92902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 with Vitamin A</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>3% in PBS, store solution at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDNF</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-0811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cAMP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Star cell culture 6 well plate</td>
			<td>Greiner-Bio-One</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemically Defined Lipid Concentrate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11905031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope C1</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Modular confocal microscope system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement membrane matrix, Phenol Red-free, LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Matrix component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>C7026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>31330038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2660-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-goat Cy3</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>AP180C</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-mouse Cy3</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>AP192C</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-rabbit Cy3</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>AP182C</td>
			<td>1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DS-Q1Mc camera</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse 90i upright widefield microscope</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse E 600FN upright microscope</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ts2 Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon Microsope Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EZ-C1 Silver Version 3.91</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software for confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCCP</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>370-86-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glasgow MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11710-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipette</td>
			<td>Brand</td>
			<td>747715</td>
			<td>Inverted</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helium-Neon Laser</td>
			<td>Melles Griot</td>
			<td></td>
			<td>Every other Laser, e.g., diode lasers emitting 594 is fine, too</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H3149-25KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HERACell 240i CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H3570</td>
			<td>1:2500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J 1.53c</td>
			<td>Wayne Rasband National Institute of Health</td>
			<td></td>
			<td>Image processing Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injekt Solo 10 mL/ Luer</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4606108V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knockout Serum Replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser (407 nm)</td>
			<td>Coherent</td>
			<td></td>
			<td>Any other Laser, e.g., diode lasers emitting 407 is fine, too</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map2</td>
			<td>Synaptic Systems</td>
			<td>No. 188004</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maxisafe 2030i</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR Plus</td>
			<td>Stemcell Technology</td>
			<td>85850</td>
			<td>iPSC medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multifuge X3R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>10325804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MycoAlert Mycoplasma Detection Kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td># LT07-218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle for single usage (23G x 1&#8221; TW)</td>
			<td>Neoject</td>
			<td>10016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-Elements Aadvanced Research 3.2</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligomycin A</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>75351</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital Shaker Heidolph Unimax 1010</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>543-12310-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP Pen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td>To draw hydrophobic barrier on slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain Dissociation System kit</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LK003150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Merck</td>
			<td>818715</td>
			<td>4% in PBS, store solution at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette 7mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1681</td>
			<td>Graduated up to 3 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan Apo VC 20x / 0.75 air DIC N2&#160; &#8734;/0.17 WD 1.0</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Dry Microscope Objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan Apo VC 60x / 1.40 oil DIC N2 &#8734;/0.17 WD 0.13</td>
			<td>Nikon Microscope Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Oil Immersion Microscope Objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene Petri dish (100 mm)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>664161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round-bottom tube with cell-strainer cap (5 mL)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6781.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Glass Antifade Moutant</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qualitative filter paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>516-0813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rock Inhibitior</td>
			<td>Merck</td>
			<td>SCM075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>83-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100&#946;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab11178</td>
			<td>1:600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB-431542</td>
			<td>Cayman Chemical Company</td>
			<td>13031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades</td>
			<td>Heinz Herenz Hamburq</td>
			<td>1110918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMI312</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>837904</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Merck/Sigma</td>
			<td>31437-1kg-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Roth</td>
			<td>3957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>131965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOX2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>Sc-17320</td>
			<td>1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>Gibco/StemPro</td>
			<td>A1110501</td>
			<td>Reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Glue Gel</td>
			<td>UHU</td>
			<td>63261</td>
			<td>adhesive gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe for single usage (1 mL)</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>300015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TB2 Thermoblock</td>
			<td>Biometra</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Plate 24 Well</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Plate 6 Well</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGFbeta3</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-094-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Hood</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>51032711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TOM20</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>SC-11415</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X</td>
			<td>Merck</td>
			<td>X100-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5M EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome Microm HM 650 V</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Production terminated, any other adjustable microtome is fine, too.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome Wilkinson Classic Razor Blade</td>
			<td>Wilkinson Sword</td>
			<td>70517470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Benchkote</td>
			<td>Merck/Sigma</td>
			<td>28418852</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wnt Antagonist I</td>
			<td>EMD Millipore Corp</td>
			<td>3378738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF 96 extracellular flux analyser</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>100737-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Assay DMEM Medium</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>103680-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Calibrant Solution</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>100840-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XFe96 FluxPak (96-well microplate)</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of human brain organoids for mitochondrial disease modeling

أمراض الميتوكوندريا تمثل أكبر فئة من الأخطاء الجنينية في التمثيل الغذائي وغير قابلة للشفاء حاليا. هذه الأمراض تسبب عيوب نمائية عصبية لا تزال آلياتها الأساسية في حالة توضيح. حاجز رئيسي هو عدم وجود نماذج فعالة تلخيص ضعف الخلايا العصبية في وقت مبكر ينظر في المرضى. يتيح التقدم في تكنولوجيا الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs) توليد أعضاء دماغية ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد) يمكن استخدامها للتحقيق في تأثير الأمراض على تطور الجهاز العصبي وتنظيمه. وقد أدخل الباحثون، بما في ذلك هؤلاء المؤلفين، مؤخرا organoids الدماغ البشري لنموذج اضطرابات الميتوكوندريا. هذه الورقة تقارير بروتوكول مفصل للجيل قوية من الأعضاء الدماغ المستمدة من iPSC الإنسان واستخدامها في التنميط الحيوي الميتوكوندريا وتحليلات التصوير. هذه التجارب سوف تسمح باستخدام organoids الدماغ للتحقيق في الاختلالات الأيضية والتنموية، ويمكن أن توفر معلومات حاسمة لتشريح الأمراض العصبية من أمراض الميتوكوندريا.

البروتوكول الموصوف هنا يسهل توليد قوي من organoids الجولة (الشكل 1A). تحتوي الأجهزة العضوية المتولدة على خلايا عصبية ناضجة يمكن تصورها باستخدام علامات البروتين المحددة للمكونات (SMI312) والتشعبات (البروتين المرتبط بالميكروتبول 2 (MAP2)) (الشكل 1B...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human Brain Organoids for Mitochondrial Disease Modeling at JoVE.com

Generation of Human Brain Organoids for Mitochondrial Disease Modeling

نحن نصف بروتوكول مفصل لتوليد الخلايا الجذعية المتعددة القدرات المستحثة البشرية المستمدة من أعضاء الدماغ واستخدامها في نمذجة أمراض الميتوكوندريا.

جيل من الأعضاء الدماغ البشري لنمذجة مرض الميتوكوندريا

Mitochondrial diseases represent the largest class of inborn errors of metabolism and are currently incurable. These diseases cause neurodevelopmental ...

يهدف هذا البروتوكول إلى استخدام أعضاء الدماغ لدراسة أمراض الميتوكوندريا. وقد تم تطويره لتوليد organoids الدماغ القابلة للاستنساخ في تقييم خصائص الميتوكوندريا الخاصة بهم. ولا تتطلب هذه الطريقة مفاعلات حيوية باهظة الثمن وإجراءات تضمين تستغرق وقتا طويلا.لذلك، فمن السهل لتنفيذ والراقية. هذا البروتوكول يجعل من الممكن لتوليد organoids الدماغ استنساخها واختبار خصائصها الميتوكوندريا. وهذا يمكن أن يؤدي إلى تحديد الأهداف التدخلية لأمراض الميتوكوندريا التي لا يمكن علاجها.للبدء، ثقافة iPSCs الإنسان في ظل ظروف خالية من التغذية في المتوسط iPSC على لوحات المغلفة ست آبار والاحتفاظ بها في حاضنة زراعة الأنسجة الرطبة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. مرور iPSCs في التقاء 80٪ باستخدام انزيم خالية مفرزة المتوسطة في نسب تتراوح بين واحد من أربعة إلى واحد في 12. لزيادة بقاء الخلية، أضف 10 كيناز البروتين المرتبط بالميكرومولار أو مثبط ROCK بعد كل تقسيم.فصل 80٪ iPSCs في اليوم صفر. إعداد التمايز القشري المتوسطة أو CDM1 وقبل الحارة في درجة حرارة الغرفة قبل إضافته إلى الخلايا. غسل الآبار التي تحتوي على iPSCs مع برنامج تلفزيوني لإزالة الخلايا الميتة والحطام.أضف 500 ميكرولتر من الكاشف A الذي تم تسخينه مسبقا إلى كل بئر واحتضنه لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية. تحقق تحت المجهر لضمان انفصال الخلية. إضافة ملليلتر واحد من iPSC المتوسطة لتخفيف الكاشف A لتحييد نشاطها.استخدام ماصة 1,000 ميكرولتر لتفكيك الخلايا عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا ونقل تعليق الخلية إلى أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر. طرد مركزي بلطف iPSCs في 125 مرة G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم يستنشق بعناية supernatant لتجنب إزعاج بيليه الخلية. إعادة إنفاق بيليه مع ملليلتر واحد من CDM1 للحصول على تعليق خلية واحدة والعد رقم الخلية.إعداد المتوسطة البذر مع 9,000 iPSCs لكل 100 ميكرولتر في CDM1 تكملها 20 ميكرومولار روك المانع, ثلاثة ميكرومولار WNT كاتينين المانع أو IWR-1, وخمسة ميكرومولار SB-431542. إضافة 100 ميكرولتر من البذر المتوسطة لكل بئر إلى لوحة أسفل V 96 جيدا. احتفظ بالطبق في حاضنة زراعة الأنسجة الرطبة عند 37 درجة مئوية و5٪ من ثاني أكسيد الكربون.لتوليد الخلايا العصبية، في اليوم الأول، لاحظ أن المجاميع الخلايا المستديرة مع حدود سلسة محددة تتشكل. لاحظ الخلايا الميتة حول التجميعات. مواصلة الثقافة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.في اليوم الثالث، قم بإثارة اللوحة عن طريق النقر على الجانبين ثلاث مرات لفصل الخلايا الميتة، ثم أضف 100 ميكرولتر من CDM1 المكملة ب 20 مثبط MICROMOLAR ROCK، وثلاثة ميكرومولار IWR-1، وخمسة ميكرومولار SB-431542 لكل بئر. احتفظ بالطبق إلى الحاضنة عند 37 درجة مئوية و5٪ من ثاني أكسيد الكربون. في اليوم السادس، قم بإزالة 80 ميكرولتر من الوسيط الفائق بعناية من كل بئر.تجنب لمس الجزء السفلي من البئر. إضافة 100 ميكرولتر من CDM1 تكملها ثلاثة ميكرومولار IWR-1 وخمسة ميكرومولار SB-431542 إلى كل بئر واحتضان لوحة. كرر الخطوة السابقة بعد كل ثلاثة أيام حتى اليوم 18.في اليوم 18، لنقل الخلايا العصبية، وإعداد CDM2 وإضافة 10 ملليلتر إلى لوحة ثقافة الخلية مرفق 100 ملليمتر منخفضة جدا. استخدام ماصة 200 ميكرولتر مع تلميح قطع لنقل neurospheres الجولة من لوحة 96 جيدا إلى لوحة ثقافة الخلية مرفق 100 ملليمتر منخفضة جدا. إزالة خمسة ملليلتر من المتوسطة من لوحة تحتوي على الأعصاب وإضافة خمسة ملليلتر من CDM2 الطازجة.ضع اللوحة على شاكر مداري بمعدل 70 دوران في الدقيقة داخل حاضنة زراعة الأنسجة الرطبة عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون. كل ثلاثة أيام، يستنشق بعناية المتوسطة فائقة واستبدالها CDM2 جديدة. اترك كمية صغيرة من الوسط لمنع الغلاف العصبي من الجفاف.في اليوم 35، قم بإعداد CDM3. يستنشق المتوسط من لوحة وإضافة 10 ملليلتر من CDM3 الباردة. بعد تغيير الوسط، ضع اللوحة مرة أخرى على شاكر مداري بمعدل 70 دوران في الدقيقة داخل حاضنة زراعة الأنسجة الرطبة عند 37 درجة مئوية و5٪ من ثاني أكسيد الكربون.تغيير المتوسط كل ثلاثة إلى خمسة أيام اعتمادا على معدل النمو كما هو مبين في لون الوسط. في اليوم 70، قم بإعداد CDM4. استخدام CDM4 المتوسطة حتى يتم الوصول إلى العمر المطلوب من organoids.خلال هذه الفترة، والحفاظ على لوحة على شاكر المداري تعيين في 70 دوران في الدقيقة الواحدة داخل حاضنة زراعة الأنسجة الرطبة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. تغيير المتوسط كل ثلاثة إلى خمسة أيام اعتمادا على معدل النمو. إعداد حل PFA 4٪ووضعه تحت غطاء أمان.جمع organoids الدماغ ونقلها بلطف مع حاد يميل ثلاثة ملليلتر البلاستيك باستور ماصة إلى لوحة من ستة آبار مليئة PFA. الحفاظ على organoids في محلول PFA لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. إزالة بعناية PFA مع ماصة البلاستيك باستور ثلاثة ملليلتر وغسل organoids ثابتة ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني.تخزين organoids ثابتة في أربع درجات مئوية في برنامج تلفزيوني حتى مزيد من الاستخدام. تحتوي الأجهزة العضوية المتولدة باستخدام هذا البروتوكول على خلايا عصبية ناضجة يمكن تصورها باستخدام علامات البروتين المحددة للمعابر والتشعبات. الأجهزة العضوية الناضجة تحتوي ليس فقط على خلايا عصبية، ولكن أيضا خلايا الدبقية.باستخدام تحليل الأعضاء الدماغ شرائح، فمن الممكن لرصد المحاور الإيجابية SMI 312 وDENDRITES MAP2 إيجابية أو الخلايا الدبقية بيتا S100. علاوة على ذلك، تساعد الصور confocal للتحقيق في توزيع مفصل وتنظيم السجود العصبية الإيجابية SOX2 فيما يتعلق بيتا-3 الخلايا العصبية إيجابية توبولين. كانت الأعضاء الدماغية ملطخة بعلامات خاصة بالميتوكوندريا ، مثل الغشاء الخارجي أو TOM20.تم إجراء التنميط الحيوي للأعضاء العضوية في الدماغ عن طريق قياس كل من عمليات التمثيل الغذائي الميتوكوندريا باستخدام معدل استهلاك الأكسجين ، أو OCR ، والتمثيل الغذائي الجليكوليك باستخدام معدل الحموضة خارج الخلية ، أو ECAR. Oligomycin يسبب انخفاض في ملف تعريف التعرف الضوئي على الحروف، وبالتالي يحدد OCR اللازمة لإنتاج ATP. عند علاج أوليغومايسين، قد يكون هناك أيضا زيادة تعويضية في ECAR مما يشير إلى أن الخلايا يمكن أن upregulate تحلل لمنع الإجهاد الأيضي.عند نقل الغلاف العصبي من لوحة 96 جيدا إلى لوحة الثقافة أو أثناء إجراء التثبيت ، من المهم التعامل مع الأجهزة العضوية بلطف لتجنب إتلافها. بعد توليد أعضاء الدماغ ، فإن صفيف الأقطاب الكهربائية المتعددة أو تصوير الكالسيوم سيكون طرقا مثالية لاختبار وظائف organoids.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

إعداد Oligomeric β اميلويد 1-42 والتعريفي للعاهة اللدونة متشابك على شرائح الحصين

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Mitochondrial Ca2+ Retention Capacity Assay and Ca2+-triggered Mitochondrial Swelling Assay

Mitochondrial Ca2+ Retention Capacity Assay and Ca2+-triggered Mitochondrial Swelling Assay

Ca المتقدرية2 + الاحتفاظ بالقدرات المقايسة و Ca2 +--تسبب تورم المتقدرية الإنزيم

The production of ATP by oxidative phosphorylation is the primary function of mitochondria. Mitochondria in higher eukaryotes also participate in ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

نمذجة عدوى فيروس زكى من وضع الدماغ البشري في المختبر باستخدام الخلايا الجذعية المشتقة من أورجانويدس الدماغي

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Simple Generation of a High Yield Culture of Induced Neurons from Human Adult Skin Fibroblasts

جيل بسيطة من ثقافة عالية الغلة المستحث الخلايا العصبية من الخلايا الليفية الجلد الكبار البشرية

Induced neurons (iNs), the product of somatic cells directly converted to neurons, are a way to obtain patient-derived neurons from tissue that is easily ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

في فيفو تتبع في محطة Presynaptic الأعصاب الحركية المورفولوجية جزيء واحد

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. ...

Production, Purification, and Quality Control for Adeno-associated Virus-based Vectors

إنتاج وتنقية ومراقبة الجودة لناقلات القائم على الفيروسات المرتبطة بالغدة

Gene delivery tools based on adeno-associated viruses (AAVs) are a popular choice for the delivery of transgenes to the central nervous system (CNS), ...

Three-Dimensional Shape Modeling and Analysis of Brain Structures

نمذجة الاشكال ثلاثية الابعاد وتحليل هياكل المخ

Statistical shape analysis of brain structures has been used to investigate the association between their structural changes and pathological processes. ...

Generation of Human Neurons and Oligodendrocytes from Pluripotent Stem Cells for Modeling Neuron-Oligodendrocyte Interactions

توليد الخلايا العصبية البشرية والخلايا قليلة التغصن من الخلايا الجذعية متعددة القدرات لنمذجة تفاعلات الخلايا العصبية قليلة التغصن

In Alzheimer&#8217;s disease (AD) and other neurodegenerative disorders, oligodendroglial failure is a common early pathological feature, but how it ...

Generation of Human Motor Units with Functional Neuromuscular Junctions in Microfluidic Devices

جيل من وحدات السيارات البشرية مع تقاطعات العصبية والعضلية الوظيفية في الأجهزة Microfluidic

Neuromuscular junctions (NMJs) are specialized synapses between the axon of the lower motor neuron and the muscle facilitating the engagement of muscle ...

Flow Cytometric Analysis of Multiple Mitochondrial Parameters in Human Induced Pluripotent Stem Cells and Their Neural and Glial Derivatives

تحليل التدفق الخلوي لمعلمات الميتوكوندريا المتعددة في الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة بالإنسان ومشتقاتها العصبية والدبقية

Mitochondria are important in the pathophysiology of many neurodegenerative diseases. Changes in mitochondrial volume, mitochondrial membrane potential ...