Name: f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells
Uploaded: 2021-06-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

أجريت التجارب في منصة تكنولوجيا المجهر الخفيف (LiMiTec) التابعة لكلية البيولوجيا، جامعة بيليفيلد. وقد مولت جامعة بيليفيلد هذا العمل.

ملاحظة: بالنسبة للبروتوكول التالي، تم تنفيذ عملية نقل عابرة للبلاستيدات الأولية، كما هو موضح سابقا12. ويرد أدناه وصف موجز.
1. عابر transfection من بروتوبلاستس
<ol><li>قطع ~ 4 غرام من أوراق صحية من أربيدوبسيس تاليانا ecotype كولومبيا إلى شرائح 1 ملم ونقلها إلى 20 مل من محلو?...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescent Spectroscopy. Third Edition. , (2006).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F&#246;rster+resonance+energy+transfer-+FRET+what+it+is,+why+do+it,+and+how+it's+done.">F&#246;rster resonance energy transfer- FRET what it is, why do it, and how it's done.</a> Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 33, 1-57 (2009).</li><li>Vogel, S. S., Nguyen, T. A., vander Meer, B. W., Blank, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+heterogeneity+and+dark+acceptor+states+on+FRET:+implications+for+using+fluorescent+protein+donors+and+acceptors.">The impact of heterogeneity and dark acceptor states on FRET: implications for using fluorescent protein donors and acceptors.</a> PLoS ONE. 7, 49593 (2012).</li><li>M&#252;ller, S. M., Galliardt, H., Schneider, J., Barisas, B. G., Seidel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+F&#246;rster+resonance+energy+transfer+by+monitoring+sensitized+emission+in+living+plant+cells.">Quantification of F&#246;rster resonance energy transfer by monitoring sensitized emission in living plant cells.</a> Frontiers in Plant Science. 4, 413 (2013).</li><li>Gadella, T. W. J., vander Krogt, G. N., Bisseling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+FRET-microscopy+in+living+plant+cells.">GFP-based FRET-microscopy in living plant cells.</a> Trends in Plant Science. 4, 287-291 (1999).</li><li>Van Rheenen, J., Langeslag, M., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+confocal+acquisition+to+optimize+imaging+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+by+sensitized+emission.">Correcting confocal acquisition to optimize imaging of fluorescence resonance energy transfer by sensitized emission.</a> Biophysical Journal. 86, 2517-2529 (2004).</li><li>Seidel, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+C-termini+of+V-ATPase+subunits+by+in+vivo-FRET+measurements.">Mapping of C-termini of V-ATPase subunits by in vivo-FRET measurements.</a> FEBS Letters. 579, 4374-4382 (2005).</li><li>Seidel, T., Schnitzer, D., Golldack, D., Sauer, M., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle-specific+iso-enzymes+of+plant+V-ATPase+as+revealed+by+in+vivo-FRET.">Organelle-specific iso-enzymes of plant V-ATPase as revealed by in vivo-FRET.</a> BMC Cell Biology. 9, 28 (2008).</li><li>Schnitzer, D., Seidel, T., Sander, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+energization+state+affects+peripheral+stalk+stability+of+plant+vacuolar+H+-ATPase+and+impairs+vacuolar+acidification.">The cellular energization state affects peripheral stalk stability of plant vacuolar H+-ATPase and impairs vacuolar acidification.</a> Plant Cell Physiology. 52, 946-956 (2011).</li><li>Roshchina, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+autofluorescence:+application+to+the+study+of+plant+living+cells.">Vital autofluorescence: application to the study of plant living cells.</a> International Journal of Spectroscopy. 2012, 124672 (2012).</li><li>Holtorf, S., Apel, K., Bohlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+constitutive+and+inducible+promoters+for+the+overexpression+of+transgenes+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparison of different constitutive and inducible promoters for the overexpression of transgenes in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Molecular Biology. 29, 637-646 (1995).</li><li>Seidel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+and+FRET-analysis+of+subunits+c+and+a+of+the+vacuolar+H+-ATPase+in+living+plant+cells.">Colocalization and FRET-analysis of subunits c and a of the vacuolar H+-ATPase in living plant cells.</a> Journal of Biotechnology. 112 (1-2), 165-175 (2004).</li><li>Beemiller, P., Hoppe, A. D., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol-3-kinase-dependent+signal+transition+regulates+ARF1+and+ARF6+during+FC&#947;+receptor-mediated+phagocytosis.">A phosphatidylinositol-3-kinase-dependent signal transition regulates ARF1 and ARF6 during FC&#947; receptor-mediated phagocytosis.</a> PLoS Biology. 4, 162 (2006).</li><li>Lambert, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FPbase:+a+community-editable+fluorescent+protein+database.">FPbase: a community-editable fluorescent protein database.</a> Nature Methods. 16, 277-278 (2019).</li></ol>

ويتميز إخماد المانحين وانبعاثات المقبولين الحساسين بعلاقة خطية تسمح إما بحساب FRET القائم على المانح أو المقبول. وتسمى العوامل المقابلة للخطية إما عامل G (المانح للمقبل) أو الحادي عشر (المقبول للمتبرع)، وهما قيم متبادلة4. قياس FRET بين البروتينات الفلورية عن طريق المجهر الفلوري غ?...

عادة ما يلاحظ نقل الطاقة بالرنين Förster ((F)RET) عن طريق التحليل الطيفي الفلوري ، على الرغم من أن العملية نفسها لا تقتصر على الحدوث بين الفلوروفوريس. اقتران ثنائي القطب الكامنة ببساطة يتطلب جزيء المانحة الباعثة للضوء ومقبول امتصاص الضوء. وهذا مستمد من التداخل الطيفي المطلوب الذي لا يتجزأ من J من أطياف امتصاص الانبعاثات والمتقبلات العادية للمانحين1. ومع ذلك، ولأن تكنولوجيا الطاقة المتجددة تتنافس مع الفلورسينس، يصبح نقل الطاقة قابلا للقياس من خلال التعديلات في انبعاثات الفلورية: تحفز الطاقة المتجددة على إخماد المانحين وانبعاثات المقبولين الحساسة.
وقد أطلق على تكنولوجيا الطاقة المتجددة القائمة على الفلوروفور (RET) مصطلح نقل الطاقة بالرنين الفلوري (FRET) لفصله عن نقل الطاقة بالرنين الإضاءة الحيوية (BRET). تعتمد تكنولوجيا الطاقة المتجددة بقوة على المسافة بين المتبرع والمقبل، والتي تقع على نطاق واسع في نطاق 0.5-10 نانومتر مربع ، وبالتالي، في نفس نطاق أبعاد البروتينات ومجمعاتها. ثانيا، يعتمد RET على ثنائي القطب التوجه كابا التربيعية. جنبا إلى جنب مع حقيقة أن حرية الدوران من الفلوروفوريس المرتبطة بالبروتين يمكن إهمالها بسبب الوزن الجزيئي والاسترخاء الدوراني البطيء ، تسمح RET بتحليل التعديلات التوافقية3.
ويستند ما يسمى دائرة نصف قطرها فورستر على التداخل الطيفي لا يتجزأ ونطاق الطول الموجي للتداخل، بحيث الكروموفوريس امتصاص الضوء الأحمر يؤدي إلى أطول Förster radii من الأصباغ الزرقاء امتصاص الضوء. نظرا لأن النطاق الديناميكي لقياسات FRET محدود بنسبة 0.5 × R0 و 1.5 × R0 ، فإن زوج FRET ECFP-EYFP لديه نطاق ديناميكي يتراوح بين 2.5-7.3 نانومتر بسبب R0 من 4.9 نانومتر4.
يتم إعطاء سطوع الفلوروفور من خلال نتاج معامل انقراض الضرس وغلته الكمية. بالنسبة لقياسات FRET ، من المفيد اختيار الفلوروفورات ذات السطوع المماثل تقريبا. وهذا يعزز الكشف عن إخماد المانحين وتوعية الانبعاثات المقبولة. كما أنه يفضل معايرة نظام المجهر. بالنظر إلى أزواج FRET المستخدمة بشكل متكرر من البروتينات السماوي والفلورسنت ، يصبح السطوع السفلي للبروتينات الفلورية السماوي واضحا (الشكل 1A).
ومع ذلك، يجب أن يكون عمر المقبول أقل من عمر المتبرع، مما يضمن توافر المقبول لنقل الطاقة. إذا تجاوزت مدة حياة المقبول عمر المتبرع ، فقد يكون المقبول لا يزال في حالة متحمسة عندما يكون المتبرع متحمسا مرة أخرى. تظهر البروتينات الفلورية السيان المتقدمة مثل mTurquoise عمرا ممتدا وبالتالي تساهم في زيادة احتمالية FRET (Figure1B). يعتمد احتمال FRET أيضا على معامل انقراض الضرس للمقبول.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well slides</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil Immersol&#160; W2010</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>refraction index of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 1: AxioObserver with LSM 780 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 2: AxioObserver with LSM 5 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells

تتم بسهولة تجارب نقل الطاقة بالرنين الرنيني (FRET) القائمة على الانبعاثات ولكن تعتمد على الإعداد المجهري. أصبحت مجاهر المسح بالليزر Confocal العمود الفقري لعلماء الأحياء. توفر الأنظمة التجارية مرونة عالية في ضبط طاقة الليزر وحساسية الكاشف وغالبا ما تجمع بين أجهزة الكشف المختلفة للحصول على الصورة المثالية. ومع ذلك، غالبا ما تكون مقارنة البيانات المستندة إلى الكثافة من التجارب والإعدادات المختلفة مستحيلة بسبب هذه المرونة. تعد الإجراءات الصديقة لعلماء الأحياء ذات فائدة وتسمح بتعديل بسيط وموثوق به لإعدادات الليزر والكاشف. 
وعلاوة على ذلك، بما أن تجارب FRET في الخلايا الحية تتأثر بالتباين في التعبير عن البروتين ونسب قبول المانحين، يجب النظر في مستويات التعبير عن البروتين لتقييم البيانات. وصف هنا هو بروتوكول بسيط لقياسات FRET موثوق بها وقابلة للاستنساخ، بما في ذلك إجراءات لتقدير التعبير البروتين وتعديل كثافة الليزر وإعدادات كاشف. سيتم إجراء تقييم البيانات عن طريق المعايرة مع دمج الفلوروفور من كفاءة FRET المعروفة. لتحسين البساطة، تمت مقارنة عوامل التصحيح التي تم الحصول عليها في الخلايا وقياس البروتينات الفلورية المؤتلفة.

تعديل المجهر الليزر المسح confocal وكشف تعديل الليزر عن زيادة خطية في الانبعاثات مع زيادة كثافة الليزر (الشكل 2 والجدول 1). وكما هو متوقع بالنسبة لأشعة الليزر الآيونية الأرجونية، كان انبعاث خط 514 نانومتر أعلى بكثير من انبعاث خط 458 نانومتر، كما يتضح من منحدر أ?...

Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

يتم توفير بروتوكول لإعداد مجهر مسح ليزر كونفوكوكال قياسي لقياسات نقل الطاقة بالرنين في الجسم الحي Förster ، يليه تقييم البيانات.

قياسات نقل الطاقة الرنين Förster في الخلايا النباتية الحية

Sensitized emission-based F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) experiments are easily done but depend on the microscopic setup. Confocal laser ...

ويوفر البروتوكول إجراء بسيطا لجعل تجارب FRET عن طريق الانبعاثات الحساسة أكثر قابلية للاستنساخ وقابلية للمقارنة. الميزة الرئيسية ل FRET هي القياسات في الوقت الحقيقي بحيث يمكن معالجة العمليات الديناميكية. لتعديل الليزر باستخدام فوتوموليبلييه الإرسال، ضع الشريحة ثمانية جيدا التي تحتوي على البروتوبلاستات المصابة تحت المجهر.بعد اختيار بئر فارغة، اختر وضع مسح الخط وعرض الرسم البياني، وخفض كثافة الليزر إلى الحد الأدنى وضبط كسب كاشف للضوضاء الخلفية للكشف. بعد ذلك، قم بزيادة كثافة الليزر في خطوات 0.5٪ أثناء تسجيل الإشارة المقابلة. لتعديل الليزر باستخدام الوضع العاكس، حدد بئرا فارغا، ثم قم بتطبيق فلتر انعكاس.قم بتشغيل وضع الانعكاس وتأكد من أن نطاق الطول الموجي للكاشف يغطي الطول الموجي لليزر. اختر وضع مسح الخط وعرض الرسم البياني، وتقلل كثافة الليزر إلى الحد الأدنى، وضبط كسب الكاشف للضوضاء الخلفية القابلة للكشف. بعد ذلك، قم بتحريك الهدف إلى الموضع الأدنى قبل تحريكه مرة أخرى حتى يظهر انعكاس الغطاء، ثم قم بزيادة كثافة الليزر في خطوات 0.5٪ أثناء تسجيل الإشارة المقابلة.لتقييم البيانات، قم بجدولة البيانات وفرزها حسب كثافة الإشارة، ثم رسم كثافة الإشارة مقابل قوة الليزر النسبية واختر كثافة الليزر مما يؤدي إلى كثافة إشارة مماثلة. لتعديل الأجهزة الضوئية، حدد بئرا فارغا وطبق فلتر الانعكاس، وبدل وضع الانعكاس وتأكد من أن نطاق الطول الموجي للكاشف يغطي الطول الموجي لليزر. اختر وضع مسح الخط وعرض الرسم البياني، وتقلل من كسب الكاشف إلى نصف الحد الأقصى وضبط كثافة الليزر للضوضاء الخلفية القابلة للكشف.بعد ذلك، قم بتحريك الهدف إلى أدنى موضع قبل تحريكه مرة أخرى حتى يظهر انعكاس الغطاء، ثم قم بزيادة كسب الكاشف في خطوات 50 إلى 100 فولت وسجل الإشارة المقابلة. لتقييم البيانات، رسم كثافة ضد كسب كاشف لكل كاشف، ثم اختيار مكاسب كاشف الفردية للحصول على حساسية مماثلة. للحصول على الصورة، اختر المرشحات المناسبة أو المرايا الديكهروية واستخدم نفس المرآة الديكهروبية لجميع القنوات لتمكين المسح الضوئي سطرا سطرا، ثم حدد هدف غمر الماء لتصوير الخلايا الحية واختر المسح الضوئي 12 أو 16 بت بسرعة مسح معتدلة.بعد ذلك، حدد نطاق الكشف ويفضل أن يكون 470 إلى 510 نانومتر للكشف عن المانحين و 530 إلى 600 نانومتر للكشف عن المقبول في حالة زوج FRET من بروتين فلوري سماوي معزز أو ECFP وبروتين فلوري أصفر محسن أو EYFP. بعد تطبيق إعدادات الكاشف والليزر كما هو موضح سابقا، راجع كثافة الليزر استنادا إلى جدول طاقة الليزر الذي تم الحصول عليه إذا لزم الأمر. تأكد من أن نسبة الإشارة إلى الضوضاء تغطي النطاق الديناميكي الكامل للكاشفات.بعد ضبط دقيق مع قطر الثقب مع الحفاظ على كثافة الليزر والمكاسب كاشف ثابت، وإجراء قياسات FRET التقاط صور من 20 خلية على الأقل. لتحديد التصحيحات عبر الحديث، قم بإجراء قياسات FRET مع الخلايا التي تعبر عن الفلوروفور المانح فقط وتلك التي تعبر عن فلورفور المقبول فقط. لمعايرة القياسات، قم بإجراء قياسات FRET مع الخلايا التي تعبر عن اندماج المتقبل المانح.لتقييم البيانات، الحصول على التشكيلات الجانبية سطر من الخلايا التأكد من أن كل ملف تعريف يحتوي على خلية واحدة لا يزيد عن. حفظ ملفات التعريف كملفات نصية. ثم باستخدام خيار استيراد الملف النصي في قسم البيانات، قم باستيراد الملفات النصية إلى جدول بيانات.بعد ذلك، اقرأ القيم القصوى من خلال تطبيق الوظيفة القصوى، ثم قم بإدراج القيم التي تم الحصول عليها في جدول يحتوي كل عمود على معرف الانبعاثات المانح، و FRET EMISSION IF، وIA للانبعاثات المقبولة، وما لا يقل عن أربع مجموعات بيانات، المانح فقط، المقبول فقط، اندماج المانحين المقبول، والقياس. وكشف تعديل الليزر عن زيادة خطية في الانبعاثات مع زيادة كثافة الليزر. وكما يتضح من منحدر أكثر انحدارا، فإن انبعاث خط 514 نانومتر كان أعلى بكثير من انبعاث خط 458 نانومتر.وكشفت متفاوتة مكاسب كاشف في قوة الليزر المستمر سلوك الأسي لكلا كاشفات تحليلها. التناقض والنزيف الطيفي من خلال المتبرع والمقبل تحليلها مع البروتينات النقية المؤتلفة، وأن تحليلها مع الخلايا التي تعبر عن تلك البروتينات يدل على أنه من المستحيل حذف تحديد النزيف الطيفي من خلال في الخلايا الحية التي يحتمل أن تسببها أصباغ الخلوية. انخفضت كفاءة FRET بين الوحدات الفرعية VACUolar ATPA المسماة ، VHA AECFP ، و VHA AEYFP مع زيادة كثافة الإشارة.وعلى النقيض من ذلك، كان التفاعل بين VHA E1 ECFP وVHA CEYFP مستقلا عن كثافة الإشارة. اختيار المكونات البصرية المناسبة أمر بالغ الأهمية للكشف عن المتبرع والمقبل. ويمكن أيضا تطبيق هذا البروتوكول لأجهزة الاستشعار نسبة في الخلايا الحية لزيادة استنساخ في هذه التجارب.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

F&#246;rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

والعزلة وقياسات الجهاز التنفسي من الميتوكوندريا من التمويل نبات

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

ميكروجرافيميتري المسرف لدراسة ديناميات ملزمة فسفوليبيد ملزمة البروتين أنيكسين A2 إلى بليرس الدهن الصلب-يؤيد استخدام جهاز رنان مرو

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

تعديل ناقلات التعبير باكولوفيروس لإنتاج يفرز البروتينات النباتية في خلايا الحشرات

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Isolation of Physiologically Active Thylakoids and Their Use in Energy-Dependent Protein Transport Assays

عزل ثيلاكويدس النشطة فسيولوجيا واستخدامها في فحوصات البروتين الطاقة تعتمد على النقل

Chloroplasts are the organelles in green plants responsible for carrying out numerous essential metabolic pathways, most notably photosynthesis. Within ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

تحليل لطي البروتين، والنقل، وتدهور في الخلايا الحية بمطاردة نبض المشعة

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

استخدام الأنابيب الفلورية الرنين نقل الطاقة لدراسة ديناميات البروتين المجمعات في مقياس زمني ميلي ثانية

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

استراتيجية phosphoproteomic لتوصيف الإشارات الإجهاد التناضح في arabidopsis

Protein phosphorylation is crucial for the regulation of enzyme activity and gene expression under osmotic condition. Mass spectrometry (MS)-based ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

إزالة واستبدال الليغندات الذاتية من البروتينات والمواد المسببة للحساسية المرتبطة بالدهون

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

فحص الأجزاء القائم على الرنين المغناطيسي النووي في الحد الأدنى من العينة ولكن وضع الأتمتة الأقصى

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

جزيء واحد فلورسينس دراسة نقل الطاقة من تخليق البروتين ريبوسوم

The ribosome is a large ribonucleoprotein complex that assembles proteins processively along mRNA templates. The diameter of the ribosome is approximately ...