Name: f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells
Uploaded: 2021-06-28T15:00:00
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Die Experimente wurden an der Technologieplattform Lichtmikroskopie (LiMiTec) der Fakultät für Biologie der Universität Bielefeld durchgeführt. Diese Arbeit wurde von der Universität Bielefeld gefördert.

HINWEIS: Für das folgende Protokoll wurde eine transiente Transfektion von Protoplasten durchgeführt, wie zuvor beschrieben12. Im Folgenden finden Sie eine kurze Beschreibung.
1. Transiente Transfektion von Protoplasten
<ol><li>Schneiden Sie ~4 g gesunde Blätter von Arabidopsis thaliana ecotype Columbia in 1 mm dicke Scheiben und übertragen Sie sie auf 20 ml Enzymlösung (1,5% Cellulase; 0,4% Macerozym; 0,1% RinderserumalbuminFraktion V; 0,4 M Mannitol; 2...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescent Spectroscopy. Third Edition. , (2006).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F&#246;rster+resonance+energy+transfer-+FRET+what+it+is,+why+do+it,+and+how+it's+done.">F&#246;rster resonance energy transfer- FRET what it is, why do it, and how it's done.</a> Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 33, 1-57 (2009).</li><li>Vogel, S. S., Nguyen, T. A., vander Meer, B. W., Blank, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+heterogeneity+and+dark+acceptor+states+on+FRET:+implications+for+using+fluorescent+protein+donors+and+acceptors.">The impact of heterogeneity and dark acceptor states on FRET: implications for using fluorescent protein donors and acceptors.</a> PLoS ONE. 7, 49593 (2012).</li><li>M&#252;ller, S. M., Galliardt, H., Schneider, J., Barisas, B. G., Seidel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+F&#246;rster+resonance+energy+transfer+by+monitoring+sensitized+emission+in+living+plant+cells.">Quantification of F&#246;rster resonance energy transfer by monitoring sensitized emission in living plant cells.</a> Frontiers in Plant Science. 4, 413 (2013).</li><li>Gadella, T. W. J., vander Krogt, G. N., Bisseling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+FRET-microscopy+in+living+plant+cells.">GFP-based FRET-microscopy in living plant cells.</a> Trends in Plant Science. 4, 287-291 (1999).</li><li>Van Rheenen, J., Langeslag, M., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+confocal+acquisition+to+optimize+imaging+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+by+sensitized+emission.">Correcting confocal acquisition to optimize imaging of fluorescence resonance energy transfer by sensitized emission.</a> Biophysical Journal. 86, 2517-2529 (2004).</li><li>Seidel, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+C-termini+of+V-ATPase+subunits+by+in+vivo-FRET+measurements.">Mapping of C-termini of V-ATPase subunits by in vivo-FRET measurements.</a> FEBS Letters. 579, 4374-4382 (2005).</li><li>Seidel, T., Schnitzer, D., Golldack, D., Sauer, M., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle-specific+iso-enzymes+of+plant+V-ATPase+as+revealed+by+in+vivo-FRET.">Organelle-specific iso-enzymes of plant V-ATPase as revealed by in vivo-FRET.</a> BMC Cell Biology. 9, 28 (2008).</li><li>Schnitzer, D., Seidel, T., Sander, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+energization+state+affects+peripheral+stalk+stability+of+plant+vacuolar+H+-ATPase+and+impairs+vacuolar+acidification.">The cellular energization state affects peripheral stalk stability of plant vacuolar H+-ATPase and impairs vacuolar acidification.</a> Plant Cell Physiology. 52, 946-956 (2011).</li><li>Roshchina, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+autofluorescence:+application+to+the+study+of+plant+living+cells.">Vital autofluorescence: application to the study of plant living cells.</a> International Journal of Spectroscopy. 2012, 124672 (2012).</li><li>Holtorf, S., Apel, K., Bohlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+constitutive+and+inducible+promoters+for+the+overexpression+of+transgenes+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparison of different constitutive and inducible promoters for the overexpression of transgenes in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Molecular Biology. 29, 637-646 (1995).</li><li>Seidel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+and+FRET-analysis+of+subunits+c+and+a+of+the+vacuolar+H+-ATPase+in+living+plant+cells.">Colocalization and FRET-analysis of subunits c and a of the vacuolar H+-ATPase in living plant cells.</a> Journal of Biotechnology. 112 (1-2), 165-175 (2004).</li><li>Beemiller, P., Hoppe, A. D., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol-3-kinase-dependent+signal+transition+regulates+ARF1+and+ARF6+during+FC&#947;+receptor-mediated+phagocytosis.">A phosphatidylinositol-3-kinase-dependent signal transition regulates ARF1 and ARF6 during FC&#947; receptor-mediated phagocytosis.</a> PLoS Biology. 4, 162 (2006).</li><li>Lambert, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FPbase:+a+community-editable+fluorescent+protein+database.">FPbase: a community-editable fluorescent protein database.</a> Nature Methods. 16, 277-278 (2019).</li></ol>

Die Donorabschreckung und die sensibilisierte Akzeptoremission zeichnen sich durch eine lineare Beziehung aus, die eine donor- oder akzeptorbasierte Berechnung der FRET ermöglicht. Die entsprechenden Faktoren der Linearität werden entweder G-Faktor (Donor zu Akzeptor) oder xi (Akzeptor zu Donor) genannt, die reziproke Werte sind4. Die Messung des FRET zwischen fluoreszierenden Proteinen mittels Fluoreszenzmikroskopie erfordert aufgrund der breiten Absorptions- und Emissionsspektren der fluoreszi...

Der Förster-Resonanzenergietransfer ((F)RET) wird typischerweise durch Fluoreszenzspektroskopie beobachtet, obwohl der Prozess selbst nicht auf die Durchführung zwischen Fluorophoren beschränkt ist. Die zugrunde liegende Dipol-Dipol-Kopplung erfordert lediglich ein lichtemittierendes Donormolekül und einen lichtabsorbierenden Akzeptor. Dies leitet sich aus dem erforderlichen spektralen Überlappungsintegrat J der normierten Donoremissions- und Akzeptorabsorptionsspektren1 ab. Da RET jedoch mit der Fluoreszenz konkurriert, wird der Energietransfer durch Änderungen der Fluoreszenzemission messbar: RET induziert Donorabschreckung und sensibilisierte Akzeptoremission.
Fluorophor-basierte RET wurde als Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET) bezeichnet, um sie von der Biolumineszenz-Resonanz-Energieübertragung (BRET) zu trennen. Die RET hängt stark vom Abstand zwischen Donor und Akzeptor ab, der weit im Bereich von 0,5-10 nm2 liegt und damit im gleichen Bereich wie die Abmessungen von Proteinen und ihren Komplexen liegt. Zweitens hängt die RET von der Dipol-Dipol-Orientierung kappa im Quadrat ab. In Kombination mit der Tatsache, dass die Rotationsfreiheit von proteingebundenen Fluorophoren aufgrund des Molekulargewichts und der langsamen Rotationsrelaxation vernachlässigt werden kann, ermöglicht RET die Analyse von Konformationsveränderungen3.
Der sogenannte Försterradius basiert auf dem spektralen Überlappungsintegral und dem Wellenlängenbereich der Überlappung, so dass rotlichtabsorbierende Chromophore zu längeren Försterradien führen als blaulichtabsorbierende Farbstoffe. Da der Dynamikbereich der FRET-Messungen durch 0,5 × R0 und 1,5 × R0 begrenzt ist, hat das FRET-Paar ECFP-EYFP aufgrund seines R0 von 4,9 nm4 einen Dynamikbereich von 2,5-7,3 nm.
Die Helligkeit eines Fluorophors ist durch das Produkt seines molaren Extinktionskoeffizienten und seiner Quantenausbeute gegeben. Für FRET-Messungen ist es vorteilhaft, Fluorophore mit nahezu ähnlicher Helligkeit zu wählen. Dies verbessert den Nachweis von Donorabschreckung und sensibilisierter Akzeptoremission. Es begünstigt auch die Kalibrierung des Mikroskopiesystems. Betrachtet man die häufig verwendeten FRET-Paare von Cyan- und fluoreszierenden Proteinen, wird die geringere Helligkeit der cyanfluoreszierenden Proteine deutlich (Abbildung 1A).
Die Lebensdauer des Akzeptors muss jedoch niedriger sein als die Lebensdauer des Spenders, um die Verfügbarkeit des Akzeptors für die Energieübertragung sicherzustellen. Wenn die Lebensdauer des Akzeptors die Lebensdauer des Spenders überschreitet, befindet sich der Akzeptor möglicherweise noch im angeregten Zustand, wenn der Spender erneut angeregt wird. Fortschrittliche cyan fluoreszierende Proteine wie mTurquoise zeigen eine verlängerte Lebensdauer und tragen somit zu einer erhöhten WAHRSCHEINLICHKEIT von FRET bei (Abbildung 1B). Die Wahrscheinlichkeit einer FRET hängt auch vom molaren Extinktionskoeffizienten des Akzeptors ab.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well slides</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil Immersol&#160; W2010</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>refraction index of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 1: AxioObserver with LSM 780 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 2: AxioObserver with LSM 5 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells

Experimente mit sensibilisierter Emissionsbasis des Förster-Resonanz-Energietransfers (FRET) sind einfach durchzuführen, hängen jedoch vom mikroskopischen Aufbau ab. Konfokale Laser-Scanning-Mikroskope sind zu einem Arbeitstier für Biologen geworden. Kommerzielle Systeme bieten eine hohe Flexibilität bei der Laserleistungsanpassung und Detektorempfindlichkeit und kombinieren oft verschiedene Detektoren, um das perfekte Bild zu erhalten. Der Vergleich von intensitätsbasierten Daten aus verschiedenen Experimenten und Aufbauten ist aufgrund dieser Flexibilität jedoch oft unmöglich. Biologenfreundliche Verfahren sind von Vorteil und ermöglichen eine einfache und zuverlässige Anpassung der Laser- und Detektoreinstellungen. 
Da FRET-Experimente in lebenden Zellen von der Variabilität der Proteinexpression und des Spender-Akzeptor-Verhältnisses beeinflusst werden, müssen Proteinexpressionsniveaus für die Datenauswertung berücksichtigt werden. Beschrieben wird hier ein einfaches Protokoll für zuverlässige und reproduzierbare FRET-Messungen, einschließlich Routinen zur Abschätzung der Proteinexpression und Anpassung der Laserintensität und der Detektoreinstellungen. Die Datenauswertung erfolgt durch Kalibrierung mit einer Fluorophorfusion bekannter FRET-Effizienz. Um die Einfachheit zu verbessern, wurden Korrekturfaktoren verglichen, die in Zellen und durch Messung rekombinanter fluoreszierender Proteine erhalten wurden.

Justierung des konfokalen Laser-Scanning-Mikroskops Die Lasereinstellung ergab eine lineare Zunahme der Emission mit zunehmender Laserintensität (Abbildung 2 und Tabelle 1). Wie für Argon-Ionen-Laser zu erwarten, war die Emission der 514-nm-Linie viel höher als die Emission der 458-nm-Linie, wie eine steilere Steigung belegt. Für nachfolgende Experimente wurde eine Laserleistung von 4,5% bzw. 6,5% für die 514-nm-Linie bzw. die 458-nm-Linie gewählt. ...

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FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Es wird ein Protokoll für die Einrichtung eines konfokalen Standard-Laser-Scanning-Mikroskops für in vivo Förster-Resonanzenergieübertragungsmessungen mit anschließender Datenauswertung bereitgestellt.

Förster Resonanz-Energietransfermessungen in lebenden Pflanzenzellen

Sensitized emission-based F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) experiments are easily done but depend on the microscopic setup. Confocal laser ...

Das Protokoll bietet ein einfaches Verfahren, um FRET-Experimente durch sensibilisierte Emissionen reproduzierbarer und vergleichbarer zu machen. Der Hauptvorteil von FRET sind Messungen in Echtzeit, so dass dynamische Prozesse adressiert werden können. Für die Lasereinstellung mit einem Transmissionsphotomultiplier legen Sie den Acht-Well-Objektträger mit den transfizierten Protoplasten unter das Mikroskop.Nachdem Sie eine leere Vertiefung ausgewählt haben, wählen Sie den Zeilenabtastmodus und die Histogrammansicht, verringern Sie die Laserintensität auf das Minimum und passen Sie die Detektorverstärkung an erkennbare Hintergrundgeräusche an. Als nächstes erhöhen Sie die Laserintensität in Schritten von 0,5%, während Sie das entsprechende Signal aufzeichnen. Wählen Sie für die Lasereinstellung im Reflexionsmodus eine leere Vertiefung aus und wenden Sie dann einen Reflexionsfilter an.Schalten Sie den Reflexionsmodus ein und stellen Sie sicher, dass der Wellenlängenbereich des Detektors die Wellenlänge des Lasers abdeckt. Wählen Sie den Zeilenabtastmodus und die Histogrammansicht, verringern Sie die Laserintensität auf ein Minimum und passen Sie die Detektorverstärkung an erkennbare Hintergrundgeräusche an. Als nächstes bewegen Sie das Objektiv in die niedrigste Position, bevor Sie es wieder nach oben bewegen, bis die Reflexion des Deckglases sichtbar ist, und erhöhen Sie dann die Laserintensität in Schritten von 0,5%, während Sie das entsprechende Signal aufzeichnen.Für die Datenauswertung tabellieren und sortieren Sie die Daten nach Signalintensitäten, zeichnen dann die Signalintensitäten gegen die relative Laserleistung auf und wählen sie die Laserintensitäten, die zu einer ähnlichen Signalintensität führen. Wählen Sie zur Einstellung der Photomultiplier eine leere Vertiefung aus und wenden Sie einen Reflexionsfilter an, schalten Sie in den Reflexionsmodus und stellen Sie sicher, dass der Wellenlängenbereich des Detektors die Wellenlänge des Lasers abdeckt. Wählen Sie den Zeilenabtastmodus und die Histogrammansicht, verringern Sie die Detektorverstärkung auf die Hälfte des Maximums und passen Sie die Laserintensität an erkennbare Hintergrundgeräusche an.Als nächstes bewegen Sie das Objektiv in die niedrigste Position, bevor Sie es wieder nach oben bewegen, bis die Reflexion des Deckglases sichtbar ist, erhöhen Sie dann die Detektorverstärkung in 50 bis 100 Volt Schritten und zeichnen Sie das entsprechende Signal auf. Für die Datenauswertung zeichnen Sie die Intensität gegen die Detektorverstärkung für jeden Detektor auf und wählen Sie dann die einzelnen Detektorgewinne aus, um eine ähnliche Empfindlichkeit zu erhalten. Wählen Sie für die Bildaufnahme die geeigneten Filter oder dichroitischen Spiegel und verwenden Sie denselben dichroitischen Spiegel für alle Kanäle, um zeilenweises Scannen zu ermöglichen, wählen Sie dann ein Wasserimmersionsobjektiv für die Abbildung lebender Zellen und wählen Sie 12 oder 16 Bit Scannen mit moderater Scangeschwindigkeit.Als nächstes definieren Sie den Nachweisbereich vorzugsweise 470 bis 510 Nanometer für den Donordetektion und 530 bis 600 Nanometer für den Akzeptordetektion im Falle des FRET-Paares aus verstärktem cyan fluoreszierendem Protein oder ECFP und erhöhtem gelb fluoreszierendem Protein oder EYFP. Nachdem Sie die Detektor- und Lasereinstellungen wie zuvor gezeigt angewendet haben, überarbeiten Sie bei Bedarf die Laserintensität basierend auf der erhaltenen Laserleistungstabelle. Stellen Sie sicher, dass das Signal-Rausch-Verhältnis den gesamten Dynamikbereich der Detektoren abdeckt.Führen Sie nach der Feinabstimmung mit dem Lochdurchmesser unter Konstanterhaltung der Laserintensitäten und Detektorgewinne die FRET-Messungen durch, die Bilder von mindestens 20 Zellen aufnehmen. Um die Übersprechkorrekturen zu bestimmen, führen Sie FRET-Messungen mit Zellen durch, die nur den Donorfluorophor exprimieren, und solchen, die nur den Akzeptorfluorophor exprimieren. Führen Sie zur Kalibrierung der Messungen FRET-Messungen mit Zellen durch, die die Donorakzeptorfusion exprimieren.Für die Datenauswertung erhalten Sie Linienprofile der Zellen, die sicherstellen, dass jedes Profil nicht mehr als eine Zelle enthält. Speichern Sie die Profile als Textdateien. Verwenden Sie dann die Option zum Importieren von Textdateien im Datenabschnitt und importieren Sie die Textdateien in eine Tabelle.Lesen Sie als Nächstes die Maximalwerte aus, indem Sie die Max-Funktion anwenden, und listen Sie dann die erhaltenen Werte in einer Tabelle auf, die jeweils eine Spalte für Die Donoremissions-ID, die FRET-Emission IF, die Akzeptoremission IA und mindestens vier Datensätze, Nur Donor, Nur Akzeptierer, Donor-Akzeptor-Fusion und Messung enthält. Die Laseranpassung zeigte eine lineare Zunahme der Emission mit zunehmender Laserintensität. Wie eine steilere Steigung zeigt, war die Emission der 514-Nanometer-Linie viel höher als die Emission der 458-Nanometer-Linie.Die Variation der Detektorgewinne bei konstanter Laserleistung ergab ein exponentielles Verhalten für beide analysierten Detektoren. Die Diskrepanz und das spektrale Durchbluten des Donors und des Akzeptors, die mit rekombinant gereinigten Proteinen analysiert und mit Zellen analysiert wurden, die diese Proteine exprimieren, zeigen, dass es unmöglich ist, die Bestimmung des spektralen Durchblutens in lebenden Zellen, die wahrscheinlich durch zelluläre Pigmente verursacht werden, wegzulassen. Die FRET-Effizienz zwischen den markierten vakuolären ATPA-Untereinheiten, VHA AECFP und VHA AEYFP, nahm mit zunehmender Signalintensität ab.Im Gegensatz dazu war die Wechselwirkung zwischen VHA E1 ECFP und VHA CEYFP unabhängig von der Signalintensität. Die Wahl geeigneter optischer Komponenten ist entscheidend für die Detektion des Spenders und Akzeptors. Dieses Protokoll kann auch für ratiometrische Sensoren in lebenden Zellen angewendet werden, um die Reproduzierbarkeit in diesen Experimenten zu erhöhen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

F&#246;rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation und Atemwege Messungen der Mitochondrien von Arabidopsis thaliana

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Forschung

Biochemie

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Dissipative Microgravimetry die Bindung Dynamik der Phospholipid-bindende Protein Annexin A2, solide unterstützt Lipid Bilayer mit einem Quarz-Resonator zu studieren

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Pflanzliche Proteine in Insektenzellen abgesondert ändern Baculovirus Expressionsvektoren herstellen

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Isolation of Physiologically Active Thylakoids and Their Use in Energy-Dependent Protein Transport Assays

Isolierung des physiologisch aktiven Thylakoids und deren Einsatz in Energie-abhängige Protein Transport Assays

Chloroplasts are the organelles in green plants responsible for carrying out numerous essential metabolic pathways, most notably photosynthesis. Within ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse der Proteinfaltung, Transport und Abbau in lebenden Zellen durch radioaktive Puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

In-vitro-Fluoreszenz Resonanz Energietransfer verwenden, um die Dynamik der Proteinkomplexe auf einer Millisekunde Zeitskala studieren

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategie zur Profilierung osmotischer Stresssignalisierung bei Arabidopsis

Protein phosphorylation is crucial for the regulation of enzyme activity and gene expression under osmotic condition. Mass spectrometry (MS)-based ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

Entfernung und Ersatz endogener Liganden aus lipidgebundenen Proteinen und Allergenen

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

NMR-basiertes Fragment-Screening mit minimaler Probe, aber maximalem Automatisierungsmodus

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

Einzelmolekül-Fluoreszenz-Energieübertragungsstudie zur Ribosomenproteinsynthese

The ribosome is a large ribonucleoprotein complex that assembles proteins processively along mRNA templates. The diameter of the ribosome is approximately ...