Name: f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells
Uploaded: 2021-06-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

הניסויים בוצעו בפלטפורמה הטכנולוגית ליור מיקרוסקופיה (LiMiTec) של הפקולטה לביולוגיה, אוניברסיטת בילפלד. עבודה זו מומנה על ידי אוניברסיטת בילפלד.

הערה: עבור הפרוטוקול הבא, הארכה ארעית של protoplasts בוצעה, כפי שתואר קודם לכן12. תיאור קצר ניתן להלן.
1. עבירה חולפת של פרוטופלסטים
<ol><li>חותכים ~ 4 גרם של עלים בריאים של Arabidopsis thaliana ecotype קולומביה לפרוסות 1 מ"מ ולהעביר אותם ל 20 מ"ל של פתרון אנזימים (1.5% צלולאז; 0.4% macerozyme; 0....

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescent Spectroscopy. Third Edition. , (2006).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F&#246;rster+resonance+energy+transfer-+FRET+what+it+is,+why+do+it,+and+how+it's+done.">F&#246;rster resonance energy transfer- FRET what it is, why do it, and how it's done.</a> Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 33, 1-57 (2009).</li><li>Vogel, S. S., Nguyen, T. A., vander Meer, B. W., Blank, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+heterogeneity+and+dark+acceptor+states+on+FRET:+implications+for+using+fluorescent+protein+donors+and+acceptors.">The impact of heterogeneity and dark acceptor states on FRET: implications for using fluorescent protein donors and acceptors.</a> PLoS ONE. 7, 49593 (2012).</li><li>M&#252;ller, S. M., Galliardt, H., Schneider, J., Barisas, B. G., Seidel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+F&#246;rster+resonance+energy+transfer+by+monitoring+sensitized+emission+in+living+plant+cells.">Quantification of F&#246;rster resonance energy transfer by monitoring sensitized emission in living plant cells.</a> Frontiers in Plant Science. 4, 413 (2013).</li><li>Gadella, T. W. J., vander Krogt, G. N., Bisseling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+FRET-microscopy+in+living+plant+cells.">GFP-based FRET-microscopy in living plant cells.</a> Trends in Plant Science. 4, 287-291 (1999).</li><li>Van Rheenen, J., Langeslag, M., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+confocal+acquisition+to+optimize+imaging+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+by+sensitized+emission.">Correcting confocal acquisition to optimize imaging of fluorescence resonance energy transfer by sensitized emission.</a> Biophysical Journal. 86, 2517-2529 (2004).</li><li>Seidel, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+C-termini+of+V-ATPase+subunits+by+in+vivo-FRET+measurements.">Mapping of C-termini of V-ATPase subunits by in vivo-FRET measurements.</a> FEBS Letters. 579, 4374-4382 (2005).</li><li>Seidel, T., Schnitzer, D., Golldack, D., Sauer, M., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle-specific+iso-enzymes+of+plant+V-ATPase+as+revealed+by+in+vivo-FRET.">Organelle-specific iso-enzymes of plant V-ATPase as revealed by in vivo-FRET.</a> BMC Cell Biology. 9, 28 (2008).</li><li>Schnitzer, D., Seidel, T., Sander, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+energization+state+affects+peripheral+stalk+stability+of+plant+vacuolar+H+-ATPase+and+impairs+vacuolar+acidification.">The cellular energization state affects peripheral stalk stability of plant vacuolar H+-ATPase and impairs vacuolar acidification.</a> Plant Cell Physiology. 52, 946-956 (2011).</li><li>Roshchina, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+autofluorescence:+application+to+the+study+of+plant+living+cells.">Vital autofluorescence: application to the study of plant living cells.</a> International Journal of Spectroscopy. 2012, 124672 (2012).</li><li>Holtorf, S., Apel, K., Bohlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+constitutive+and+inducible+promoters+for+the+overexpression+of+transgenes+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparison of different constitutive and inducible promoters for the overexpression of transgenes in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Molecular Biology. 29, 637-646 (1995).</li><li>Seidel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+and+FRET-analysis+of+subunits+c+and+a+of+the+vacuolar+H+-ATPase+in+living+plant+cells.">Colocalization and FRET-analysis of subunits c and a of the vacuolar H+-ATPase in living plant cells.</a> Journal of Biotechnology. 112 (1-2), 165-175 (2004).</li><li>Beemiller, P., Hoppe, A. D., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol-3-kinase-dependent+signal+transition+regulates+ARF1+and+ARF6+during+FC&#947;+receptor-mediated+phagocytosis.">A phosphatidylinositol-3-kinase-dependent signal transition regulates ARF1 and ARF6 during FC&#947; receptor-mediated phagocytosis.</a> PLoS Biology. 4, 162 (2006).</li><li>Lambert, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FPbase:+a+community-editable+fluorescent+protein+database.">FPbase: a community-editable fluorescent protein database.</a> Nature Methods. 16, 277-278 (2019).</li></ol>

מרווה תורם ופליטת קבלה רגישה מאופיינים במערכת יחסים ליניארית המאפשרת חישוב מבוסס תורם או קבלה של FRET. הגורמים המתאימים של ליניאריות נקראים גורם G (תורם לקבל) או xi (מקבל לתורם), שהם ערכים הדדיים4. מדידת FRET בין חלבונים פלואורסצנטיים על ידי מיקרוסקופיית פלואורסצנטית דורשת לעתים קר?...

העברת אנרגיית תהודה Förster ((F)RET) הוא נצפה בדרך כלל על ידי ספקטרוסקופיה פלואורסצנטית, אם כי התהליך עצמו אינו מוגבל להתרחש בין פלואורופורים. צימוד הדיפול-דיפול הבסיסי פשוט דורש מולקולת תורם פולטת אור ומקבל סופג אור. זה נגזר מהחופה הספקטרלית הנדרשת אינטגרל J של פליטת התורם מנורמל וספקטרום ספיגת מקבל1. עם זאת, מכיוון ש-RET מתחרה בפלואורסצנטיות, העברת האנרגיה הופכת למדידה על ידי שינויים בפליטת פלואורסצנטיות: RET גורמת להרוות תורמים ולפליטת קבלים רגישה.
RET מבוסס פלואורופור זכה לכינוי העברת אנרגיית תהודה פלואורסצנטית (FRET) כדי להפריד אותו מהעברת אנרגיית תהודה ביו-לומינציה (BRET). RET תלוי מאוד על המרחק בין התורם ומקבל, אשר נמצא באופן נרחב בטווח של 0.5-10 nm2 ולכן, באותו טווח כמו מידות החלבונים והמתחמים שלהם. שנית, RET תלויה בקאפה בכיוון דיפול-דיפול בריבוע. בשילוב עם העובדה כי חופש סיבובי של פלואורופורים הקשורים לחלבון ניתן להזניח בשל המשקל המולקולרי ואת הרפיה סיבובית איטית, RET מאפשר ניתוח של שינויים קונפורמיים3.
מה שמכונה רדיוס Förster מבוסס על אינטגרל החפיפה הספקטרלית וטווח אורך הגל של החפיפה, כך שכרומופורים סופגי אור אדום גורמים לראדי Förster ארוך יותר מאשר צבעים סופגי אור כחולים. מכיוון שהטווח הדינמי של מדידות FRET מוגבל ב- 0.5 × R0 ו- 1.5 × R0, לזוג FRET ECFP-EYFP יש טווח דינמי של 2.5-7.3 ננומטר בשל R0 של 4.9 nm4.
הבהירות של פלואורופור ניתנת על ידי תוצר מקדם ההכחדה הטוחנת שלו והתשואה הקוונטית שלו. עבור מדידות FRET, כדאי לבחור פלואורופורים של בהירות כמעט דומה. זה משפר את הזיהוי של מרווה תורם ופליטת קבלה רגישה. זה גם מעדיף את הכיול של מערכת המיקרוסקופיה. כשמסתכלים על זוגות FRET הנפוצים של חלבוני ציאן ופלואורסצנטי, הבהירות הנמוכה יותר של חלבוני הציאן פלואורסצנטיים הופכת לברורה (איור 1A).
עם זאת, אורך החיים של המקבל חייב להיות נמוך יותר מחייו של התורם, הבטחת הזמינות של הקבלן להעברת אנרגיה. אם חייו של המקבל עולים על חייו של התורם, המקבל עשוי עדיין להיות במצב הנרגש כאשר התורם מתרגש שוב. חלבונים פלואורסצנטיים ציאן מתקדמים כגון mTurquoise מראים אורך חיים ממושך ובכך תורמים להסתברות מוגברת של FRET (איור 1B). ההסתברות של FRET תלויה גם במקדם ההכחדה הטוחנת של המקבל.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well slides</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil Immersol&#160; W2010</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>refraction index of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 1: AxioObserver with LSM 780 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 2: AxioObserver with LSM 5 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells

ניסויי העברת אנרגיית תהודה (FRET) מבוססי פליטה רגישים נעשים בקלות אך תלויים במערך המיקרוסקופי. מיקרוסקופי סריקת לייזר קונפוקליים הפכו לסוס עבודה לביולוגים. מערכות מסחריות מציעות גמישות גבוהה בהתאמת כוח לייזר וברגישות לגלאיים ולעתים קרובות משלבות גלאים שונים כדי להשיג את התמונה המושלמת. עם זאת, ההשוואה של נתונים מבוססי עוצמה מניסויים והגדרות שונות היא לעתים קרובות בלתי אפשרית בשל גמישות זו. נהלים ידידותיים לביולוגים הם יתרון ומאפשרים התאמה פשוטה ואמינה של הגדרות לייזר וגלאי. 
יתר על כן, כמו ניסויי FRET בתאים חיים מושפעים השונות ביטוי חלבון ויחסי מקבל תורם, רמות ביטוי חלבון חייב להיחשב להערכת נתונים. מתואר כאן פרוטוקול פשוט למדידות FRET אמינות ושחזוריות, כולל שגרות להערכת ביטוי חלבון והתאמה של עוצמת הלייזר והגדרות הגלאי. הערכת נתונים תבוצע על ידי כיול עם היתוך פלואורופור של יעילות FRET ידועה. כדי לשפר את הפשטות, גורמי תיקון הושוו כי הושגו בתאים ועל ידי מדידת חלבונים פלואורסצנטיים רקומביננטיים.

התאמה של המיקרוסקופ לסריקת לייזר קונפוקלית התאמת הלייזר חשפה עלייה ליניארית בפליטה בעוצמת לייזר גוברת (איור 2 ושולחן 1). כצפוי עבור לייזרים ארגון-יון, פליטת קו 514 ננומטר היה הרבה יותר גבוה מאשר פליטה של קו 458 ננומטר, כפי שמעיד מדרון תלול יותר. בניסויים הבא?...

Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

פרוטוקול מסופק להגדרת מיקרוסקופ סטנדרטי לסריקת לייזר קונפוקלית למדידות העברת אנרגיה תהודה של vivo Förster, ולאחריו הערכת נתונים.

מדידות העברת אנרגיה תהודה Förster בתאי צמח חיים

Sensitized emission-based F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) experiments are easily done but depend on the microscopic setup. Confocal laser ...

הפרוטוקול מספק הליך פשוט כדי להפוך ניסויי FRET על ידי פליטות רגישות יותר לשחזור ודומה. היתרון העיקרי של FRET הם מדידות בזמן אמת, כך שניתן לטפל בתהליכים דינמיים. להתאמת לייזר באמצעות פוטומולטילייה של שידור, הנח את השקופית בת שמונה הבאר המכילה את הפרוטופלסטים המודבקים מתחת למיקרוסקופ.לאחר בחירת באר ריקה, בחר מצב סריקת קו ותצוגת היסטוגרמה, הקטן את עוצמת הלייזר למינימום והתאם את רווח הגלאי לרעשי רקע הניתנים לזיהוי. לאחר מכן, להגדיל את עוצמת הלייזר בשלבים של 0.5% תוך הקלטת האות המתאים. להתאמת לייזר באמצעות המצב המשקף, בחרו באר ריקה ולאחר מכן החל מסנן השתקפות.התחל את מצב ההשתקפות וודא שטווח גל הגל של הגלאי מכסה את אורך הגל של הלייזר. בחר את מצב סריקת הקו ואת תצוגת היסטוגרמה, הקטן את עוצמת הלייזר למינימום והתאם את רווח הגלאי לרעשי רקע הניתנים לזיהוי. לאחר מכן, הזז את המטרה למיקום הנמוך ביותר לפני הזזתה בחזרה למעלה עד להשתקפות של כיסוי נראה, ולאחר מכן להגדיל את עוצמת הלייזר בשלבים של 0.5% תוך הקלטת האות המתאים.להערכת נתונים, סמן ומיין את הנתונים לפי עוצמות האות, ולאחר מכן התווה את עוצמת האות כנגד כוח הלייזר היחסי ובחר בעוצמות הלייזר וכתוצאה מכך עוצמת אות דומה. להתאמת הפוטמוליפליירים, בחרו באר ריקה והחלו מסנן השתקפות, עברו למצב השתקפות וודאו שטווח אורך הגל של הגלאי מכסה את אורך הגל של הלייזר. בחר את מצב סריקת הקו ואת תצוגת היסטוגרמה, הקטן את רווח הגלאי לחצי מהמקסימום והתאם את עוצמת הלייזר לרעשי רקע הניתנים לזיהוי.לאחר מכן, הזז את המטרה למיקום הנמוך ביותר לפני הזזתה בחזרה למעלה עד להשתקפות של כיסוי גלוי, ולאחר מכן להגדיל את רווח הגלאי ב 50 עד 100 צעדים וולט ולתעד את האות המתאים. להערכת נתונים, התווו את העוצמה כנגד רווח הגלאי עבור כל גלאי, ולאחר מכן בחרו את רווחי הגלאי הבודדים כדי לקבל רגישות דומה. לרכישת תמונות, בחר את המסננים המתאימים או המראות הדיכרואיות והשתמש באותה מראה דיכרואית עבור כל הערוצים כדי לאפשר סריקה שורה אחר שורה, ולאחר מכן בחר יעד טבילת מים להדמיה של תאים חיים ובחר סריקה של 12 או 16 סיביות במהירות סריקה מתונה.לאחר מכן, הגדר את טווח הזיהוי רצוי 470 עד 510 ננומטר לזיהוי תורם ו 530 עד 600 ננומטר לגילוי קבל במקרה של זוג FRET של חלבון פלואורסצנטי ציאן משופר או ECFP וחלבון פלואורסצנטי צהוב משופר או EYFP. לאחר החלת הגדרות הגלאי והלייזר כפי שהודגם בעבר, תקן את עוצמת הלייזר בהתבסס על שולחן כוח הלייזר שהושג במידת הצורך. ודא שיחס האות לרעש מכסה את כל הטווח הדינמי של הגלאים.לאחר כוונון עדין עם קוטר חור הסיכה תוך שמירה על עוצמות הלייזר והגלאי מקבל קבוע, בצע את מדידות FRET לוקח תמונות של לפחות 20 תאים. כדי לקבוע את תיקוני ההצלבה, בצע מדידות FRET עם תאים המבטאים את פלואורופור התורם בלבד ואלה המבטאים את פלואורופור הקבלה בלבד. לכיול המדידות, בצע מדידות FRET עם תאים המבטאים את היתוך מקבל התורם.להערכת נתונים, השג פרופילי שורות של התאים המבטיחים שכל פרופיל מכיל לא יותר מתא אחד. שמור את הפרופילים כקבצי טקסט. לאחר מכן, באמצעות אפשרות ייבוא קובץ טקסט במקטע הנתונים, יבא את קבצי הטקסט לגיליון אלקטרוני.לאחר מכן, קרא את הערכים המרביים על-ידי החלת הפונקציה max ולאחר מכן פרט את הערכים המתקבלים בטבלה בעלת עמודה כל אחד עבור מזהה פליטת תורמים, פליטת FRET IF, IA של פליטת מקבלים, ולפחות ארבע ערכות נתונים, תורם בלבד, מקבל בלבד, היתוך ומקבל תורם ומדידה. התאמת הלייזר חשפה עלייה ליניארית בפליטה עם עוצמת לייזר גוברת. כפי שניתן לראות במדרון תלול יותר, פליטת קו 514 ננומטר הייתה גבוהה בהרבה מפליטת קו 458 ננומטר.שינוי רווחי הגלאי בכוח לייזר מתמיד חשף התנהגות מעריכית עבור שני הגלאים המנותחים. הפער והדימום הספקטרלי של התורם והמקבל שניתחו עם חלבונים מטוהרים רקומביננטיים וזה ניתח עם תאים המבטאים חלבונים אלה ממחיש כי אי אפשר להשמיט את הקביעה של דימום ספקטרלי דרך בתאים חיים שנגרם ככל הנראה על ידי פיגמנטים תאיים. יעילות FRET בין תת-אוניות ה-ATPA vacuolar שכותרתן, VHA AECFP ו- VHA AEYFP ירדה עם עוצמת האות הגוברת.לעומת זאת, האינטראקציה בין VHA E1 ECFP ו- VHA CEYFP לא הייתה תלויה בעוצמת האות. הבחירה ברכיבים אופטיים מתאימים חיונית לאיתור התורם והמקבל. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם גם עבור חיישנים רצומטריים בתאים חיים כדי להגדיל את הרבייה בניסויים אלה.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

F&#246;rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

בידוד, מדידות הנשימה של המיטוכונדריה מ תודרנית לבנה

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry dissipative ללמוד את הדינמיקה איגוד של פוספוליפיד איגוד חלבון Annexin A2 כדי Bilayers השומנים הנתמכות על-ידי מוצק באמצעות מהוד קוורץ

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

שינוי Baculovirus וקטורים ביטוי לייצר מופרש צמח חלבונים בתאי חרקים

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Isolation of Physiologically Active Thylakoids and Their Use in Energy-Dependent Protein Transport Assays

בידוד של פעיל מבחינה פיזיולוגית Thylakoids, השימוש בהם במסגרת מבחני תחבורה אנרגיה תלוית חלבון

Chloroplasts are the organelles in green plants responsible for carrying out numerous essential metabolic pathways, most notably photosynthesis. Within ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

ניתוח של קיפול חלבונים, תחבורה, והשפלה בתאים חיים על ידי הדופק רדיואקטיבי צ'ייס

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

שימוש בהעברת אנרגיה פלורסצנטיות תהודה חוץ גופית ללמוד את הדינמיקה של חלבון מתחמי בקנה מידה הזמן אלפיות השנייה

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

אסטרטגיה פוספוטומית ליצירת פרופיל של איתות מתח אוסמוטי ב- Arabidopsis

Protein phosphorylation is crucial for the regulation of enzyme activity and gene expression under osmotic condition. Mass spectrometry (MS)-based ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

הסרה והחלפה של ליגנדים אנדוגניים מחלבונים ואלרגנים הקשורים לשומנים

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

סינון מקטעים מבוסס NMR במדגם מינימלי אך במצב אוטומציה מקסימלי

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

מולקולה בודדת פלואורסצנטית העברת אנרגיה מחקר של סינתזת חלבון ריבוזום

The ribosome is a large ribonucleoprotein complex that assembles proteins processively along mRNA templates. The diameter of the ribosome is approximately ...