Name: f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells
Uploaded: 2021-06-28T15:00:00
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प्रयोगों को जीव विज्ञान संकाय, Bielefeld विश्वविद्यालय के लाइट माइक्रोस्कोपी प्रौद्योगिकी मंच (LiMiTec) में किया गया था। इस काम को Bielefeld University द्वारा वित्त पोषित किया गया है।

नोट:: निम्न प्रोटोकॉल के लिए, protoplasts के क्षणिक अभिकर्मक किया गया था, के रूप में पहले वर्णित 12. एक संक्षिप्त विवरण नीचे दिया गया है।
1. प्रोटोप्लास्ट का क्षणिक अभिकर्मक
<ol><li> Arabidopsis thaliana ecotype Col...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescent Spectroscopy. Third Edition. , (2006).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F&#246;rster+resonance+energy+transfer-+FRET+what+it+is,+why+do+it,+and+how+it's+done.">F&#246;rster resonance energy transfer- FRET what it is, why do it, and how it's done.</a> Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 33, 1-57 (2009).</li><li>Vogel, S. S., Nguyen, T. A., vander Meer, B. W., Blank, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+heterogeneity+and+dark+acceptor+states+on+FRET:+implications+for+using+fluorescent+protein+donors+and+acceptors.">The impact of heterogeneity and dark acceptor states on FRET: implications for using fluorescent protein donors and acceptors.</a> PLoS ONE. 7, 49593 (2012).</li><li>M&#252;ller, S. M., Galliardt, H., Schneider, J., Barisas, B. G., Seidel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+F&#246;rster+resonance+energy+transfer+by+monitoring+sensitized+emission+in+living+plant+cells.">Quantification of F&#246;rster resonance energy transfer by monitoring sensitized emission in living plant cells.</a> Frontiers in Plant Science. 4, 413 (2013).</li><li>Gadella, T. W. J., vander Krogt, G. N., Bisseling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+FRET-microscopy+in+living+plant+cells.">GFP-based FRET-microscopy in living plant cells.</a> Trends in Plant Science. 4, 287-291 (1999).</li><li>Van Rheenen, J., Langeslag, M., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+confocal+acquisition+to+optimize+imaging+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+by+sensitized+emission.">Correcting confocal acquisition to optimize imaging of fluorescence resonance energy transfer by sensitized emission.</a> Biophysical Journal. 86, 2517-2529 (2004).</li><li>Seidel, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+C-termini+of+V-ATPase+subunits+by+in+vivo-FRET+measurements.">Mapping of C-termini of V-ATPase subunits by in vivo-FRET measurements.</a> FEBS Letters. 579, 4374-4382 (2005).</li><li>Seidel, T., Schnitzer, D., Golldack, D., Sauer, M., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle-specific+iso-enzymes+of+plant+V-ATPase+as+revealed+by+in+vivo-FRET.">Organelle-specific iso-enzymes of plant V-ATPase as revealed by in vivo-FRET.</a> BMC Cell Biology. 9, 28 (2008).</li><li>Schnitzer, D., Seidel, T., Sander, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+energization+state+affects+peripheral+stalk+stability+of+plant+vacuolar+H+-ATPase+and+impairs+vacuolar+acidification.">The cellular energization state affects peripheral stalk stability of plant vacuolar H+-ATPase and impairs vacuolar acidification.</a> Plant Cell Physiology. 52, 946-956 (2011).</li><li>Roshchina, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+autofluorescence:+application+to+the+study+of+plant+living+cells.">Vital autofluorescence: application to the study of plant living cells.</a> International Journal of Spectroscopy. 2012, 124672 (2012).</li><li>Holtorf, S., Apel, K., Bohlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+constitutive+and+inducible+promoters+for+the+overexpression+of+transgenes+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparison of different constitutive and inducible promoters for the overexpression of transgenes in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Molecular Biology. 29, 637-646 (1995).</li><li>Seidel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+and+FRET-analysis+of+subunits+c+and+a+of+the+vacuolar+H+-ATPase+in+living+plant+cells.">Colocalization and FRET-analysis of subunits c and a of the vacuolar H+-ATPase in living plant cells.</a> Journal of Biotechnology. 112 (1-2), 165-175 (2004).</li><li>Beemiller, P., Hoppe, A. D., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol-3-kinase-dependent+signal+transition+regulates+ARF1+and+ARF6+during+FC&#947;+receptor-mediated+phagocytosis.">A phosphatidylinositol-3-kinase-dependent signal transition regulates ARF1 and ARF6 during FC&#947; receptor-mediated phagocytosis.</a> PLoS Biology. 4, 162 (2006).</li><li>Lambert, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FPbase:+a+community-editable+fluorescent+protein+database.">FPbase: a community-editable fluorescent protein database.</a> Nature Methods. 16, 277-278 (2019).</li></ol>

दाता शमन और संवेदनशील स्वीकर्ता उत्सर्जन को एक रैखिक संबंध की विशेषता है जो या तो दाता- या FRET के स्वीकर्ता-आधारित गणना के लिए अनुमति देता है। रैखिकता के संबंधित कारकों को या तो जी कारक (दाता से स्वीकर्ता)...

Förster अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण ((एफ) आरईटी) आमतौर पर प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा मनाया जाता है, हालांकि प्रक्रिया स्वयं फ्लोरोफोरस के बीच होने तक सीमित नहीं है। अंतर्निहित द्विध्रुवीय-द्विध्रुवीय युग्मन को बस एक प्रकाश उत्सर्जक दाता अणु और एक प्रकाश-अवशोषित स्वीकर्ता की आवश्यकता होती है। यह आवश्यक वर्णक्रमीय ओवरलैप इंटीग्रल जे से प्राप्त होता है जो सामान्यीकृत दाता उत्सर्जन और स्वीकर्ता अवशोषण स्पेक्ट्रा 1 का होता है। हालांकि, क्योंकि आरईटी प्रतिदीप्ति के साथ प्रतिस्पर्धा करता है, ऊर्जा हस्तांतरण प्रतिदीप्ति उत्सर्जन में परिवर्तन द्वारा औसत दर्जे का हो जाता है: आरईटी दाता शमन और संवेदनशील स्वीकर्ता उत्सर्जन को प्रेरित करता है।
फ्लोरोफोर-आधारित आरईटी को बायोल्यूमिनेसेंस अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (BRET) से अलग करने के लिए प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (FRET) कहा जाता है। आरईटी दाता और स्वीकर्ता के बीच की दूरी पर दृढ़ता से निर्भर करता है, जो व्यापक रूप से 0.5-10 एनएम 2 की सीमा में है और इस प्रकार, प्रोटीन और उनके परिसरों के आयामों के समान सीमा में है। दूसरा, आरईटी द्विध्रुवीय-द्विध्रुवीय अभिविन्यास कप्पा वर्ग पर निर्भर करता है। इस तथ्य के साथ संयुक्त है कि प्रोटीन-बाध्य फ्लोरोफोरस की घूर्णी स्वतंत्रता को आणविक वजन और धीमी गति से घूर्णी विश्राम के कारण उपेक्षित किया जा सकता है, आरईटी संरचनात्मक परिवर्तनों के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है3।
तथाकथित Förster त्रिज्या वर्णक्रमीय ओवरलैप अभिन्न और ओवरलैप की तरंग दैर्ध्य सीमा पर आधारित है, ताकि लाल प्रकाश को अवशोषित क्रोमोफोर के परिणामस्वरूप नीले प्रकाश-अवशोषित रंगों की तुलना में लंबे समय तक फ़र्स्टर त्रिज्या हो। चूंकि FRET माप की गतिशील सीमा R0 × 0.5 और R0 × 1.5 द्वारा सीमित है, इसलिए FRET जोड़ी ECFP-EYFP में 4.9 nm4 के R0 के कारण 2.5-7.3 nm की गतिशील सीमा है।
फ्लोरोफोर की चमक इसके दाढ़ विलुप्त होने के गुणांक और इसकी क्वांटम उपज के उत्पाद द्वारा दी जाती है। FRET माप के लिए, लगभग समान चमक के fluorophores का चयन करना फायदेमंद है। यह दाता शमन और संवेदनशील स्वीकर्ता उत्सर्जन का पता लगाने को बढ़ाता है। यह माइक्रोस्कोपी सिस्टम के अंशांकन का भी पक्षधर है। सियान और फ्लोरोसेंट प्रोटीन के अक्सर उपयोग किए जाने वाले FRET जोड़े को देखते हुए, सियान फ्लोरोसेंट प्रोटीन की कम चमक स्पष्ट हो जाती है (चित्रा 1 ए)।
हालांकि, स्वीकर्ता का जीवनकाल दाता के जीवनकाल से कम होना चाहिए, जिससे ऊर्जा हस्तांतरण के लिए स्वीकर्ता की उपलब्धता सुनिश्चित हो। यदि स्वीकर्ता का जीवनकाल दाता के जीवनकाल से अधिक है, तो स्वीकर्ता अभी भी उत्साहित अवस्था में हो सकता है जब दाता फिर से उत्साहित होता है। उन्नत सियान फ्लोरोसेंट प्रोटीन जैसे mTurquoise एक विस्तारित जीवनकाल दिखाते हैं और इस प्रकार FRET (चित्रा 1 B) की बढ़ी हुई संभावना में योगदान करते हैं। FRET की संभावना भी स्वीकर्ता के दाढ़ विलुप्त होने के गुणांक पर निर्भर करती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well slides</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil Immersol&#160; W2010</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>refraction index of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 1: AxioObserver with LSM 780 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 2: AxioObserver with LSM 5 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells

संवेदी उत्सर्जन आधारित Förster अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (FRET) प्रयोगों आसानी से किया जाता है, लेकिन माइक्रोस्कोपिक सेटअप पर निर्भर करता है। Confocal लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप जीवविज्ञानियों के लिए एक workhorse बन गए हैं। वाणिज्यिक प्रणालियां लेजर पावर समायोजन और डिटेक्टर संवेदनशीलता में उच्च लचीलापन प्रदान करती हैं और अक्सर सही छवि प्राप्त करने के लिए विभिन्न डिटेक्टरों को जोड़ती हैं। हालांकि, विभिन्न प्रयोगों और सेटअपों से तीव्रता-आधारित डेटा की तुलना अक्सर इस लचीलेपन के कारण असंभव होती है। जीवविज्ञानी के अनुकूल प्रक्रियाएं लाभ की हैं और लेजर और डिटेक्टर सेटिंग्स के सरल और विश्वसनीय समायोजन के लिए अनुमति देती हैं। 
इसके अलावा, चूंकि जीवित कोशिकाओं में FRET प्रयोग प्रोटीन अभिव्यक्ति और दाता-स्वीकर्ता अनुपात में परिवर्तनशीलता से प्रभावित होते हैं, इसलिए डेटा मूल्यांकन के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर पर विचार किया जाना चाहिए। यहां वर्णित विश्वसनीय और पुन: प्रस्तुत करने योग्य FRET माप के लिए एक सरल प्रोटोकॉल है, जिसमें प्रोटीन अभिव्यक्ति के अनुमान और लेजर तीव्रता और डिटेक्टर सेटिंग्स के समायोजन के लिए दिनचर्या शामिल है। डेटा मूल्यांकन ज्ञात FRET दक्षता के एक fluorophore संलयन के साथ अंशांकन द्वारा किया जाएगा। सादगी में सुधार करने के लिए, सुधार कारकों की तुलना की गई है जो कोशिकाओं में और पुनः संयोजक फ्लोरोसेंट प्रोटीन को मापने के द्वारा प्राप्त किए गए हैं।

confocal लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप का समायोजन लेजर समायोजन ने बढ़ती लेजर तीव्रता (चित्रा 2 और तालिका 1) के साथ उत्सर्जन की एक रैखिक वृद्धि का खुलासा किया। जैसा कि आर्गन-आयन लेजर के ल...

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FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

विवो Förster अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण माप में के लिए एक मानक confocal लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप की स्थापना के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान की जाती है, डेटा मूल्यांकन के बाद।

Förster अनुनाद ऊर्जा स्थानांतरण जीवित संयंत्र कोशिकाओं में माप

Sensitized emission-based F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) experiments are easily done but depend on the microscopic setup. Confocal laser ...

प्रोटोकॉल संवेदनशील उत्सर्जन द्वारा FRET प्रयोगों को अधिक पुनरुत्पादक और तुलनीय बनाने के लिए एक सरल प्रक्रिया प्रदान करता है। FRET का मुख्य लाभ वास्तविक समय में माप हैं ताकि गतिशील प्रक्रियाओं को संबोधित किया जा सके। एक संचरण photomultiplier का उपयोग कर लेजर समायोजन के लिए, माइक्रोस्कोप के नीचे transfected protoplasts युक्त आठ अच्छी तरह से स्लाइड जगह.एक खाली अच्छी तरह से चुनने के बाद, लाइन स्कैनिंग मोड और हिस्टोग्राम दृश्य चुनें, लेजर तीव्रता को न्यूनतम तक कम करें और पता लगाने योग्य पृष्ठभूमि शोर के लिए डिटेक्टर लाभ को समायोजित करें। अगला, संबंधित संकेत को रिकॉर्ड करते समय 0.5% के चरणों में लेजर तीव्रता बढ़ाएं। प्रतिबिंबित मोड का उपयोग करके लेजर समायोजन के लिए, एक खाली कुएं का चयन करें, फिर एक प्रतिबिंब फ़िल्टर लागू करें।प्रतिबिंब मोड पर स्विच करें और सुनिश्चित करें कि डिटेक्टर तरंग दैर्ध्य रेंज लेजर की तरंग दैर्ध्य को कवर करती है। लाइन स्कैनिंग मोड और हिस्टोग्राम दृश्य चुनें, लेजर तीव्रता को न्यूनतम करने के लिए कम करने के लिए और पता लगाने योग्य पृष्ठभूमि शोर करने के लिए डिटेक्टर लाभ को समायोजित करें। इसके बाद, इसे वापस ले जाने से पहले उद्देश्य को सबसे कम स्थिति में ले जाएं जब तक कि कवरस्लिप का प्रतिबिंब दिखाई न दे, फिर संबंधित सिग्नल को रिकॉर्ड करते समय 0.5% के चरणों में लेजर तीव्रता बढ़ाएं।डेटा मूल्यांकन के लिए, सिग्नल तीव्रता द्वारा डेटा को सारणीबद्ध और सॉर्ट करें, फिर सापेक्ष लेजर शक्ति के खिलाफ सिग्नल तीव्रता को प्लॉट करें और एक समान सिग्नल तीव्रता के परिणामस्वरूप लेजर तीव्रता चुनें। फोटोमल्टीप्लायर के समायोजन के लिए, एक खाली अच्छी तरह से चुनें और एक प्रतिबिंब फ़िल्टर लागू करें, प्रतिबिंब मोड पर स्विच करें और सुनिश्चित करें कि डिटेक्टर तरंग दैर्ध्य रेंज लेजर की तरंग दैर्ध्य को कवर करती है। लाइन स्कैनिंग मोड और हिस्टोग्राम दृश्य चुनें, डिटेक्टर लाभ को अधिकतम आधे तक कम करें और पता लगाने योग्य पृष्ठभूमि शोर के लिए लेजर तीव्रता को समायोजित करें।अगला, कवरस्लिप का प्रतिबिंब दिखाई देने तक इसे वापस ले जाने से पहले उद्देश्य को सबसे कम स्थिति में ले जाएं, फिर डिटेक्टर लाभ को 50 से 100 वोल्ट चरणों में बढ़ाएं और संबंधित सिग्नल रिकॉर्ड करें। डेटा मूल्यांकन के लिए, प्रत्येक डिटेक्टर के लिए डिटेक्टर लाभ के खिलाफ तीव्रता की साजिश करें, फिर समान संवेदनशीलता प्राप्त करने के लिए व्यक्तिगत डिटेक्टर लाभ चुनें। छवि अधिग्रहण के लिए, उपयुक्त फिल्टर या डाइक्रोइक दर्पण चुनें और लाइन स्कैनिंग द्वारा लाइन को सक्षम करने के लिए सभी चैनलों के लिए एक ही डाइक्रोइक दर्पण का उपयोग करें, फिर लाइव कोशिकाओं की इमेजिंग के लिए एक जल विसर्जन उद्देश्य का चयन करें और मध्यम स्कैनिंग गति के साथ 12 या 16 बिट स्कैनिंग चुनें।इसके बाद, पता लगाने की सीमा अधिमानतः दाता का पता लगाने के लिए 470 से 510 नैनोमीटर और संवर्धित सियान फ्लोरोसेंट प्रोटीन या ईसीएफपी की FRET जोड़ी के मामले में स्वीकर्ता का पता लगाने के लिए 530 से 600 नैनोमीटर और बढ़े हुए पीले फ्लोरोसेंट प्रोटीन या EYFP के मामले में 530 से 600 नैनोमीटर परिभाषित करें। डिटेक्टर और लेजर सेटिंग्स को लागू करने के बाद जैसा कि पहले प्रदर्शित किया गया था, यदि आवश्यक हो तो प्राप्त लेजर पावर टेबल के आधार पर लेजर तीव्रता को संशोधित करें। सुनिश्चित करें कि सिग्नल-टू-शोर अनुपात डिटेक्टरों की पूरी गतिशील सीमा को कवर करता है।पिनहोल व्यास के साथ ठीक ट्यूनिंग के बाद, जबकि लेजर तीव्रता और डिटेक्टर लाभ स्थिर रखते हुए, कम से कम 20 कोशिकाओं की छवियों को लेते हुए FRET माप करें। Crosstalk सुधार निर्धारित करने के लिए, केवल दाता fluorophore व्यक्त कोशिकाओं और स्वीकर्ता fluorophore व्यक्त करने वालों के साथ FRET माप प्रदर्शन करें। माप के अंशांकन के लिए, दाता स्वीकर्ता संलयन को व्यक्त करने वाली कोशिकाओं के साथ FRET माप करें।डेटा मूल्यांकन के लिए, यह सुनिश्चित करते हुए कक्षों की पंक्ति प्रोफ़ाइल प्राप्त करें कि प्रत्येक प्रोफ़ाइल में एक से अधिक कक्ष नहीं हैं. प्रोफ़ाइल को पाठ फ़ाइलों के रूप में सहेजें. फिर डेटा अनुभाग में पाठ फ़ाइल आयात विकल्प का उपयोग करके, पाठ फ़ाइलों को स्प्रेडशीट में आयात करें.अगला, अधिकतम फ़ंक्शन को लागू करके अधिकतम मूल्यों को पढ़ें, फिर दाता उत्सर्जन आईडी, FRET उत्सर्जन IF, स्वीकर्ता उत्सर्जन IA, और कम से कम चार डेटासेट, केवल दाता, केवल दाता, स्वीकारकर्ता केवल, दाता-स्वीकारकर्ता संलयन, और माप के लिए एक कॉलम वाली तालिका में प्राप्त मूल्यों को सूचीबद्ध करें। लेजर समायोजन ने लेजर तीव्रता में वृद्धि के साथ उत्सर्जन में एक रैखिक वृद्धि का खुलासा किया। जैसा कि एक खड़ी ढलान द्वारा दिखाया गया है, 514 नैनोमीटर लाइन का उत्सर्जन 458 नैनोमीटर लाइन के उत्सर्जन की तुलना में बहुत अधिक था।निरंतर लेजर शक्ति पर डिटेक्टर लाभ को अलग-अलग करने से दोनों विश्लेषण डिटेक्टरों के लिए एक घातीय व्यवहार का पता चला। विसंगति और वर्णक्रमीय खून बह रहा है के माध्यम से दाता और स्वीकर्ता पुनः संयोजक शुद्ध प्रोटीन के साथ विश्लेषण किया और है कि उन प्रोटीनों को व्यक्त कोशिकाओं के साथ विश्लेषण से पता चलता है कि यह सेलुलर pigments के कारण होने की संभावना जीवित कोशिकाओं में वर्णक्रमीय रक्तस्राव के निर्धारण को छोड़ने के लिए असंभव है। लेबल किए गए वैक्यूलर एटीपीए सबयूनिट्स, वीएचए एईसीएफपी और वीएचए एईईएफपी के बीच फ्रेट दक्षता बढ़ती सिग्नल तीव्रता के साथ कम हो गई।इसके विपरीत, VHA E1 ECFP और VHA CEYFP के बीच बातचीत सिग्नल तीव्रता से स्वतंत्र थी। दाता और स्वीकर्ता का पता लगाने के लिए उपयुक्त ऑप्टिकल घटकों का विकल्प महत्वपूर्ण है। इस प्रोटोकॉल को इन प्रयोगों में पुनरुत्पादकता को बढ़ाने के लिए जीवित कोशिकाओं में रेशियोमेट्रिक सेंसर के लिए भी लागू किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

F&#246;rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

अलगाव और Arabidopsis थालियाना से Mitochondria की श्वसन माप

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

अपव्यय Microgravimetry फॉस्फोलिपिड बाइंडिंग प्रोटीन की बाइंडिंग गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए Annexin A2 करने के लिए ठोस-समर्थित लिपिड Bilayers एक क्वार्ट्ज प्रतिध्वनि का उपयोग

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

संशोधित Baculovirus अभिव्यक्ति वैक्टर कीट कोशिकाओं में स्रावित संयंत्र प्रोटीन का उत्पादन करने के लिए

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Isolation of Physiologically Active Thylakoids and Their Use in Energy-Dependent Protein Transport Assays

शारीरिक रूप से सक्रिय Thylakoids के अलगाव और ऊर्जा पर निर्भर प्रोटीन परिवहन परख में उनके उपयोग

Chloroplasts are the organelles in green plants responsible for carrying out numerous essential metabolic pathways, most notably photosynthesis. Within ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

प्रोटीन तह, परिवहन, और रेडियोधर्मी पल्स चेस द्वारा जीवित कोशिकाओं में क्षरण का विश्लेषण

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

एक मिलीसेकंड समय स्केल पर प्रोटीन परिसरों की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए विट्रो प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण में उपयोग करना

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

अरबीडोप्सिस में ऑस्मोटिक स्ट्रेस सिग्नलिंग के लिए फॉस्फोप्रोटेओमिक रणनीति

Protein phosphorylation is crucial for the regulation of enzyme activity and gene expression under osmotic condition. Mass spectrometry (MS)-based ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

लिपिड-बाउंड प्रोटीन और एलर्जेंस से एंडोजेनस लिगांड को हटाना और प्रतिस्थापन

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

न्यूनतम नमूना लेकिन अधिकतम स्वचालन मोड में एनएमआर-आधारित टुकड़ा स्क्रीनिंग

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

रिबोसोम प्रोटीन संश्लेषण का एकल अणु फ्लोरेसेंस एनर्जी ट्रांसफर अध्ययन

The ribosome is a large ribonucleoprotein complex that assembles proteins processively along mRNA templates. The diameter of the ribosome is approximately ...