Name: f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells
Uploaded: 2021-06-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

Deneyler, Bielefeld Üniversitesi Biyoloji Fakültesi Işık Mikroskopi Teknolojisi Platformu'nda (LiMiTec) gerçekleştirildi. Bu çalışma Bielefeld Üniversitesi tarafından finanse edilmiştir.

NOT: Aşağıdaki protokol için, daha önce açıklandığı gibi protoplastların geçici transfeksiyonı gerçekleştirildi12. Aşağıda kısa bir açıklama verilmiştir.
1. Protoplastların geçici transfeksiyon
<ol><li> Arabidopsis thaliana ecotype Columbia'nın ~4 g sağlıklı yapraklarını 1 mm dilimler halinde kesin ve 20 mL enzim çözeltisine (%1,5 selüloz) aktarın; %0.4 macerozim; %0.1 sığır serum albümin Fraksiyonu V; 0.4 M mannitol; 20 ...

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescent Spectroscopy. Third Edition. , (2006).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F&#246;rster+resonance+energy+transfer-+FRET+what+it+is,+why+do+it,+and+how+it's+done.">F&#246;rster resonance energy transfer- FRET what it is, why do it, and how it's done.</a> Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology. 33, 1-57 (2009).</li><li>Vogel, S. S., Nguyen, T. A., vander Meer, B. W., Blank, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+heterogeneity+and+dark+acceptor+states+on+FRET:+implications+for+using+fluorescent+protein+donors+and+acceptors.">The impact of heterogeneity and dark acceptor states on FRET: implications for using fluorescent protein donors and acceptors.</a> PLoS ONE. 7, 49593 (2012).</li><li>M&#252;ller, S. M., Galliardt, H., Schneider, J., Barisas, B. G., Seidel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+F&#246;rster+resonance+energy+transfer+by+monitoring+sensitized+emission+in+living+plant+cells.">Quantification of F&#246;rster resonance energy transfer by monitoring sensitized emission in living plant cells.</a> Frontiers in Plant Science. 4, 413 (2013).</li><li>Gadella, T. W. J., vander Krogt, G. N., Bisseling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-based+FRET-microscopy+in+living+plant+cells.">GFP-based FRET-microscopy in living plant cells.</a> Trends in Plant Science. 4, 287-291 (1999).</li><li>Van Rheenen, J., Langeslag, M., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correcting+confocal+acquisition+to+optimize+imaging+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+by+sensitized+emission.">Correcting confocal acquisition to optimize imaging of fluorescence resonance energy transfer by sensitized emission.</a> Biophysical Journal. 86, 2517-2529 (2004).</li><li>Seidel, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+C-termini+of+V-ATPase+subunits+by+in+vivo-FRET+measurements.">Mapping of C-termini of V-ATPase subunits by in vivo-FRET measurements.</a> FEBS Letters. 579, 4374-4382 (2005).</li><li>Seidel, T., Schnitzer, D., Golldack, D., Sauer, M., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organelle-specific+iso-enzymes+of+plant+V-ATPase+as+revealed+by+in+vivo-FRET.">Organelle-specific iso-enzymes of plant V-ATPase as revealed by in vivo-FRET.</a> BMC Cell Biology. 9, 28 (2008).</li><li>Schnitzer, D., Seidel, T., Sander, T., Golldack, D., Dietz, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+energization+state+affects+peripheral+stalk+stability+of+plant+vacuolar+H+-ATPase+and+impairs+vacuolar+acidification.">The cellular energization state affects peripheral stalk stability of plant vacuolar H+-ATPase and impairs vacuolar acidification.</a> Plant Cell Physiology. 52, 946-956 (2011).</li><li>Roshchina, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+autofluorescence:+application+to+the+study+of+plant+living+cells.">Vital autofluorescence: application to the study of plant living cells.</a> International Journal of Spectroscopy. 2012, 124672 (2012).</li><li>Holtorf, S., Apel, K., Bohlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+constitutive+and+inducible+promoters+for+the+overexpression+of+transgenes+in+Arabidopsis+thaliana.">Comparison of different constitutive and inducible promoters for the overexpression of transgenes in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Molecular Biology. 29, 637-646 (1995).</li><li>Seidel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colocalization+and+FRET-analysis+of+subunits+c+and+a+of+the+vacuolar+H+-ATPase+in+living+plant+cells.">Colocalization and FRET-analysis of subunits c and a of the vacuolar H+-ATPase in living plant cells.</a> Journal of Biotechnology. 112 (1-2), 165-175 (2004).</li><li>Beemiller, P., Hoppe, A. D., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol-3-kinase-dependent+signal+transition+regulates+ARF1+and+ARF6+during+FC&#947;+receptor-mediated+phagocytosis.">A phosphatidylinositol-3-kinase-dependent signal transition regulates ARF1 and ARF6 during FC&#947; receptor-mediated phagocytosis.</a> PLoS Biology. 4, 162 (2006).</li><li>Lambert, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FPbase:+a+community-editable+fluorescent+protein+database.">FPbase: a community-editable fluorescent protein database.</a> Nature Methods. 16, 277-278 (2019).</li></ol>

Donör söndürme ve duyarlı kabul eden emisyon, donör veya alıcı tabanlı FRET hesaplamasına izin veren doğrusal bir ilişki ile karakterize edilir. Karşılık gelen doğrusallık faktörlerine, karşılıklı değerler olan G faktörü (bağışçıdan alıcıya) veya xi (donöre kabul eden) denir4. Floresan proteinler arasındaki FRET'in floresan mikroskopi ile ölçülmesi, floresan proteinlerin geniş emilimi ve emisyon spektrumu nedeniyle genellikle DSBT ve ASBT için düzeltmeler ger...

Förster rezonans enerji transferi ((F)RET) tipik olarak floresan spektroskopisi ile gözlenir, ancak sürecin kendisi floroforlar arasında meydana gelmekle sınırlı değildir. Alttaki dipol-dipol bağlantısı sadece ışık yayan bir donör molekülü ve ışık emici bir alıcı gerektirir. Bu, normalleştirilmiş donör emisyonu ve alıcı emici absorbans spektrumunun gerekli spektral örtüşümü integral J'den türetilmiştir1. Bununla birlikte, RET floresan ile rekabet ettiği için, enerji transferi floresan emisyonundaki değişikliklerle ölçülebilir hale gelir: RET, donörlerin söndürülmesine ve duyarlı kabul edilebilir emisyona neden olur.
Florofor bazlı RET, biyolüminesans rezonans enerji transferinden (BRET) ayırmak için floresan rezonans enerji transferi (FRET) olarak adlandı. RET, donör ve alıcı arasındaki mesafeye bağlıdır, bu da yaygın olarak 0.5-10 nm2 aralığındadır ve böylece proteinlerin boyutları ve kompleksleri ile aynı aralıktadır. İkinci olarak, RET dipol-dipol oryantasyon kappa kare bağlıdır. Moleküler ağırlık ve yavaş dönme gevşemesi nedeniyle proteine bağlı floroforların dönme özgürlüğünün ihmal edilebildiği gerçeğiyle birleştiğinde, RET konformasyonel değişikliklerin analizine izin verir3.
Förster yarıçapı, spektral örtüşme integraline ve örtüşmenin dalga boyu aralığına dayanır, böylece kırmızı ışık emici kromoforlar mavi ışık emici boyalardan daha uzun Förster yarıçapı ile sonuçlanır. FRET ölçümlerinin dinamik aralığı R0 × 0,5 ve R0 × 1,5 ile sınırlı olduğundan, FRET çifti ECFP-EYFP 4,9 nm4 R0 nedeniyle 2,5-7,3 nm dinamik aralığına sahiptir.
Bir floroforun parlaklığı, azı dişi yok olma katsayısının ve kuantum veriminin ürünü ile verilir. FRET ölçümleri için, neredeyse benzer parlaklığa sahip floroforları seçmek avantajlıdır. Bu, donör söndürme ve duyarlı kabul eden emisyonun tespitini artırır. Ayrıca mikroskopi sisteminin kalibrasyonunu da tercih eder. Sık kullanılan FRET siyan ve floresan protein çiftlerine bakıldığında, siyan floresan proteinlerin daha düşük parlaklığı belirgin hale gelir (Şekil 1A).
Bununla birlikte, alıcının ömrü, bağışçının enerji transferi için kullanılabilirliğini sağlamak için donörün ömründen daha düşük olmalıdır. Kabul edenin ömrü donörün ömrünü aşarsa, bağışçı tekrar heyecanlandığında kabul eden kişi hala heyecanlı durumda olabilir. mTurquoise gibi gelişmiş siyan floresan proteinler uzun bir ömür gösterir ve böylece FRET olasılığının artmasına katkıda bulunur (Şekil1B). FRET olasılığı da kabul edenin azı dişi yok olma katsayısına bağlıdır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-well slides</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil Immersol&#160; W2010</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>444969-0000-000</td>
			<td>refraction index of water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 1: AxioObserver with LSM 780 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 2: AxioObserver with LSM 5 scan head, confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

f&#246;rster resonance energy transfer measurements in living plant cells

Hassaslaştırılmış emisyon bazlı Förster rezonans enerji transferi (FRET) deneyleri kolayca yapılır, ancak mikroskobik kuruluma bağlıdır. Konfokal lazer tarama mikroskopları biyologlar için bir çalışma atı haline gelmiştir. Ticari sistemler lazer güç ayarı ve dedektör hassasiyetinde yüksek esneklik sunar ve genellikle mükemmel görüntüyü elde etmek için farklı dedektörleri birleştirir. Ancak, farklı denemelerden ve kurulumlardan gelen yoğunluğa dayalı verilerin karşılaştırılması genellikle bu esneklik nedeniyle imkansızdır. Biyolog dostu prosedürler avantajlıdır ve lazer ve dedektör ayarlarının basit ve güvenilir bir şekilde ayarlanmasında izin verir. 
Ayrıca canlı hücrelerde yapılan FRET deneyleri protein ekspresyosu ve donör-kabul edici oranlarındaki değişkenliklerden etkilendiği için veri değerlendirmesi için protein ekspresyon düzeylerinin göz önünde bulundurulmalıdır. Burada, protein ekspresyonunun tahmini ve lazer yoğunluğunun ve dedektör ayarlarının ayarlanması için rutinler de dahil olmak üzere güvenilir ve tekrarlanabilir FRET ölçümleri için basit bir protokol açıklanmıştır. Veri değerlendirmesi, bilinen FRET verimliliğinin florofor füzyonu ile kalibrasyon ile yapılacaktır. Basitliği artırmak için hücrelerde ve rekombinant floresan proteinlerin ölçülerek elde edilen düzeltme faktörleri karşılaştırılmıştır.

Konfokal lazer tarama mikroskopunun ayarlanmasında Lazer ayarı, artan lazer yoğunluğu ile emisyonun doğrusal bir artışını ortaya koydu (Şekil 2 ve Tablo 1). Argon iyon lazerler için beklendiği gibi, 514 nm hattının emisyonu, daha dik bir eğimin kanıt ettiği gibi, 458 nm hattının emisyonunun çok daha yüksekti. Sonraki deneyler için sırasıyla 514 nm hattı ve 458 nm hattı için %4,5 ve %6,5 lazer gücü seçilmiştir. Bu, 1123 (514 ...

Watch this Scientific Journal Video about FÃƒÂ¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells at JoVE.com

FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

In vivo Förster rezonans enerji transferi ölçümleri için standart bir konfokal lazer tarama mikroskobu kurmak ve ardından veri değerlendirmesi için bir protokol sağlanmıştır.

Yaşayan Bitki Hücrelerinde Förster Rezonans Enerji Transferi Ölçümleri

Sensitized emission-based F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) experiments are easily done but depend on the microscopic setup. Confocal laser ...

Protokol, hassaslaştırılmış emisyonlar tarafından FRET deneylerini daha tekrarlanabilir ve karşılaştırılabilir hale getirmek için basit bir prosedür sağlar. FRET'in temel avantajı, dinamik süreçlerin ele alınabilmesi için gerçek zamanlı ölçümlerdir. Bir iletim fotomultiplier kullanarak lazer ayarı için, transfected protoplastları içeren sekiz kuyu kaydıranı mikroskop altına yerleştirin.Boş bir kuyu seçtikten sonra, çizgi tarama modunu ve histogram görünümünü seçin, lazer yoğunluğunu minimuma düşür ve dedektör kazancını tespit edilebilir arka plan gürültüsüne ayarlayın. Ardından, ilgili sinyali kaydederken lazer yoğunluğunu % 0,5'lik adımlarla artırın. Yansıtıcı modu kullanarak lazer ayarı için boş bir kuyu seçin ve ardından bir yansıma filtresi uygulayın.Yansıma modunu aç ve dedektör dalga boyu aralığının lazerin dalga boylarını kapsadığından emin olun. Çizgi tarama modunu ve histogram görünümünü seçin, lazer yoğunluğunu minimuma düşür ve dedektör kazancını algılanabilir arka plan gürültüsüne ayarlayın. Ardından, kapak kapağının yansıması görünene kadar geri hareket ettirmeden önce hedefi en düşük konuma getirin, ardından ilgili sinyali kaydederken lazer yoğunluğunu% 0,5'lik adımlarla artırın.Veri değerlendirmesi için, verileri sinyal yoğunluklarına göre tablolayın ve sıralayın, ardından sinyal yoğunluklarını göreli lazer gücüne göre çizin ve benzer bir sinyal yoğunluğuna neden olan lazer yoğunluklarını seçin. Fotomultiplierlerin ayarlanmasında, boş bir kuyu seçin ve bir yansıma filtresi uygulayın, yansıma moduna geçin ve dedektör dalga boyu aralığının lazerin dalga boylarını kapsadığından emin olun. Çizgi tarama modunu ve histogram görünümünü seçin, dedektör kazancını maksimumun yarısına düşürün ve lazer yoğunluğunu algılanabilir arka plan gürültüsüne ayarlayın.Ardından, kapak kapağının yansıması görünene kadar geri hareket ettirmeden önce hedefi en düşük konuma getirin, ardından dedektör kazancını 50 ila 100 volt adımda artırın ve ilgili sinyali kaydedin. Veri değerlendirmesi için, her dedektör için dedektör kazancına karşı yoğunluğu çizin, ardından benzer hassasiyet elde etmek için bireysel dedektör kazanımlarını seçin. Görüntü alımı için uygun filtreleri veya dikroik aynaları seçin ve satır satır taramayı etkinleştirmek için tüm kanallar için aynı dikroik aynayı kullanın, ardından canlı hücrelerin görüntülenmesi için bir su daldırma hedefi seçin ve orta tarama hızıyla 12 veya 16 bit taramayı seçin.Daha sonra, gelişmiş siyan floresan protein veya ECFP ve gelişmiş sarı floresan protein veya EYFP FRET çifti durumunda, donör tespiti için tercihen 470 ila 510 nanometre ve kabul eden algılama için 530 ila 600 nanometre algılama aralığını tanımlayın. Dedektör ve lazer ayarlarını daha önce gösterildiği gibi uyguladıktan sonra, gerekirse elde edilen lazer güç tablosuna göre lazer yoğunluğunu gözden geçirin. Sinyal-gürültü oranının dedektörlerin tüm dinamik aralığını kapsadığından emin olun.Lazer yoğunluklarını ve dedektör kazanımlarını sabit tutarken iğne deliği çapı ile ince ayar yaptıktan sonra, en az 20 hücrenin görüntülerini alarak FRET ölçümlerini gerçekleştirin. Çapraz konuşma düzeltmelerini belirlemek için, sadece donör floroforu ifade eden hücrelerle ve sadece alıcı floroforu ifade eden hücrelerle FRET ölçümleri gerçekleştirin. Ölçümlerin kalibrasyonu için donör alıcı füzyonunu ifade eden hücrelerle FRET ölçümleri gerçekleştirin.Veri değerlendirmesi için, her profilin birden fazla hücre içermemesini sağlayan hücrelerin çizgi profillerini edinin. Profilleri metin dosyaları olarak kaydedin. Ardından, veri bölümündeki metin dosyası alma seçeneğini kullanarak metin dosyalarını bir elektronik tabloya alın.Ardından, max işlevini uygulayarak maksimum değerleri okuyun, ardından her biri donör emisyon kimliği, FRET emisyonU, kabul eden emisyon IA ve en az dört veri kümesi, yalnızca donör, yalnızca kabul eden, bağışçı-alıcı füzyonu ve ölçümü için bir sütun içeren bir tabloda elde edilen değerleri listeleyin. Lazer ayarı, artan lazer yoğunluğu ile emisyonda doğrusal bir artış olduğunu ortaya koydu. Daha dik bir eğimde gösterildiği gibi, 514 nanometre hattının emisyonu 458 nanometre hattının emisyonunun çok daha yüksekti.Dedektör kazanımlarının sürekli lazer gücüyle farklı şekilde farklılanarak analiz edilen her iki dedektör için de üstel bir davranış ortaya çıktı. Donörün ve kabul edenin rekombinant saflaştırılmış proteinlerle analiz edilen ve bu proteinleri ifade eden hücrelerle analiz edilen tutarsızlığı ve spektral kanaması, hücresel pigmentlerin neden olduğu canlı hücrelerde spektral kanamanın belirlenmesini atlamanın imkansız olduğunu göstermektedir. Etiketli vakuolar ATPA alt ünlemleri, VHA AECFP ve VHA AEYFP arasındaki FRET verimliliği artan sinyal yoğunluğu ile azaldı.Buna karşılık, VHA E1 ECFP ve VHA CEYFP arasındaki etkileşim sinyal yoğunluğundan bağımsızdı. Uygun optik bileşenlerin seçimi, donörün ve alıcının tespiti için çok önemlidir. Bu protokol, bu deneylerdeki tekrarlanabilirliği artırmak için canlı hücrelerdeki oranmetrik sensörler için de uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

F&#246;rster Resonance Energy Transfer Measurements in Living Plant Cells

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Yalıtım ve solunum ölçümleri mitokondri Arabidopsis thaliana üzerinden

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

A2 bir kuvars rezonatör kullanarak katı destekli Lipid Bilayers için Annexin Protein bağlayıcı fosfolipid bağlama dinamikleri çalışmaya dissipative Microgravimetry

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Bitki proteinleri böcek hücrelerinde salgılanan Baculovirus ifade vektörel çizimler oluşturmak için değiştirme

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Isolation of Physiologically Active Thylakoids and Their Use in Energy-Dependent Protein Transport Assays

Yalıtım fizyolojik aktif Thylakoids ve onların kullanımı enerji bağımlı Protein taşıma deneyleri

Chloroplasts are the organelles in green plants responsible for carrying out numerous essential metabolic pathways, most notably photosynthesis. Within ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Protein katlanması, taşıma ve canlı hücreler radyoaktif darbe Chase tarafından bozulması Analizi

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Protein kompleksleri milisaniyelik zaman ölçekte dinamikleri çalışmaya vitro Floresans rezonans enerji transferi içinde kullanma

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Phosphoproteomic Strategy for Profiling Osmotic Stress Signaling in Arabidopsis

Arabidopsis'te Osmotik Stres Sinyali Profili Çıkarmak için Fosfoproteomik Strateji

Protein phosphorylation is crucial for the regulation of enzyme activity and gene expression under osmotic condition. Mass spectrometry (MS)-based ...

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

Lipid'e Bağlı Proteinler ve Alerjenlerden Endojen Ligandların Çıkarılması ve Değiştirilmesi

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

Minimum numune ancak maksimum otomasyon modunda NMR tabanlı parça taraması

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

Ribozom Protein Sentezinin Tek Molekül floresan Enerji Transferi Çalışması

The ribosome is a large ribonucleoprotein complex that assembles proteins processively along mRNA templates. The diameter of the ribosome is approximately ...