Name: optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes
Uploaded: 2022-06-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منح المعهد الوطني للعيون EY02665 و EY031706 والمؤسسة الدولية لأبحاث الشبكية للدكتور فينبرغ ، والمنحة الأساسية للمعاهد الوطنية للصحة (EY014800) ، ومنحة غير مقيدة من أبحاث الوقاية من العمى ، نيويورك ، نيويورك ، إلى قسم طب العيون والعلوم البصرية ، جامعة يوتا. حصل الدكتور فرانس فينبرغ أيضا على جائزة البحث لمنع العمى / جائزة الدكتور إتش جيمس وكارول للتطوير الوظيفي المجاني ، والدكتورة سيلك بيكر من منحة ARVO EyeFind. نشكر الدكتورة آن هانيكين من معهد سكريبس للأبحاث على توفير عين المتبرع المستخدمة في التسجيلات الموضحة في الشكل 2E.

أجريت جميع التجارب باستخدام الفئران وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الدراسات الحيوانية المؤسسية في جامعة يوتا. تم الحصول على عيون الخنازير لعرض هذا الفيديو بعد الوفاة من المسلخ (موارد الخنازير المستدامة ، جونسونفيل). تم الحصول على...

<ol>
	<li>Perlman, I., Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. , (1995).</li><li>Bonezzi, P. J., Tarchick, M. J., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+electroretinograms+made+easy:+performing+ERGs+using+3D+printed+components.">Ex vivo electroretinograms made easy: performing ERGs using 3D printed components.</a> Journal of Physiology. 598 (21), 4821-4842 (2020).</li><li>Vinberg, F., Kefalov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+ex+vivo+functional+testing+of+two+retinas+by+in+vivo+electroretinogram+system.">Simultaneous ex vivo functional testing of two retinas by in vivo electroretinogram system.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52855 (2015).</li><li>Heckenlively, J. R., Arden, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practice of Clinical Electrophysiology of Vision. , (2006).</li><li>Vinberg, F., Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+ERG+analysis+of+photoreceptors+using+an+in+vivo+ERG+system.">Ex vivo ERG analysis of photoreceptors using an in vivo ERG system.</a> Vision Research. 101, 108-117 (2014).</li><li>Winkler, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+the+fast+and+slow+components+of+P3+of+the+electroretinogram+of+the+isolated+rat+retina.">Calcium and the fast and slow components of P3 of the electroretinogram of the isolated rat retina.</a> Vision Research. 14 (1), 9-15 (1974).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dissection+of+the+electroretinogram+from+the+isolated+rat+retina+with+microelectrodes+and+drugs.">A dissection of the electroretinogram from the isolated rat retina with microelectrodes and drugs.</a> Visual Neuroscience. 16 (4), 727-741 (1999).</li><li>Abbas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revival+of+light+signalling+in+the+postmortem+mouse+and+human+retina.">Revival of light signalling in the postmortem mouse and human retina.</a> Nature. , (2022).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+photoreceptors:+Mechanisms+underlying+changes+in+structure+and+function.">Diabetic photoreceptors: Mechanisms underlying changes in structure and function.</a> Visual Neuroscience. 37, (2020).</li><li>Kantola, L., Piccolino, M., Wade, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+light+on+the+retina:+Translation+and+commentary+of+Holmgren+(1866).">The action of light on the retina: Translation and commentary of Holmgren (1866).</a> Journal of the History of the Neurosciences. 28 (4), 399-415 (2019).</li><li>Frank, R. N., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodopsin+photoproducts:+effects+on+electroretinogram+sensitivity+in+isolated+perfused+rat+retina.">Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina.</a> Science. 161 (3840), 487-489 (1968).</li><li>Hamasaki, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+sodium+ion+concentration+on+the+electroretinogram+of+the+isolated+retina+of+the+frog.">The effect of sodium ion concentration on the electroretinogram of the isolated retina of the frog.</a> Journal of Physiology. 167 (1), 156-168 (1963).</li><li>Granit, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+components+of+the+retinal+action+potential+in+mammals+and+their+relation+to+the+discharge+in+the+optic+nerve.">The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve.</a> Journal of Physiology. 77 (3), 207-239 (1933).</li><li>Donner, K., Hemila, S., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-dependence+of+rod+photoresponses+from+the+aspartate-treated+retina+of+the+frog+(Rana+temporaria).">Temperature-dependence of rod photoresponses from the aspartate-treated retina of the frog (Rana temporaria).</a> Acta Physiologica Scandinavica. 134 (4), 535-541 (1988).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+properties+of+a+new+isolated+rat+retina+preparation.">Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation.</a> Vision Research. 39 (13), 2165-2177 (1999).</li><li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function.">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function.</a> Brain Research Protocols. 16 (1-3), 27-36 (2005).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+phototransduction+and+light+signal+transmission+during+type+2+diabetes.">Rod phototransduction and light signal transmission during type 2 diabetes.</a> BMJ Open Diabetes Research and Care. 8 (1), 001571 (2020).</li><li>Nymark, S., Haldin, C., Tenhu, H., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+measuring+free+drug+concentration:+retinal+tissue+as+a+biosensor.">A new method for measuring free drug concentration: retinal tissue as a biosensor.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (6), 2583-2588 (2006).</li><li>Winkler, B. S., Kapousta-Bruneau, N., Arnold, M. J., Green, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inhibiting+glutamine+synthetase+and+blocking+glutamate+uptake+on+b-wave+generation+in+the+isolated+rat+retina.">Effects of inhibiting glutamine synthetase and blocking glutamate uptake on b-wave generation in the isolated rat retina.</a> Visual Neuroscience. 16 (2), 345-353 (1999).</li></ol>

تم تطويره في الأصل في عام 1865 بواسطة Holmgren لقياس استجابات ضوء الشبكية من شبكية العينالبرمائية 10 ، وقد حالت القيود التقنية في البداية دون استخدام ERG على نطاق واسع. ومع ذلك ، حددت الدراسات الأساسية التي أجراها راجنار جرانيت وآخرون الأصول الخلوية ل ERG وقياس المستقبلات الضوئية واست?...

يقيس تخطيط كهربية الشبكية وظيفة الشبكية استجابة للضوء1. إنه جزء لا يتجزأ من دراسة فسيولوجيا الشبكية والفيزيولوجيا المرضية ، وقياس نجاح علاجات أمراض الشبكية. يستخدم ERG في الجسم الحي على نطاق واسع لتقييم وظيفة الشبكية في الكائنات الحية السليمة ، ولكن له قيود كبيرة 2,3. من بين هذه ، يتم إعاقة التحليل الكمي لأنواع خلايا الشبكية الفردية في الجسم الحي ERG ، لأنه يسجل مجموع التغييرات المحتملة ، وبالتالي تراكب الاستجابات ، من جميع خلايا الشبكية إلى المنبهات الضوئية4. علاوة على ذلك ، فإنه لا يسمح بسهولة بإضافة الأدوية إلى شبكية العين ، وهو عرضة للتأثيرات الجهازية ، ولديه نسبة إشارة إلى ضوضاء منخفضة نسبيا. يتم التخلص من هذه العيوب في خارج الجسم الحي ERG الذي يبحث في وظيفة شبكية العينالمعزولة 2،3،5،6. يسمح ERG خارج الجسم الحي بتسجيل استجابات كبيرة ومستقرة من أنواع معينة من خلايا الشبكية عن طريق إضافة مثبطات دوائية وتقييم سهل للعوامل العلاجية ، والتي يمكن إضافتها إلى superfusate. في الوقت نفسه ، يزيل تأثيرات التأثيرات الجهازية ويزيل الضوضاء الفسيولوجية (مثل ضربات القلب أو التنفس).
في خارج الجسم الحي ERG ، يتم عزل شبكية العين أو عينات الشبكية وتثبيتها على جانب المستقبلات الضوئية لأعلى على قبة حامل العينة 3,5. يتم تجميع حامل العينة ، وتوصيله بنظام التروية الذي يزود شبكية العين بوسائط ساخنة ومؤكسجة ، ويوضع على مرحلة المجهر ، والذي تم تعديله لتقديم محفزات ضوئية يتم التحكم فيها بواسطة الكمبيوتر. لتسجيل الاستجابات المستنبطة بالضوء ، يتم توصيل حامل العينة بمكبر للصوت ومحول رقمي ونظام تسجيل (الشكل 1). تسمح هذه التقنية بعزل الاستجابات عن المستقبلات الضوئية للقضيب والمخروط ، والخلايا ثنائية القطب ON-القطب، و Müller glia عن طريق تغيير معلمات المحفزات الضوئية وإضافة عوامل دوائية.
يمكن تحويل مشبك التصحيح الحالي أو إعداد الصفيف متعدد الأقطاب الكهربائية (MEA) لتسجيل ERG خارج الجسم الحي ، إما بالاقتران مع محول ERG خارج الجسم الحي المتاح تجاريا أو حامل عينة مخصص للتحكم العددي بالكمبيوتر من البولي كربونات (CNC) ، لقياس استجابات الضوء في شبكية العين من نماذج الحيوانات الصغيرة ، مثل الفئران. يزيد هذا التعديل من إمكانية الوصول إلى ERG خارج الجسم الحي مع تقليل الحاجة إلى المعدات المتخصصة. يبسط تصميم حامل العينة تقنية التركيب ويدمج الأقطاب الكهربائية ، مما يلغي الحاجة إلى معالجة الأقطاب الكهربائية الدقيقة مقارنة بطرق ERG عبر الشبكية خارج الجسم الحي المبلغ عنها سابقا7. يعد معدل التروية ودرجة الحرارة داخل حامل العينة من العوامل المهمة التي تؤثر على خصائص الاستجابة من المستقبلات الضوئية والخلايا ثنائية القطب ON. من خلال ضبط هذه الظروف ، يمكن تسجيل ERG خارج الجسم الحي بشكل موثوق من شبكية الفأر المعزولة على مدى فترات طويلة من الزمن. تسمح الظروف التجريبية المحسنة بتسجيلات ERG خارج الجسم الحي في لكمات شبكية العين من شبكية أكبر ، بما في ذلك عيون الحيوانات الكبيرة وعيون المتبرع البشري8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mm socket</td>
			<td>WPI</td>
			<td>2026-10</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ag/AgCl Electrode</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>EP1</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ames&#39; medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1420</td>
			<td>perfusion media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>barium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0750</td>
			<td>potassium channel blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-AP4</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>0101</td>
			<td>broad spectrum glutamatergic antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OcuScience Ex Vivo ERG Adapter</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>n/a</td>
			<td>ex vivo ERG specimen holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded luer connector</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>51525K222 or 51525K223</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes

تعد قياسات استجابات الضوء العصبي في شبكية العين أمرا بالغ الأهمية للتحقيق في فسيولوجيا شبكية العين السليمة ، وتحديد التغيرات المرضية في أمراض الشبكية ، واختبار التدخلات العلاجية. يسمح مخطط كهربية الشبكية خارج الجسم الحي (ERG) بتحديد المساهمات من أنواع الخلايا الفردية في شبكية العين المعزولة عن طريق إضافة عوامل دوائية محددة وتقييم التغيرات الجوهرية للأنسجة بشكل مستقل عن التأثيرات الجهازية. يمكن قياس استجابات ضوء الشبكية باستخدام حامل عينة ERG متخصص خارج الجسم الحي وإعداد التسجيل ، ويتم تعديله من مشبك التصحيح الحالي أو معدات صفيف الأقطاب الكهربائية الدقيقة. على وجه الخصوص ، تم إعاقة دراسة الخلايا ثنائية القطب ON ، ولكن أيضا المستقبلات الضوئية ، بسبب الانخفاض البطيء ولكن التدريجي لاستجابات الضوء في ERG خارج الجسم الحي بمرور الوقت. تعمل زيادة سرعة التروية وتعديل درجة حرارة النفاذية على تحسين وظيفة الشبكية خارج الجسم الحي وزيادة سعة الاستجابة والاستقرار. يسمح ERG خارج الجسم الحي بشكل فريد بدراسة أنواع الخلايا العصبية الشبكية الفردية. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح التحسينات لزيادة سعة الاستجابة والاستقرار إلى أقصى حد بالتحقيق في استجابات الضوء في عينات شبكية العين من الحيوانات الكبيرة ، وكذلك عيون المتبرعين من البشر ، مما يجعل ERG خارج الجسم الحي إضافة قيمة إلى ذخيرة التقنيات المستخدمة للتحقيق في وظيفة الشبكية.

خارج الجسم الحي يتيح ERG تسجيل مستقبلات ضوئية قابلة للتكرار ومستقرة واستجابات ضوء الخلية ثنائية القطب ON-القطب ، على سبيل المثال ، من شبكية العين (الشكل 2A-C). يمكن تسجيل استجابات المستقبلات الضوئية من شبكية العين من متبرع بشري مع تأخير يصل إلى 5 ساعات بع?...

Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

إن تعديل مجموعة الأقطاب المتعددة أو معدات مشبك التصحيح الحالية يجعل مخطط كهربية الشبكية خارج الجسم الحي متاحا على نطاق أوسع. تسهل الطرق المحسنة لتسجيل استجابات الضوء خارج الجسم الحي والحفاظ عليها دراسة وظيفة مستقبلات الضوء والخلايا ثنائية القطب في شبكية العين السليمة ، والنماذج الحيوانية لأمراض العيون ، وشبكية العين من متبرع بشري.

تحسين الإعداد والظروف لمخطط كهربية الشبكية خارج الجسم الحي لدراسة وظيفة شبكية العين في العيون الصغيرة والكبيرة

Measurements of retinal neuronal light responses are critical to investigating the physiology of the healthy retina, determining pathological changes in ...

يوضح هذا البروتوكول الشروط اللازمة للحفاظ على وظيفة الشبكية في ERG خارج الجسم الحي ، وخاصة الموجة B الحساسة للغاية التي تنتجها خلايا ON-bipolar. باستخدام ex vivo ERG ، يمكننا قياس وظيفة أنواع مختلفة من الخلايا العصبية في شبكية العين مع نسبة إشارة عالية إلى الضوضاء مع السماح بإدخال العوامل الدوائية بسهولة. هذه الطريقة قابلة بشكل خاص لتحديد فعالية العوامل الدوائية على وظيفة الشبكية والمرض.للبدء ، قم بتحويل إعداد صفيف متعدد الأقطاب الكهربائية عن طريق توصيل حامل عينة ERG خارج الجسم الحي بمكبر صوت تفاضلي عبر ضاليعة. يجب توصيل مكبر الصوت بالإدخال التناظري للوحة الواجهة لنظام الصفيف متعدد الأقطاب الكهربائية. استخدم برنامج التسجيل للصفيف متعدد الأقطاب الكهربائية لتسجيل وتخزين بيانات الإدخال من ex vivo ERG.اضبط كسب مكبر الصوت التفاضلي على 100 وأضف تضخيم جهد إضافي 10X ، اعتمادا على مواصفات محول الأرقام الرقمية. اضبط مرشح التمرير المنخفض على 100 هرتز. بدلا من ذلك ، لتحويل إعداد مشبك التصحيح ، قم بتوصيل حامل عينة ERG خارج الجسم الحي عبر مرحلة متقدمة بمكبر صوت تفاضلي ، والذي يجب توصيله بمرحلة مضخم مشبك التصحيح.استخدم برنامج نظام مشبك التصحيح ومحول الأرقام لتسجيل وتخزين بيانات الإدخال من ex vivo ERG. اضبط المعلمات كما هو موضح سابقا. قم بتوصيل مصابيح LED بأطوال موجية مناسبة بالمجهر.للتحكم في محفزات الضوء ، استخدم برنامج تشغيل LED يتم التحكم فيه بواسطة مخرجات تناظرية من محول رقمي. تحكم في مصابيح LED باستخدام برنامج التسجيل الذي سيمكن من تشغيل محفزات الضوء. بعد ذلك ، قم بمعايرة ناتج الضوء لمصابيح LED في موضع شبكية العين في حامل العينة باستخدام الصمام الثنائي الضوئي.إذا لزم الأمر ، أدخل مرشحات الكثافة المحايدة لتعتيم شدة الضوء في مسار الضوء. لتحضير القطب ، أدخل قطب كهربائي من حبيبات كلوريد الفضة في موصل إغراء ملولب. املأ الجزء الداخلي من موصل الإغراء بالغراء الساخن ، وأدخل مقبس 2 ملم في الغراء الساخن من الجانب غير الملولب.لحام سلك فضي من القطب EP-1 إلى مقبس اثنين ملليمتر. قم بربط القطب النهائي بحلقة O على الخيط في منافذ القطب لحامل عينة ERG خارج الجسم الحي. بالنسبة للعيون الكبيرة ، بما في ذلك عيون المتبرعين بالبشر ، قم بتنظيف الكرة الأرضية من النسيج الضام المتبقي وإزالة الجزء الأمامي والعدسة.استخدم مشرطا لعمل قطع حوالي ثلاثة ملليمترات من الليمبوس. أدخل مقص تشريح منحني في الشق واقطعه على طول الحافة لإزالة الجزء الأمامي من العين بالعدسة. الحصول على عينات شبكية العين لتخطيط كهربية الشبكية خارج الجسم الحي مع لكمة خزعة يمكن التخلص منها من ثلاثة إلى ستة ملليمترات.لتركيب الأنسجة على حامل العينة ، ضع النصف السفلي من حامل العينة في طبق بتري كبير ، واملأه بوسط أميس المؤكسج بحيث تكون قبة حامل العينة مغمورة للتو. أمسك بعناية حافة الشبكية بالملقط الدقيق وانقل الشبكية إلى قبة حامل العينة خارج الجسم الحي ، وجانب المستقبلات الضوئية متجها لأعلى. ارفع حامل العينة من محلول أميس ، مع الحرص على بقاء شبكية العين في مكانها.جفف لوحة حامل العينة تماما لتقليل الضوضاء والحديث الكهربائي وتحويل الإشارة. ثم قم بتجميع نصفي حامل العينة بأربعة براغي وقم بتوصيل خط التروية. قم بقيادة القطب في النصف السفلي من حامل العينة وقم بتوصيل كابل الأنود بجانب الشبكية الداخلي وكابل الكاثود بجانب المستقبلات الضوئية.قم بتزويد حامل العينة بما لا يقل عن ملليلتر واحد في الدقيقة من وسط Ames المؤكسج لمدة 10 إلى 20 دقيقة للسماح باستقرار استجابات الضوء. مكن Ex vivo ERG من تسجيل المستقبلات الضوئية واستجابات ضوء الخلية ثنائية القطب من شبكية الفأر. كان تسجيل استجابات المستقبلات الضوئية من شبكية العين من متبرع بشري ممكنا مع تأخير يصل إلى خمس ساعات بعد الوفاة من الاستئصال وأقل من 20 دقيقة تأخير لاستجابات الخلايا ثنائية القطب ON.في ظل الظروف المثالية ، كانت سعة الاستجابة والحركية في كلا النوعين من الخلايا مستقرة نسبيا بمرور الوقت ، لكنها أظهرت انخفاضا بطيئا بعد 40 إلى 45 دقيقة من تركيب شبكية العين على حامل العينة. أدى انخفاض درجة الحرارة في حامل العينة إلى إبطاء حركية كل من مستقبلات الصور والخلايا ثنائية القطب ON. ومع ذلك ، فقد قلل من سعة الموجة B ولكن ليس الموجة A.على العكس من ذلك ، أدى إبطاء معدل الإرواء إلى تقليل سعة كل من مستقبلات الصورة واستجابات الخلايا ثنائية القطب ON-القطب، ولكنه لم يؤثر على الوقت الضمني للموجة A أو B. أدى وقف التروية لمدة 10 دقائق متبوعا بإعادة التروية إلى فقدان كامل لوظيفة الخلية ثنائية القطب مع استجابات مستقبلات ضوئية محفوظة. تعد سرعة التروية الكافية ودرجة الحرارة الفسيولوجية أمرا بالغ الأهمية للحصول على استجابات مستقرة ، على وجه الخصوص ، من الخلايا ثنائية القطب ON-القطب.يسمح هذا البروتوكول بالاستكشاف المتعمق للاختلافات في وظيفة المستقبلات الضوئية في البقعة الصفراء البشرية والأطراف ، والإجابة على الأسئلة التي لم يكن من الممكن إجراؤها في السابق إلا في الرئيسيات غير البشرية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

التلاعب الجيني للمخيخي الحبيبة الخلايا العصبية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية والهجرة

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

الماوس الدماغ المؤخر<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الثقافة لدراسة الهجرة Branchiomotor الوجه العصبية

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

فيفو السابقين الاستعدادات للالميكعي الجهاز سليمة والإكسسوار الشم لمبة

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

النظام الشمي كنموذج لدراسة أنماط نمو محور عصبي ومورفولوجيا<em&gt; في فيفو</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

باستخدام مخطط كهربية لتقييم وظيفة في القوارض الشبكية وتأثيرات واقية من بعيد الاطراف الدماغية شروط مسبقة

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

متزامنة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; اختبار وظيفي اثنين من شبكية العين من قبل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نظام مخطط كهربية

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

تقنيات زراعة الكلب في الحيوانات الكبيرة والصغيرة

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

في فيفو طرق لتقييم خلية العقدة الشبكية ووظيفة العصب البصري وهيكل في الحيوانات الكبيرة

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

في الجسم الحي قراءات إصابة الأوعية الدموية في شبكية الفأر لتعزيز التكاثر

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...