Name: optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes
Uploaded: 2022-06-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המכון הלאומי לעיניים EY02665 ו- EY031706 והקרן הבינלאומית לחקר הרשתית לד"ר וינברג, מענק הליבה של המכונים הלאומיים לבריאות (EY014800), ומענק בלתי מוגבל ממחקר למניעת עיוורון, ניו יורק, ניו יורק, למחלקה לרפואת עיניים ומדעי הראייה, אוניברסיטת יוטה. ד"ר פרנס וינברג זכה גם בפרס מחקר למניעת עיוורון / פרס פיתוח הקריירה החופשית של ד"ר ה. ג'יימס וקרול, וד"ר סילקה בקר ממענק ARVO EyeFind. אנו מודים לד"ר אן הנקן ממכון המחקר סקריפס על כך שסיפקה את עין התורם המשמשת להקלטות המוצגות באיור 2E.

כל הניסויים בעכברים נערכו בהתאם למדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית למחקרים בבעלי חיים באוניברסיטת יוטה. עיני חזיר להדגמת הסרטון הזה הושגו לאחר המוות מבית המטבחיים (משאבי חזירים בני קיימא, ג'ונסוןוויל). העיניים התקבלו מתורמים אנושיים לאחר מוות מוחי או לבבי בהס...

<ol>
	<li>Perlman, I., Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. , (1995).</li><li>Bonezzi, P. J., Tarchick, M. J., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+electroretinograms+made+easy:+performing+ERGs+using+3D+printed+components.">Ex vivo electroretinograms made easy: performing ERGs using 3D printed components.</a> Journal of Physiology. 598 (21), 4821-4842 (2020).</li><li>Vinberg, F., Kefalov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+ex+vivo+functional+testing+of+two+retinas+by+in+vivo+electroretinogram+system.">Simultaneous ex vivo functional testing of two retinas by in vivo electroretinogram system.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52855 (2015).</li><li>Heckenlively, J. R., Arden, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practice of Clinical Electrophysiology of Vision. , (2006).</li><li>Vinberg, F., Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+ERG+analysis+of+photoreceptors+using+an+in+vivo+ERG+system.">Ex vivo ERG analysis of photoreceptors using an in vivo ERG system.</a> Vision Research. 101, 108-117 (2014).</li><li>Winkler, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+the+fast+and+slow+components+of+P3+of+the+electroretinogram+of+the+isolated+rat+retina.">Calcium and the fast and slow components of P3 of the electroretinogram of the isolated rat retina.</a> Vision Research. 14 (1), 9-15 (1974).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dissection+of+the+electroretinogram+from+the+isolated+rat+retina+with+microelectrodes+and+drugs.">A dissection of the electroretinogram from the isolated rat retina with microelectrodes and drugs.</a> Visual Neuroscience. 16 (4), 727-741 (1999).</li><li>Abbas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revival+of+light+signalling+in+the+postmortem+mouse+and+human+retina.">Revival of light signalling in the postmortem mouse and human retina.</a> Nature. , (2022).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+photoreceptors:+Mechanisms+underlying+changes+in+structure+and+function.">Diabetic photoreceptors: Mechanisms underlying changes in structure and function.</a> Visual Neuroscience. 37, (2020).</li><li>Kantola, L., Piccolino, M., Wade, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+light+on+the+retina:+Translation+and+commentary+of+Holmgren+(1866).">The action of light on the retina: Translation and commentary of Holmgren (1866).</a> Journal of the History of the Neurosciences. 28 (4), 399-415 (2019).</li><li>Frank, R. N., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodopsin+photoproducts:+effects+on+electroretinogram+sensitivity+in+isolated+perfused+rat+retina.">Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina.</a> Science. 161 (3840), 487-489 (1968).</li><li>Hamasaki, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+sodium+ion+concentration+on+the+electroretinogram+of+the+isolated+retina+of+the+frog.">The effect of sodium ion concentration on the electroretinogram of the isolated retina of the frog.</a> Journal of Physiology. 167 (1), 156-168 (1963).</li><li>Granit, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+components+of+the+retinal+action+potential+in+mammals+and+their+relation+to+the+discharge+in+the+optic+nerve.">The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve.</a> Journal of Physiology. 77 (3), 207-239 (1933).</li><li>Donner, K., Hemila, S., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-dependence+of+rod+photoresponses+from+the+aspartate-treated+retina+of+the+frog+(Rana+temporaria).">Temperature-dependence of rod photoresponses from the aspartate-treated retina of the frog (Rana temporaria).</a> Acta Physiologica Scandinavica. 134 (4), 535-541 (1988).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+properties+of+a+new+isolated+rat+retina+preparation.">Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation.</a> Vision Research. 39 (13), 2165-2177 (1999).</li><li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function.">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function.</a> Brain Research Protocols. 16 (1-3), 27-36 (2005).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+phototransduction+and+light+signal+transmission+during+type+2+diabetes.">Rod phototransduction and light signal transmission during type 2 diabetes.</a> BMJ Open Diabetes Research and Care. 8 (1), 001571 (2020).</li><li>Nymark, S., Haldin, C., Tenhu, H., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+measuring+free+drug+concentration:+retinal+tissue+as+a+biosensor.">A new method for measuring free drug concentration: retinal tissue as a biosensor.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (6), 2583-2588 (2006).</li><li>Winkler, B. S., Kapousta-Bruneau, N., Arnold, M. J., Green, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inhibiting+glutamine+synthetase+and+blocking+glutamate+uptake+on+b-wave+generation+in+the+isolated+rat+retina.">Effects of inhibiting glutamine synthetase and blocking glutamate uptake on b-wave generation in the isolated rat retina.</a> Visual Neuroscience. 16 (2), 345-353 (1999).</li></ol>

הוא פותח במקור בשנת 1865 על ידי הולמגרן כדי למדוד את תגובות האור ברשתית מהרשתיתהדו-חיים 10, אך אילוצים טכניים מנעו בתחילה שימוש נרחב ב-ERG. אף על פי כן, מחקרים ראשוניים של Ragnar Granit ואחרים זיהו את המקורות התאיים של ה-ERG ומדדו תגובות של תאים פוטורצפטורים ותאי ON-bipolar exvivo 11,12...

אלקטרורטינוגרפיה מודדת את תפקוד הרשתית בתגובה לאור1. הוא חלק בלתי נפרד מלימוד הפיזיולוגיה והפתופיזיולוגיה של הרשתית, ומדידת ההצלחה של טיפולים במחלות רשתית. ה- in vivo ERG נמצא בשימוש נרחב להערכת תפקוד הרשתית באורגניזמים שלמים, אך יש לו מגבלות משמעותיות 2,3. בין אלה, הניתוח הכמותי של סוגי תאי רשתית בודדים ב- in vivo ERG נפגע, שכן הוא רושם את סכום השינויים הפוטנציאליים, ולכן תגובות כיסוי, מכל תאי הרשתית לגירויים קלים4. יתר על כן, הוא אינו מאפשר בקלות תוספת של תרופות לרשתית, הוא פגיע להשפעות סיסטמיות, ויש לו יחס אות לרעש נמוך יחסית. חסרונות אלה מתבטלים ב- ex vivo ERG החוקר את תפקוד הרשתית המבודדת 2,3,5,6. ה- ex vivo ERG מאפשר הקלטה של תגובות גדולות ויציבות מסוגי תאי רשתית ספציפיים על ידי הוספת מעכבים פרמקולוגיים והערכה קלה של חומרים טיפוליים, אשר ניתן להוסיף לסופרפוזט. יחד עם זאת, הוא מסיר השפעות של השפעות מערכתיות ומבטל רעש פיזיולוגי (למשל, פעימות לב או נשימה).
ב- ex vivo ERG, רשתיות או דגימות רשתית מבודדות ומותקנות בצד הפוטורצפטור למעלה על הכיפה של מחזיק הדגימה 3,5. מחזיק הדגימה מורכב, מחובר למערכת זלוף המספקת לרשתית מדיה מחוממת ומחומצנת, ומונח על במת מיקרוסקופ, אשר שונה כדי לספק גירויי אור מבוקרי מחשב. כדי לתעד את התגובות שמעוררות האור, מחזיק הדגימה מחובר למגבר, לדיגיטייזר ולמערכת הקלטה (איור 1). טכניקה זו מאפשרת בידוד של תגובות מפוטורצפטורים של מוטות וחרוטים, תאי ON-bipolar ו-Müller glia על ידי שינוי הפרמטרים של גירויי האור והוספת חומרים פרמקולוגיים.
ניתן להמיר מהדק תיקון קיים או מערך רב-אלקטרודות (MEA) להקלטת ex vivo ERG, בשילוב עם מתאם ex vivo ERG זמין מסחרית או מחזיק דגימה מותאם אישית במכונה של מחשב פוליקרבונט (CNC), כדי למדוד את תגובות האור ברשתיות ממודלים של בעלי חיים קטנים, כגון עכברים. שינוי זה מגדיל את הנגישות של ex vivo ERG תוך מזעור הצורך בציוד מיוחד. העיצוב של מחזיק הדגימה מפשט את טכניקת ההרכבה ומשלב אלקטרודות, ומבטל את הצורך במניפולציה של מיקרואלקטרודות בהשוואהלשיטות ex vivo ERG שדווחו בעבר 7. קצב הזלוף והטמפרטורה בתוך בעל הדגימה הם גורמים חשובים המשפיעים על תכונות התגובה של פוטורצפטורים ותאי ON-bipolar. על ידי התאמת תנאים אלה, ניתן להקליט את ה- ex vivo ERG באופן אמין מרשתית העכבר המבודדת לאורך פרקי זמן ממושכים. תנאי ניסוי ממוטבים מאפשרים הקלטות ex vivo ERG באגרופים ברשתית מרשתיות גדולות יותר, כולל עיניים גדולות של בעלי חיים ועיניים של תורמים אנושיים8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mm socket</td>
			<td>WPI</td>
			<td>2026-10</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ag/AgCl Electrode</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>EP1</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ames&#39; medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1420</td>
			<td>perfusion media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>barium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0750</td>
			<td>potassium channel blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-AP4</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>0101</td>
			<td>broad spectrum glutamatergic antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OcuScience Ex Vivo ERG Adapter</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>n/a</td>
			<td>ex vivo ERG specimen holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded luer connector</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>51525K222 or 51525K223</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes

מדידות של תגובות אור עצביות ברשתית הן קריטיות לחקר הפיזיולוגיה של הרשתית הבריאה, לקביעת שינויים פתולוגיים במחלות רשתית ולבדיקת התערבויות טיפוליות. האלקטרורטינוגרמה ex vivo (ERG) מאפשרת כימות של תרומות מסוגי תאים בודדים ברשתית המבודדת על ידי הוספת חומרים פרמקולוגיים ספציפיים והערכה של שינויים פנימיים ברקמה ללא תלות בהשפעות מערכתיות. ניתן למדוד את תגובות אור הרשתית באמצעות מחזיק דגימת ex vivo ERG מיוחד ומערך הקלטה, ששונה מציוד קיים של מהדק טלאי או מערך מיקרואלקטרודה. במיוחד, המחקר של תאים דו-קוטביים על-קוטביים, אך גם של פוטורצפטורים, נפגע על ידי הירידה האיטית אך המתקדמת של תגובות האור ב-ex vivo ERG לאורך זמן. מהירות זלוף מוגברת והתאמת טמפרטורת ההפרשה משפרים את תפקוד הרשתית ex vivo וממקסמים את משרעת התגובה והיציבות. ה- ex vivo ERG מאפשר באופן ייחודי לחקור סוגי תאים עצביים ברשתית בודדים. בנוסף, שיפורים למקסום אמפליטודות התגובה והיציבות מאפשרים לחקור תגובות אור בדגימות רשתית מבעלי חיים גדולים, כמו גם מעיני תורמים אנושיים, מה שהופך את ה- ex vivo ERG לתוספת רבת ערך לרפרטואר הטכניקות המשמשות לחקר תפקוד הרשתית.

אקס ויוו ERG מאפשר הקלטה של תגובות אור פוטורצפטור ותאים דו-קוטביים הניתנים לשחזור ויציבות, לדוגמה, מרשתית העכבר (איור 2A-C). הקלטה של תגובות פוטורצפטור מרשתיות של תורמים אנושיים אפשרית עם עיכוב של עד 5 שעות לאחר המוות של אנוקלציה (איור 2D) ?...

Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

שינוי של מערך multielectrode קיים או ציוד מהדק תיקון עושה את ex vivo electroretinogram נגיש יותר. שיטות משופרות לתיעוד ושמירה על תגובות אור ex vivo מקלות על חקר תפקוד התאים הפוטורצפטורים וה-ON-דו-קוטביים ברשתית הבריאה, מודלים של בעלי חיים של מחלות עיניים ורשתיות של תורמים אנושיים.

אופטימיזציה של ההגדרה והתנאים עבור אלקטרורטינוגרמה של Ex Vivo כדי לחקור את תפקוד הרשתית בעיניים קטנות וגדולות

Measurements of retinal neuronal light responses are critical to investigating the physiology of the healthy retina, determining pathological changes in ...

פרוטוקול זה מדגים את התנאים הדרושים לשמירה על תפקוד הרשתית ב- ex vivo ERG, במיוחד גל B הרגיש ביותר המיוצר על ידי תאי ON-bipolar. עם ex vivo ERG, אנו יכולים למדוד את התפקוד של סוגים שונים של נוירונים ברשתית עם יחס אות לרעש גבוה תוך מתן אפשרות להכנסה קלה של סוכנים פרמקולוגיים. שיטה זו מקובלת במיוחד לכימות היעילות של חומרים פרמקולוגיים על תפקוד הרשתית ומחלות.כדי להתחיל, המירו מערך רב-אלקטרודות על ידי חיבור מחזיק הדגימה ex vivo ERG למגבר דיפרנציאלי באמצעות במת ראש. יש לחבר את המגבר לכניסה האנלוגית של לוח הממשק של מערכת המערך מרובת האלקטרודות. השתמש בתוכנת ההקלטה עבור מערך האלקטרודות המרובות כדי להקליט ולאחסן את נתוני הקלט מ- ex vivo ERG.הגדר את הרווח של מגבר הדיפרנציאל ל-100 והוסף הגברה נוספת של מתח פי 10, בהתאם למפרט הדיגיטייזר. הגדר את מסנן המעבר הנמוך ל- 100 הרץ. לחלופין, כדי להמיר מערך מהדק טלאי, חבר את מחזיק הדגימה ex vivo ERG באמצעות במת ראש למגבר דיפרנציאלי, אשר חייב להיות מחובר לבמת הראש של מגבר מהדק התיקון.השתמש בתוכנת מערכת מהדק התיקון ובדיגיטציה כדי להקליט ולאחסן את נתוני הקלט מ- ex vivo ERG. הגדר את הפרמטרים כפי שהוצג קודם לכן. חבר נורות LED עם אורכי הגל המתאימים למיקרוסקופ.כדי לשלוט בגירויים של אור, השתמש בדרייבר LED הנשלט על-ידי יציאות אנלוגיות מדיגיטייזר. שלוט בנורות ה- LED באמצעות תוכנת הקלטה שתאפשר הפעלה של גירויים קלים. לאחר מכן, כייל את תפוקת האור של נוריות ה-LED במיקום הרשתית במחזיק הדגימה באמצעות פוטודיודה.במידת הצורך, הכנס מסנני צפיפות ניטרליים כדי לעמעם את עוצמת האור בנתיב האור. כדי להכין את האלקטרודה, הכנס אלקטרודת גלולת כסף כסופה כלוריד למחבר פיתיון מושחל. מלא את החלק הפנימי של מחבר הפיתיון בדבק חם, והכנס שקע של שני מילימטרים לתוך הדבק החם מהצד שאינו מושחל.הלחמה חוט כסף של אלקטרודת EP-1 לשקע שני המילימטרים. הברג את האלקטרודה המוגמרת עם טבעת O על החוט ליציאות האלקטרודה של מחזיק הדגימה ex vivo ERG. עבור עיניים גדולות, כולל עיניים תורמות אנושיות, נקה את הגלובוס של רקמת החיבור הנותרת והסר את החלק הקדמי ואת העדשה.השתמש באזמל כדי לבצע חתך כשלושה מילימטרים מהלימבוס. הכנס מספריים דיסקציה מעוקלים לתוך החתך לחתוך לאורך הלימבוס כדי להסיר את החלק הקדמי של העין עם העדשה. השג דגימות רשתית עבור אלקטרורטינוגרפיה ex vivo עם אגרוף ביופסיה חד פעמית של שלושה עד שישה מילימטרים.כדי להרכיב את הרקמה על מחזיק הדגימה, הניחו את החצי התחתון של מחזיק הדגימה לתוך צלחת פטרי גדולה, ומלאו אותה במדיום איימס מחומצן כך שהכיפה של מחזיק הדגימה פשוט שקועה. תופסים בזהירות את קצה הרשתית עם מלקחיים עדינים ומעבירים את הרשתית על הכיפה של מחזיק הדגימה ex vivo, צד הפוטורצפטור פונה כלפי מעלה. הרם את מחזיק הדגימה מהפתרון של איימס, ודאג שהרשתית תישאר במקומה.ייבש לחלוטין את הצלחת של מחזיק הדגימה כדי למזער רעשים, crosstalk חשמלי, ו shunting אותות. לאחר מכן הרכיבו את שני חצאי מחזיק הדגימה עם ארבעה ברגים וחברו את קו הזליפה. להניע את האלקטרודה בחצי התחתון של מחזיק הדגימה ולחבר את כבל האנודה לצד הרשתית הפנימית ואת כבל הקתודה לצד הפוטורצפטור.השתמשו במחזיק הדגימה עם לפחות מיליליטר אחד לדקה של איימס מחומצן למשך 10 עד 20 דקות כדי לאפשר לתגובות האור להתייצב. Ex vivo ERG אפשר הקלטה של תגובות אור פוטורצפטור ותאי ON-דו-קוטביות מרשתית העכבר. הקלטה של תגובות פוטורצפטורים מרשתיות של תורמים אנושיים הייתה אפשרית עם עיכוב של עד חמש שעות לאחר המוות של enucleation ועיכוב של פחות מ-20 דקות עבור תגובות תאים ON-bipolar.בתנאים אידיאליים, אמפליטודות התגובה והקינטיקה בשני סוגי התאים היו יציבות יחסית לאורך זמן, אך הראו ירידה איטית 40 עד 45 דקות לאחר שהרשתיות הורכבו על מחזיק הדגימה. טמפרטורה מופחתת במחזיק הדגימה האטה מאוד את הקינטיקה של קולטני פוטו ותאי ON-bipolar. עם זאת, הוא הפחית את המשרעת של גל B אך לא את גל A.לעומת זאת, האטת קצב הזליפה הפחיתה את המשרעת של תגובות קולטני הצילום ותאי ON-bipolar, אך לא השפיעה על הזמן המרומז של גל A או B. הפסקת הזליפה למשך 10 דקות ולאחריה רפרפוזיה הביאה לאובדן מוחלט של תפקוד התאים הדו-קוטביים עם תגובות פוטורצפטור משומרות. מהירות זלוף מספקת וטמפרטורה פיזיולוגית הן קריטיות לקבלת תגובות יציבות, בפרט, מתאים ON-bipolar ב- ex vivo ERG.פרוטוקול זה מאפשר לחקור לעומק את ההבדלים בתפקוד הפוטורצפטור במקולרי ובפריפריה האנושית, תוך מענה על שאלות שבעבר יכלו להתבצע רק בפרימטים שאינם אנושיים.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

מניפולציה גנטית של Cerebellar גרגיר נוירונים<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; בVivo</em&gt; ללמוד עצבי מורפולוגיה וגירה

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

עכבר המוח האחורי<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבות לחקר הגירת Branchiomotor Neuron פנים

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

מערכת חוש הריח כמודל לחקר דפוסי axonal צמיחה ומורפולוגיה<em&gt; In vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

שימוש בelectroretinogram כדי להעריך את התפקוד ברשתית מכרסמים וההשפעות המגנות של האיבר המרוחק איסכמי אכשור קד

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

בו זמנית<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; בדיקות פונקציונליות של שתי הרשתיות על ידי<em&gt; In vivo</emמערכת electroretinogram&gt;

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

כלבת נקרומה טכניקות בעלי חיים גדולים וקטנים

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

ב-Vivo שיטות להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In vivo קריאות פגיעה בכלי דם ברשתית העכבר כדי לקדם את יכולת השחזור

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...