Name: optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes
Uploaded: 2022-06-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Göz Enstitüsü'nün Dr. Vinberg'e EY02665 ve EY031706 ve Uluslararası Retinal Araştırma Vakfı, Ulusal Sağlık Enstitüleri Çekirdek Hibe (EY014800) ve New York, NY'daki Körlüğü Önleme Araştırmalarından Utah Üniversitesi Oftalmoloji ve Görsel Bilimler Bölümü'ne Sınırsız Hibe ile desteklenmiştir. Dr. Frans Vinberg ayrıca Körlüğü Önleme Araştırması / Dr. H. James ve Carole Ücretsiz Kariyer Geliştirme Ödülü ve ARVO EyeFind hibesinden Dr. Silke Becker'in de sahibidir. Scripps Araştırma Enstitüsü'nden Dr. Anne Hanneken'e, Şekil 2E'de gösterilen kayıtlar için kullanılan donör gözünü sağladığı için teşekkür ederiz.

Fareleri kullanan tüm deneyler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Kılavuzuna uygun olarak gerçekleştirildi ve Utah Üniversitesi Kurumsal Hayvan Çalışmaları Komitesi tarafından onaylandı. Bu videonun gösterimi için domuz gözleri, mezbahadan (Sürdürülebilir Domuz Kaynakları, Johnsonville) ölüm sonrası elde edildi. Gözler, FDA, Organ Satın Alma Kuruluşları Birliği (AOPO) ve Amerika Göz Bankaları Birliği tarafından tamamen akredite edilmiş olan Utah Lions Göz Bankas...

<ol>
	<li>Perlman, I., Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. , (1995).</li><li>Bonezzi, P. J., Tarchick, M. J., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+electroretinograms+made+easy:+performing+ERGs+using+3D+printed+components.">Ex vivo electroretinograms made easy: performing ERGs using 3D printed components.</a> Journal of Physiology. 598 (21), 4821-4842 (2020).</li><li>Vinberg, F., Kefalov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+ex+vivo+functional+testing+of+two+retinas+by+in+vivo+electroretinogram+system.">Simultaneous ex vivo functional testing of two retinas by in vivo electroretinogram system.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52855 (2015).</li><li>Heckenlively, J. R., Arden, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practice of Clinical Electrophysiology of Vision. , (2006).</li><li>Vinberg, F., Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+ERG+analysis+of+photoreceptors+using+an+in+vivo+ERG+system.">Ex vivo ERG analysis of photoreceptors using an in vivo ERG system.</a> Vision Research. 101, 108-117 (2014).</li><li>Winkler, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+the+fast+and+slow+components+of+P3+of+the+electroretinogram+of+the+isolated+rat+retina.">Calcium and the fast and slow components of P3 of the electroretinogram of the isolated rat retina.</a> Vision Research. 14 (1), 9-15 (1974).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dissection+of+the+electroretinogram+from+the+isolated+rat+retina+with+microelectrodes+and+drugs.">A dissection of the electroretinogram from the isolated rat retina with microelectrodes and drugs.</a> Visual Neuroscience. 16 (4), 727-741 (1999).</li><li>Abbas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revival+of+light+signalling+in+the+postmortem+mouse+and+human+retina.">Revival of light signalling in the postmortem mouse and human retina.</a> Nature. , (2022).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+photoreceptors:+Mechanisms+underlying+changes+in+structure+and+function.">Diabetic photoreceptors: Mechanisms underlying changes in structure and function.</a> Visual Neuroscience. 37, (2020).</li><li>Kantola, L., Piccolino, M., Wade, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+light+on+the+retina:+Translation+and+commentary+of+Holmgren+(1866).">The action of light on the retina: Translation and commentary of Holmgren (1866).</a> Journal of the History of the Neurosciences. 28 (4), 399-415 (2019).</li><li>Frank, R. N., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhodopsin+photoproducts:+effects+on+electroretinogram+sensitivity+in+isolated+perfused+rat+retina.">Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina.</a> Science. 161 (3840), 487-489 (1968).</li><li>Hamasaki, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+sodium+ion+concentration+on+the+electroretinogram+of+the+isolated+retina+of+the+frog.">The effect of sodium ion concentration on the electroretinogram of the isolated retina of the frog.</a> Journal of Physiology. 167 (1), 156-168 (1963).</li><li>Granit, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+components+of+the+retinal+action+potential+in+mammals+and+their+relation+to+the+discharge+in+the+optic+nerve.">The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve.</a> Journal of Physiology. 77 (3), 207-239 (1933).</li><li>Donner, K., Hemila, S., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-dependence+of+rod+photoresponses+from+the+aspartate-treated+retina+of+the+frog+(Rana+temporaria).">Temperature-dependence of rod photoresponses from the aspartate-treated retina of the frog (Rana temporaria).</a> Acta Physiologica Scandinavica. 134 (4), 535-541 (1988).</li><li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+properties+of+a+new+isolated+rat+retina+preparation.">Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation.</a> Vision Research. 39 (13), 2165-2177 (1999).</li><li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function.">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function.</a> Brain Research Protocols. 16 (1-3), 27-36 (2005).</li><li>Becker, S., Carroll, L. S., Vinberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+phototransduction+and+light+signal+transmission+during+type+2+diabetes.">Rod phototransduction and light signal transmission during type 2 diabetes.</a> BMJ Open Diabetes Research and Care. 8 (1), 001571 (2020).</li><li>Nymark, S., Haldin, C., Tenhu, H., Koskelainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+measuring+free+drug+concentration:+retinal+tissue+as+a+biosensor.">A new method for measuring free drug concentration: retinal tissue as a biosensor.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (6), 2583-2588 (2006).</li><li>Winkler, B. S., Kapousta-Bruneau, N., Arnold, M. J., Green, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inhibiting+glutamine+synthetase+and+blocking+glutamate+uptake+on+b-wave+generation+in+the+isolated+rat+retina.">Effects of inhibiting glutamine synthetase and blocking glutamate uptake on b-wave generation in the isolated rat retina.</a> Visual Neuroscience. 16 (2), 345-353 (1999).</li></ol>

İlk olarak 1865 yılında Holmgren tarafından amfibi retina10'dan retinal ışık tepkilerini ölçmek için geliştirilen teknik kısıtlamalar başlangıçta ERG'nin yaygın olarak kullanılmasını engelledi. Bununla birlikte, Ragnar Granit ve diğerleri tarafından yapılan seminal çalışmalar, ERG'nin hücresel kökenlerini tanımladı ve fotoreseptör ve ON-bipolar hücre yanıtlarını ex vivo 11,12,13 olarak...

Elektroretinografi, ışığa yanıt olarak retina fonksiyonunu ölçer1. Retina fizyolojisi ve patofizyolojisini incelemek ve retina hastalıkları için tedavilerin başarısını ölçmek için ayrılmaz bir bütündür. İn vivo ERG, bozulmamış organizmalarda retina fonksiyonunu değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır, ancak önemli sınırlamaları vardır 2,3. Bunlar arasında, in vivo ERG'deki bireysel retinal hücre tiplerinin kantitatif analizi, tüm retinal hücrelerden ışık uyaranlarına kadar potansiyel değişikliklerin toplamını ve dolayısıyla üst üste binen tepkileri kaydettiği için engellenmektedir4. Ayrıca, retinaya ilaç eklenmesine kolayca izin vermez, sistemik etkilere karşı savunmasızdır ve nispeten düşük bir sinyal-gürültü oranına sahiptir. Bu dezavantajlar, izole retina 2,3,5,6'nın işlevini araştıran ex vivo ERG'de ortadan kaldırılmıştır. Exvivo ERG, farmakolojik inhibitörlerin eklenmesi ve süperfüzyona eklenebilen terapötik ajanların kolay değerlendirilmesi ile spesifik retinal hücre tiplerinden büyük ve stabil yanıtların kaydedilmesini sağlar. Aynı zamanda, sistemik etkilerin etkilerini ortadan kaldırır ve fizyolojik gürültüyü (örneğin, kalp atışı veya solunum) ortadan kaldırır.
Ex vivo ERG'de, retinalar veya retinal örnekler izole edilir ve numune tutucu 3,5'in kubbesi üzerinde fotoreseptör tarafı yukarı doğru monte edilir. Numune tutucu monte edilir, retinaya ısıtılmış, oksijenli ortam sağlayan bir perfüzyon sistemine bağlanır ve bilgisayar kontrollü ışık uyaranları vermek için modifiye edilmiş bir mikroskop sahnesine yerleştirilir. Işığın ortaya çıkardığı tepkileri kaydetmek için, numune tutucu bir amplifikatöre, sayısallaştırıcıya ve kayıt sistemine bağlanır (Şekil 1). Bu teknik, ışık uyaranlarının parametrelerini değiştirerek ve farmakolojik ajanlar ekleyerek çubuk ve koni fotoreseptörlerinden, ON-bipolar hücrelerden ve Müller glia'dan gelen yanıtların izole edilmesini sağlar.
Mevcut bir yama kelepçesi veya çoklu elektrot dizisi (MEA) kurulumu, fareler gibi küçük hayvan modellerinden retinalardaki ışık tepkilerini ölçmek için piyasada satılan bir ex vivo ERG adaptörü veya özel bir polikarbonat bilgisayar sayısal kontrol (CNC) ile işlenmiş numune tutucu ile birlikte ex vivo ERG'yi kaydetmek için dönüştürülebilir. Bu değişiklik, ex vivo ERG'nin erişilebilirliğini artırırken, özel ekipman ihtiyacını en aza indirir. Numune tutucunun tasarımı, montaj tekniğini basitleştirir ve elektrotları entegre ederek, daha önce bildirilen transretinal ex vivo ERG yöntemlerine kıyasla mikroelektrotların manipülasyon ihtiyacını ortadan kaldırır7. Numune tutucunun içindeki perfüzyon hızı ve sıcaklık, fotoreseptörlerden ve ON-bipolar hücrelerden gelen yanıt özelliklerini etkileyen önemli faktörlerdir. Bu koşulları ayarlayarak, ex vivo ERG, izole fare retinasından uzun süre boyunca güvenilir bir şekilde kaydedilebilir. Optimize edilmiş deneysel koşullar, büyük hayvan gözleri ve insan donör gözleri de dahil olmak üzere daha büyük retinalardan retinal yumruklarda ex vivo ERG kayıtlarına izin verir8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mm socket</td>
			<td>WPI</td>
			<td>2026-10</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ag/AgCl Electrode</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>EP1</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ames&#39; medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1420</td>
			<td>perfusion media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>barium chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0750</td>
			<td>potassium channel blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-AP4</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>0101</td>
			<td>broad spectrum glutamatergic antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OcuScience Ex Vivo ERG Adapter</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>n/a</td>
			<td>ex vivo ERG specimen holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded luer connector</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>51525K222 or 51525K223</td>
			<td>materials to prepare electrode</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimizing the setup and conditions for ex vivo electroretinogram to study retina function in small and large eyes

Retinal nöronal ışık yanıtlarının ölçümleri, sağlıklı retinanın fizyolojisinin araştırılması, retina hastalıklarında patolojik değişikliklerin belirlenmesi ve terapötik müdahalelerin test edilmesi için kritik öneme sahiptir. Exvivo elektroretinogram (ERG), spesifik farmakolojik ajanların eklenmesi ve sistemik etkilerden bağımsız olarak doku-intrinsik değişikliklerin değerlendirilmesi yoluyla izole retinadaki bireysel hücre tiplerinin katkılarının ölçülmesine olanak tanır. Retinal ışık tepkileri, mevcut yama kelepçesi veya mikroelektrot dizisi ekipmanından modifiye edilmiş özel bir ex vivo ERG numune tutucu ve kayıt kurulumu kullanılarak ölçülebilir. Özellikle, ON-bipolar hücrelerin ve aynı zamanda fotoreseptörlerin incelenmesi, zaman içinde ex vivo ERG'deki ışık tepkilerinin yavaş ama ilerleyici düşüşü ile engellenmiştir. Artan perfüzyon hızı ve perfüzyon sıcaklığının ayarlanması, ex vivo retinal fonksiyonu iyileştirir ve yanıt genliğini ve stabilitesini en üst düzeye çıkarır. Exvivo ERG, bireysel retinal nöronal hücre tiplerinin incelenmesine benzersiz bir şekilde izin verir. Ek olarak, yanıt genliklerini ve stabilitesini en üst düzeye çıkarmaya yönelik iyileştirmeler, büyük hayvanlardan ve insan donör gözlerinden alınan retina örneklerinde ışık yanıtlarının araştırılmasına izin vererek, ex vivo ERG'yi retina fonksiyonunu araştırmak için kullanılan tekniklerin repertuarına değerli bir katkı sağlar.

Ex vivo ERG, örneğin fare retinasından tekrarlanabilir ve kararlı fotoreseptör ve ON-bipolar hücre ışık tepkilerinin kaydedilmesini sağlar (Şekil 2A-C). İnsan donör retinalarından fotoreseptör yanıtlarının kaydedilmesi, enükleasyonun 5 saate kadar postmortem gecikmesi (Şekil 2D) ve <20 dakika enükleasyon gecikmesi ile ON-bipolar hücre yanıtları ile mümkündür (Şekil 2E</st...

Watch this Scientific Journal Video about Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes at JoVE.com

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

Mevcut multielektrot dizisinin veya yama kelepçesi ekipmanının modifikasyonu, ex vivo elektroretinogramı daha yaygın olarak erişilebilir hale getirir. Exvivo ışık yanıtlarını kaydetmek ve sürdürmek için geliştirilmiş yöntemler, sağlıklı retinada, göz hastalıklarının hayvan modellerinde ve insan donör retinalarında fotoreseptör ve ON-bipolar hücre fonksiyonunun incelenmesini kolaylaştırır.

Ex Vivo Elektroretinogramın Küçük ve Büyük Gözlerde Retina Fonksiyonunu İncelemesi için Kurulum ve Koşulların Optimize Edilmesi

Measurements of retinal neuronal light responses are critical to investigating the physiology of the healthy retina, determining pathological changes in ...

Bu protokol, ex vivo ERG'de retina fonksiyonunu korumak için gereken koşulları, özellikle de ON-bipolar hücreler tarafından üretilen son derece hassas B dalgasını göstermektedir. Ex vivo ERG ile, farmakolojik ajanların kolayca tanıtılmasına izin verirken, yüksek sinyal-gürültü oranına sahip farklı retinal nöron tiplerinin işlevini ölçebiliriz. Bu yöntem özellikle farmakolojik ajanların retina fonksiyonu ve hastalığı üzerindeki etkinliğini ölçmek için uygundur.Başlamak için, ex vivo ERG numune tutucuyu bir başlık aracılığıyla bir diferansiyel amplifikatöre bağlayarak çok elektrotlu bir dizi kurulumunu dönüştürün. Amplifikatör, çoklu elektrot dizi sisteminin arayüz kartının analog girişine takılmalıdır. ex vivo ERG'den giriş verilerini kaydetmek ve depolamak için çoklu elektrot dizisinin kayıt yazılımını kullanın.Diferansiyel amplifikatörün kazancını 100'e ayarlayın ve sayısallaştırıcı özelliklerine bağlı olarak ek bir 10X voltaj amplifikasyonu ekleyin. Düşük geçiş filtresini 100 hertz olarak ayarlayın. Alternatif olarak, bir yama kelepçesi kurulumunu dönüştürmek için, ex vivo ERG numune tutucuyu bir far aracılığıyla yama kelepçesi amplifikatörünün baş kısmına bağlanması gereken bir diferansiyel amplifikatöre bağlayın.ex vivo ERG'den giriş verilerini kaydetmek ve depolamak için yama kelepçe sistemi yazılımını ve sayısallaştırıcıyı kullanın. Parametreleri daha önce gösterildiği gibi ayarlayın. Uygun dalga boylarına sahip LED'leri mikroskopa bağlayın.Işık uyaranlarını kontrol etmek için, bir sayısallaştırıcıdan analog çıkışlarla kontrol edilen bir LED sürücü kullanın. LED'leri, ışık uyaranlarının tetiklenmesini sağlayacak kayıt yazılımı ile kontrol edin. Ardından, LED'lerin ışık çıkışını bir fotodiyot kullanarak numune tutucudaki retina konumunda kalibre edin.Gerekirse, ışık yolundaki ışık yoğunluğunu kısmak için nötr yoğunluk filtreleri takın. Elektrodu hazırlamak için, dişli bir yem konektörüne gümüş gümüş klorür pelet elektrodu yerleştirin. Yem konektörünün içini sıcak tutkalla doldurun ve dişli olmayan taraftan sıcak tutkalın içine iki milimetrelik bir soket takın.EP-1 elektrodunun gümüş telini iki milimetrelik sokete lehimleyin. Bitmiş elektrotu diş üzerinde bir O-ring ile ex vivo ERG numune tutucunun elektrot portlarına vidalayın. İnsan donör gözleri de dahil olmak üzere büyük gözler için, kalan bağ dokusunun küresini temizleyin ve ön segmenti ve lensi çıkarın.Limbustan yaklaşık üç milimetre kesim yapmak için bir neşter kullanın. Kavisli diseksiyon makasını kesiye yerleştirin ve gözün ön kısmını lensle çıkarmak için limbüs boyunca kesin. Üç ila altı milimetre tek kullanımlık biyopsi punch ile ex vivo elektroretinografi için retinal örnekler alın.Dokuyu numune tutucuya monte etmek için, numune tutucunun alt yarısını büyük bir Petri kabına yerleştirin ve numune tutucunun kubbesi sadece suya batırılacak şekilde oksijenli Ames'medium ile doldurun. Retinanın kenarını ince forsepslerle dikkatlice kavrayın ve retinayı ex vivo numune tutucunun kubbesi, fotoreseptör tarafı yukarı bakacak şekilde aktarın. Retinanın yerinde kalmasına dikkat ederek numune tutucuyu Ames çözeltisinden kaldırın.Gürültüyü, elektriksel çapraz konuşmayı ve sinyal şöntünü en aza indirmek için numune tutucunun plakasını tamamen kurulayın. Daha sonra numune tutucunun her iki yarısını dört vidayla birleştirin ve perfüzyon hattını bağlayın. Elektrodu numune tutucunun alt yarısında sürün ve anot kablosunu iç retinal tarafa ve katot kablosunu fotoreseptör tarafına bağlayın.Işık tepkilerinin stabilize olmasına izin vermek için numune tutucuyu dakikada en az bir mililitre oksijenli Ames'medium ile 10 ila 20 dakika boyunca perfüze edin. Ex vivo ERG, fare retinasından fotoreseptör ve ON-bipolar hücre ışığı tepkilerinin kaydedilmesini sağladı. İnsan donör retinalarından fotoreseptör yanıtlarının kaydedilmesi, enükleasyonun beş saate kadar postmortem gecikmesi ve ON-bipolar hücre yanıtları için 20 dakikadan az gecikme ile mümkün olmuştur.İdeal koşullar altında, her iki hücre tipindeki yanıt genlikleri ve kinetiği zamanla nispeten kararlıydı, ancak retinalar numune tutucuya monte edildikten 40 ila 45 dakika sonra yavaş bir düşüş gösterdi. Numune tutucudaki düşük sıcaklık, hem foto reseptörlerin hem de ON-bipolar hücrelerin kinetiğini büyük ölçüde yavaşlattı. Bununla birlikte, B dalgasının genliğini azalttı, ancak A dalgasının değil.Tersine, perfüzyon hızını yavaşlatmak hem foto reseptörün hem de ON-bipolar hücre yanıtlarının genliklerini azalttı, ancak A veya B dalgasının örtük zamanını etkilemedi. Perfüzyonun 10 dakika boyunca kesilmesi ve ardından reperfüzyon, korunmuş fotoreseptör yanıtları ile ON-bipolar hücre fonksiyonunun tamamen kaybedilmesine neden oldu. Yeterli perfüzyon hızı ve fizyolojik sıcaklık, özellikle ex vivo ERG'deki ON-bipolar hücrelerden stabil yanıtlar elde etmek için kritik öneme sahiptir.Bu protokol, insan makula ve periferisindeki fotoreseptör fonksiyonundaki farklılıkların derinlemesine araştırılmasına izin verir ve daha önce sadece insan olmayan primatlarda gerçekleştirilebilecek soruları yanıtlar.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optimizing the Setup and Conditions for Ex Vivo Electroretinogram to Study Retina Function in Small and Large Eyes

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Serebellar Granül Nöronlar Genetik Manipülasyon<em&gt; In Vitro</em&gt; Ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Nöronal morfoloji ve Göç Eğitim için

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Fare Beyin<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kültür Yüz Branchiomotor Nöron Göç Eğitim için

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Bozulmamış Vomeronasal Organ ve Aksesuar Koku Ampul Ex Vivo Hazırlıklar

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Bir Model Olarak Koku Sistemi Akson Büyüme Modelleri ve Morfoloji Eğitim için<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

Kemirgen Retina ve Uzaktan Ekstremite İskemik Önkoşullamanın Koruyucu Etkileri Fonksiyonu Değerlendirmek Üzere elektroretinogram kullanma

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Eşzamanlı<em&gt; Ex vivo</emİki retina&gt; Fonksiyonel Test tarafından<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram Sistemi

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

Büyük ve küçük hayvanlarda kuduz Necropsy teknikleri

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

In Vivo Büyük Hayvanlarda Retina Ganglion Hücre ve Optik Sinir Fonksiyonu ve Yapısını Değerlendirme Yöntemleri

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...