Name: a high throughput microplate feeder assay for quantification of consumption in drosophila
Uploaded: 2021-06-14T15:00:00
Duration: 8 min 55 s
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इस काम को राष्ट्रीय नशीली दवाओं के दुरुपयोग पर संस्थान (U01 DA041613) से टीएफसीएम और आरआरएचए को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।

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	<li>Wong, R., Piper, M. D. W., Wertheim, B., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+food+intake+in+Drosophila.">Quantification of food intake in Drosophila.</a> PLoS ONE. 4 (6), (2009).</li><li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases.">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 9 (3), 235-244 (2016).</li><li>Spitaler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+species+affects+feeding+and+fitness+of+Drosophila+suzukii+adults.">Yeast species affects feeding and fitness of Drosophila suzukii adults.</a> Journal of Pest Science. 93 (4), 1295-1309 (2020).</li><li>Wang, Q. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGC1&#945;+controls+sucrose+taste+sensitization+in+Drosophila.">PGC1&#945; controls sucrose taste sensitization in Drosophila.</a> Cell Reports. 31 (1), 107480 (2020).</li><li>Valtierra-de-Luis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+dose-mortality+responses+in+adult+Diptera:+Validation+using+Ceratitis+capitata+and+Drosophila+suzukii+responses+to+spinosad.">Quantification of dose-mortality responses in adult Diptera: Validation using Ceratitis capitata and Drosophila suzukii responses to spinosad.</a> PLoS ONE. 14 (2), 1-11 (2019).</li><li>Williams, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bisphenol+A+affects+lipid+metabolism+in+Drosophila+melanogaster.">Exposure to bisphenol A affects lipid metabolism in Drosophila melanogaster.</a> Basic &amp; Clinical Pharmacology &amp; Toxicology. 114 (5), 414-420 (2014).</li><li>Jajoo, A., Donlon, C., Shnayder, S., Levin, M., McVey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sertraline+induces+DNA+damage+and+cellular+toxicity+in+Drosophila+that+can+be+ameliorated+by+antioxidants.">Sertraline induces DNA damage and cellular toxicity in Drosophila that can be ameliorated by antioxidants.</a> Scientific Reports. 10 (1), 1-12 (2020).</li><li>Fochler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+alcohol+consumption+in+Drosophila+melanogaster.">Genetics of alcohol consumption in Drosophila melanogaster.</a> Genes, Brain and Behavior. 16 (7), 675-685 (2017).</li><li>Highfill, C. 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W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (20), 8253-8256 (2007).</li><li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+feeding+assay+in+adult+Drosophila+reveals+rapid+modulation+of+food+ingestion+by+its+nutritional+value.">A quantitative feeding assay in adult Drosophila reveals rapid modulation of food ingestion by its nutritional value.</a> Molecular Brain. 8 (1), 87 (2015).</li><li>Shiraiwa, T., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proboscis+extension+response+(PER)+assay+in+Drosophila.">Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (3), e193 (2007).</li><li>Shell, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+solid+food+intake+in+Drosophila+via+consumption-excretion+of+a+dye+tracer.">Measurement of solid food intake in Drosophila via consumption-excretion of a dye tracer.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1-13 (2018).</li><li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excreta+quantification+(EX-Q)+for+longitudinal+measurements+of+food+intake+in+Drosophila.">Excreta quantification (EX-Q) for longitudinal measurements of food intake in Drosophila.</a> iScience. 23 (1), 100776 (2020).</li><li>Park, A., Tran, T., Atkinson, N. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Taste+circuit+that+regulates+ingestion+by+integrating+food+and+hunger+signals.">A Taste circuit that regulates ingestion by integrating food and hunger signals.</a> Cell. 165 (3), 715-729 (2016).</li><li>Jaime, M. D. L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+high-throughput+WAFFL+system+for+treating+and+monitoring+individual+Drosophila+melanogaster+adults.">The high-throughput WAFFL system for treating and monitoring individual Drosophila melanogaster adults.</a> bioRxiv. , (2018).</li><li>IUPAC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Compendium of Chemical Terminology (The "Gold Book"). , (1997).</li><li>Itskov, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+monitoring+and+quantitative+analysis+of+feeding+behaviour+in+Drosophila.">Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila.</a> Nature Communications. 5, 4560 (2014).</li><li>Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FLIC:+high-throughput,+continuous+analysis+of+feeding+behaviors+in+Drosophila.">FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila.</a> PLoS One. 9 (6), 101107 (2014).</li></ol>

लेखकों को खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है ।

अध्ययन ड्रोसोफिलामें खपत की मात्रा के लिए एक उपन्यास प्रोटोकॉल का वर्णन करता है: माइक्रोप्लेट फीडर परख (एमएफए)। इस परख में, मक्खियां नियंत्रित आकार के छिद्रों के माध्यम से 1536-कुएं माइक्रोप्लेट के सीलबंद कुओं से उपभोग करती हैं(चित्र 1, चित्रा 2; अनुपूरक वीडियो एस 1)। चूंकि तरल भोजन को माइक्रोप्लेट के माध्यम से रंगा और प्रदान किया जाता है, इसलिए भोजन के ऑप्टिकल अवशोषण के माप माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर(चित्रा 3)का उपयोग करके प्राप्त किए जा सकते हैं। इस तरीके से, खपत से पहले और बाद में अवशोषण की तुलना करके निर्धारित किया जाता है, और फिर खपत से पहले तिरस्कृत ज्ञात मात्रा के लिए इस अनुपात को लागू करता है। यह रंगे माध्यम(चित्रा 3B)के विभिन्न संस्करणों के अवशोषण को मापने के द्वारा अनुभवजन्य रूप से सत्यापित किया गया था ।
इस परख को विकसित करने के लिए, एक उपकरण की जरूरत थी जो खपत के अवशोषण-आधारित मात्राकरण का लाभ उठा सके। माइक्रोप्लेट प्रारूप में मक्खियों का परीक्षण आकर्षक है क्योंकि यह भोजन को वितरित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले माइक्रोप्लेट का पूरक है और कपलर ज्यामिति को समायोजित करके कई प्लेट प्रारूपों (जैसे, 6-, 12-, 48-, या 96-अच्छी तरह से प्रारूपों) से चयन करने में लचीलेपन की अनुमति देता है। व्यक्तिगत फ्लाई कल्चर के लिए अनुमति देने के लिए 96-वेल माइक्रोप्लेट प्रारूप चुना गया था।
3 डी मुद्रित डिवाइस(चित्रा 1)ठीक 96-अच्छी संस्कृति प्लेट के साथ 1536-अच्छी तरह से फीडर प्लेट को उन्मुख करता है, जिससे प्रत्येक फ्लाई को खपत के लिए फीडर प्लेट के 4 कुओं तक पहुंच मिलती है। इसके अलावा, आवास प्लेट में मक्खियों के वितरण के लिए पर्याप्त समय प्रदान करने और परख दीक्षा को नियंत्रित करने के लिए, डिवाइस में अपने संबंधित कुओं में मक्खियों से युक्त बाधा स्ट्रिप्स और उल्लंघनों को रोकने के लिए शामिल हैं। इन भागों की खरीद या संशोधन के लिए आवश्यक फाइलें(अनुपूरक फाइलें एस 2-एस 3)प्रदान की जाती हैं, साथ ही संबंधित टुकड़ों(अनुपूरक फाइल एस 4)के लिए आवश्यक निर्माण निर्देश भी प्रदान किए जाते हैं।
एमएफए एक साधारण उच्च थ्रूपुट विधि प्रदान करता है जो ड्रोसोफिला फीडिंग व्यवहार की निगरानी के लिए अधिक विस्तृत तरीकों का पूरक है18,21,22. एमएफए भोजन के सेवन की मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले अन्य तरीकों पर कई फायदे प्रदान करता है। थ्रूपुट प्लेट रीडर का उपयोग करके खपत की मात्रा निर्धारित करके बढ़ाया जाता है। यह मैनुअल माप को समाप्त करता है और मैनुअल डेटा प्रविष्टि को समाप्त करता है। डेटा प्रोग्रामेटिक निष्कर्षण और प्रसंस्करण के लिए भी उत्तरदायी हैं। इसके अलावा, उच्च थ्रूपुट जैविक प्रतिकृति की व्यवहार्य संख्या को बढ़ाता है, विशेष रूप से सांप्रदायिक फीडर डिजाइनों की तुलना में, जो खपत में छोटे मतभेदों का पता लगाने की शक्ति को काफी बढ़ाता है। एमएफए का उपयोग करके, एक भी प्रयोगकर्ता परख के प्रति रात भर 500 से अधिक मक्खियों की खपत या वरीयता की मात्रा निर्धारित कर सकता है। परख के ओवरलैपिंग रन से, 5 दिन की अवधि में 2,000 से अधिक मक्खियों का परीक्षण किया जा सकता है। अंत में, माइक्रोप्लेट और कपलर(अनुपूरक फाइल एस 5)की पुन: प्रयोज्यता के कारण दीर्घकालिक लागत बचत होती है। एमएफए का उपयोग करना, प्रति परख अनुमानित लागत $ 14.80 के रूप में कम हो सकती है, उपकरणों के लिए $ 127.60 अप-फ्रंट लागत के साथ। क्लासिक CApillary FEeder (कैफे) परख है, जो महंगा सटीक microcapillaries की आवश्यकता का उपयोग करना, प्रतिकृति की एक तुलनीय संख्या के लिए परख प्रति अनुमानित लागत $४६.०८ है । इस प्रकार, जबकि आवश्यक उपकरण प्राप्त करने में एक अग्रिम निवेश है, आवर्ती लागत में कमी पर्याप्त बचत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, विशेष रूप से उदाहरणों में जहां दोहराया परीक्षण किया जाता है ।
सभी परख के साथ के रूप में, एमएफए कुछ सीमाएं हैं । मुख्यतः, इसके लिए 1536-वेल माइक्रोप्लेट पढ़ने में सक्षम माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर तक पहुंच की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, मात्राकरण के लिए अवशोषण मापन पर निर्भरता ऑप्टिकल हस्तक्षेप के लिए अतिसंवेदनशील विधि बनाता है । यह परीक्षण किए गए नमूनों के एक छोटे सबसेट के लिए नकारात्मक खपत मूल्यों के रूप में प्रकट होता है। पोषक तत्व, दवाएं, फार्मास्यूटिकल्स, या ब्याज के विषाक्त पदार्थ भी परख के साथ संगत होने के लिए पानी में घुलनशील होना चाहिए।
अपनी सीमाओं के बावजूद, यह विधि ड्रोसोफिलामें खपत व्यवहार की मात्रा निर्धारित करने की एक उच्च थ्रूपुट विधि प्रदान करती है। इसके अलावा, कपलिंग डिवाइस को आसानी से कई प्लेट प्रारूपों को स्वीकार करने के लिए संशोधित किया जा सकता है, जिससे यह विभिन्न प्रकार की कीट प्रजातियों को समायोजित करने की अनुमति देता है।

ड्रोसोफिला मेलनोगास्टर ने भोजन के सेवन और उपभोग से जुड़े लक्षणों के जैविक आधार का अध्ययन करने के लिए एक आनुवंशिक मॉडल जीव के रूप में व्यापक उपयोग देखाहै 1. यह अनुमान लगाया गया है कि मानव रोग पैदा करने वाले जीन के 65% मक्खियों में कार्यात्मक समरूप होते हैं, जिनमें मक्खियों और मनुष्यों के बीच कार्यात्मक रूप से समकक्ष ऊतकों में व्यक्त किए जा रहे लोगों का एक महत्वपूर्ण अनुपातहोताहै। इसके अलावा, डी मेलनोगेस्टर का आकार, लघु अंतरपीढ़ीगत समय, सरल रखरखाव और आनुवंशिक अनुरेखाएं इसे पोषक तत्वों की खपत पर अध्ययन के लिए एक आकर्षक मॉडल बनाती हैं3,4 और कीटनाशकों सहित विभिन्न पदार्थों के विषविज्ञानी और औषधीय प्रभाव, कीटनाशक5,प्रदूषक6,फार्मास्यूटिकल्स7,और दुर्व्यवहार की दवाएं8,9,10।
कई मामलों में, ऐसे लक्षणों के अध्ययन के लिए खपत के सटीक मात्राकरण की आवश्यकता होती है। खपत की मात्रा निर्धारित करने के तरीके विविध हैं और इसमें सीपिलरी फ्यूडर (कैफे) परख11,मनुअल फेडिंग (एमएएफई) परख12,प्रोबोसिस एक्सटेंशन रिस्पांस (प्रति) परख13,ट्रेसर डाई एक्सट्रेक्शन14,15,ओलिगोन्यूक्लियोटाइड ट्रेसर एक्सट्रेक्शन16,और रेडियो-आइसोटोप निष्कर्षण5,17शामिल हैं। हाल के प्रयासों ने इन परखों के थ्रूपुट को बढ़ाने पर ध्यान केंद्रित किया है, जैसा कि एक्सप्रेसो परख18 या प्लेट आधारित पूरे पशु खिला FLat (WAFFL) प्रणाली19में । उनकी उपयोगिता के बावजूद, ये परख जटिल, महंगे या श्रम-प्रधान हो सकते हैं, जो उच्च थ्रूपुट अध्ययनों में उनके उपयोग में बाधा डालते हैं।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig01.jpg"> चित्रा 1:माइक्रोप्लेट फीडर परख के घटक। (A)3D असेंबल माइक्रोप्लेट फीडर परख का प्रतिपादन। 1536-वेल माइक्रोप्लेट 3डी-मुद्रित कपलर द्वारा उन्मुख है ताकि निचले 96-वेल माइक्रोप्लेट के प्रत्येक कुएं में ऊपरी 1536-वेल माइक्रोप्लेट के चार कुओं तक पहुंच हो। कुओं तक पहुंच को कपलर के माध्यम से स्लॉट किए गए बैरियर स्ट्रिप्स की स्थिति को समायोजित करके नियंत्रित किया जा सकता है। (ख)माइक्रोप्लेट फीडर परख के प्रत्येक कुएं का एक चित्रमय प्रतिनिधित्व । खपत समाधान प्रत्येक अच्छी तरह से एक सीलिंग फिल्म है कि मक्खी द्वारा उपयोग की अनुमति के लिए छिद्रित किया गया है का उपयोग कर बनाए रखा जाता है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig02.jpg"> चित्रा 2:माइक्रोप्लेट फीडर परख में प्रक्रियाओं का अवलोकन। यह आंकड़ा एक प्रवाह आरेख दिखाता है जो प्रोटोकॉल के चरण 4.1-5.8 से मेल खाता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
इन बाधाओं को दूर करने के लिए, माइक्रोप्लेट फीडर परख (एमएफए; चित्रा 1) विकसित किया गया था। इस परख में, मक्खियों को 96-वेल माइक्रोप्लेट में व्यक्तिगत रूप से रखे जाते हैं। प्रत्येक माइक्रोप्लेट एक कस्टम, 3 डी मुद्रित डिवाइस का उपयोग कर एक १५३६ अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट के लिए युग्मित है । डिवाइस ठीक दो प्लेटों को इस तरह से उन्मुख करता है कि प्रत्येक फ्लाई ९६-वेल प्लेट के अपने संबंधित कुएं में १५३६-वेल माइक्रोप्लेट के 4 कुओं तक पहुंच है । एक अथाह 1536-अच्छी तरह से प्लेट और सीलिंग फिल्मों का उपयोग करके, समाधान का चयन कुओं में तिरस्कृत कर रहे हैं और मक्खियों तक पहुंच प्रदान करने के लिए सटीक 0.25 मिमी व्यास सुइयों के साथ छिद्रित। गंभीर रूप से, माइक्रोप्लेट से सीधे खपत की अनुमति देने से माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके तत्काल अवशोषण-आधारित माप की अनुमति देता है। एक पतला ट्रेसर डाई खपत माध्यम में शामिल किया जाता है, और जोखिम के बाद अवशोषण में परिवर्तन का उपयोग खपत की मात्रा(चित्रा 2 और चित्रा 3)निर्धारित करने के लिए किया जाता है। चूंकि प्रत्येक में तरल तरल पदार्थ के एक स्तंभ का अनुमान है, इसलिए वॉल्यूमेट्रिक अंतर कॉलम की ऊंचाई में अंतर के रूप में प्रकट होगा। (चित्रा 3A) बीयर-लैम्बर्ट कानून20के अनुसार:
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62771/62771eq01.jpg">
जहां एक अवशोषण है, ε तनु विश्लेषण के लिए मोलर अवशोषण गुणांक है, एल ऑप्टिकल पथ लंबाई है, और सी तनु विश्लेषण की एकाग्रता है । इस प्रकार, लगातार मोलर अवशोषण गुणांक और एकाग्रता के साथ, अवशोषण में परिवर्तन पूरी तरह से ऑप्टिकल प्रकाश पथ में परिवर्तन के कारण होते हैं, यानी, किसी दिए गए कुएं के भीतर तरल पदार्थ का स्तर। एक्सपोजर से पहले और बाद में अवशोषण को मापने से, अवशोषण में आनुपातिक परिवर्तन मात्रा(चित्रा 3B)में आनुपातिक परिवर्तन को दर्शाता है।
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig03.jpg"> चित्र 3:अच्छी मात्रा का अवशोषण आधारित मात्रा। (A)ज्ञात इनपुट तीव्रता का घटना प्रकाश(मैं0)प्रत्येक अच्छी तरह से पार करता है। विभिन्न भरने की मात्रा में प्रकाश का क्षीणन विभिन्न उत्पादन तीव्रता(I)पैदा करता है, जो मात्रा और अवशोषण के बीच एक रैखिक संबंध का प्रदर्शन करता है। (ख)अवशोषण बनाम मात्रा का अनुभवजन्य माप। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
मात्रा में परिवर्तन के आधार पर, किसी भी निगलने वाले यौगिक की मात्रा की गणना फीडिंग समाधान में उसकी ज्ञात एकाग्रता से की जा सकती है। परख के लिए आवश्यक भागों लागत में कम कर रहे है और पुनः प्रयोज्य की एक उच्च डिग्री है, काफी परख की आवर्ती लागत को कम करने । इस प्रकार, यह प्रक्रिया खपत को ठीक से निर्धारित करने की एक सस्ती, उच्च थ्रूपुट विधि प्रदान करती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25 mm Diameter Needers</td>
			<td>Rave Scientific</td>
			<td>RS-MN-52-001012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m Syringe Filters</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>25-245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Disposable Syringe</td>
			<td>EXELINT</td>
			<td>26200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barrier Strips (Laser Cut)</td>
			<td>Ponoko</td>
			<td>-</td>
			<td>Material: clear PETG, 0.5mm thickness; Supplementary File:</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22625501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Rotor A-4-62 with micro-titer plate buckets</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22638041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FD&#38;C Blue #1</td>
			<td>Spectrum Chemical Mfg Corp</td>
			<td>FD110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Film Sealing Paddle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-563-280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flystuff Flypad</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>#59-114 and #59-119</td>
			<td>CO2 Anesthesia: The Flypads&#160; come in two sizes, either of which is appropriate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate Coupler (3D Printed)</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>-</td>
			<td>Material: Multi Jet Fusion nylon (MJF PA12); Supplementary File:</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate Lids</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>656170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Devices SpectraMax iD5</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>-</td>
			<td>Any microplate reader with 1536-well resolution will do.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Probe Holder</td>
			<td>Rave Scientific</td>
			<td>RS-MN-52-001000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyester Sealing Film</td>
			<td>Excel Scientific, Inc.</td>
			<td>100-SEAL-PLT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene 96-well microplates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>655101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene, Bottomless, 15396-well microplates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>783000</td>
			<td>Made to Order; allow for adequate lead time when purchasing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bands</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weather Stripping</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1/2&#34; x 1/8&#34; High Density Self Adhesive Neoprene Rubber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high throughput microplate feeder assay for quantification of consumption in drosophila

ड्रोसोफिला में भोजन के सेवन की मात्रा खपत से जुड़े लक्षणों, उनके पर्यावरणीय कारकों और कई पदार्थों के विषाक्त और औषधीय प्रभावों के आनुवंशिक और शारीरिक आधार का अध्ययन करने के लिए उपयोग की जाती है। वर्तमान में लागू किए गए कुछ तरीके उच्च थ्रूपुट माप के लिए उत्तरदायी हैं। माइक्रोप्लेट फीडर परख (एमएफए) को अवशोषण का उपयोग करके व्यक्तिगत मक्खियों के लिए तरल भोजन की खपत की मात्रा निर्धारित करने के लिए विकसित किया गया था। इस परख में, मक्खियों एक 1536-अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट के चुनिंदा कुओं से तरल खाद्य माध्यम का उपभोग करते हैं। तरल खाद्य माध्यम में एक पतला ट्रेसर डाई को शामिल करके और प्रत्येक अच्छी तरह से एक ज्ञात मात्रा लोड करके, खपत से पहले और बाद में अच्छी तरह से प्राप्त की गई अवशोषित माप मात्रा में परिणामी परिवर्तन को प्रतिबिंबित करता है (यानी, मात्रा का सेवन)। इस विधि के साथ उच्च थ्रूपुट विश्लेषण को सक्षम करने के लिए, एक 3 डी-मुद्रित कपलर डिजाइन किया गया था जो मक्खियों को व्यक्तिगत रूप से 96-वेल माइक्रोप्लेट में हल करने की अनुमति देता है। यह डिवाइस खपत के लिए 4 कुओं तक प्रत्येक फ्लाई एक्सेस देने के लिए 96-और 1536-वेल माइक्रोप्लेट को ठीक से उन्मुख करता है, इस प्रकार नियमित खपत के अलावा खाद्य वरीयता मात्राकरण को सक्षम करता है। इसके अलावा, डिवाइस में बाधा स्ट्रिप्स हैं जो खुले और बंद पदों के बीच टॉगल करते हैं ताकि नियंत्रित रोकथाम और एक समय में नमूनों के कॉलम को जारी करने की अनुमति दी जा सके। यह विधि एक साथ कई मक्खियों द्वारा जलीय समाधानों की खपत के उच्च थ्रूपुट माप को सक्षम बनाती है। इसमें अन्य कीड़ों के अनुकूल होने और पोषक तत्वों, विषाक्त पदार्थों या फार्मास्यूटिकल्स की खपत को स्क्रीन करने की क्षमता भी है।

यह निर्धारित करने के लिए कि क्या व्यक्तिगत प्लेटों के कुओं के बीच कोई सहसंबंध मौजूद है, वाष्पीकरण को हर कुएं के लिए निर्धारित किया गया था (एन = 96 कुएं/प्लेट तीन प्लेटों के लिए)। वाष्पीकरण -0.036 μL ± 0.003 μL (मतलब ± SEM भर में पाया गया था) । (चित्रा 6A) पियर्सन सहसंबंधों की गणना वाष्पीकरण और अच्छी तरह से स्थानों के बीच प्रवृत्तियों का मूल्यांकन करने के लिए की गई थी। वाष्पीकरण बनाम पंक्तियों के लिए सहसंबंध गुणांक(चित्रा 6B,सी)था -0.04 (पी = 0.4949) और वाष्पीकरण बनाम कॉलम के लिए -0.23 (पी = 0.0001)। बाद में कॉलम में हल्के लेकिन सांख्यिकीय महत्वपूर्ण सहसंबंधों को कम करने के लिए समूहों को कॉलम के बीच वितरित किया गया।
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig06.jpg"> चित्र 6:एमएफए में वाष्पीकरण। (ए)वाष्पीकरण का घनत्व वितरण धराशायी रेखा द्वारा दर्शाए गए ± एसडी के साथ वाष्पीकरण परिवर्तन । वाष्पीकरण और पंक्तियों(बी)या कॉलम(सी)के बीच सहसंबंध पियर्सन सहसंबंध गुणांक और पी-वैल्यू के साथ संकेत के रूप में। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig06large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
प्रोटोकॉल की वैधता स्थापित करने के लिए, खपत 3-5 दिन पुराने कैंटन-एस बी मक्खियों (एन = 36/सेक्स/प्लेट और एन = 24 वाष्पीकरण नियंत्रण/तीन प्लेटों के लिए प्लेट)(चित्रा 7)के लिए निर्धारित किया गया था । नियंत्रण कुओं के बीच वाष्पीकरण शून्य (-0.030 माइक्रोन ± 0.006 माइक्रोल, पी = 4.81 x 10-6;एक नमूना टी-टेस्टबनाम शून्य) से काफी अलग था। दो नमूनों को डेटासेट से (दोनों पुरुष) छोड़ दिया गया, एक रात भर एक्सपोजर के दौरान मौत के कारण और दूसरा वाष्पीकरण के लिए समायोजन के बाद नकारात्मक खपत मूल्य के कारण । इससे 99 फीसद सैंपल रिटेंशन रेट > मिले।
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig07.jpg"> चित्र 7:एमएफए का उपयोग करके उपभोग मात्राकरण। (ए)उपभोग को कस्टम मनगढ़ंत ग्लास कक्ष का उपयोग करके कल्पना की गई थी। मक्खियों को छिद्रित कुओं से पीते हुए देखा गया और रंगे समाधान के घूस के बाद नीले पेट के धुंधला का प्रदर्शन किया गया। वाष्पीकरण नियंत्रण, नर मक्खियों और मादा मक्खियों के बीच अनुपूरक वीडियो एस 1. (बी)उपभोग मान (मतलब ± एसईएम) भी देखें। असमान विचरण के साथ जोड़ीवार पोस्ट हॉक टी-टेस्टसांख्यिकीय तुलनाओं के लिए किया गया था, जिसमें सलाखों द्वारा इंगित महत्व था। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig07large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
इसके बाद, विचरण (ANOVA) मॉडल का विश्लेषण वाई = μ + एस + पी + SxP + ई द्वारा वर्णित किया गया था, वाई के साथ समूह का मतलब है, समग्र मतलब के रूप में μ, एस सेक्स के निश्चित प्रभाव के रूप में, प्लेट के निश्चित प्रभाव के रूप में पी, सेक्स और प्लेट के बीच बातचीत के रूप में SxP, और ई के रूप में अवशिष्ट परिवर्तनशीलता । ANOVA कोई महत्वपूर्ण प्लेट से प्लेट परिवर्तनशीलता (पी = 0.671) या खपत के लिए प्लेटों (पी = 0.104) के साथ सेक्स विशिष्ट बातचीत दिखाया, जबकि अकेले सेक्स काफी खपत में मनाया भिन्नता के लिए योगदान (पी = 4.17 x10-18). एक पोस्ट हॉक टी-टेस्टसे पता चला है कि पुरुषों ने महिलाओं की तुलना में काफी कम खपत की (0.500 माइक्रोन ± 0.017 माइक्रोएल बनाम 0.811 माइक्रोन ± 0.028 माइक्रोन, पी = 1.13 x 10-17,दो नमूना टी-अकृषण के साथ परीक्षण)।
यह प्रदर्शित करने के लिए कि परख का उपयोग दो-पसंद वरीयता मात्राकरण के लिए किया जा सकता है, मक्खियों को 1% खमीर निकालने और 15% इथेनॉल और 1% खमीर निकालने के साथ पूरक 4% सुक्रोज समाधान के साथ 4% सुक्रोज समाधान के बीच एक विकल्प दिया गया था। पुरुषों और महिलाओं दोनों ने पुरुषों के लिए 0.974 ± 0.026 के वरीयता सूचकांकों के साथ इथेनॉल और खमीर निकालने के साथ समाधान के लिए भारी वरीयता दिखाई और महिलाओं के लिए 0.876 ± 0.06 (औसत ± एसईएम)(चित्रा 8)।
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62771/62771fig08.jpg"> चित्र 8:एमएफए का उपयोग करके वरीयता मात्राकरण। 4% सुक्रोज बनाम 4% सुक्रोज की खपत पुरुष और महिला मक्खियों के लिए 15% इथेनॉल और खमीर निकालने के साथ पूरक (एन = प्रत्येक लिंग के लिए 33)। नर मक्खियों ने नियंत्रण सुक्रोज समाधान (0.511 माइक्रोन ± 0.029 माइक्रोएल बनाम 0.00 माइक्रोल ± 0.017 माइक्रोएल; पी = 4.06e-10;दो-नमूना टी-परीक्षण) की तुलना मेंइथेनॉल समाधान का अधिक सेवन किया। महिला मक्खियों ने नियंत्रण सुक्रोज समाधान (0.939 माइक्रोन ± 0.044 माइक्रोएल बनाम 0.132 माइक्रोएल ± 0.044 माइक्रोएल; पी = 7.38e-17;दो-नमूना टी-टेस्ट) की तुलना मेंअधिक इथेनॉल समाधान का भी सेवन किया। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/62771fig08large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
अनुपूरक वीडियो एस 1: वीडियो छिद्रित अच्छी तरह से एक मक्खी खिला और रंगे समाधान निगलना जबकि नीले पेट धुंधला जमते से पता चलता है । चित्रा 7Aमें एक स्टिल इमेज दिखाई गई है । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/JoVE%20Review%20-%20Supplementary%20Video%20S.1.mp4" target="_blank">कृपया इस वीडियो को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>
अनुपूरक फाइल एस 2: माइक्रोप्लेट फीडर परख कपलर। यह एमएफए में उपयोग किए जाने वाले कपलर का 3डी-प्रिंटेबल निर्माण है। एमएफए के लिए प्रिंटिंग मटेरियल नायलॉन पीए12 का इस्तेमाल किया गया। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/Supplementary%20File%20S.2.STL" target="_blank">इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
अनुपूरक फाइल एस 3: माइक्रोप्लेट फीडर परख बैरियर पट्टी। इसमें फीडर प्लेट में मक्खियों के जोखिम को टॉगल करने के लिए उपयोग की जाने वाली प्लास्टिक बाधा स्ट्रिप्स का डिजाइन शामिल है। एक एकल कपलर बारह बैरियर स्ट्रिप्स तक का उपयोग कर सकता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/Supplementary%20File%20S.3.tif" target="_blank">इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
अनुपूरक फाइल एस 4: माइक्रोप्लेट फीडर परख के लिए अनपैकिंग और निर्माण निर्देश। दोवर और बैरियर स्ट्रिप्स को अनपैक करने के लिए निर्देश शामिल किए गए हैं। निर्माण निर्देश आंतरिक ढक्कन, बाहरी ढक्कन, और माध्यमिक कंटेनर के लिए शामिल हैं जो एक्सपोजर के दौरान वाष्पीकरण को सीमित करने के लिए उपयोग किए जाते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/Supplementary%20File%20S.4.docx" target="_blank">इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
अनुपूरक फाइल एस 5:माइक्रोप्लेट फीडर परख (एमएफए) और एक 1-विकल्प एकल फ्लाई सीफिलरी फ्यूईडर (कैफे) परख की लागत तुलना। एक ही पंक्ति के लिए ७२ मक्खियों/सेक्स का परीक्षण एमएफए उपकरण (कपलर्स + प्लेटें + बैरियर स्ट्रिप्स) के दो सेट की आवश्यकता होगी, जबकि कैफे को प्रत्येक संस्कृति शीशी के लिए केवल 1 केशिका की आवश्यकता होगी । एमएफए के लिए प्रारंभिक निवेश में बड़े अंतर के बावजूद, आवर्ती लागत ($ 14.80 बनाम $ 46.08, क्रमशः) में बड़ा अंतर केवल 4 लाइनों (ब्रेक-इडब्ल्यूई पॉइंट) के परीक्षण के बाद अप-फ्रंट लागतों को ठीक करने की अनुमति देगा। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62771/Supplementary%20File%20S.5.xlsx" target="_blank">इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

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A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

माइक्रोप्लेट फीडर परख ड्रोसोफिलामें तरल खाद्य खपत की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक किफायती, उच्च थ्रूपुट विधि प्रदान करता है। एक 3डी-मुद्रित डिवाइस 96-वेल माइक्रोप्लेट को जोड़ता है जिसमें मक्खियों को 1536-वेल माइक्रोप्लेट से घर में ले जाया जाता है जिसमें से मक्खियां ट्रेसर डाई के साथ एक भोजन समाधान का उपभोग करती हैं। समाधान की मात्रा में गिरावट स्पेक्ट्रोफोटोमेटिक रूप से मापी जाती है।

ड्रोसोफिला में खपत की मात्रा के लिए एक उच्च थ्रूपुट माइक्रोप्लेट फीडर परख

Quantifying food intake in Drosophila is used to study the genetic and physiological underpinnings of consumption-associated traits, their environmental ...

माइक्रोप्लेट फीडर परख ड्रोसोफिला फीडिंग व्यवहार को मापने के लिए एक सरल, उच्च थ्रूपुट, किफायती विधि प्रदान करता है, और यह अन्य, अधिक विस्तृत तरीकों पर कई फायदे प्रदान करता है। प्लेट रीडर के साथ अवशोषण को मापकर खपत की मात्रा निर्धारित करना मैनुअल माप को समाप्त करता है और मैनुअल डेटा प्रविष्टि को समाप्त करता है। डेटा प्रोग्रामेटिक निष्कर्षण और प्रसंस्करण के लिए भी उत्तरदायी हैं।इस उच्च थ्रूपुट परख के साथ हम पानी में घुलनशील पोषक तत्वों, दवाओं, फार्मास्यूटिकल्स या विषाक्त पदार्थों की खपत को निर्धारित कर सकते हैं, और सिस्टम को विभिन्न प्रकार की कीट प्रजातियों में अनुप्रयोगों के लिए संशोधित किया जा सकता है। पिघले हुए एगर को एक अभिकर् ट गर्त में डालकर शुरू करें और एक मल्टी-चैनल पिपेट का उपयोग करके 96-अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट के प्रत्येक कुएं में पिघले हुए एगलिटर को वितरित करें। एक सीलबंद बैग में एक सप्ताह तक के लिए बचे हुए एग्राज को ठंडा करें और अतिरिक्त प्लेटें बनाने के लिए इसे फिर से पिघलाएं।यदि बाधा स्ट्रिप्स बहुत ढीली हैं, तो उन्हें चैनलों में पकड़ने के लिए वक्रता देने के लिए उंगली के चारों ओर कुंडल करें। कपलर्स तैयार करने के लिए बैरियर स्ट्रिप चैनलों में बैरियर स्ट्रिप्स डालें। एक भुखमरी की थाली के लिए कपलर प्रत्यय, सुनिश्चित करने के लिए कपलर का उपयोग करने के लिए थाली में हेरफेर के रूप में कपलर बंद पर्ची हो सकती है ।सुनिश्चित करें कि कपलर का कोण वाला कोना सही अभिविन्यास बनाए रखने के लिए माइक्रोप्लेट के कोण कोने से मेल खाता है। सीओ 2 संज्ञाहरण के तहत, तीन से पांच दिन पुरानी मक्खियों को छांटें। भुखमरी प्लेट में कॉलम द्वारा व्यक्तिगत मक्खियों को लोड करें।प्रत्येक कॉलम को बंद करें क्योंकि यह अपनी बाधा पट्टी को बंद स्थिति में समायोजित करके भरता है। सावधानी से माइक्रोप्लेट के भीतर नमूना लेआउट रिकॉर्ड करें। एक बार भुखमरी की थाली भर जाने के बाद, मक्खियों को CO2 को हटाने के बाद अनायास ठीक होने की अनुमति दें, और उन्हें अपने प्रारंभिक एनेस्थेटाइजेशन समय से शुरू होने वाले छह घंटे तक भूखा रखें।10 मिलीलीटर आसुत पानी में 0.4 ग्राम सुक्रोज और 0.1 ग्राम खमीर निकालने को भंग करके 15 मिलीलीटर शंकु नली में तरल भोजन तैयार करें। भंवर ट्यूब जब तक ठोस पूरी तरह से भंग। डाई स्टॉक समाधान के 40 माइक्रोलीटर जोड़ें और तरल भोजन को 0.45 माइक्रोमीटर फिल्टर के साथ इत्तला दी गई 10 मिलीलीटर सिरिंज में स्थानांतरित करें।एक समय में समाधान के लगभग 1.5 मिलीलीटर को 1.7 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में फ़िल्टर करें। समाधान युक्त सिरिंज को एक तरफ सेट करें और फीडर प्लेट तैयार करने के दौरान आवश्यकतानुसार अतिरिक्त समाधान को फ़िल्टर करें। सीलिंग फिल्म के साथ 1536-वेल माइक्रोप्लेट के नीचे सील करके एक फीडर प्लेट तैयार करें।फिल्म का अच्छी तरह पालन करने के लिए सीलिंग पैडल का इस्तेमाल करें। फिर, एक रेजर ब्लेड के साथ बाएं और दाएं किनारों से अतिरिक्त फिल्म ट्रिम करें। 1536-वेल माइक्रोप्लेट के चार कुओं के प्रत्येक क्लस्टर के लिए फ़िल्टर किए गए तरल भोजन कॉलम-वार के 10 माइक्रोलीटर को ऊपरी बाएं हाथ में अच्छी तरह से वितरित करें।एक बार जब सभी कुएं भर जाते हैं, तो प्लेट के शीर्ष पर एक सीलिंग फिल्म लागू करें, माइक्रोप्लेट के नीचे सील करने के लिए उपयोग किए जाने वाले समान चरणों के बाद। प्लेटों की वांछित संख्या के लिए दोहराएं। तरल पदार्थ को व्यवस्थित करने के लिए 10 सेकंड के लिए 200 बार जी पर प्लेटों को सेंट्रलाइज करें।प्लेट को ठंडा होने की अनुमति न दें क्योंकि इससे कुओं में संघनन का निर्माण हो सकता है, अवशोषण रीडिंग अस्पष्ट हो सकती है। 0.25 मिलीमीटर व्यास की सुई से लैस सुई जांच उपकरण के साथ प्लेट की शीर्ष सतह पर कुओं को छिद्रित करें, समाधानों को वितरित करते समय उपयोग किए जाने वाले उसी क्रम का उपयोग करते हुए। क्रॉस-संदूषण को रोकने के लिए समाधानों के बीच सुई को मिटा दें।प्लेट को पलटें और नीचे के कुओं को छिद्रित करें। बिना ढक्कन के 630 नैनोमीटर पर प्लेट का अवशोषण पढ़ें। यह सुनिश्चित करने के लिए शीर्ष सीलिंग फिल्म पर एक आंतरिक ढक्कन रखें कि संघनन के छल्ले छिद्रित कुओं को घेरते हैं, फिर प्लेट पर बाहरी ढक्कन रखें।फीडर प्लेट को कपलर पर सामना करें ताकि गाइड फीडर प्लेट और भुखमरी प्लेट के उपयुक्त छेद को संरेखित करें। सुनिश्चित करें कि कपलर और प्लेटें सही ढंग से उन्मुख हैं। एक बार जब सभी फीडर प्लेटें कपलर्स पर लोड हो जाती हैं, तो कपलर पर बैरियर स्ट्रिप्स को समायोजित करके प्लेटों के लिए कुओं को खोलें।कपलर और प्लेट असेंबलिंग को सेकेंडरी कंटेनर में रखें। आर्द्रता प्रदान करने के लिए प्रत्येक माध्यमिक कंटेनर में भिगोए हुए पेपर तौलिए वाले पिपेट बॉक्स के निचले आधे हिस्से को रखें। माध्यमिक कंटेनर के ढक्कन को बंद करें और इसे नियंत्रित वातावरण में स्थानांतरित करें।मक्खियों को 22 घंटे तक उपभोग करने की अनुमति दें। एक्सपोजर के 22 घंटे के बाद, मृत मक्खियों के लिए प्रत्येक प्लेट की जांच करें और तदनुसार प्लेट लेआउट को अपडेट करें। सभी प्लेटों की जांच के बाद, माध्यमिक कंटेनर के अंदर CO2 पंप करके मक्खियों को सामूहिक रूप से एनेस्थेटाइज करें।लगभग 60 सेकंड के बाद, सुनिश्चित करें कि सभी मक्खियों को स्थिर किया गया है। धीरे-धीरे मक्खियों को भुखमरी की प्लेट में टैप करें और प्लास्टिक बाधा स्ट्रिप्स को बदलें। पढ़ने के लिए फीडर प्लेटें हटा दें।630 नैनोमीटर पर प्लेट के अवशोषण को फिर से पढ़ें। इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि सभी प्लेटें न पढ़ी जा न दें। वाष्पीकरण को हर कुएं के लिए निर्धारित किया गया था और यह निर्धारित करने के लिए पाया गया था कि व्यक्तिगत प्लेटों के कुओं के बीच कोई सहसंबंध मौजूद है या नहीं।वाष्पीकरण बनाम पंक्तियों और वाष्पीकरण बनाम स्तंभों के लिए पियर्सन सहसंबंध गुणांकों की गणना वाष्पीकरण और अच्छी तरह से स्थानों के बीच प्रवृत्तियों का मूल्यांकन करने के लिए की गई थी। प्रोटोकॉल की वैधता स्थापित करने के लिए तीन से पांच दिन पुराने कैंटन-एसबी मक्खियों के लिए खपत की मात्रा निर्धारित की गई थी । मक्खियों को 1% खमीर निकालने और 15% इथेनॉल और 1% खमीर निकालने के साथ पूरक 4% सुक्रोज समाधान के साथ 4% सुक्रोज समाधान के बीच एक विकल्प दिया गया था।दोनों पुरुषों और महिलाओं ने इथेनॉल और खमीर निकालने के साथ समाधान के लिए भारी वरीयता दिखाई। फीडर प्लेटों का निर्माण करते समय स्थिरता बनाए रखना आवश्यक है, यह सुनिश्चित करना कि प्रत्येक फ्लाई को भोजन की मात्रा, वाष्पीकरण और पहुंच के संबंध में एक समान खपत परिदृश्य के साथ प्रस्तुत किया जाता है। यह तकनीक ड्रोसोफिला क्षेत्र के शोधकर्ताओं को पारंपरिक तरीकों की तुलना में उच्च थ्रूपुट के साथ खपत और वरीयता व्यवहार के लिए उच्च थ्रूपुट परख करने की अनुमति देगी।

Research

JoVE Journal

Behavior

A High Throughput Microplate Feeder Assay for Quantification of Consumption in Drosophila

Handwriting Analysis Indicates Spontaneous Dyskinesias in Neuroleptic Na&#239;ve Adolescents at High Risk for Psychosis

Handwriting Analysis Indicates Spontaneous Dyskinesias in Neuroleptic NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adolescents at High Risk for Psychosis

लिखावट विश्लेषण मानसिकता के लिए उच्च जोखिम में न्यूरोलेप्टिक भोले किशोरों में सहज Dyskinesias इंगित करता है

Growing evidence suggests that movement abnormalities are a core feature of psychosis. One marker of movement abnormality, dyskinesia, is a result of ...

Measurement of Fronto-limbic Activity Using an Emotional Oddball Task in Children with Familial High Risk for Schizophrenia

एक प्रकार का पागलपन के लिए पारिवारिक उच्च जोखिम के साथ बच्चों में एक भावनात्मक Oddball कार्य का उपयोग ललाट-लिम्बिक गतिविधि की माप

Adolescence is a critical developmental period where the early symptoms of schizophrenia frequently emerge. First-degree relatives of people with ...

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

मॉडरेट प्रसव पूर्व शराब जोखिम और वयस्क चूहों में सामाजिक व्यवहार की मात्रा का ठहराव

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

ट्रेडमिल थकान परीक्षण: माउस के लिए थकान की तरह व्यवहार का एक सरल, उच्च throughput परख

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

मतन व्यवहार पर पर्यावरणीय संकेतों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए एक विधि<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

एक स्वचालित रैपिड चलने नकारात्मक Geotaxis परख Neurodegeneration के एक Drosophila मॉडल में वयस्क चढ़ाई व्यवहार का विश्लेषण के लिए

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

Drosophila melanogaster लार्वा में हाइपोक्सिया का पता लगाने के लिए एक Burrowing/सुरंग परख

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

Noninvasive, High-throughput Determination of Sleep Duration in Rodents

गैर इनवेसिव, कुतर में सोने की अवधि का उच्च प्रवाह दृढ़ संकल्प

Traditionally, sleep is monitored by an electroencephalogram (EEG). EEG studies in rodents require surgical implantation of the electrodes followed by a ...

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

व्यक्तिगत ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के अल्कोहल सेडक्शन समय को मापने के लिए उच्च-थ्रूपुट विधि

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human ...

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एनओसी को मापने के लिए एक बेहतर परख और उपकरण

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...