Name: an intestinal gut organ culture system for analyzing host-microbiota interactions
Uploaded: 2021-06-30T15:00:00
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हम आंत अंग संस्कृति प्रणाली प्रोटोकॉल के अनुकूलन में उनके मूल्यवान योगदान के लिए Yissachar प्रयोगशाला के अतीत और वर्तमान सदस्यों को धन्यवाद देते हैं । हम पांडुलिपि के महत्वपूर्ण संपादन के लिए येल लॉरे को धन्यवाद देते हैं। इस काम को इज़राइल साइंस फाउंडेशन (ग्रांट नंबर 3114831), इज़राइल साइंस फाउंडेशन - ब्रॉड इंस्टीट्यूट ज्वाइंट प्रोग्राम (ग्रांट नंबर 8165162), और गैस्नर फंड फॉर मेडिकल रिसर्च, इज़राइल द्वारा समर्थित किया गया था।

यह प्रोटोकॉल पशु कल्याण के लिए आचार समिति द्वारा अनुमोदित पशु देखभाल दिशानिर्देशों का पालन करता है ।
1. प्रयोग की तैयारी
<ol><li>आंत अंग संस्कृति उपकरण का निर्माण (3 दिन)<ol>
<li>3डी प्रिंटर का उपयोग कर?...

<ol>
	<li>Mowat, A. M., Agace, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+specialization+within+the+intestinal+immune+system.">Regional specialization within the intestinal immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (10), 667-685 (2014).</li><li>Pearce, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+in+vitro+and+ex+vivo+Models+to+Study+Host-Microbiome+Interactions+and+Acute+Stressors.">Intestinal in vitro and ex vivo Models to Study Host-Microbiome Interactions and Acute Stressors.</a> Frontiers in Physiology. 9 (1584), (2018).</li><li>Hooper, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+commensal+host-microbial+relationships+in+the+intestine.">Molecular analysis of commensal host-microbial relationships in the intestine.</a> Science. 291 (5505), 881-884 (2001).</li><li>Haller, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-pathogenic+bacteria+elicit+a+differential+cytokine+response+by+intestinal+epithelial+cell/leucocyte+co-cultures.">Non-pathogenic bacteria elicit a differential cytokine response by intestinal epithelial cell/leucocyte co-cultures.</a> Gut. 47 (1), 79-87 (2000).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease:+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model.">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. 61 (7), 1007-1015 (2012).</li><li>Gazzaniga, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+Colon+Chip+Technology+to+Identify+Commensal+Bacteria+That+Promote+Host+Tolerance+to+Infection.">Harnessing Colon Chip Technology to Identify Commensal Bacteria That Promote Host Tolerance to Infection.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 11, 638014 (2021).</li><li>Yissachar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Intestinal+Organ+Culture+System+Uncovers+a+Role+for+the+Nervous+System+in+Microbe-Immune+Crosstalk.">An Intestinal Organ Culture System Uncovers a Role for the Nervous System in Microbe-Immune Crosstalk.</a> Cell. 168 (6), 1135-1148 (2017).</li><li>Duscha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propionic+Acid+Shapes+the+Multiple+Sclerosis+Disease+Course+by+an+Immunomodulatory+Mechanism.">Propionic Acid Shapes the Multiple Sclerosis Disease Course by an Immunomodulatory Mechanism.</a> Cell. 180 (6), 1067-1080 (2020).</li><li>Grosheva, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+Screen+Identifies+Host+and+Microbiota+Regulators+of+Intestinal+Barrier+Function.">High-Throughput Screen Identifies Host and Microbiota Regulators of Intestinal Barrier Function.</a> Gastroenterology. 159 (5), 1807-1823 (2020).</li><li>Blaize, J. F., Corbo, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+Dilutions+and+Plating:+Microbial+Enumeration.">Serial Dilutions and Plating: Microbial Enumeration.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li><li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+intestinal+Th17+cells+by+segmented+filamentous+bacteria.">Induction of intestinal Th17 cells by segmented filamentous bacteria.</a> Cell. 139 (3), 485-498 (2009).</li><li>Schnupf, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+host+interaction+of+mouse+segmented+filamentous+bacteria+in+vitro.">Growth and host interaction of mouse segmented filamentous bacteria in vitro.</a> Nature. 520 (7545), 99-103 (2015).</li><li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+immune+maturation+depends+on+colonization+with+a+host-specific+microbiota.">Gut immune maturation depends on colonization with a host-specific microbiota.</a> Cell. 149 (7), 1578-1593 (2012).</li><li>Atarashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+Cell+Induction+by+Adhesion+of+Microbes+to+Intestinal+Epithelial+Cells.">Th17 Cell Induction by Adhesion of Microbes to Intestinal Epithelial Cells.</a> Cell. 163 (2), 367-380 (2015).</li></ol>

यह लेख पूर्व वीवो आंत अंग संस्कृतियों के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जिसे Yissachar एट अल ने हाल ही में विकसित किया है(9 और अप्रकाशित डेटा) प्रकाशित किया है। आंत अंग संस्कृति प्रणाल?...

आंत एक अत्यधिक जटिल अंग है जिसमें कोशिका प्रकारों (एपिथेलियल कोशिकाओं, प्रतिरक्षा प्रणाली कोशिकाओं, न्यूरॉन्स, और अधिक) की एक विस्तृत श्रृंखला होती है जो एक विशेष संरचना में आयोजित होती है जो कोशिकाओं को एक दूसरे के साथ बातचीत करने और संवाद करने और ल्यूमिनल सामग्री (माइक्रोबायोटा, भोजन, आदि) के साथ संवाद करने की अनुमति देती है। 1.वर्तमान में, मेजबान-माइक्रोबायोटा इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए उपलब्ध अनुसंधान टूलबॉक्स में इन विट्रो सेल संस्कृतियां और वीवो पशु मॉडल2 शामिल हैं। वीवो पशु मॉडल में एक शारीरिक ऊतक निर्माण3 प्रदान करते हैं, लेकिन गरीब प्रयोगात्मक नियंत्रण और प्रयोग की स्थिति में हेरफेर करने की सीमित क्षमता के साथ। इन विट्रो कल्चर सिस्टम, दूसरी ओर, प्राथमिक कोशिकाओं या सेल लाइनों का उपयोग करते हैं जिन्हें रोगाणुओं4के साथ पूरक किया जा सकता है, प्रयोग मापदंडों पर तंग नियंत्रण की पेशकश करता है लेकिन सेलुलर जटिलता और ऊतक वास्तुकला की कमी होती है। आधुनिक इन विट्रो परख स्वस्थ और रोगीय मानव ऊतक नमूनों के उन्नत उपयोग की अनुमति देते हैं, जैसे माउस या मानव स्रोतों से प्राप्त एपिथेलियल ऑर्गेनॉइड5,6,और नमूने जो म्यूकोसल माइक्रोएनवायरमेंट7की नकल करते हैं। एक अन्य उदाहरण 'एक चिप पर आंत' परख है, जिसमें मानव उपनिवेश एपिथेलियल सेल लाइन (Caco2), बाह्राश मैट्रिक्स और माइक्रोफ्लुइडिक चैनल शामिल हैं जो आंत की शारीरिक स्थिति की नकल करने के लिए8। हालांकि, इन विट्रो नमूनों के रूप में उन्नत और अभिनव हो सकते हैं, वे सामान्य ऊतक वास्तुकला या भोले सेलुलर संरचना को बनाए नहीं रखते हैं।
इसका समाधान करने के लिए, Yissachar एट अल हाल ही में एक पूर्व वीवो अंग संस्कृति प्रणाली9 (चित्रा 1)विकसित की है जो बरकरार आंत के टुकड़े पूर्व वीवोको बनाए रखता है, जो वीवो और इन विट्रो मॉडल दोनों के फायदों से लाभान्वित होता है। यह पूर्व वीवो आंत अंग संस्कृति प्रणाली एक कस्टम-निर्मित संस्कृति उपकरण पर आधारित है जो छह पेट के ऊतकों की एक मल्टीप्लेक्स संस्कृति का समर्थन करता है, जो सिस्टम के इनपुट और आउटपुट को नियंत्रित करते हुए तुलनीय परिस्थितियों में प्रयोगात्मक आदानों की जांच करने की अनुमति देता है। हाल के कार्यों से पता चला है कि यह प्रणाली व्यक्तिगत आंत बैक्टीरिया9, संपूर्ण मानव माइक्रोबायोटा नमूनों10 और माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स11के लिए आंतों की प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने के लिए मूल्यवान है । यह प्रणाली पहली बार, मेजबान, माइक्रोबियल और पर्यावरणीय घटकों पर उच्च स्तर के नियंत्रण के साथ इन प्रारंभिक मेजबान-माइक्रोबायोटा इंटरैक्शन का अध्ययन करने की अनुमति देती है। इसके अलावा, यह वास्तविक समय में, पूरे प्रयोग में निगरानी और हेरफेर की अनुमति देता है।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62779/62779fig01.jpg"> चित्रा 1:आंत संस्कृति डिवाइस की योजनाबद्ध। एक पूरी आंतों के ऊतक टुकड़ा कक्ष (शीर्ष) के उत्पादन और इनपुट बंदरगाहों से जुड़ा हुआ है, जिसमें पंप ल्यूमेन के अंदर और बाहरी मध्यम कक्ष में मध्यम प्रवाह को विनियमित करते हैं। पूरे डिवाइस (नीचे) में 6 ऐसे कक्ष होते हैं। इस आंकड़े को Yissachar एट अल 2017 से संशोधित किया गया है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62779/62779fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Device</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge Blunt Needle</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>75165a754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Blunt Needle</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>75165a758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>All Purpose Adhesive Selant 100% Silicone</td>
			<td>DAP</td>
			<td>688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cubic Vacuum Desiccator VDC-21+ 2 Shelves</td>
			<td></td>
			<td>AAAD4021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Slide 1 mm Thick</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2947-75X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Incubator im-10</td>
			<td></td>
			<td>AAH24315K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPC 301E Vacuum PUMP</td>
			<td></td>
			<td>VI-412711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Quick Turn Tube Coupling Plugs</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>51525k121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic Quick Turn Tube Coupling Sockets</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>52525k211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer</td>
			<td>Dow</td>
			<td></td>
			<td>Polydimethylsiloxane, PDMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>6516t11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zortrax M200</td>
			<td>Zortrax</td>
			<td></td>
			<td>Zortrax Z-SUITE, Autodesk Fusion 360</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zortrax M200 Materials: z-ultrat</td>
			<td>Zortrax</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x), Serum Free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#39;s Mod Dulbecco&#39;s Medium With Phenol Red (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12440061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knock-Out Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1370701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non Essential Amino Acid (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Scissors</td>
			<td>Aseltech</td>
			<td>11-00-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11297-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Braided Surgical Thread</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8010G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Scissors</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>14091-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1 &#181;m Filter</td>
			<td>Life Gene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m Filter</td>
			<td>Life Gene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Luer Lock Syringe</td>
			<td>B-D</td>
			<td>309649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greenough Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirculating Precision Air Heater &#34;CUBE&#34;</td>
			<td></td>
			<td>CUBE-2-LIS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>new era pump systems inc</td>
			<td>nep-ne-1600-em</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intestinal gut organ culture system for analyzing host-microbiota interactions

आंत ऊतक की संरचना मेजबान और आंत माइक्रोबायोटा के बीच करीबी और पारस्परिक बातचीत की सुविधा प्रदान करती है। ये क्रॉस-वार्ता स्थानीय और प्रणालीगत होरोस्टेसिस को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण हैं; आंत माइक्रोबायोटा संरचना (डिस्बायोसिस) में परिवर्तन मानव रोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ संबद्ध है। मेजबान-माइक्रोबायोटा इंटरैक्शन को विच्छेदन करने के तरीकों में शारीरिक ऊतक संरचना (वीवो पशु मॉडल में उपयोग करते समय) के संरक्षण और प्रयोग कारकों पर नियंत्रण का स्तर (सरल इन विट्रो सेल कल्चर सिस्टम) के बीच एक अंतर्निहित ट्रेडऑफ शामिल है। इस ट्रेडऑफ को संबोधित करने के लिए, Yissachar एट अल हाल ही में एक आंतों अंग संस्कृति प्रणाली विकसित की है । प्रणाली एक भोले पेट के ऊतकों के निर्माण और सेलुलर तंत्र को संरक्षित करती है और यह तंग प्रयोगात्मक नियंत्रण की अनुमति भी देती है, जिससे प्रयोगों को सुविधाजनक बनाया जा सकता है जिसे वीवो मेंआसानी से नहीं किया जा सकता है। यह विभिन्न आंत घटकों (जैसे एपिथेलियल, इम्यूनोलॉजिकल और न्यूरोनल तत्वों) की अल्पकालिक प्रतिक्रियाओं को चमकदार क्षोभ (एनारोबिक या एरोबिक रोगाणुओं सहित, चूहों या मनुष्यों, दवाओं और मेटाबोलाइट्स से पूरे माइक्रोबायोटा नमूनों) के लिए इष्टतम है। यहां, हम कस्टम-निर्मित आंत संस्कृति डिवाइस का उपयोग करके कई आंत के टुकड़ों के अंग संस्कृति के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का विस्तृत विवरण प्रस्तुत करते हैं। ल्यूमिनल क्षोभ के लिए मेजबान प्रतिक्रियाओं को ऊतक वर्गों या पूरे-माउंट ऊतक टुकड़ों, फ्लोरेसेंस इन-सीटू संकरण (मछली), या समय-चूक इमेजिंग के इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग द्वारा कल्पना की जा सकती है। यह प्रणाली अगली पीढ़ी के अनुक्रमण, प्रवाह साइटोमेट्री और विभिन्न सेलुलर और जैव रासायनिक परख सहित रीडआउट की एक विस्तृत श्रृंखला का समर्थन करती है। कुल मिलाकर, यह त्रि-आयामी अंग संस्कृति प्रणाली बड़े, अक्षुण्ण आंतों के ऊतकों की संस्कृति का समर्थन करती है और स्थानीय आंत वातावरण में मेजबान-माइक्रोबायोटा इंटरैक्शन के उच्च-रिज़ॉल्यूशन विश्लेषण और दृश्य के लिए व्यापक अनुप्रयोग हैं।

आंत अंग संस्कृति प्रणाली ऊतक व्यवहार्यता पूर्व वीवो बनाए रखता है। ऊतक व्यवहार्यता का मूल्यांकन संस्कृति अवधि के दौरान किया गया था। पेट के ऊतकों के टुकड़े आंत अंग संस्कृति प्रणाली में इनक्यूबेटे?...

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An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

यह लेख पूर्व वीवो प्रयोगों के लिए एक उपन्यास आंत अंग संस्कृति प्रणाली का उपयोग करके मेजबान-माइक्रोबायोम इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए एक अनूठी विधि प्रस्तुत करता है।

मेजबान-माइक्रोबायोटा इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए एक आंत आंत अंग संस्कृति प्रणाली

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

आंत अंग संस्कृति प्रणाली इन विट्रो और वीवो परख के फायदों को जोड़ती है और इस प्रकार वीवो प्रयोगों में जटिल करने के लिए सरल इन विट्रो परख के बीच एक मध्यवर्ती प्रयोगात्मक कदम के रूप में कार्य करता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ आंतों के शरीर विज्ञान के संरक्षण के साथ तंग प्रयोगात्मक नियंत्रण का संयोजन है। यह विधि मेजबान, माइक्रोबियल और पर्यावरणीय घटकों पर उच्च स्तर के नियंत्रण के साथ विशिष्ट उत्तेजना के लिए आंतों की प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने के लिए अंतर्दृष्टि प्रदान करती है।प्रक्रिया का प्रदर्शन एलन शेमेश, मेरी प्रयोगशाला से एक परास्नातक छात्र, और डॉ सिवन Amidror, हमारे प्रयोगशाला प्रबंधक होगा । शुरू करने के लिए, डिवाइस मोल्ड के भीतर उचित स्थिति में कुंद-अंत सुइयों को डालें और डिवाइस और ढक्कन के एक सेट के लिए लगभग 20 ग्राम पॉलीडिमिथाइलसिलोक्सेन या पीडीएमएस मिश्रण डालें। पीडीएमएस मिश्रण से हवा के बुलबुले को हटाने के लिए मोल्डों को 30 मिनट के लिए एक वैक्यूम कक्ष में रखें, फिर पीडीएमएस बहुलीकरण को पूरा करने के लिए रात भर 55 डिग्री सेल्सियस पर मोल्डों को इनक्यूबेट करें।जब पीडीएमएस सेट हो जाता है, तो मोल्ड से सुइयों को बाहर निकालें और ध्यान से प्लास्टिक मोल्डों से संस्कृति डिवाइस और ढक्कन जारी करें। सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करके अच्छी तरह से रूपरेखा से पीडीएमएस अवशेषों को हटा दें। पीडीएमएस डिवाइस और डिवाइस को गैर-विषाक्त सिलिकॉन चिपकने का उपयोग करके 75 बाय 50 मिलीमीटर माइक्रोस्लाइड के कवर ग्लास पर संलग्न करें और भागों को रात भर सेट करने के लिए छोड़ दें।डिवाइस के चिकनी पक्ष में चिपके हुए को लागू करें। ल्यूमेन के लिए 12, 22 गेज सुई और कुएं के लिए 12, 18 गेज सुई डालें। सिलिकॉन का उपयोग करके सभी सुइयों को ठीक करें और इसे रात भर सेट करें।इनपुट सीरिंज को शुद्ध करें और सुनिश्चित करें कि अच्छी तरह से मध्यम सभी ट्यूबों से अपशिष्ट ग्लास में बहती है, फिर इनपुट सीरिंज को शुद्ध करती है और यह सुनिश्चित करती है कि उत्तेजना सभी ट्यूबों से अपशिष्ट ग्लास में बहती है, जिससे विभिन्न उत्तेजनाओं को दूषित न करने का ध्यान रखा जा सके। माउस का त्याग करने के बाद, सभी वसा और संयोजी ऊतकों को काटकर, इसे विच्छेदन करने और पाचन तंत्र को पेट से गुदा तक ले जाने के लिए तेज कैंची और संदंश का उपयोग करें। कोलन काटकर नई प्लेट पर रख दें।ऊतक को धीरे-धीरे और केवल किनारों पर पकड़ते समय संपर्क को कम करें। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे पेट फ्लश प्रदर्शन करते हैं। धीरे से तैयार 10 मिलीलीटर सिरिंज के साथ बाँझ IMDM के साथ पेट की सामग्री फ्लश के रूप में पाठ में वर्णित है ।आंतों के ऊतकों से मल को हटाने के बाद, कोलन को बाँझ आईएमडीएम के 0.5 मिलीलीटर से भरी एक नई छह अच्छी तरह से प्लेट में रखें। इसके बाद, पेट के ऊतकों को लें और ध्यान से इसे 22 गेज सुई से कनेक्ट करें, जिससे दो धागे के साथ एक तंग टाई हो जाए। ल्यूमेन प्रवाह के लिए कोलन के सही अभिविन्यास को बनाए रखें, जैसे कि समीपस्थ और डिस्टल क्रमशः इनपुट और आउटपुट के बराबर है।सभी ऊतकों के लिए कोलन फ्लशिंग और सुई बांधने दोहराएं। इनपुट और आउटपुट ट्यूब को डिवाइस से कनेक्ट करें, फिर वांछित दरों पर पंप शुरू करके प्रयोग शुरू करें। ल्यूमेन के भीतर कोलोनिक एपिथेलियम और बलगम स्राव में बलगम से भरे गोबलेट कोशिकाओं का पता लगाया गया था और साथ ही उपनिवेशी क्रिप्ट्स में आईईसी का प्रसार किया गया था, जैसा कि KI67 धुंधला द्वारा इंगित किया गया था।इन परिणामों से पता चला है कि आंत संस्कृति प्रणाली आंतों समारोह और संरचना पूर्व वीवो बनाए रखता है । खंडित तंतुक बैक्टीरिया, या एसएफबी, परिचय के दो घंटे के बाद, सीटू संकरण में फ्लोरेसेंस का उपयोग करके छोटी आंत विली के साथ निकट सहयोग में विशिष्ट एसएफबी फिलामेंट्स का पता लगाया गया था। इसके अतिरिक्त, एक ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छोटी आंत एपिथेलियम ब्रश सीमा के कुछ माइक्रोन के भीतर एसएफबी प्रस्तुत किया ।एसएफबी के साथ जलसेक के दो घंटे बाद पूरे ऊतक नमूनों के जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल का उत्पादन किया गया था। नियंत्रण संस्कृतियों को रोगाणु मुक्त या बैक्टीरियोइड कमजोरी मोनोकॉलोनाइज्ड चूहों के मल निलंबन के साथ संचार किया गया था। एसएफबी द्वारा राजी किए गए ये परिवर्तन मुख्य रूप से रोगाणु मुक्त नियंत्रण की तुलना में छोटे आयाम के थे।कोलन का अभिविन्यास अत्यधिक महत्वपूर्ण है। सुई पर पेट बांधते समय अतिरिक्त सावधानी बरतें। उचित टाई ल्यूमेन सामग्री के साथ कुएं के प्रदूषण को रोक देगा।readout तकनीकों की एक विस्तृत श्रृंखला इस प्रोटोकॉल का पालन कर सकती है, जैसे कि अगली पीढ़ी अनुक्रमण, इमेजिंग, सेल छंटाई, और कई और अधिक। यह रीडआउट स्वास्थ्य और रोग में मेजबान माइक्रोबायोम इंटरैक्शन में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान करता है।

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Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) establishes a life-long latent infection in peripheral neurons. This latent reservoir is the source of recurrent ...

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; संस्कृति और पैटर्न मान्यता रिसेप्टर माउस आंतों Organoids की उत्तेजना

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

छोटे अणुओं मिलाना सी-di-जीएमपी में संकेत है कि जांच के लिए एक उच्च throughput सेटअप की स्थापना<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; पेट के अंग संस्कृति और रोगाणुरोधी होस्ट रक्षा अध्ययन में इसके उपयोग

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System

अलग माउस से लिम्फोसाइटों छोटे आंत्र प्रतिरक्षा प्रणाली

The intestinal immune system plays an essential role in maintaining the barrier function of the gastrointestinal tract by generating tolerant responses to ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

मानव कोलोनॉइड Monolayers रोगजनकों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए, Commensals, और मेजबान आंत्र उपकला

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...

Analysis of Interactions between Endobiotics and Human Gut Microbiota Using In Vitro Bath Fermentation Systems

इन विट्रो बाथ फर्टिलाइजेशन सिस्टम का उपयोग करEndoबायोटिक्स और मानव गट माइक्रोबायोटा के बीच इंटरेक्शन का विश्लेषण

Human intestinal microorganisms have recently become an important target of research in promoting human health and preventing diseases. Consequently, ...

High Throughput Co-culture Assays for the Investigation of Microbial Interactions

माइक्रोबायल इंटरेक्शन की जांच के लिए उच्च थ्रूपुट सह-संस्कृति पराख

The study of interactions between microorganisms has led to numerous discoveries, from novel antimicrobials to insights in microbial ecology. Many ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

मुरीन हार्ट ट्रांसप्लांटेशन के लिए कफ तकनीक का अनुकूलन

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...