Name: an intestinal gut organ culture system for analyzing host-microbiota interactions
Uploaded: 2021-06-30T15:00:00
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Agradecemos a los miembros pasados y presentes del laboratorio de Yissachar por sus valiosas contribuciones en la optimización del protocolo del sistema de cultivo de órganos intestinales. Agradecemos a Yael Laure por la edición crítica del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por la Fundación de Ciencia de Israel (subvención No. 3114831), la Fundación de Ciencia de Israel - Programa Conjunto del Instituto Broad (subvención No. 8165162) y el Fondo Gassner para la Investigación Médica, Israel.

Este protocolo sigue las pautas de cuidado animal aprobadas por el comité de ética para el bienestar animal.
1. Preparación del experimento
<ol><li>Fabricación del dispositivo de cultivo de órganos intestinales (3 días)<ol>
<li>Usando una impresora 3D, imprima los moldes de plástico reutilizables para el dispositivo de cultivo de órganos (el dispositivo tiene 6 pozos, con 24 orificios pequeños y grandes, y para la tapa de la cubierta del dispositivo) (archivos 3D adjuntos). NOTA:...

<ol>
	<li>Mowat, A. M., Agace, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+specialization+within+the+intestinal+immune+system.">Regional specialization within the intestinal immune system.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (10), 667-685 (2014).</li><li>Pearce, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+in+vitro+and+ex+vivo+Models+to+Study+Host-Microbiome+Interactions+and+Acute+Stressors.">Intestinal in vitro and ex vivo Models to Study Host-Microbiome Interactions and Acute Stressors.</a> Frontiers in Physiology. 9 (1584), (2018).</li><li>Hooper, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+commensal+host-microbial+relationships+in+the+intestine.">Molecular analysis of commensal host-microbial relationships in the intestine.</a> Science. 291 (5505), 881-884 (2001).</li><li>Haller, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-pathogenic+bacteria+elicit+a+differential+cytokine+response+by+intestinal+epithelial+cell/leucocyte+co-cultures.">Non-pathogenic bacteria elicit a differential cytokine response by intestinal epithelial cell/leucocyte co-cultures.</a> Gut. 47 (1), 79-87 (2000).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li><li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease:+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model.">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. 61 (7), 1007-1015 (2012).</li><li>Gazzaniga, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harnessing+Colon+Chip+Technology+to+Identify+Commensal+Bacteria+That+Promote+Host+Tolerance+to+Infection.">Harnessing Colon Chip Technology to Identify Commensal Bacteria That Promote Host Tolerance to Infection.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 11, 638014 (2021).</li><li>Yissachar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Intestinal+Organ+Culture+System+Uncovers+a+Role+for+the+Nervous+System+in+Microbe-Immune+Crosstalk.">An Intestinal Organ Culture System Uncovers a Role for the Nervous System in Microbe-Immune Crosstalk.</a> Cell. 168 (6), 1135-1148 (2017).</li><li>Duscha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propionic+Acid+Shapes+the+Multiple+Sclerosis+Disease+Course+by+an+Immunomodulatory+Mechanism.">Propionic Acid Shapes the Multiple Sclerosis Disease Course by an Immunomodulatory Mechanism.</a> Cell. 180 (6), 1067-1080 (2020).</li><li>Grosheva, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput+Screen+Identifies+Host+and+Microbiota+Regulators+of+Intestinal+Barrier+Function.">High-Throughput Screen Identifies Host and Microbiota Regulators of Intestinal Barrier Function.</a> Gastroenterology. 159 (5), 1807-1823 (2020).</li><li>Blaize, J. F., Corbo, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+Dilutions+and+Plating:+Microbial+Enumeration.">Serial Dilutions and Plating: Microbial Enumeration.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li><li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+intestinal+Th17+cells+by+segmented+filamentous+bacteria.">Induction of intestinal Th17 cells by segmented filamentous bacteria.</a> Cell. 139 (3), 485-498 (2009).</li><li>Schnupf, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+host+interaction+of+mouse+segmented+filamentous+bacteria+in+vitro.">Growth and host interaction of mouse segmented filamentous bacteria in vitro.</a> Nature. 520 (7545), 99-103 (2015).</li><li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+immune+maturation+depends+on+colonization+with+a+host-specific+microbiota.">Gut immune maturation depends on colonization with a host-specific microbiota.</a> Cell. 149 (7), 1578-1593 (2012).</li><li>Atarashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+Cell+Induction+by+Adhesion+of+Microbes+to+Intestinal+Epithelial+Cells.">Th17 Cell Induction by Adhesion of Microbes to Intestinal Epithelial Cells.</a> Cell. 163 (2), 367-380 (2015).</li></ol>

Este artículo describe un protocolo optimizado para cultivos de órganos intestinales ex vivo que Yissachar et al. han desarrollado recientemente (datos publicados9 y no publicados). El sistema de cultivo de órganos intestinales admite el cultivo multiplexado de fragmentos intestinales intactos mientras mantiene el flujo luminal. Proporciona un control total sobre el entorno intra y extra-luminal (incluyendo la dosis de estimulación, el tiempo de exposición y el caudal) y preserva la ...

El intestino es un órgano altamente complejo que contiene una amplia gama de tipos de células (células epiteliales, células del sistema inmune, neuronas y más) organizadas en una estructura particular que permite a las células interactuar y comunicarse entre sí y con el contenido luminal (microbiota, alimentos, etc.) 1. Actualmente, la caja de herramientas de investigación disponible para analizar las interacciones huésped-microbiota incluye cultivos celulares in vitro y modelos animales in vivo 2. Los modelos animales in vivo proporcionan una construcción fisiológica del tejido3 pero con un control experimental deficiente y una capacidad limitada para manipular las condiciones del experimento. Los sistemas de cultivo in vitro, por otro lado, utilizan células primarias o líneas celulares que se pueden complementar con microbios4,ofreciendo un control estricto sobre los parámetros del experimento, pero carecen de la complejidad celular y la arquitectura del tejido. Los ensayos in vitro modernos permiten el uso avanzado de muestras de tejido humano sanas y patológicas, como organoides epiteliales derivados de fuentes de ratón ohumanas 5,6,y muestras que imitan el microambiente de la mucosa7. Otro ejemplo es el ensayo 'gut on a chip', que incluye la línea celular epitelial colónica humana (Caco2), la matriz extracelular y los canales microfluídicos para imitar la condición fisiológica del invariante intestinal8. Sin embargo, por muy avanzadas e innovadoras que puedan ser las muestras in vitro, no mantienen una arquitectura tisular normal ni una composición celular ingenua.
Para abordar eso, Yissachar et al. desarrollaron recientemente un sistema de cultivo de órganos ex vivo 9 (Figura 1)que mantiene intactos los fragmentos intestinales ex vivo,beneficiándose de las ventajas de los modelos in vivo e in vitro. Este sistema de cultivo de órganos intestinales ex vivo se basa en un dispositivo de cultivo personalizado que admite un cultivo multiplexado de seis tejidos del colon, lo que permite examinar las entradas experimentales en condiciones comparables mientras se controlan las entradas y salidas del sistema. Trabajos recientes han demostrado que este sistema es valioso para analizar las respuestas intestinales a bacterias intestinales individuales9,muestras enteras de microbiota humana10 y metabolitos microbianos11. Este sistema permite, por primera vez, el estudio de estas interacciones tempranas huésped-microbiota con un alto nivel de control sobre los componentes huésped, microbianos y ambientales. Además, permite monitorizar y manipular el sistema a lo largo del experimento, en tiempo real.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62779/62779fig01.jpg"> Figura 1: Esquemas del dispositivo de cultivo intestinal. Un fragmento de tejido intestinal entero está unido a los puertos de salida y entrada de la cámara (arriba), con bombas que regulan el flujo medio dentro del lumen y en la cámara media externa. Todo el dispositivo (parte inferior) contiene 6 cámaras de este tipo. Esta cifra ha sido modificada a partir de Yissachar et al. 2017. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62779/62779fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Device</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge Blunt Needle</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>75165a754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Blunt Needle</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>75165a758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>All Purpose Adhesive Selant 100% Silicone</td>
			<td>DAP</td>
			<td>688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cubic Vacuum Desiccator VDC-21+ 2 Shelves</td>
			<td></td>
			<td>AAAD4021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Slide 1 mm Thick</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2947-75X50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Incubator im-10</td>
			<td></td>
			<td>AAH24315K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPC 301E Vacuum PUMP</td>
			<td></td>
			<td>VI-412711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Quick Turn Tube Coupling Plugs</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>51525k121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic Quick Turn Tube Coupling Sockets</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>52525k211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer</td>
			<td>Dow</td>
			<td></td>
			<td>Polydimethylsiloxane, PDMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing</td>
			<td>Mcmaster</td>
			<td>6516t11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zortrax M200</td>
			<td>Zortrax</td>
			<td></td>
			<td>Zortrax Z-SUITE, Autodesk Fusion 360</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zortrax M200 Materials: z-ultrat</td>
			<td>Zortrax</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x), Serum Free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iscove&#39;s Mod Dulbecco&#39;s Medium With Phenol Red (1x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12440061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knock-Out Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1370701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non Essential Amino Acid (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Scissors</td>
			<td>Aseltech</td>
			<td>11-00-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11297-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Braided Surgical Thread</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8010G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Scissors</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>14091-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1 &#181;m Filter</td>
			<td>Life Gene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m Filter</td>
			<td>Life Gene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Luer Lock Syringe</td>
			<td>B-D</td>
			<td>309649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greenough Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirculating Precision Air Heater &#34;CUBE&#34;</td>
			<td></td>
			<td>CUBE-2-LIS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>new era pump systems inc</td>
			<td>nep-ne-1600-em</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intestinal gut organ culture system for analyzing host-microbiota interactions

La estructura del tejido intestinal facilita interacciones cercanas y mutualistas entre el huésped y la microbiota intestinal. Estas conversaciones cruzadas son cruciales para mantener la homeostasis local y sistémica; los cambios en la composición de la microbiota intestinal (disbiosis) se asocian con una amplia gama de enfermedades humanas. Los métodos para diseccionar las interacciones huésped-microbiota abarcan una compensación inherente entre la preservación de la estructura fisiológica del tejido (cuando se utilizan modelos animales in vivo) y el nivel de control sobre los factores del experimento (como en los sistemas simples de cultivo celular in vitro). Para abordar esta compensación, Yissachar et al. desarrollaron recientemente un sistema de cultivo de órganos intestinales. El sistema conserva una construcción ingenua del tejido del colon y mecanismos celulares y también permite un control experimental estricto, facilitando experimentaciones que no se pueden realizar fácilmente in vivo. Es óptimo para diseccionar respuestas a corto plazo de varios componentes intestinales (como elementos epiteliales, inmunológicos y neuronales) a perturbaciones luminales (incluidos microbios anaeróbicos o aeróbicos, muestras de microbiota completa de ratones o humanos, medicamentos y metabolitos). Aquí, presentamos una descripción detallada de un protocolo optimizado para el cultivo de órganos de múltiples fragmentos intestinales utilizando un dispositivo de cultivo intestinal hecho a medida. Las respuestas del huésped a las perturbaciones luminales se pueden visualizar mediante tinción de inmunofluorescencia de secciones de tejido o fragmentos de tejido de montaje completo, hibridación fluorescente in situ (FISH) o imágenes de lapso de tiempo. Este sistema admite una amplia gama de lecturas, incluida la secuenciación de próxima generación, la citometría de flujo y varios ensayos celulares y bioquímicos. En general, este sistema de cultivo de órganos tridimensionales admite el cultivo de tejidos intestinales grandes e intactos y tiene amplias aplicaciones para el análisis de alta resolución y la visualización de las interacciones huésped-microbiota en el entorno intestinal local.

El sistema de cultivo de órganos intestinales mantiene la viabilidad del tejido ex vivo. La evaluación de la viabilidad del tejido se realizó durante todo el período de cultivo. Los fragmentos de tejido del colon se incubaron en el sistema de cultivo de órganos intestinales y se fijaron después de un cultivo de 2/12/24 h. La integridad de la capa de células epiteliales intestinales (IEC) se validó mediante tinción de inmunofluorescencia utilizando anticuerpos E-cadherina y citoqueratina-18. Asimismo, se...

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An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

Este artículo presenta un método único para analizar las interacciones huésped-microbioma utilizando un nuevo sistema de cultivo de órganos intestinales para experimentos ex vivo.

Un sistema de cultivo de órganos intestinales intestinales para analizar las interacciones huésped-microbiota

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

El sistema de cultivo de órganos intestinales combina las ventajas de los ensayos in vitro e in vivo y, por lo tanto, sirve como un paso experimental intermedio entre los ensayos in vitro simples y los experimentos in vivo complejos. La principal ventaja de esta técnica es la combinación de un estricto control experimental con la preservación de la fisiología intestinal. Este método proporciona información para analizar las respuestas intestinales a estímulos específicos con un alto nivel de control sobre el huésped, los microbios y los componentes ambientales.Demostrando el procedimiento estarán Alon Shemesh, un estudiante de maestría de mi laboratorio, y el Dr. Sivan Amidror, nuestro gerente de laboratorio. Para comenzar, inserte las agujas de extremo romo en la posición adecuada dentro del molde del dispositivo y funda aproximadamente 20 gramos de mezcla de polidimetilsiloxano o PDMS, para un juego del dispositivo y la tapa. Coloque los moldes en una cámara de vacío durante 30 minutos para eliminar las burbujas de aire de la mezcla PDMS, luego incube los moldes a 55 grados Celsius durante la noche para completar la polimerización PDMS.Cuando se configure el PDMS, saque las agujas del molde y suelte cuidadosamente el dispositivo de cultivo y la tapa de los moldes de plástico. Elimine los residuos de PDMS del contorno del pozo con una cuchilla quirúrgica. Coloque el dispositivo PDMS y la cubierta del dispositivo en un vidrio de cubierta de microdeslidas de 75 por 50 milímetros con adhesivo de silicio no tóxico y deje que las piezas se fijen durante la noche.Aplique el pegado en el lado liso del dispositivo. Inserte 12, 22 agujas de calibre para el lumen y 12, 18 agujas de calibre para el pozo. Fije todas las agujas en su lugar con silicona y déjelo colocar durante la noche.Purgue las jeringas de entrada y asegúrese de que el medio del pozo fluya desde todos los tubos hacia un vaso de desecho, luego purgue las jeringas de entrada y asegúrese de que las estimulaciones fluyan de todos los tubos hacia un vidrio de desecho, teniendo cuidado de no contaminar las diferentes estimulaciones. Después de sacrificar el ratón, use tijeras afiladas y pórceps para diseccionarlo y sacar el tracto digestivo desde el estómago hasta el ano, cortando toda la grasa y los tejidos conectivos. Corte el colon y colóquelo en un plato nuevo.Minimice el contacto mientras sostiene el tejido suavemente y solo en los bordes. Realice el lavado del colon bajo un microscopio de disección. Enjuague suavemente el contenido de colon con IMDM estéril con la jeringa preparada de 10 mililitros como se describe en el texto.Después de extraer las heces del tejido intestinal, coloque el colon en una nueva placa de seis pozos llena de 0,5 mililitros de IMDM estéril. A continuación, tome el tejido del colon y conéctelo cuidadosamente a la aguja de calibre 22, haciendo un lazo apretado con los dos hilos. Mantenga la orientación correcta del colon al flujo de lúmenes, de modo que el proximal y el distal sea igual a la entrada y salida, respectivamente.Repita el enrojecimiento del colon y el ate con aguja para todos los tejidos. Conecte los tubos de entrada y salida al dispositivo, luego comience el experimento iniciando las bombas a las velocidades deseadas. Se detectaron células caliciformes llenas de moco en el epitelio colónico y secreción de moco dentro de la luz, así como la proliferación de IEC en las criptas colónicas, como lo indica la tinción KI67.Estos resultados mostraron que el sistema de cultivo intestinal mantiene la función intestinal y la estructura ex-vivo. Después de dos horas de introducción de bacterias filamentosas segmentadas, o SFB, se detectaron filamentos SFB típicos en estrecha asociación con vellosidades del intestino delgado mediante hibridación fluorescente in situ. Además, una microscopía electrónica de transmisión presentó SFB dentro de unas pocas micras del borde del cepillo del epitelio del intestino delgado.Los perfiles de expresión génica de muestras de tejido entero se produjeron por triplicado dos horas después de la infusión con SFB. Los cultivos de control se infundieron con suspensiones fecales de ratones monocolonizados sin gérmenes o Bacteroides fragilis. Estos cambios persuadidos por SFB fueron principalmente de pequeña amplitud en comparación con el control libre de gérmenes.La orientación del colon es muy importante. Tenga especial cuidado al atar el colon a la aguja. La amarre adecuada evitará la contaminación del pozo con el contenido de lúmenes.Una amplia gama de técnicas de lectura pueden seguir este protocolo, como la secuenciación de próxima generación, imágenes, clasificación celular y muchas más. Estas lecturas proporcionan una visión novedosa de las interacciones del microbioma del huésped en la salud y la enfermedad.

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