Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Dette arbejde blev økonomisk støttet af Kansas City University's intramural tilskud til Abdulbaki Agbas og Summer Research Fellowship for Daniel Barrera. Forfatterne er taknemmelige for Dr. Jan Talley's redaktionelle arbejde.

Frosne afkom hjertevæv blev modtaget fra Dr. Sean Newcomer sammen med den institutionelle IACUC godkendelse brev. Hjertevævet blev fremstillet af en langvarig langsgående undersøgelse, der var flashfrosset i flydende nitrogen, og opbevaret ved -80 °C til fremtidig brug. Alle protokoller vedrørende behandling af afkom hjertevæv fulgte retningslinjerne fra Kansas City University IBC og IACUC udvalg.
1. Udarbejdelse af buffere og reagenser
BEMÆRK: Forbered alle p...

<ol>
	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoidance+of+malignant+hyperthermia+in+a+porcine+model+for+experimental+open+heart+surgery.">Avoidance of malignant hyperthermia in a porcine model for experimental open heart surgery.</a> Laboratory Animal Science. 35 (2), 172-175 (1985).</li><li>Panov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bovine+serum+albumin+on+mitochondrial+respiration+in+the+brain+and+liver+of+mice+and+rats.">Effect of bovine serum albumin on mitochondrial respiration in the brain and liver of mice and rats.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 149 (2), 187-190 (2010).</li><li>Jha, P., Wang, X., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+respiratory+chain+supercomplexes+using+blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE).">Analysis of mitochondrial respiratory chain supercomplexes using blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE).</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 1-14 (2016).</li><li>Pressure Biosciences Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of Functional Mitochondria from Whole Rat Heart Using a PBI Shredder and Pressure Cycling Technology (PCT). , (2010).</li><li>McLaughlin, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+quantify+mitochondrial+content+and+intrinsic+bioenergetic+efficiency+across+organs.">Novel approach to quantify mitochondrial content and intrinsic bioenergetic efficiency across organs.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17599 (2020).</li><li>Hom, J., Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

De kritiske trin for denne protokol er angivet her. For det første skal vævs homogenisering håndteres omhyggeligt, således at der ikke påføres for store virkninger under vævs homogeniseringsprocessen. Der bør anvendes en vævs shredder, som er en del af trykcyklingsteknologi (PCT) til indledende vævs homogenisering9. Dette trin vil reducere den overdrevne slagtilfælde cyklus af glas-på-glas homogenisator (Figur 1B), der yderligere kan ødelægge allerede sk...

Målet med denne protokol var at give detaljerede skridt til at opnå mitokondrier-beriget præparat fra tidligere frosset hjertevæv med en ny teknologi af lav energi mekanisk forstyrrelse af væv, der forbedrer væv lysis og ekstraktion af mitokondrier. Med denne metode bliver forbedret ekstraktionseffektivitet uden at generere høj forskydningsstress eller høj temperatur og kort homogeniseringstid (10-12 s) opnåelig1.
At opnå mitokondrier fra arkiveret frosset væv er et værdifuldt aktiv til at udføre både funktionelle2 og biokemiske undersøgelser3 ellers ikke let gentages under de nøjagtige eksperimentelle forhold. En klassisk Potter-Elvehjem Teflon støder glas homogenisator eller Dounce homogenisator er blevet brugt og bruges stadig i forskningslaboratorier til at homogenisere blødt væv som lever, nyre og hjerne. Men, homogenisering hårdt væv såsom muskler og hjerte kræver mere homogenisering tid, enzym behandling, høj hastighed homogenisering, og omfattende brugeroplevelse. Dette er ufordelagtigt for udvinding intakte organeller såsom mitokondrier fra hårdt væv såsom muskler og hjerte. Den metode, der er beskrevet i denne protokol, anvendes til at opnå højtydende mitokondrier-beriget præparat til analyse af mitokondrie elektron transportkæde (ETC) proteinkomplekser og deres superkompleks dannelse i hjertevæv høstet fra afkom født til udøvet og stillesiddende so, flash-frosset i flydende nitrogen, og opbevares ved -80 °C til fremtidig brug. Denne metode giver brugeren mulighed for at isolere mitokondrier beriget forberedelse fra tidligere frosne arkiverede væv.
Ekstern nanomaterialeeksponering for gravide gnavere kan have en negativ indvirkning på hjertefunktionen og mitokondrie respiration og bioenergetics på afkom under svangerskab4. Ikke desto mindre, aerob motion-induceret positive ændringer i fosteret myocyt bioenergetics under graviditeten er endnu ikke dokumenteret. Men, nye undersøgelser giver bevis for, at moderens aerob træning under graviditeten har en positiv indflydelse på fosterets hjertefunktion5. For at give yderligere dokumentation blev der foretaget en analyse af de langsgående virkninger af moderøvelse på afkom af hjerte mitokondrie respiratoriske kædekomplekser (dvs. Kompleks I gennem Kompleks V) under graviditeten.
Denne undersøgelse har betydelig sundhedsrelevans, da resultaterne kan tyde på, at moderøvelse forbedrer effektiviteten af energiproduktionen i hjerte mitokondrier af afkom. I denne undersøgelse blev søer (hunsvin) brugt som dyremodel af to grunde: (i) hjertefysiologi ligner human6, og (ii) hjertevævshøst fra afkom fra forskellige tidspunkter er mulig under en institutionel IACUC-godkendelse. Den foreslåede undersøgelse har til formål at besvare mange af de grundlæggende spørgsmål, der forbinder moderlig motion og dens potentielle positive virkninger på den cellulære og biokemiske sammensætning af afkommets hjertevæv. Denne tilgang kræver blide, men effektive mitokondrierisolationsteknikker fra tidligere frosne hjertevæv fra de langvarige og dyre langsgående undersøgelser, der behandlede problemerne med de bioenergetiske ændringer i fostrets hjerte-myocytter under graviditeten. Den metode, der er beskrevet i denne undersøgelse tillader udnytte store summer af tidligere frosne arkiveret væv til mitokondrier-beriget forberedelse til både analytiske og funktionelle undersøgelser. Undersøgelsen vil også bidrage til at udfylde videnskløften på dette område ved at levere foreløbige data, hvilket kan føre til fremtidige undersøgelser, der bestemmer virkningerne af mødres motion på hjertesundhed i livmoderen og videre.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

Mitokondrie elektron overførsel kompleks (ETC) profil er ændret i hjertet væv af afkom født til en udøvet so. Den hypotese foreslået og testet var, at en regelmæssig moderens udøvelse af en so under graviditeten ville øge mitokondrie effektiviteten af afkom hjerte bioenergetik. Denne hypotese blev testet ved at isolere mitokondrier ved hjælp af en mild-isolation procedure til at vurdere mitokondrie ETC og supercomplex profiler. Den procedure, der er beskrevet her, gjorde det muligt at behandle tidligere frosne arkiverede hjertevæv og eliminerede nødvendigheden af frisk mitokondrier forberedelse til vurdering af mitokondrie ETC komplekser, superkomplekser og ETC komplekse aktivitetsprofiler. Denne protokol beskriver den optimale ETC protein komplekse måling i multiplexed antistof-baseret immunblotting og super kompleks vurdering ved hjælp af blå-native gel elektroforese.

Efter protokollen blev der forberedt et godt udbytte af mitokondrier-beriget proteinblanding fra hjertevæv. Ca. 15 mg/mL mitokondrier-beriget proteinblanding blev fremstillet af et gennemsnit på 1,2 g frosset hjertevæv høstet fra afkom af soen. Observationer viste, at mindre end 0,5 g frosset hjertevæv ikke gav en tilstrækkelig mængde mitokondrieberiget proteinblanding til at udføre en BN-PAGE-analyse. Mængden af mitokondriepræparat var tilstrækkelig til at udføre (i) en standard immunoblotanalyse til vurderi...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

Fremstilling af mitokondrier-berigede prøver fra tidligere frosne arkiverede faste væv gjorde det muligt for efterforskerne at udføre både funktionelle og analytiske vurderinger af mitokondrier i forskellige eksperimentelle modaliteter. Denne undersøgelse viser, hvordan man forbereder mitokondrier-berigede præparater fra frossen hjertevæv og udfører analytiske vurderinger af mitokondrier.

Måling Mitokondrie Elektron Overførsel Komplekser i tidligere frosne hjertevæv fra afkom af so: En model til at vurdere Motion-induceret Mitokondrie Bioenergetics Ændringer

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

Denne protokol er betydelig, fordi det giver brugerne mulighed for at forberede mitokondrier prøver fra frosne væv indsamlet fra tidligere undersøgelser og arkiveret. Denne protokol reducerer også brugen af levende dyr til vævshøst. Denne teknik giver brugerne mulighed for at bruge tidligere frosne arkivvæv til at forberede mitokondrier berigede prøver ved at anvende en blid væv makulering metode.Denne metode til forberedelse maksimerer udbyttet af mitokondrier forberedelse. Gennem læsning af protokollen er tilrådeligt at sikre tilgængeligheden af alle komponenter og værktøjer, især fuldt opladet shredder drev og også udøve med nogle uønskede væv for at blive fortrolig med trinene. Edina Kosa, en forskningsmedarbejder fra mit laboratorium.Til at begynde med skal du registrere vægten af røret, der indeholder hjertevævet. Nu vejer det tomme rør og trække det fra den tidligere registrerede vægt for at opnå en nettovægt af hjertevævet. Sæt det frosne hjertevæv direkte i bægerglasset af iskold opløsning.Rør rundt i fem minutter. Samtidig ved hjælp af pincet anvende let pres på vævet for at komme ud så meget blod som muligt. Tag vævet ud med sammenkrerne og klem hjertet med et rent filterpapirhåndklæde for at fjerne blod.Placer derefter vævet i et andet bæger af iskold opløsning. Efter omrøring af vævet i fem minutter tørres vævet forsigtigt på et køkkenrulle og fjerner fedtet, størknet blod, aurikler og fasciae. Pool ventrikulært væv.For at makulere vævsprøverne skal du placere 50 til 300 milligram hjertevæv i vævs shredderkammeret fra ramsiden og lukke ramsiden. Derefter tilsættes omkring 0,2 til 0,8 milliliter vaskebuffer til hætten side af røret. Brug rørværktøjet til at hætte shredderkammeret med shredderhætten tæt uden at stramme den for meget.Sæt shredderkammeret i shredderholderenheden med ram-siden nedad for at montere. Sæt og sæt biddet af den fuldt ladede shredderfører ind med makulatorhætten, så boret er tæt låst på plads, og tryk derefter ned på shredderføreren i shredderkammeret, indtil trykindikatoren på shredderholderen når en indstilling på ca. to. Tryk på aftrækkeren, og kør makulatordriveren i ca. 10 til 12 sekunder, mens du bevarer indstillingen ved to.Overhold røret for at sikre makulering og passage af hele eller det meste af vævsmassen gennem lysis disken ind i det øverste shredderkammerkammer, og om nødvendigt returnere røret til makulatorholderen for at fortsætte makuleringen. Efter makuleringen af prøveløftning shredderkammeret ud af holderenheden og brug rørværktøjet til at fjerne shredderhætten og placere den på en ren overflade til senere brug, der kun anbefales i samme prøve for at undgå krydskontaminering fra andre vævsprøver. Overfør det strimlede hjertevæv ind i det tredje bægerglas med 40 milliliter vaskebuffer med en rørestang og rør vævet i fem minutter med en medium hastighed, mens du er på rørepladen.Filtrer affjedringen gennem en forbetæret nylonnetmonfilament. Efter kassation af filtratet vaskes det strimlede væv på filteret tre gange med 10 milliliter vaskebuffer. Overfør det vaskede væv til et 50 milliliter bægerglas med 20 milliliter vaskebuffer placeret i isbadet på den magnetiske omrøring.Tilsæt 0,5 milliliter trypsinopløsning under konstant omrøring i 15 minutter. Ca. halvvejs gennem omrøring overføres vævsaffjedringen til en løst monteret håndholdt glas-på-glas homogenisator, der kan rumme 15 milliliter volumen. Homogeniser affjedringen med fire til fem blide strøg uden at producere skum.Derefter placeres homogenatet i et 50 milliliter bæger og blandes på en omrøringsplade. Derefter tilsættes 10 milliliter af isolationsbufferen, der indeholder trypsinhæmmer, til homogenatet og inkuberes under forsigtigt omrøring. Efter filtrering af suspensionen igen gennem et nylonfilter gemme filteret i en 50 milliliter koniske rør og overføre partikelfraktion tilbage på filteret til glas-på-glas homogenisator.Ved 15 til 20 milliliter af vaskebufferen og homogeniseres forsigtigt med hånden i 25 til 30 sekunder. Efter at have kombineret homogenatet med filtratet og afbalancering af rørene, centrifuge og derefter ved hjælp af en plast pipette fjerne supernatant forlader 0,2 milliliter fra toppen af den fluffy pellet. Filtrer det resulterende supernatant i et nyt konisk rør ved hjælp af et nylonfilter for at undgå forurening og centrifuge endnu en gang.Efter at have kasseret supernatanten vaskes pellet to til tre gange ved at tilføje isolationsbufferen til siden af røret for at forhindre brud eller kontaminering af pelleten. Kassér det fluffy hvide ydre fælglag hver gang. Tilsæt fem milliliter af isolationsbufferen til hvert rør og opbryd pelleten ved hjælp af en pipette med en centliterspids eller en ny overførselspipette Fortynd derefter suspensionen med 20 milliliter ekstra isolationsbuffer og centrifuge suspensionen ved 8,500 X g i 15 minutter ved fire grader Celsius.Efter at have kasseret supernatanten, der genbruges pellet først i fem milliliter og derefter i yderligere 15 milliliter af resuspending buffer og centrifuge ved 8, 500 X g i 15 minutter ved fire grader Celsius. Kassér nu supernatanten og gem den brune pellet, der indeholder vasket intakt mitokondrier. Resuspend mitokondrier beriget pellet i 250 mikroliter af resuspending buffer herunder protease hæmmere.Aliquot suspensionen i 25 mikroliter volumen, hurtig fryse i flydende nitrogen og opbevares i en 80 grader Celsius dybfryser i flere år. Efter protokollen blev mitokondrier-beriget protein fremstillet af hjertet af afkom født af to grupper af søer. Den ene blev udøvet under graviditeten, og den anden var stillesiddende.ETC proteinprofilanalyse viste, at afkom af udøvede søer udgjorde relativt reducerede niveauer i nogle af ETC-komplekserne. Mitokondrieproteiner blev løst i en 3 til 8% gradient BN-PAGE og immunprobed med antistofcocktails. Både udøvede og stillesiddende grupper udviser flere superkomplekser.Den fremtrædende superkomplekse stigning var på ni måneder i den udøvede gruppe sammenlignet med den stillesiddende gruppe. Mitokondrier-berigede proteiner fremstillet fra forskellige aldersgrupper på 48 timer tre måneder, seks måneder og ni måneder blev analyseret for Complex I-II aktivitet ved hjælp af en kinetisk analyse. Den udøvede gruppe udviste en kompleks I-II-aktivitet i forhold til den stillesiddende gruppes.Andre forskere viser, at der er mulighed for funktionelle undersøgelser af mitokondrier fremstillet af frosset væv og celler. Fremstilling af mitokondrier fremstillet af frosset væv kan anvendes til en bred vifte af væv med minimal skade.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Brug Stillads Liposomer at Rekonstituer Lipid-proksimal protein-protein interaktioner<em&gt; In vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Analyzing Supercomplexes of the Mitochondrial Electron Transport Chain with Native Electrophoresis, In-gel Assays, and Electroelution

Analyse af superkomplekser af den mitokondrieelektron transportkæde med indfødte elektroforese, in-gel analyser og elektrolysering

The mitochondrial electron transport chain (ETC) transduces the energy derived from the breakdown of various fuels into the bioenergetic currency of the ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

Optimeret protokol til ekstraktion af proteiner fra humanmitralventilen

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Analyser af mitokondrie Calcium tilstrømning i isolerede mitochondrier og kulturperler celler

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Måling af mitokondrie iltforbrug i Permeabilized fibre fra Drosophila bruger minimale mængder af væv

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Måling af leveren mitokondrie iltforbrug og Proton lækage kinetik for at anslå mitokondrie Respiration i Holsten malkekvæg

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Bruger i Vitro fluorescens resonans energioverførsel at studere dynamikken i proteinkomplekser på en millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

En model membran platform for rekonstituerende Mitokondrielle Membran Dynamics

Mitochondrial dynamics is essential for the organelle&#8217;s diverse functions and cellular responses. The crowded, spatially complex, mitochondrial ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Mærkning og visualisering af mitokondriegenomudtryksprodukter i Baker&apos;s Yeast Saccharomyces cerevisiae

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Vurdering af mitokondriefunktion i iskiasnerven ved respirometri i høj opløsning

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...