Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
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इस काम को डैनियल बैरेरा के लिए अब्दुलबाकी एजबास और ग्रीष्मकालीन अनुसंधान फैलोशिप के लिए कैनसस सिटी यूनिवर्सिटी के इंट्राम्यूरल अनुदान द्वारा वित्तीय रूप से समर्थित किया गया था। लेखक डॉ जान टैली के संपादकीय काम के लिए आभारी हैं।

जमे हुए संतानों के दिल के ऊतकों को संस्थागत आईएसीयूसी अनुमोदन पत्र के साथ डॉ शॉन नवागंतुक से प्राप्त किया गया था। हृदय के ऊतकों को एक दीर्घकालिक अनुदैर्ध्य अध्ययन से प्राप्त किया गया था, तरल नाइट्रोजन...

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	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल के लिए महत्वपूर्ण चरणों को यहां इंगित किया गया है। सबसे पहले, ऊतक समरूपता को सावधानीपूर्वक संभाला जाना चाहिए ताकि ऊतक समरूपता प्रक्रिया के दौरान अत्यधिक सरासर प्रभाव लागू न किया जा सके। ?...

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य ऊतक के कम ऊर्जा यांत्रिक व्यवधान की एक नई तकनीक के साथ पहले जमे हुए दिल के ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध तैयारी प्राप्त करने के लिए विस्तृत कदम प्रदान करना था जो ऊतक लाइसिस और माइटोकॉन्ड्रिया के निष्कर्षण में सुधार करता है। इस विधि के साथ, उच्च कतरनी तनाव या उच्च तापमान और कम homogenization समय (10-12 s) उत्पन्न किए बिना निष्कर्षण दक्षता में सुधार प्राप्त करने योग्य हो जाते हैं।
संग्रहीत जमे हुए ऊतक से माइटोकॉन्ड्रिया प्राप्त करने के लिए कार्यात्मक 2 और जैव रासायनिक अध्ययन दोनों को निष्पादित करने के लिए एक मूल्यवान संपत्ति है3 अन्यथा सटीक प्रयोगात्मक परिस्थितियों में आसानी से दोहराया जा सकता है। एक क्लासिक पॉटर-Elvehjem Teflon pestle ग्लास homogenizer या Dounce homogenizer का उपयोग किया गया है और अभी भी अनुसंधान प्रयोगशालाओं में जिगर, गुर्दे और मस्तिष्क जैसे नरम ऊतकों को homogenize करने के लिए उपयोग किया जा रहा है। हालांकि, मांसपेशियों और हृदय जैसे कठोर ऊतकों को homogenizing अधिक homogenization समय, एंजाइम उपचार, उच्च गति homogenization, और व्यापक उपयोगकर्ता अनुभव की आवश्यकता होती है। यह मांसपेशियों और हृदय जैसे कठोर ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया जैसे बरकरार ऑर्गेनेल को निकालने के लिए हानिकारक है। इस प्रोटोकॉल में वर्णित विधि का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला (ईटीसी) प्रोटीन परिसरों का विश्लेषण करने के लिए उच्च उपज माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध तैयारी प्राप्त करने के लिए किया जाता है और हृदय के ऊतकों में उनके सुपरकॉम्प्लेक्स गठन का उपयोग किया जाता है, जो व्यायाम और गतिहीन बोने के लिए पैदा हुए संतानों से काटा जाता है, तरल नाइट्रोजन में फ्लैश-जमे हुए, और भविष्य के उपयोग के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। यह विधि उपयोगकर्ता को पहले जमे हुए संग्रहीत ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया समृद्ध तैयारी को अलग करने की अनुमति देती है।
गर्भवती कृन्तकों के लिए बाहरी नैनोमटेरियल एक्सपोजर गर्भावस्था के दौरान संतानों पर कार्डियक फ़ंक्शन और माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन और बायोएनर्जेटिक्स को नकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकता है। फिर भी, गर्भावस्था के दौरान भ्रूण मायोसाइट्स बायोएनर्जेटिक्स में एरोबिक व्यायाम-प्रेरित सकारात्मक परिवर्तनों को अभी तक प्रलेखित नहीं किया गया है। हालांकि, उभरते हुए अध्ययन इस बात के सबूत प्रदान करते हैं कि गर्भावस्था के दौरान मातृ एरोबिक व्यायाम का भ्रूण के कार्डियक फ़ंक्शन 5 पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। आगे के सबूत प्रदान करने के लिए, गर्भावस्था के दौरान संतान कार्डियक माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन श्रृंखला परिसरों (यानी, कॉम्प्लेक्स वी के माध्यम से जटिल मैं) पर मातृ व्यायाम के अनुदैर्ध्य प्रभावों का विश्लेषण किया गया था।
इस अध्ययन में महत्वपूर्ण स्वास्थ्य प्रासंगिकता है क्योंकि परिणाम यह सुझाव दे सकते हैं कि मातृ व्यायाम संतानों के कार्डियक माइटोकॉन्ड्रिया में ऊर्जा उत्पादन की दक्षता में सुधार करता है। इस अध्ययन में, बोने (मादा सुअर) का उपयोग दो कारणों से एक पशु मॉडल के रूप में किया गया था: (i) कार्डियक फिजियोलॉजी मानव 6 के समान है, और (ii) विभिन्न समय बिंदुओं से संतानों से दिल के ऊतकों की फसल एक संस्थागत आईएसीयूसी अनुमोदन के तहत संभव है। प्रस्तावित अध्ययन का उद्देश्य मातृ व्यायाम और संतानों के हृदय ऊतक के सेलुलर और जैव रासायनिक मेकअप पर इसके संभावित सकारात्मक प्रभावों को जोड़ने वाले कई मौलिक सवालों के जवाब देना है। इस दृष्टिकोण के लिए लंबे और महंगे अनुदैर्ध्य अध्ययनों से प्राप्त पहले जमे हुए कार्डियक ऊतक से कोमल अभी तक प्रभावी माइटोकॉन्ड्रिया अलगाव तकनीकों की आवश्यकता होती है जो गर्भावस्था के दौरान भ्रूण कार्डियक मायोसाइट्स के भीतर बायोएनर्जेटिक परिवर्तनों के मुद्दों को संबोधित करते हैं। इस अध्ययन में वर्णित विधि विश्लेषणात्मक और कार्यात्मक अध्ययनों दोनों के लिए माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध तैयारी के लिए पहले से जमे हुए संग्रहीत ऊतक की बड़ी राशि का उपयोग करने की अनुमति देती है। अध्ययन प्रारंभिक डेटा प्रदान करके इस क्षेत्र में ज्ञान के अंतर को भरने में भी मदद करेगा, जिससे गर्भाशय में और उससे परे हृदय स्वास्थ्य पर मातृ व्यायाम के प्रभावों को निर्धारित करने वाले भविष्य के अध्ययन हो सकते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

माइटोकॉन्ड्रियल इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर कॉम्प्लेक्स (ETC) प्रोफ़ाइल को एक व्यायाम बोने के लिए पैदा हुई संतानों के हृदय के ऊतकों में संशोधित किया जाता है। प्रस्तावित और परीक्षण की गई परिकल्पना यह थी कि गर्भावस्था के दौरान बोने का एक नियमित मातृ व्यायाम संतान हृदय बायोएनर्जेटिक्स की माइटोकॉन्ड्रियल दक्षता को बढ़ाएगा। इस परिकल्पना का परीक्षण माइटोकॉन्ड्रियल ईटीसी और सुपरकॉम्प्लेक्स प्रोफाइल का आकलन करने के लिए एक हल्के-अलगाव प्रक्रिया का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रिया को अलग करके किया गया था। यहां वर्णित प्रक्रिया ने पहले जमे हुए संग्रहित हृदय ऊतकों के प्रसंस्करण के लिए अनुमति दी और माइटोकॉन्ड्रियल ईटीसी कॉम्प्लेक्स, सुपरकॉम्प्लेक्स और ईटीसी जटिल गतिविधि प्रोफाइल के मूल्यांकन के लिए ताजा माइटोकॉन्ड्रिया तैयारी की आवश्यकता को समाप्त कर दिया। यह प्रोटोकॉल मल्टीप्लेक्स्ड एंटीबॉडी-आधारित इम्यूनोब्लॉटिंग और नीले-देशी जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके सुपर जटिल मूल्यांकन में इष्टतम ईटीसी प्रोटीन जटिल माप का वर्णन करता है।

प्रोटोकॉल का पालन करते हुए, हृदय के ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध प्रोटीन मिश्रण की एक अच्छी उपज तैयार की गई थी। माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध प्रोटीन मिश्रण का लगभग 15 मिलीग्राम / एमएल बोने की संतानों से क?...

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Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

पहले जमे हुए संग्रहित ठोस ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध नमूनों की तैयारी ने जांचकर्ताओं को विभिन्न प्रयोगात्मक तौर-तरीकों में माइटोकॉन्ड्रिया के कार्यात्मक और विश्लेषणात्मक मूल्यांकन दोनों करने की अनुमति दी। यह अध्ययन दर्शाता है कि जमे हुए दिल के ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध तैयारी कैसे तैयार की जाए और माइटोकॉन्ड्रिया के विश्लेषणात्मक मूल्यांकन किए जाएं।

बोने की संतानों से पहले जमे हुए कार्डियक ऊतक में माइटोकॉन्ड्रियल इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर कॉम्प्लेक्स को मापना: व्यायाम-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल बायोएनर्जेटिक्स परिवर्तनों का आकलन करने के लिए एक मॉडल

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह उपयोगकर्ताओं को पिछले अध्ययनों से एकत्र किए गए जमे हुए ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया के नमूने तैयार करने और संग्रहीत करने की अनुमति देता है। यह प्रोटोकॉल ऊतक फसल के लिए जीवित जानवरों के उपयोग को भी कम करता है। यह तकनीक उपयोगकर्ताओं को एक कोमल ऊतक श्रेडिंग विधि को नियोजित करके माइटोकॉन्ड्रिया समृद्ध नमूनों को तैयार करने के लिए पहले जमे हुए संग्रह ऊतकों का उपयोग करने की अनुमति देती है।तैयारी की यह विधि माइटोकॉन्ड्रिया तैयारी की उपज को अधिकतम करती है। प्रोटोकॉल को पढ़ने के माध्यम से सभी घटकों और उपकरणों की उपलब्धता सुनिश्चित करने की सलाह दी जाती है, विशेष रूप से पूरी तरह से चार्ज किए गए श्रेडर ड्राइव और चरणों से परिचित होने के लिए कुछ अवांछित ऊतकों के साथ व्यायाम भी करें। प्रक्रिया का प्रदर्शन एडिना कोसा, मेरी प्रयोगशाला से एक अनुसंधान सहयोगी होगा।शुरू करने के लिए, हृदय के ऊतकों वाली ट्यूब का वजन रिकॉर्ड करें। अब खाली ट्यूब का वजन करें और इसे दिल के ऊतकों का शुद्ध वजन प्राप्त करने के लिए पहले से दर्ज वजन से घटाएं। जमे हुए दिल के ऊतकों को सीधे बर्फ-ठंडे समाधान के बीकर में रखें।इसे पांच मिनट के लिए हिलाएं। साथ ही चिमटी का उपयोग करके ऊतक को जितना संभव हो उतना रक्त बाहर निकलने के लिए थोड़ा दबाव लागू होता है। संदंश के साथ ऊतक को बाहर निकालें और रक्त को हटाने के लिए एक साफ फिल्टर पेपर तौलिया के साथ दिल को निचोड़ें।फिर ऊतक को बर्फ-ठंडे समाधान के एक और बीकर में रखें। पांच मिनट के लिए ऊतक को हिलाने के बाद, धीरे से एक कागज तौलिया पर ऊतक को सुखाएं और वसा, थक्के वाले रक्त, ऑरिकल्स और प्रावरणी को हटा दें। वेंट्रिकुलर ऊतक पूल.ऊतक के नमूनों को काटने के लिए, राम की ओर से ऊतक श्रेडर कक्ष में 50 से 300 मिलीग्राम हृदय ऊतक रखें और राम की ओर बंद करें। फिर ट्यूब के कैप पक्ष में धोने के बफर के बारे में 0.2 से 0.8 मिलीलीटर जोड़ें। इसे कसने के बिना श्रेडर कैप snugly के साथ श्रेडर कक्ष कैप करने के लिए ट्यूब उपकरण का उपयोग करें।लगे हुए फिटिंग के लिए नीचे राम पक्ष के साथ श्रेडर धारक इकाई में श्रेडर कक्ष रखें। सम्मिलित करें और shredder टोपी के साथ पूरी तरह से चार्ज श्रेडर ड्राइवर के बिट संलग्न यह सुनिश्चित करने के लिए कि बिट snugly जगह में बंद कर दिया गया है तो श्रेडर कक्ष में shredder ड्राइवर के लिए दबाव लागू करें जब तक श्रेडर धारक पर दबाव संकेतक लगभग दो की एक सेटिंग तक पहुँच जाता है। ट्रिगर दबाएँ और दो पर सेटिंग बनाए रखते हुए लगभग 10 से 12 सेकंड के लिए श्रेडर ड्राइवर चलाएँ।ऊपरी श्रेडर कक्ष में लाइसिस डिस्क के माध्यम से सभी या अधिकांश ऊतक द्रव्यमान के श्रेडिंग और गुजरने को सुनिश्चित करने के लिए ट्यूब का निरीक्षण करें और यदि आवश्यक हो तो श्रेडर धारक को ट्यूब को श्रेडर धारक को वापस कर दें। नमूना shredding के बाद धारक इकाई से बाहर श्रेडर कक्ष उठाओ और श्रेडर टोपी को हटाने के लिए ट्यूब उपकरण का उपयोग करें और बाद में उपयोग के लिए इसे एक साफ सतह पर रखने के लिए केवल एक ही नमूने के भीतर सिफारिश की अन्य ऊतक नमूनों से पार संदूषण से बचने के लिए. एक हलचल बार के साथ वाशिंग बफर के 40 मिलीलीटर के साथ तीसरे बीकर में कटा हुआ दिल के ऊतकों को स्थानांतरित करें और हलचल प्लेट पर रहते हुए मध्यम गति से पांच मिनट के लिए ऊतक को हिलाया।एक पूर्व गीला नायलॉन जाल monofilament के माध्यम से निलंबन फ़िल्टर. फिल्टर को छोड़ने के बाद फ़िल्टर पर कटा हुआ ऊतक को 10 मिलीलीटर वॉशिंग बफर के साथ तीन बार धोएं। चुंबकीय हलचल पर बर्फ स्नान में रखा वॉशिंग बफर के 20 मिलीलीटर के साथ एक 50 मिलीलीटर बीकर में धोए गए ऊतक को स्थानांतरित करें।15 मिनट के लिए लगातार हिलाते हुए ट्रिप्सिन समाधान के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें। सरगर्मी के माध्यम से लगभग आधे रास्ते में ऊतक निलंबन को एक ढीले ढंग से फिट किए गए हैंडहेल्ड ग्लास-ऑन-ग्लास होमोजेनाइज़र में स्थानांतरित किया जाता है जो 15 मिलीलीटर मात्रा को पकड़ सकता है। झाग के उत्पादन के बिना चार से पांच कोमल स्ट्रोक के साथ निलंबन homogenize.फिर, होमोजेनेट को 50 मिलीलीटर बीकर में रखें और एक सरगर्मी प्लेट पर मिलाएं। इसके बाद, होमोजेनेट में ट्रिप्सिन इनहिबिटर युक्त अलगाव बफर के 10 मिलीलीटर जोड़ें और धीरे-धीरे सरगर्मी करते हुए इनक्यूबेट करें। एक नायलॉन फिल्टर के माध्यम से निलंबन को फिर से फ़िल्टर करने के बाद फ़िल्टर को 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में सहेजें और फ़िल्टर पर छोड़े गए पार्टिकुलेट अंश को ग्लास-ऑन-ग्लास होमोजेनाइज़र में स्थानांतरित करें।वॉशिंग बफर के 15 से 20 मिलीलीटर पर और धीरे-धीरे 25 से 30 सेकंड के लिए हाथ से homogenize। फिल्टर के साथ homogenate के संयोजन के बाद और ट्यूबों को संतुलित करने के बाद, सेंट्रीफ्यूज और फिर एक प्लास्टिक पिपेट का उपयोग करके शराबी गोली के शीर्ष से 0.2 मिलीलीटर छोड़ने वाले supernatant को हटा दें। संदूषण और एक और बार सेंट्रीफ्यूज से बचने के लिए एक नायलॉन फिल्टर का उपयोग कर एक नई शंक्वाकार ट्यूब में परिणामी supernatant फ़िल्टर।supernatant को छोड़ने के बाद छर्रे को तोड़ने या दूषित करने से रोकने के लिए ट्यूब के किनारे पर अलगाव बफर जोड़कर दो से तीन बार गोली को धोएं। शराबी सफेद बाहरी रिम परत हर बार छोड़ दें। प्रत्येक ट्यूब के लिए अलगाव बफर के पांच मिलीलीटर जोड़ें और एक मिलीलीटर टिप या एक नया स्थानांतरण पिपेट के साथ एक पिपेट का उपयोग करके गोली को तोड़दें फिर अतिरिक्त अलगाव बफर के 20 मिलीलीटर के साथ निलंबन को पतला करें और चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 8, 500 एक्स जी पर निलंबन को सेंट्रीफ्यूज करें।supernatant को छोड़ने के बाद छर्रे को पहले पांच मिलीलीटर में और फिर चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 8, 500 एक्स जी पर पुन: निलंबित बफर और सेंट्रीफ्यूज के अतिरिक्त 15 मिलीलीटर में। अब supernatant त्याग और भूरे रंग की गोली धोया बरकरार माइटोकॉन्ड्रिया युक्त बचाने के लिए. प्रोटीज अवरोधकों सहित resuspending बफर के 250 माइक्रोलीटर में माइटोकॉन्ड्रिया समृद्ध गोली resuspendd.25 माइक्रोलीटर मात्रा में निलंबन को एलीकोट करें, तरल नाइट्रोजन में त्वरित फ्रीज करें और कई वर्षों तक 80 डिग्री सेल्सियस गहरे फ्रीजर में स्टोर करें। प्रोटोकॉल का पालन करते हुए माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध प्रोटीन बोने के दो समूहों में पैदा हुई संतानों के दिल से तैयार किया गया था। एक को गर्भावस्था के दौरान व्यायाम किया गया था और दूसरा गतिहीन था।ईटीसी प्रोटीन प्रोफाइल विश्लेषण से पता चला है कि व्यायाम किए गए बोने की संतानों ने कुछ ईटीसी परिसरों में अपेक्षाकृत कम स्तर प्रस्तुत किया। माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन को 3 से 8% ग्रेडिएंट बीएन-पेज में हल किया गया था और एंटीबॉडी कॉकटेल के साथ इम्यूनोप्रोबेड किया गया था। दोनों व्यायाम और गतिहीन समूह कई सुपरकॉम्प्लेक्स प्रदर्शित करते हैं।प्रमुख सुपरकॉम्प्लेक्स वृद्धि देखी गई गतिहीन समूह की तुलना में अभ्यास किए गए समूह में नौ महीने में थी। माइटोकॉन्ड्रिया-समृद्ध प्रोटीन 48 घंटे तीन महीने, छह महीने और नौ महीने के विभिन्न आयु समूहों से प्राप्त एक गतिज परख का उपयोग कर जटिल I-II गतिविधि के लिए विश्लेषण किया गया था। व्यायाम किए गए समूह ने गतिहीन समूह की तुलना में एक जटिल I-II गतिविधि दिखाई।जमे हुए ऊतकों और कोशिकाओं से प्राप्त माइटोकॉन्ड्रिया पर कार्यात्मक अध्ययन की व्यवहार्यता अन्य जांचकर्ताओं द्वारा दिखाई गई है। जमे हुए ऊतक से प्राप्त माइटोकॉन्ड्रिया की तैयारी को न्यूनतम क्षति के साथ ऊतकों की एक विस्तृत विविधता के लिए लागू किया जा सकता है।

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Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

एक मिलीसेकंड समय स्केल पर प्रोटीन परिसरों की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए विट्रो प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण में उपयोग करना

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली गतिशीलता के पुनर्गठन के लिए एक मॉडल झिल्ली मंच

Mitochondrial dynamics is essential for the organelle&#8217;s diverse functions and cellular responses. The crowded, spatially complex, mitochondrial ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

बेकर के खमीर सैचरोमाइसेस सेरेविसिया में माइटोकॉन्ड्रियल जीनोम अभिव्यक्ति उत्पादों की लेबलिंग और विज़ुअलाइज़ेशन

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

उच्च-रिज़ॉल्यूशन रेस्पिरोमेट्री द्वारा कटिस्नायुशूल तंत्रिका में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का आकलन करना

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...