Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
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Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dalla sovvenzione intramurale della Kansas City University per Abdulbaki Agbas e dalla Summer Research Fellowship per Daniel Barrera. Gli autori sono grati per il lavoro editoriale del Dr. Jan Talley.

I tessuti cardiaci congelati della prole sono stati ricevuti dal Dr. Sean Newcomer insieme alla lettera di approvazione istituzionale IACUC. I tessuti cardiaci sono stati ottenuti da uno studio longitudinale a lungo termine, congelati in azoto liquido e conservati a -80 °C per un uso futuro. Tutti i protocolli riguardanti l'elaborazione del tessuto cardiaco della prole hanno seguito le linee guida dei comitati IBC e IACUC della Kansas City University.
1. Preparazione di tamponi e reagenti
<...

<ol>
	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoidance+of+malignant+hyperthermia+in+a+porcine+model+for+experimental+open+heart+surgery.">Avoidance of malignant hyperthermia in a porcine model for experimental open heart surgery.</a> Laboratory Animal Science. 35 (2), 172-175 (1985).</li><li>Panov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bovine+serum+albumin+on+mitochondrial+respiration+in+the+brain+and+liver+of+mice+and+rats.">Effect of bovine serum albumin on mitochondrial respiration in the brain and liver of mice and rats.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 149 (2), 187-190 (2010).</li><li>Jha, P., Wang, X., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+respiratory+chain+supercomplexes+using+blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE).">Analysis of mitochondrial respiratory chain supercomplexes using blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE).</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 1-14 (2016).</li><li>Pressure Biosciences Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of Functional Mitochondria from Whole Rat Heart Using a PBI Shredder and Pressure Cycling Technology (PCT). , (2010).</li><li>McLaughlin, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+quantify+mitochondrial+content+and+intrinsic+bioenergetic+efficiency+across+organs.">Novel approach to quantify mitochondrial content and intrinsic bioenergetic efficiency across organs.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17599 (2020).</li><li>Hom, J., Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

I passaggi critici per questo protocollo sono indicati qui. In primo luogo, l'omogeneizzazione dei tessuti deve essere gestita con cura in modo che non vengano applicati effetti eccessivi durante il processo di omogeneizzazione dei tessuti. Dovrebbe essere utilizzato un trituratore di tessuti, che fa parte della tecnologia del ciclo di pressione (PCT) per l'omogeneizzazione iniziale dei tessuti9. Questo passaggio ridurrà l'eccessivo ciclo di corsa dell'omogeneizzatore vetro su vetro (<strong clas...

L'obiettivo di questo protocollo era quello di fornire passaggi dettagliati per ottenere una preparazione arricchita con mitocondri da tessuto cardiaco precedentemente congelato con una nuova tecnologia di interruzione meccanica a bassa energia del tessuto che migliora la lisi tissutale e l'estrazione dei mitocondri. Con questo metodo, è possibile migliorare l'efficienza di estrazione senza generare elevate sollecitazioni di taglio o alte temperature e tempi di omogeneizzazione brevi (10-12 s)12 s1.
Ottenere mitocondri da tessuti congelati archiviati è una risorsa preziosa per eseguire studi sia funzionali2 che biochimici3 altrimenti non facilmente ripetibili nelle esatte condizioni sperimentali. Un classico omogeneizzatore di vetro per pestelli Potter-Elvehjem Teflon o omogeneizzatore Dounce è stato utilizzato ed è ancora utilizzato nei laboratori di ricerca per omogeneizzare i tessuti molli come fegato, reni e cervello. Tuttavia, l'omogeneizzazione dei tessuti duri come muscoli e cuore richiede più tempo di omogeneizzazione, trattamento enzimatico, omogeneizzazione ad alta velocità e ampia esperienza utente. Questo è svantaggioso per l'estrazione di organelli intatti come i mitocondri da tessuti duri come muscoli e cuore. Il metodo descritto in questo protocollo viene utilizzato per ottenere una preparazione arricchita con mitocondri ad alto rendimento per analizzare i complessi proteici della catena di trasporto degli elettroni mitocondriali (ETC) e la loro formazione di supercomplessi nei tessuti cardiaci raccolti dalla prole nati da scrofe esercitate e sedentarie, congelati in azoto liquido e conservati a -80 ° C per un uso futuro. Questo metodo consente all'utente di isolare la preparazione arricchita con mitocondri da tessuti archiviati precedentemente congelati.
L'esposizione di nanomateriali esterni a roditori gravidi può influenzare negativamente la funzione cardiaca e la respirazione mitocondriale e la bioenergetica sulla progenie durante la gestazione4. Tuttavia, i cambiamenti positivi indotti dall'esercizio aerobico nella bioenergetica dei miociti fetali durante la gravidanza devono ancora essere documentati. Tuttavia, studi emergenti forniscono la prova che l'esercizio aerobico materno durante la gravidanza ha un'influenza positiva sulla funzione cardiaca fetale5. Al fine di fornire ulteriori prove, è stata eseguita un'analisi degli effetti longitudinali dell'esercizio materno sui complessi della catena respiratoria mitocondriale cardiaca della prole (cioè dal complesso I al complesso V) durante la gravidanza.
Questo studio ha una significativa rilevanza per la salute poiché i risultati possono suggerire che l'esercizio materno migliora l'efficienza della produzione di energia nei mitocondri cardiaci della prole. In questo studio, le scrofe (suine femmine) sono state utilizzate come modello animale per due motivi: (i) la fisiologia cardiaca è simile a quella umana6 e (ii) la raccolta di tessuto cardiaco dalla prole da diversi punti temporali è fattibile sotto un'approvazione istituzionale IACUC. Lo studio proposto mira a rispondere a molte delle domande fondamentali che collegano l'esercizio materno e i suoi potenziali effetti positivi sulla composizione cellulare e biochimica del tessuto cardiaco della prole. Questo approccio richiede tecniche di isolamento dei mitocondri delicati ma efficaci da tessuto cardiaco precedentemente congelato ottenuto da lunghi e costosi studi longitudinali che hanno affrontato i problemi dei cambiamenti bioenergetici all'interno dei miociti cardiaci fetali durante la gravidanza. Il metodo descritto in questo studio consente di utilizzare grandi somme di tessuto archiviato precedentemente congelato per la preparazione arricchita di mitocondri sia per studi analitici che funzionali. Lo studio contribuirà anche a colmare il divario di conoscenze in questo campo fornendo dati preliminari, che potrebbero portare a studi futuri che determinano gli effetti dell'esercizio materno sulla salute del cuore in utero e oltre.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

Il profilo del complesso di trasferimento di elettroni mitocondriale (ETC) è modificato nel tessuto cardiaco della prole nata da una scrofa esercitata. L'ipotesi proposta e testata era che un regolare esercizio materno di una scrofa durante la gravidanza avrebbe aumentato l'efficienza mitocondriale della bioenergetica cardiaca della prole. Questa ipotesi è stata testata isolando i mitocondri utilizzando una procedura di isolamento lieve per valutare l'ETC mitocondriale e i profili supercomplessi. La procedura qui descritta ha permesso l'elaborazione di tessuti cardiaci archiviati precedentemente congelati ed ha eliminato la necessità di una preparazione di mitocondri freschi per la valutazione di complessi ETC mitocondriali, supercomplessi e profili di attività complessi ETC. Questo protocollo descrive la misurazione ottimale del complesso proteico ETC nell'immunoblotting a base di anticorpi multiplexati e nella valutazione super complessa utilizzando l'elettroforesi su gel blu-nativa.

Seguendo il protocollo, è stata preparata una buona resa di miscela proteica arricchita con mitocondri dal tessuto cardiaco. Circa 15 mg/mL di miscela proteica arricchita con mitocondri sono stati ottenuti da una media di 1,2 g di tessuto cardiaco congelato raccolto dalla prole della scrofa. Le osservazioni hanno indicato che meno di 0,5 g di tessuto cardiaco congelato non producevano una quantità sufficiente di miscela proteica arricchita con mitocondriale per effettuare un test BN-PAGE. La quantità di preparazione m...

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Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

La preparazione di campioni arricchiti di mitocondri da tessuti solidi archiviati precedentemente congelati ha permesso ai ricercatori di eseguire valutazioni sia funzionali che analitiche dei mitocondri in varie modalità sperimentali. Questo studio dimostra come preparare preparati arricchiti con mitocondri dal tessuto cardiaco congelato ed eseguire valutazioni analitiche dei mitocondri.

Misurazione dei complessi di trasferimento di elettroni mitocondriali nel tessuto cardiaco precedentemente congelato dalla prole della scrofa: un modello per valutare i cambiamenti bioenergetici mitocondriali indotti dall'esercizio

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

Questo protocollo è significativo perché consente agli utenti di preparare campioni di mitocondri da tessuti congelati raccolti da studi precedenti e archiviati. Questo protocollo riduce anche l'uso di animali vivi per la raccolta dei tessuti. Questa tecnica consente agli utenti di utilizzare tessuti di archivio precedentemente congelati per preparare campioni arricchiti di mitocondri utilizzando un metodo di triturazione dei tessuti delicati.Questo metodo di preparazione massimizza la resa della preparazione dei mitocondri. Attraverso la lettura del protocollo è consigliabile garantire la disponibilità di tutti i componenti e gli strumenti in particolare l'azionamento a trituratore completamente carico e anche esercitare con alcuni tessuti indesiderati per familiarizzare con i passaggi. A dimostrare la procedura sarà Edina Kosa, ricercatrice associata del mio laboratorio.Per cominciare, registrare il peso del tubo contenente il tessuto cardiaco. Ora pesare il tubo vuoto e sottrarlo dal peso precedentemente registrato per ottenere un peso netto del tessuto cardiaco. Mettere il tessuto cardiaco congelato direttamente nel becher della soluzione ghiacciata.Mescolare per cinque minuti. Contemporaneamente usando una pinzetta applicare una leggera pressione sul tessuto per estrarre più sangue possibile. Estrarre il tessuto con una pinza e spremere il cuore con un tovagliolo di carta da filtro pulito per rimuovere il sangue.Quindi posizionare il tessuto in un altro becher di soluzione ghiacciata. Dopo aver mescolato il tessuto per cinque minuti, asciugare delicatamente il tessuto su un tovagliolo di carta e rimuovere il grasso, il sangue coagulato, i padiglioni auricolari e le fasce. Raggruppare il tessuto ventricolare.Per triturare i campioni di tessuto, posizionare da 50 a 300 milligrammi di tessuto cardiaco nella camera del trituratore di tessuti dal lato dell'ariete e chiudere il lato dell'ariete. Quindi aggiungere da 0,2 a 0,8 millilitri di tampone di lavaggio sul lato del cappuccio del tubo. Utilizzare lo strumento tubo per tappare la camera del trituratore con il cappuccio del trituratore in modo aderente senza serrarlo eccessivamente.Posizionare la camera di triturazione nell'unità portatritura con il lato dell'ariete verso il basso per il montaggio innestato. Inserire e innestare la punta del driver del trituratore completamente carico con il cappuccio del trituratore assicurando che la punta sia comodamente bloccata in posizione, quindi applicare la pressione sul driver del trituratore nella camera del trituratore fino a quando l'indicatore di pressione sul supporto del trituratore raggiunge un'impostazione di circa due. Premere il grilletto ed eseguire il driver del trituratore per circa 10-12 secondi mantenendo l'impostazione a due.Osservare il tubo per garantire la triturazione e il passaggio di tutta o la maggior parte della massa di tessuto attraverso il disco di lisi nella camera superiore del trituratore e, se necessario, restituire il tubo al supporto del trituratore per continuare la triturazione. Dopo la triturazione del campione, sollevare la camera di triturazione dall'unità portante e utilizzare lo strumento del tubo per rimuovere il tappo del trituratore e posizionarlo su una superficie pulita per un uso successivo raccomandato solo all'interno dello stesso campione per evitare la contaminazione incrociata da altri campioni di tessuto. Trasferire il tessuto cardiaco triturato nel terzo becher con 40 millilitri di tampone di lavaggio con una barra di agitazione e mescolare il tessuto per cinque minuti a una velocità media mentre si è sulla piastra di agitazione.Filtrare la sospensione attraverso un monofilamento in rete di nylon pre-bagnato. Dopo aver scartato il filtrato lavare il tessuto triturato sul filtro tre volte con 10 millilitri di tampone di lavaggio. Trasferire il tessuto lavato in un becher da 50 millilitri con 20 millilitri di tampone di lavaggio posto nel bagno di ghiaccio sulla agitazione magnetica.Aggiungere 0,5 millilitri di soluzione di tripsina mescolando costantemente per 15 minuti. Circa a metà dell'agitazione trasferire la sospensione tissutale in un omogeneizzatore portatile vetro su vetro liberamente montato che può contenere 15 millilitri di volume. Omogeneizzare la sospensione con quattro o cinque colpi delicati senza produrre schiuma.Quindi, posizionare l'omogeneizzato in un becher da 50 millilitri e mescolare su una piastra di agitazione. Quindi, aggiungere 10 millilitri del tampone di isolamento contenente inibitore della tripsina all'omogeneizzato e incubare mescolando delicatamente. Dopo aver filtrato nuovamente la sospensione attraverso un filtro in nylon, salvare il filtro in un tubo conico da 50 millilitri e trasferire la frazione di particolato rimasta sul filtro all'omogeneizzatore vetro su vetro.A 15-20 millilitri del tampone di lavaggio e omogeneizzare delicatamente con la mano per 25-30 secondi. Dopo aver combinato l'omogeneizzato con il filtrato e bilanciato i tubi, centrifugare e quindi utilizzare una pipetta di plastica rimuovere il surnatante lasciando 0,2 millilitri dalla parte superiore del pellet soffice. Filtrare il surnatante risultante in un nuovo tubo conico utilizzando un filtro in nylon per evitare la contaminazione e centrifugare ancora una volta.Dopo aver scartato il surnatante lavare il pellet due o tre volte aggiungendo il tampone di isolamento sul lato del tubo per evitare di rompere o contaminare il pellet. Scartare ogni volta il soffice strato bianco del bordo esterno. Aggiungere cinque millilitri del tampone di isolamento a ciascun tubo e rompere il pellet usando una pipetta con una punta di un millilitro o una nuova pipetta di trasferimento Quindi diluire la sospensione con 20 millilitri di tampone di isolamento aggiuntivo e centrifugare la sospensione a 8.500 X g per 15 minuti a quattro gradi Celsius.Dopo aver scartato il surnatante, risospese il pellet prima in cinque millilitri e poi in altri 15 millilitri del tampone di risospesso e centrifuga a 8.500 X g per 15 minuti a quattro gradi Celsius. Ora scartare il surnatante e salvare il pellet marrone contenente mitocondri intatti lavati. Risospesso il pellet arricchito con mitocondri in 250 microlitri del tampone di riusaspendimento, compresi gli inibitori della proteasi.Aliquotare la sospensione in un volume di 25 microlitri, congelare rapidamente in azoto liquido e conservare in un congelatore a 80 gradi Celsius per diversi anni. Seguendo il protocollo la proteina arricchita con mitocondri è stata preparata dal cuore della prole nata da due gruppi di scrofe. Uno è stato esercitato durante la gravidanza e l'altro era sedentario.L'analisi del profilo proteico ETC ha rivelato che la progenie delle scrofe esercitate presentava livelli relativamente ridotti in alcuni dei complessi ETC. Le proteine mitocondriali sono state risolte in un gradiente BN-PAGE dal 3 all'8% e immunoprobed con cocktail di anticorpi. Sia i gruppi esercitati che quelli sedentari presentano più supercomplessi.L'aumento supercomplesso prominente osservato è stato a nove mesi nel gruppo esercitato rispetto al gruppo sedentario. Proteine arricchite con mitocondri ottenute da diverse fasce di età di 48 ore tre mesi, sei mesi e nove mesi sono state analizzate per l'attività del Complesso I-II utilizzando un test cinetico. Il gruppo esercitato ha mostrato un'attività complessa I-II rispetto a quella del gruppo sedentario.La fattibilità di studi funzionali sui mitocondri ottenuti da tessuti e cellule congelati è dimostrata da altri ricercatori. La preparazione dei mitocondri ottenuti da tessuto congelato può essere applicata per un'ampia varietà di tessuti con danni minimi.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

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Utilizzando impalcatura liposomi per ricostituire interazioni proteina-proteina lipidi-prossimale<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Ricerca

Biochimica

Analyzing Supercomplexes of the Mitochondrial Electron Transport Chain with Native Electrophoresis, In-gel Assays, and Electroelution

Analisi di supercomplexes della catena di trasporto elettronico mitocondriale con elettroforesi nativa, analisi in-gel e elettroelution

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Utilizzo In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer per studiare la dinamica dei complessi della proteina ad una scala di tempo di millisecondo

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