Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Dette arbeidet ble økonomisk støttet av Kansas City Universitys intramurale stipend for Abdulbaki Agbas og Summer Research Fellowship for Daniel Barrera. Forfatterne er takknemlige for Dr. Jan Talleys redaksjonelle arbeid.

Frosne avkom hjertevev ble mottatt fra Dr. Sean Newcomer sammen med det institusjonelle IACUC-godkjenningsbrevet. Hjertevevet ble hentet fra en langvarig langsgående studie, flashfryst i flytende nitrogen og lagret ved -80 °C for fremtidig bruk. Alle protokoller om behandling av avkom hjertevev fulgte retningslinjene til Kansas City University IBC og IACUC-komiteer.
1. Utarbeidelse av buffere og reagenser
MERK: Forbered alle prøver i henhold til produsentens retnin...

<ol>
	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoidance+of+malignant+hyperthermia+in+a+porcine+model+for+experimental+open+heart+surgery.">Avoidance of malignant hyperthermia in a porcine model for experimental open heart surgery.</a> Laboratory Animal Science. 35 (2), 172-175 (1985).</li><li>Panov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bovine+serum+albumin+on+mitochondrial+respiration+in+the+brain+and+liver+of+mice+and+rats.">Effect of bovine serum albumin on mitochondrial respiration in the brain and liver of mice and rats.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 149 (2), 187-190 (2010).</li><li>Jha, P., Wang, X., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+respiratory+chain+supercomplexes+using+blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE).">Analysis of mitochondrial respiratory chain supercomplexes using blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE).</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 1-14 (2016).</li><li>Pressure Biosciences Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of Functional Mitochondria from Whole Rat Heart Using a PBI Shredder and Pressure Cycling Technology (PCT). , (2010).</li><li>McLaughlin, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+quantify+mitochondrial+content+and+intrinsic+bioenergetic+efficiency+across+organs.">Novel approach to quantify mitochondrial content and intrinsic bioenergetic efficiency across organs.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17599 (2020).</li><li>Hom, J., Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

De kritiske trinnene for denne protokollen er angitt her. For det første bør vev homogenisering håndteres nøye slik at overdreven rene effekter ikke vil bli brukt under vev homogeniseringsprosessen. En vevsmakuleringsmaskin bør brukes, som er en del av trykksyklingsteknologi (PCT) for innledende vev homogenisering9. Dette trinnet vil redusere den overdrevne slagsyklusen til glass-på-glass homogenisator (figur 1B) som ytterligere kan ødelegge allerede skjøre mi...

Målet med denne protokollen var å gi detaljerte trinn for å oppnå mitokondrier-beriket forberedelse fra tidligere frossent hjertevev med en ny teknologi for mekanisk forstyrrelse av vev med lav energi som forbedrer vevslys og utvinning av mitokondrier. Med denne metoden blir forbedret utvinningseffektivitet uten å generere høy skjærspenning eller høy temperatur og kort homogeniseringstid (10-12 s) oppnåelig1.
For å få mitokondrier fra arkivert frossent vev er en verdifull ressurs for å utføre både funksjonelle2 og biokjemiske studier3 ellers ikke lett repeterbar under de eksakte eksperimentelle forholdene. En klassisk Potter-Elvehjem Teflon pestle glass homogenisator eller Dounce homogenisator har blitt brukt og brukes fortsatt i forskningslaboratorier for å homogenisere bløtvev som lever, nyre og hjerne. Imidlertid krever homogenisering av harde vev som muskel og hjerte mer homogeniseringstid, enzymbehandling, høyhastighets homogenisering og omfattende brukeropplevelse. Dette er ufordelaktig for å trekke ut intakte organeller som mitokondrier fra hardt vev som muskel og hjerte. Metoden beskrevet i denne protokollen brukes til å oppnå høy avkastning mitokondri-beriket forberedelse for å analysere mitokondrie elektron transportkjede (ETC) proteinkomplekser og deres supercomplex dannelse i hjertevev høstet fra avkom født til utøvd og stillesittende så, flash-frossen i flytende nitrogen, og lagret ved -80 °C for fremtidig bruk. Denne metoden gjør det mulig for brukeren å isolere mitokondrier beriket preparat fra tidligere frosne arkiverte vev.
Ekstern nanomaterialeeksponering for gravide gnagere kan påvirke hjertefunksjonen og mitokondrie respirasjon og bioenergi negativt på avkom under svangerskapet4. Likevel er aerob treningsinduserte positive endringer i fosterets myocyttbioenergetikk under graviditet ennå ikke dokumentert. Imidlertid gir nye studier bevis på at mors aerob trening under graviditet har en positiv innflytelse på fosterets hjertefunksjon5. For å gi ytterligere bevis, ble det utført en analyse av langsgående effekter av mors trening på avkom hjerte mitokondrie respiratoriske kjedekomplekser (dvs. kompleks I gjennom kompleks V) under graviditet.
Denne studien har betydelig helserelevans siden resultatene kan tyde på at mors trening forbedrer effektiviteten av energiproduksjon i hjerte mitokondriene til avkom. I denne studien ble søer (kvinnelig gris) brukt som dyremodell av to grunner: (i) hjertefysiologi ligner på human6, og (ii) hjertevevshøst fra avkom fra forskjellige tidspunkter er mulig under en institusjonell IACUC-godkjenning. Den foreslåtte studien tar sikte på å svare på mange av de grunnleggende spørsmålene som knytter mors trening og dens potensielle positive effekter på cellulær og biokjemisk sminke av avkommets hjertevev. Denne tilnærmingen krever milde, men effektive mitokondrier isolasjon teknikker fra tidligere frossent hjertevev hentet fra lange og kostbare langsgående studier som adresserte problemene med bioenergetiske endringer innen foster hjerte myocytter under graviditeten. Metoden beskrevet i denne studien tillater bruk av store summer av tidligere frossent arkivert vev for mitokondrier-beriket forberedelse for både analytiske og funksjonelle studier. Studien vil også bidra til å fylle kunnskapsgapet på dette feltet ved å gi foreløpige data, noe som kan føre til fremtidige studier som bestemmer effekten av mors trening på hjertehelse i utero og utover.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

Mitokondrie-elektronoverføringskomplekset (ETC) profilen er modifisert i hjertevevet til avkom født til en utøvd så. Hypotesen som ble foreslått og testet var at en vanlig morsøvelse av en så under graviditet ville øke mitokondrieeffektiviteten til avkom hjertebioenergetikk. Denne hypotesen ble testet ved å isolere mitokondrier ved hjelp av en mild isolasjonsprosedyre for å vurdere mitokondrie ETC og supercomplex profiler. Prosedyren beskrevet her tillot behandling av tidligere frosne arkiverte hjertevev og eliminerte nødvendigheten av fersk mitokondrier forberedelse for vurdering av mitokondrie ETC-komplekser, superkompatibiliteter og ETC komplekse aktivitetsprofiler. Denne protokollen beskriver den optimale ETC-proteinkompleksmålingen i multiplekset antistoffbasert immunoblotting og superkompleks vurdering ved hjelp av blå-innfødt geleelektroforese.

Etter protokollen ble det utarbeidet et godt utbytte av mitokondrier-beriket proteinblanding fra hjertevev. Omtrent 15 mg/ml mitokondri-beriket proteinblanding ble hentet fra et gjennomsnitt på 1,2 g frossent hjertevev høstet fra avkom av såret. Observasjoner indikerte at mindre enn 0,5 g frossent hjertevev ikke ga tilstrekkelig mengde mitokondrieberiket proteinblanding til å utføre en BN-PAGE-analyse. Mengden mitokondriepreparat var tilstrekkelig til å utføre (i) en standard immunoblotanalyse for å vurdere de en...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

Utarbeidelse av mitokondri-berikede prøver fra tidligere frosne arkiverte faste vev tillot etterforskerne å utføre både funksjonelle og analytiske vurderinger av mitokondrier i ulike eksperimentelle modaliteter. Denne studien viser hvordan man forbereder mitokondri-berikede preparater fra frossent hjertevev og utfører analytiske vurderinger av mitokondrier.

Måling av mitokondrieelektronoverføringskomplekser i tidligere frossent hjertevev fra avkom av så: En modell for å vurdere treningsinduserte mitokondriebioenergiendringer

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

Denne protokollen er betydelig fordi den lar brukerne forberede mitokondrier prøver fra frosne vev samlet fra tidligere studier og arkivert. Denne protokollen reduserer også bruken av levende dyr til vevshøsting. Denne teknikken lar brukerne bruke tidligere frosne arkivvev for å forberede mitokondrier beriket prøver ved å bruke en mild vevsmakuleringsmetode.Denne forberedelsesmetoden maksimerer utbyttet av mitokondrierpreparat. Gjennom lesing av protokollen anbefales det å sikre tilgjengeligheten av alle komponenter og verktøy, spesielt den fulladede makuleringsdriften og også trene med noen uønskede vev for å bli kjent med trinnene. Edina Kosa, forskningsmedarbeider fra laboratoriet mitt, demonstrerer prosedyren.Til å begynne med registrerer du vekten av røret som inneholder hjertevevet. Nå veie det tomme røret og trekke det fra den tidligere registrerte vekten for å oppnå en nettovekt av hjertevevet. Sett det frosne hjertevevet direkte inn i begeret av iskald løsning.Rør den i fem minutter. Samtidig bruker pinsett lite trykk på vevet for å komme ut så mye blod som mulig. Ta ut vevet med tang og klem hjertet med et rent filterpapirhåndkle for å fjerne blod.Plasser deretter vevet i et annet beger av iskald løsning. Etter å ha rørt vevet i fem minutter, tørk forsiktig vevet på et papirhåndkle og fjern fettet, koagulert blod, aurikler og fasciae. Basseng ventrikkelvevet.For å makulere vevsprøvene, plasser 50 til 300 milligram hjertevev i vevsmakuleringskammeret fra ramsiden og lukk ramsiden. Tilsett deretter ca 0,2 til 0,8 milliliter vaskebuffer til hettesiden av røret. Bruk rørverktøyet til å kappe makuleringskammeret med makuleringshetten tett uten å stramme den for mye.Plasser makuleringskammeret i makuleringsmaskinens holderenhet med ramsiden ned for innkoblet montering. Sett inn og koble bitset til den fulladede makuleringsmaskinen med makuleringshetten, og sørg for at bitset er godt låst på plass, og trykk deretter ned på makuleringsmaskinen i makuleringskammeret til trykkindikatoren på makuleringsmaskinen når en innstilling på ca. to. Trykk på avtrekkeren og kjør makuleringsmaskinen i omtrent 10 til 12 sekunder mens du opprettholder innstillingen på to.Vær oppmerksom på røret for å sikre makulering og passering av hele eller det meste av vevsmassen gjennom lysisskiven inn i det øvre makuleringskammeret og om nødvendig returnere røret til makuleringsmaskinen for å fortsette makuleringen. Etter at prøven er makulert, løft makuleringskammeret ut av holderenheten og bruk rørverktøyet til å fjerne makuleringshetten og plasser den på et rent underlag for senere bruk som bare anbefales i samme prøve for å unngå krysskontaminering fra andre vevsprøver. Overfør det ristede hjertevevet til det tredje begeret med 40 milliliter vaskebuffer med en rørestang og rør vevet i fem minutter med middels hastighet mens du er på røreplaten.Filtrer suspensjonen gjennom en pre-fuktet nylon mesh monofilament. Etter å ha kastet filtratet, vask det ristede vevet på filteret tre ganger med 10 milliliter vaskebuffer. Overfør det vaskede vevet til et 50 milliliter beger med 20 milliliter vaskebuffer plassert i isbadet på den magnetiske røren.Tilsett 0,5 milliliter trypsinoppløsning mens du stadig rører i 15 minutter. Omtrent halvveis gjennom omrøringen overføres vevsfjæringen til en løst montert håndholdt glass-på-glass homogenisator som kan holde 15 milliliter volum. Homogeniser suspensjonen med fire til fem milde slag uten å produsere skum.Plasser deretter homogenatet i et 50 milliliter beger og bland på en røreplate. Deretter legger du til 10 milliliter av isolasjonsbufferen som inneholder trypsinhemmer til homogenatet og inkuberer mens du forsiktig rører. Etter filtrering av suspensjonen igjen gjennom et nylonfilter, lagre filteret i et 50 milliliter konisk rør og overfør partikkelfraksjonen som er igjen på filteret til glass-på-glass homogenisatoren.Ved 15 til 20 milliliter av vaskebufferen og homogeniser forsiktig med hånden i 25 til 30 sekunder. Etter å ha kombinert homogenatet med filtratet og balansert rørene, sentrifuger og deretter ved hjelp av en plastpipette, fjern supernatanten som etterlater 0,2 milliliter fra toppen av den myke pelletsen. Filtrer det resulterende supernatanten inn i et nytt konisk rør ved hjelp av et nylonfilter for å unngå forurensning og sentrifugering en gang til.Etter å ha kastet supernatanten, vask pelletsen to til tre ganger ved å legge isolasjonsbufferen til siden av røret for å forhindre brudd eller forurense pellet. Kast det myke hvite ytre felglaget hver gang. Tilsett fem milliliter av isolasjonsbufferen i hvert rør og bryt opp pelletsen ved hjelp av en pipette med en milliliterspiss eller en ny overføringspipette Fortynn deretter suspensjonen med 20 milliliter ekstra isolasjonsbuffer og sentrifuger suspensjonen ved 8500 X g i 15 minutter ved fire grader Celsius.Etter å ha kastet den supernatante resuspend pellet først i fem milliliter og deretter i ytterligere 15 milliliter av resuspending buffer og sentrifuger på 8,500 X g i 15 minutter ved fire grader Celsius. Kast nå supernatanten og lagre den brune pelletsen som inneholder vasket intakt mitokondrier. Resuspender mitokondriene beriket pellet i 250 mikroliter av resuspending buffer inkludert proteasehemmere.Aliquot suspensjonen i 25 mikroliter volum, rask frysing i flytende nitrogen og lagre i en 80 grader Celsius dypfryser i flere år. Etter protokollen ble mitokondrieberiket protein tilberedt fra hjertet av avkom født til to grupper av søer. Den ene ble utøvd under graviditeten og den andre var stillesittende.ETC proteinprofilanalyse viste at avkom av utøvde søer presenterte relativt reduserte nivåer i noen av ETC-kompleksene. Mitokondrieproteiner ble løst i en 3 til 8% gradient BN-PAGE og immunoprobed med antistoffcocktails. Både utøvde og stillesittende grupper viser flere superkomplekser.Den fremtredende supercomplex økningen observert var på ni måneder i den utøvde gruppen sammenlignet med stillesittende gruppe. Mitokondrier-berikede proteiner hentet fra ulike aldersgrupper på 48 timer tre måneder, seks måneder og ni måneder ble analysert for kompleks I-II-aktivitet ved hjelp av en kinetisk analyse. Den utøvde gruppen viste en kompleks I-II-aktivitet sammenlignet med stillesittende gruppe.Gjennomførbarhet av funksjonelle studier på mitokondrier hentet fra frosne vev og celler er vist av andre undersøkere. Fremstillingen av mitokondrier hentet fra frossent vev kan brukes til et bredt utvalg av vev med minimal skade.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Bruke Stillas liposomer for å rekonstituere Lipid-proksimale Protein-protein interaksjoner<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Analyzing Supercomplexes of the Mitochondrial Electron Transport Chain with Native Electrophoresis, In-gel Assays, and Electroelution

Analysere superkomplekser av den mitokondriale elektrontransportkjede med innfødte elektroforese, in-gel-analyser og elektrolysering

The mitochondrial electron transport chain (ETC) transduces the energy derived from the breakdown of various fuels into the bioenergetic currency of the ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

Optimalisert protokoll for ekstraksjon av proteiner fra Human Mitral Valve

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Analyser av mitokondrie kalsium tilstrømning av isolerte mitokondrier og kultivert celler

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Måling av mitokondrie oksygenforbruk i Permeabilized fiber av Drosophila med minimale mengder vev

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Måle leveren mitokondrie oksygenforbruk og Proton lekkasje Kinetics å anslå mitokondrie åndedrett i Holstein melkeku

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Bruke i Vitro fluorescens resonans energioverføring å studere dynamikken i Protein komplekser på et millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

En modell membran plattform for rekonstituere mitokondrie membran dynamikk

Mitochondrial dynamics is essential for the organelle&#8217;s diverse functions and cellular responses. The crowded, spatially complex, mitochondrial ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Merking og visualisering av mitokondriegenomuttrykksprodukter i Baker&apos;s Yeast Saccharomyces cerevisiae

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Vurdering av mitokondriefunksjon i isjiasnerven ved høyoppløselig respirometri

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...