Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
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Este trabajo fue apoyado financieramente por la subvención intramuros de la Universidad de Kansas City para Abdulbaki Agbas y la Beca de Investigación de Verano para Daniel Barrera. Los autores están agradecidos por el trabajo editorial del Dr. Jan Talley.

Los tejidos cardíacos de la descendencia congelada fueron recibidos del Dr. Sean Newcomer junto con la carta de aprobación institucional de la IACUC. Los tejidos cardíacos se obtuvieron de un estudio longitudinal a largo plazo, se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 ° C para su uso futuro. Todos los protocolos relacionados con el procesamiento del tejido cardíaco de la descendencia siguieron las pautas de los comités IBC e IACUC de la Universidad de Kansas City.
1. Pre...

<ol>
	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoidance+of+malignant+hyperthermia+in+a+porcine+model+for+experimental+open+heart+surgery.">Avoidance of malignant hyperthermia in a porcine model for experimental open heart surgery.</a> Laboratory Animal Science. 35 (2), 172-175 (1985).</li><li>Panov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bovine+serum+albumin+on+mitochondrial+respiration+in+the+brain+and+liver+of+mice+and+rats.">Effect of bovine serum albumin on mitochondrial respiration in the brain and liver of mice and rats.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 149 (2), 187-190 (2010).</li><li>Jha, P., Wang, X., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+respiratory+chain+supercomplexes+using+blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE).">Analysis of mitochondrial respiratory chain supercomplexes using blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE).</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 1-14 (2016).</li><li>Pressure Biosciences Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of Functional Mitochondria from Whole Rat Heart Using a PBI Shredder and Pressure Cycling Technology (PCT). , (2010).</li><li>McLaughlin, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+quantify+mitochondrial+content+and+intrinsic+bioenergetic+efficiency+across+organs.">Novel approach to quantify mitochondrial content and intrinsic bioenergetic efficiency across organs.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17599 (2020).</li><li>Hom, J., Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

Los pasos críticos para este protocolo se indican aquí. En primer lugar, la homogeneización de tejidos debe manejarse cuidadosamente para que no se apliquen efectos excesivos durante el proceso de homogeneización de tejidos. Se debe utilizar una trituradora de tejidos, que forma parte de la tecnología de ciclo de presión (PCT) para la homogeneización inicial de tejidos9. Este paso reducirá el ciclo de carrera excesivo del homogeneizador de vidrio sobre vidrio (Figura 1...

El objetivo de este protocolo era proporcionar pasos detallados para obtener una preparación enriquecida con mitocondrias a partir de tejido cardíaco previamente congelado con una nueva tecnología de interrupción mecánica de baja energía del tejido que mejora la lisis tisular y la extracción de mitocondrias. Con este método, se puede lograr una mayor eficiencia de extracción sin generar altas tensiones de cizallamiento o alta temperatura y un corto tiempo de homogeneización (10-12 s)10.0001.
Obtener mitocondrias a partir de tejido congelado archivado es un activo valioso para realizar estudios funcionales2 y bioquímicos3, de lo contrario no sería fácilmente repetible en las condiciones experimentales exactas. Se ha utilizado un homogeneizador de vidrio de mortero de teflón clásico Potter-Elvehjem o homogeneizador Dounce y todavía se usa en laboratorios de investigación para homogeneizar tejidos blandos como el hígado, el riñón y el cerebro. Sin embargo, la homogeneización de tejidos duros como el músculo y el corazón requiere más tiempo de homogeneización, tratamiento enzimático, homogeneización de alta velocidad y una amplia experiencia de usuario. Esto es desventajoso para extraer orgánulos intactos, como las mitocondrias, del tejido duro, como el músculo y el corazón. El método descrito en este protocolo se utiliza para obtener una preparación enriquecida con mitocondrias de alto rendimiento para analizar complejos de proteínas de cadena de transporte de electrones mitocondriales (ETC) y su formación supercompleja en tejidos cardíacos cosechados de crías nacidas de cerdas ejercitadas y sedentarias, congeladas en nitrógeno líquido y almacenadas a -80 ° C para su uso futuro. Este método permite al usuario aislar la preparación enriquecida con mitocondrias de tejidos archivados previamente congelados.
La exposición externa a nanomateriales a roedores preñados puede afectar negativamente la función cardíaca y la respiración mitocondrial y la bioenergética de la progenie durante la gestación4. Sin embargo, los cambios positivos inducidos por el ejercicio aeróbico en la bioenergética de los miocitos fetales durante el embarazo aún no se han documentado. Sin embargo, estudios emergentes aportan evidencia de que el ejercicio aeróbico materno durante el embarazo tiene una influencia positiva en la función cardíaca fetal5. Con el fin de proporcionar más evidencia, se realizó un análisis de los efectos longitudinales del ejercicio materno sobre los complejos de la cadena respiratoria mitocondrial cardíaca de la descendencia (es decir, del Complejo I al Complejo V) durante el embarazo.
Este estudio tiene una relevancia significativa para la salud, ya que los resultados pueden sugerir que el ejercicio materno mejora la eficiencia de la producción de energía en las mitocondrias cardíacas de la descendencia. En este estudio, las cerdas (cerdo hembra) se utilizaron como modelo animal por dos razones: (i) la fisiología cardíaca es similar a la humana6, y (ii) la recolección de tejido cardíaco de la descendencia de diferentes puntos de tiempo es factible bajo una aprobación institucional de la IACUC. El estudio propuesto tiene como objetivo responder a muchas de las preguntas fundamentales que vinculan el ejercicio materno y sus posibles efectos positivos en la composición celular y bioquímica del tejido cardíaco de la descendencia. Este enfoque requiere técnicas de aislamiento de mitocondrias suaves pero efectivas a partir de tejido cardíaco previamente congelado obtenido de los largos y costosos estudios longitudinales que abordaron los problemas de los cambios bioenergéticos dentro de los miocitos cardíacos fetales durante el embarazo. El método descrito en este estudio permite utilizar grandes sumas de tejido archivado previamente congelado para la preparación enriquecida con mitocondrias para estudios analíticos y funcionales. El estudio también ayudará a llenar el vacío de conocimiento en este campo al proporcionar datos preliminares, lo que podría conducir a futuros estudios que determinen los efectos del ejercicio materno en la salud cardíaca en el útero y más allá.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

El perfil del complejo de transferencia de electrones mitocondrial (ETC) se modifica en el tejido cardíaco de la descendencia nacida de una cerda ejercitada. La hipótesis propuesta y probada fue que un ejercicio materno regular de una cerda durante el embarazo aumentaría la eficiencia mitocondrial de la bioenergética cardíaca de la descendencia. Esta hipótesis se probó mediante el aislamiento de mitocondrias mediante un procedimiento de aislamiento leve para evaluar la ETC mitocondrial y los perfiles supercomplejos. El procedimiento descrito aquí permitió el procesamiento de tejidos cardíacos archivados previamente congelados y eliminó la necesidad de una preparación de mitocondrias frescas para la evaluación de complejos ETC mitocondriales, supercomplejos y perfiles de actividad compleja ETC. Este protocolo describe la medición óptima del complejo de proteínas ETC en la inmunoblotting basada en anticuerpos multiplexados y la evaluación súper compleja utilizando electroforesis en gel nativo azul.

Siguiendo el protocolo, se preparó un buen rendimiento de la mezcla de proteínas enriquecidas con mitocondrias del tejido cardíaco. Se obtuvieron aproximadamente 15 mg/ml de mezcla de proteínas enriquecidas con mitocondrias a partir de un promedio de 1,2 g de tejido cardíaco congelado extraído de la descendencia de la cerda. Las observaciones indicaron que menos de 0,5 g de tejido cardíaco congelado no produjeron una cantidad suficiente de mezcla de proteínas enriquecidas con mitocondrias para llevar a cabo un en...

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Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

La preparación de muestras enriquecidas con mitocondrias a partir de tejidos sólidos archivados previamente congelados permitió a los investigadores realizar evaluaciones funcionales y analíticas de las mitocondrias en diversas modalidades experimentales. Este estudio demuestra cómo preparar preparaciones enriquecidas con mitocondrias a partir de tejido cardíaco congelado y realizar evaluaciones analíticas de las mitocondrias.

Medición de complejos de transferencia de electrones mitocondriales en tejido cardíaco previamente congelado de la descendencia de cerda: un modelo para evaluar los cambios bioenergéticos mitocondriales inducidos por el ejercicio

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

Este protocolo es significativo porque permite a los usuarios preparar muestras de mitocondrias a partir de tejidos congelados recolectados de estudios previos y archivados. Este protocolo también reduce el uso de animales vivos para la recolección de tejidos. Esta técnica permite a los usuarios utilizar tejidos de archivo previamente congelados para preparar muestras enriquecidas con mitocondrias mediante el empleo de un método suave de trituración de tejidos.Este método de preparación maximiza el rendimiento de la preparación de mitocondrias. A través de la lectura del protocolo es recomendable garantizar la disponibilidad de todos los componentes y herramientas, especialmente la unidad de trituradora completamente cargada y también hacer ejercicio con algunos tejidos no deseados para familiarizarse con los pasos. Demostrando el procedimiento estará Edina Kosa, una investigadora asociada de mi laboratorio.Para empezar, registre el peso del tubo que contiene el tejido cardíaco. Ahora pesa el tubo vacío y resta del peso previamente registrado para obtener un peso neto del tejido cardíaco. Coloque el tejido cardíaco congelado directamente en el vaso de precipitados de la solución helada.Revuelva durante cinco minutos. Simultáneamente, el uso de pinzas aplica una ligera presión al tejido para extraer la mayor cantidad de sangre posible. Saque el pañuelo con fórceps y apriete el corazón con una toalla de papel de filtro limpia para eliminar la sangre.Luego coloque el tejido en otro vaso de precipitados de solución helada. Después de remover el tejido durante cinco minutos, seque suavemente el pañuelo en una toalla de papel y retire la grasa, la sangre coagulada, las aurículas y las fascias. Agrupar el tejido ventricular.Para triturar las muestras de tejido, coloque de 50 a 300 miligramos de tejido cardíaco en la cámara trituradora de tejido desde el lado del carnero y cierre el lado del carnero. Luego agregue aproximadamente 0.2 a 0.8 mililitros de tampón de lavado al lado de la tapa del tubo. Use la herramienta de tubo para tapar la cámara de la trituradora con la tapa de la trituradora cómodamente sin apretarla demasiado.Coloque la cámara de la trituradora en la unidad de soporte de la trituradora con el lado del ariete hacia abajo para el ajuste comprometido. Inserte y enganche la broca del controlador de trituradora completamente cargada con la tapa de la trituradora, asegurando que la broca esté bien bloqueada en su lugar, luego aplique presión hacia abajo al conductor de la trituradora en la cámara de la trituradora hasta que el indicador de presión en el soporte de la trituradora alcance un ajuste de aproximadamente dos. Presione el gatillo y ejecute el controlador de la trituradora durante unos 10 a 12 segundos mientras mantiene la configuración en dos.Observe el tubo para asegurar la trituración y el paso de toda o la mayor parte de la masa de tejido a través del disco de lisis a la cámara superior de la trituradora y, si es necesario, devuelva el tubo al soporte de la trituradora para continuar la trituración. Después de triturar la muestra, levante la cámara de la trituradora de la unidad de soporte y use la herramienta de tubo para quitar la tapa de la trituradora y colóquela en una superficie limpia para su uso posterior recomendado solo dentro de la misma muestra para evitar la contaminación cruzada de otras muestras de tejido. Transfiera el tejido cardíaco triturado al tercer vaso de precipitados con 40 mililitros de tampón de lavado con una barra de agitación y agite el tejido durante cinco minutos a una velocidad media mientras está en la placa de agitación.Filtra la suspensión a través de un monofilamento de malla de nylon prehumedecido. Después de desechar el filtrado, lave el tejido triturado en el filtro tres veces con 10 mililitros de tampón de lavado. Transfiera el tejido lavado a un vaso de precipitados de 50 mililitros con 20 mililitros de tampón de lavado colocado en el baño de hielo en el agitador magnético.Agregue 0.5 mililitros de solución de tripsina mientras remueve constantemente durante 15 minutos. Aproximadamente a la mitad de la agitación, transfiera la suspensión de tejido a un homogeneizador de vidrio sobre vidrio de mano poco ajustado que puede contener 15 mililitros de volumen. Homogeneizar la suspensión con cuatro a cinco golpes suaves sin producir espuma.Luego, coloque el homogeneizado en un vaso de precipitados de 50 mililitros y mezcle en un plato de agitación. A continuación, agregue 10 mililitros del tampón de aislamiento que contiene el inhibidor de tripsina al homogeneizado e incube mientras se agita suavemente. Después de filtrar la suspensión nuevamente a través de un filtro de nylon, guarde el filtro en un tubo cónico de 50 mililitros y transfiera la fracción de partículas que queda en el filtro al homogeneizador de vidrio sobre vidrio.A 15 a 20 mililitros del tampón de lavado y homogeneizar suavemente con la mano durante 25 a 30 segundos. Después de combinar el homogeneizado con el filtrado y equilibrar los tubos, centrifugar y luego usar una pipeta de plástico retirar el sobrenadante dejando 0,2 mililitros de la parte superior del pellet esponjoso. Filtre el sobrenadante resultante en un nuevo tubo cónico utilizando un filtro de nylon para evitar la contaminación y centrífuga una vez más.Después de desechar el sobrenadante, lave el pellet dos o tres veces agregando el tampón de aislamiento al costado del tubo para evitar que se rompa o contamine el pellet. Deseche la capa de borde exterior blanco esponjoso cada vez. Agregue cinco mililitros del tampón de aislamiento a cada tubo y rompa el pellet usando una pipeta con una punta de un mililitro o una nueva pipeta de transferencia Luego diluya la suspensión con 20 mililitros de tampón de aislamiento adicional y centrifugue la suspensión a 8, 500 X g durante 15 minutos a cuatro grados Centígrados.Después de desechar el sobrenadante, resusped el pellet primero en cinco mililitros y luego en 15 mililitros adicionales del tampón de resuspensión y la centrífuga a 8, 500 X g durante 15 minutos a cuatro grados centígrados. Ahora deseche el sobrenadante y guarde el gránulo marrón que contiene mitocondrias intactas lavadas. Resuspend el pellet enriquecido con mitocondrias en 250 microlitros del tampón de resuspensión incluyendo inhibidores de la proteasa.Alícuota la suspensión en 25 microlitros de volumen, congela rápidamente en nitrógeno líquido y guárdala en un congelador de 80 grados centígrados durante varios años. Siguiendo el protocolo, la proteína enriquecida con mitocondrias se preparó a partir del corazón de la descendencia nacida de dos grupos de cerdas. Uno se ejercitaba durante el embarazo y el otro era sedentario.El análisis del perfil de proteínas de ETC reveló que la descendencia de cerdas ejercitadas presentaba niveles relativamente reducidos en algunos de los complejos de ETC. Las proteínas mitocondriales se resolvieron en un gradiente BN-PAGE de 3 a 8% y se inmunoprobieron con cócteles de anticuerpos. Tanto los grupos ejercitados como los sedentarios exhiben múltiples supercomplejos.El aumento prominente del supercomplejo observado fue a los nueve meses en el grupo ejercitado en comparación con el grupo sedentario. Las proteínas enriquecidas con mitocondrias obtenidas de diferentes grupos de edad de 48 horas tres meses, seis meses y nueve meses fueron analizadas para la actividad del Complejo I-II utilizando un ensayo cinético. El grupo ejercitado mostró una actividad del Complejo I-II en comparación con la del grupo sedentario.La viabilidad de los estudios funcionales sobre mitocondrias obtenidos de tejidos y células congelados es demostrada por otros investigadores. La preparación de mitocondrias obtenidas a partir de tejido congelado se puede aplicar para una amplia variedad de tejidos con un daño mínimo.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

El uso de andamios liposomas para reconstituir las interacciones proteína-proteína-lípidos proximal<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Investigación

Bioquímica

Analyzing Supercomplexes of the Mitochondrial Electron Transport Chain with Native Electrophoresis, In-gel Assays, and Electroelution

Análisis de supercomplexes de la cadena de transporte de electrones mitocondriales con electroforesis nativa, ensayos en gel y electroelución

The mitochondrial electron transport chain (ETC) transduces the energy derived from the breakdown of various fuels into the bioenergetic currency of the ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

Protocolo optimizado para la extracción de proteínas de la válvula mitral humana

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

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Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

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The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

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Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

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A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

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Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Etiquetado y visualización de productos de expresión del genoma mitocondrial en la levadura de Panadero Saccharomyces cerevisiae

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Evaluación de la función mitocondrial en el nervio ciático mediante respirometría de alta resolución

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