Name: measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes
Uploaded: 2021-08-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Detta arbete stöddes ekonomiskt av Kansas City Universitys intramurala anslag för Abdulbaki Agbas och Summer Research Fellowship för Daniel Barrera. Författarna är tacksamma för Dr. Jan Talleys redaktionella arbete.

Frysta avkommor hjärtvävnader mottogs från Dr. Sean Newcomer tillsammans med det institutionella IACUC godkännandebrevet. Hjärtvävnaderna erhölls från en långsiktig longitudinell studie, blixtfryst i flytande kväve och lagrades vid -80 °C för framtida användning. Alla protokoll om bearbetning av avkomma hjärtvävnad följde riktlinjerna från Kansas City University IBC och IACUC kommittéer.
1. Beredning av buffertar och reagenser
OBS: Förbered alla pro...

<ol>
	<li>Gross, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+functional+mitochondria+from+rat+kidney+and+skeletal+muscle+without+manual+homogenization.">Isolation of functional mitochondria from rat kidney and skeletal muscle without manual homogenization.</a> Analytical Biochemistry. 418 (2), 213-223 (2011).</li><li>Osto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+mitochondrial+respiration+in+previously+frozen+biological+samples.">Measuring mitochondrial respiration in previously frozen biological samples.</a> Current Protocols in Cell Biology. 89 (1), 116 (2020).</li><li>Agbas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+electron+transfer+cascade+enzyme+activity+assessment+in+cultured+neurons+and+select+brain+regions.">Mitochondrial electron transfer cascade enzyme activity assessment in cultured neurons and select brain regions.</a> Current Protocols in Toxicology. 80, 73 (2019).</li><li>Hathaway, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal-engineered+nanomaterial+exposure+disrupts+progeny+cardiac+function+and+bioenergetics.">Maternal-engineered nanomaterial exposure disrupts progeny cardiac function and bioenergetics.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (3), 446-458 (2017).</li><li>May, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+maternal+aerobic+exercise+during+pregnancy+on+fetal+cardiac+function+and+outflow.">Influence of maternal aerobic exercise during pregnancy on fetal cardiac function and outflow.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology MFM. 2 (2), 100095 (2020).</li><li>Ehler, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoidance+of+malignant+hyperthermia+in+a+porcine+model+for+experimental+open+heart+surgery.">Avoidance of malignant hyperthermia in a porcine model for experimental open heart surgery.</a> Laboratory Animal Science. 35 (2), 172-175 (1985).</li><li>Panov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bovine+serum+albumin+on+mitochondrial+respiration+in+the+brain+and+liver+of+mice+and+rats.">Effect of bovine serum albumin on mitochondrial respiration in the brain and liver of mice and rats.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 149 (2), 187-190 (2010).</li><li>Jha, P., Wang, X., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+respiratory+chain+supercomplexes+using+blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+(BN-PAGE).">Analysis of mitochondrial respiratory chain supercomplexes using blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE).</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 1-14 (2016).</li><li>Pressure Biosciences Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Isolation of Functional Mitochondria from Whole Rat Heart Using a PBI Shredder and Pressure Cycling Technology (PCT). , (2010).</li><li>McLaughlin, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+approach+to+quantify+mitochondrial+content+and+intrinsic+bioenergetic+efficiency+across+organs.">Novel approach to quantify mitochondrial content and intrinsic bioenergetic efficiency across organs.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17599 (2020).</li><li>Hom, J., Sheu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+dynamics+of+mitochondria--a+special+emphasis+on+cardiac+muscle+cells.">Morphological dynamics of mitochondria--a special emphasis on cardiac muscle cells.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 46 (6), 811-820 (2009).</li><li>Greggio, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+respiratory+chain+supercomplex+formation+in+response+to+exercise+in+human+skeletal+muscle.">Enhanced respiratory chain supercomplex formation in response to exercise in human skeletal muscle.</a> Cell Metabolism. 25 (2), 301-311 (2017).</li></ol>

De kritiska stegen för det här protokollet anges här. För det första bör vävnadshomogenisering hanteras noggrant så att överdrivna rena effekter inte kommer att appliceras under vävnadshomogeniseringsprocessen. En vävnadsförstörare bör användas, som är en del av tryckcyklingsteknik (PCT) för initial vävnads homogenisering9. Detta steg kommer att minska den överdrivna slagcykeln för homogenisator av glas mot glas (figur 1B) som ytterligare kan förs...

Målet med detta protokoll var att tillhandahålla detaljerade steg för att erhålla mitokondrier-berikade preparat från tidigare fryst hjärtvävnad med en ny teknik för låg energi mekanisk störning av vävnad som förbättrar vävnad lys och extraktion av mitokondrier. Med denna metod blir förbättrad extraktionseffektivitet utan att generera hög skjuvningsstress eller hög temperatur och kort homogeniseringstid (10-12 s) uppnåelig1.
Att få mitokondrier från arkiverad frusen vävnad är en värdefull tillgång för att utföra både funktionella2 och biokemiska studier3 annars inte lätt repeterbara under de exakta experimentella förhållandena. En klassisk Potter-Elvehjem Teflon pestle glass homogenisator eller Dounce homogenisator har använts och används fortfarande i forskningslaboratorier för att homogenisera mjuka vävnader som lever, njure och hjärna. Homogenisering av hårda vävnader som muskler och hjärta kräver dock mer homogeniseringstid, enzymbehandling, höghastighets homogenisering och omfattande användarupplevelse. Detta är ofördelaktigt för att extrahera intakta organeller som mitokondrier från hårdvävnad som muskler och hjärta. Metoden som beskrivs i detta protokoll används för att erhålla hög avkastning mitokondrier-berikad beredning för att analysera mitokondriell elektron transport kedja (ETC) proteinkomplex och deras superkomplex bildas i hjärtvävnader skördas från avkommor födda till utövad och stillasittande sugga, flash-fryst i flytande kväve, och lagras vid -80 °C för framtida användning. Denna metod gör det möjligt för användaren att isolera mitokondrier berikad beredning från tidigare frysta arkiverade vävnader.
Extern nanomaterialexponering för gravida gnagare kan påverka hjärtfunktionen och mitokondriell andning och bioenergetik på avkomma under dräktigheten4 negativt. Aerob motion-inducerad positiva förändringar i fetala myocyt bioenergetics under graviditeten är dock ännu inte dokumenteras. Nya studier ger dock bevis för att moderns aeroba träning under graviditeten har en positiv inverkan på fetala hjärtfunktionen5. För att ge ytterligare bevis utfördes en analys av de longitudinella effekterna av moderns träning på avkommans mitokondriella andningskedjekomplex (dvs. komplex I genom komplex V) under graviditeten.
Denna studie har betydande hälsorelevans eftersom resultaten kan tyda på att moderns träning förbättrar effektiviteten i energiproduktionen i hjärt mitokondrier av avkomman. I denna studie användes suggor (hongris) som en djurmodell av två skäl: (i) hjärtfysiologi liknar human6, och (ii) hjärtvävnadsskörd från avkommor från olika tidpunkter är möjlig enligt ett institutionellt IACUC-godkännande. Den föreslagna studien syftar till att svara på många av de grundläggande frågorna som kopplar samman moderns träning och dess potentiella positiva effekter på den cellulära och biokemiska makeupen av avkommans hjärtvävnad. Detta tillvägagångssätt kräver skonsam men effektiv mitokondrier isolering tekniker från tidigare fryst hjärt vävnad erhålls från de långa och kostsamma longitudinella studier som tog upp frågorna om bioenergetic förändringar inom fetala hjärt myocyter under graviditeten. Metoden som beskrivs i denna studie gör det möjligt att använda stora mängder tidigare frusen arkiverad vävnad för mitokondrier-berikad förberedelse för både analytiska och funktionella studier. Studien kommer också att bidra till att fylla kunskapsgapet inom detta område genom att tillhandahålla preliminära data, vilket kan leda till framtida studier som fastställer effekterna av moderns träning på hjärthälsan in utero och därefter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amino caproic acid</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>A2504-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Hu Total OxPhos complex kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>458199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-VDAC antibody</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab15895</td>
			<td>use 1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie G-250</td>
			<td>ThermoSientific</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie GelCode Blue</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>24592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Cabiochem</td>
			<td>300410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass-Glass pestle homogenizer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>KT885451-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Studio</td>
			<td>LICOR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-Dye conjugated anti-Rabbit Ab</td>
			<td>LICOR</td>
			<td>LC0725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell plate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Synergy HT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Native molecular weight marker</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BN2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh monofilament</td>
			<td>Small Part Inc</td>
			<td>CMN-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>ThermoScientfic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCT Shredder</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEA BLOCK Blocking buffer</td>
			<td>ThermoScienctific</td>
			<td>37527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredder PULSE Tube</td>
			<td>Pressure Bioscience Inc</td>
			<td>FT500-PS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M150-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>M191-1G</td>
			<td>Requires fresh preparation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring mitochondrial electron transfer complexes in previously frozen cardiac tissue from the offspring of sow: a model to assess exercise-induced mitochondrial bioenergetics changes

Den mitokondriella elektronöverföringskomplexet (ETC)-profilen modifieras i hjärtvävnaden hos avkomman som fötts till en tränad sugga. Denna hypotes testades genom att isolera mitokondrier med hjälp av en mild-isolering förfarande för att bedöma mitokondriell ETC och superkomplex profiler. Förfarandet som beskrivs här tillåtet för bearbetning av tidigare frysta arkiverade hjärtvävnader och eliminerade behovet av färska mitokondrier förberedelse för bedömning av mitokondriella ETC komplex, superkomplex och ETC komplexa verksamhet profiler. Detta protokoll beskriver den optimala ETC protein komplexa mätning i multiplexed antikropp-baserade immunblåsning och super komplexa bedömning med blå-native gel elektrofores.

Enligt protokollet bereddes ett bra utbyte av mitokondrier-berikad proteinblandning från hjärtvävnad. Cirka 15 mg/ml mitokondriberikad proteinblandning erhölls från i genomsnitt 1, 2 g fryst hjärtvävnad som skördats från avkomman till suggan. Mängden mitokondriell beredning var tillräcklig för att utföra (i) en standard immunoblot analys för bedömning av enskilda elektron överföring komplex (ETC) (dvs. Complex-I, II, III, IV och Complex-V), (ii) en mitokondriell superkomplex bedömning av BN-PAGE och imm...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochon

Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

Beredning av mitokondriberikade prover från tidigare frysta arkiverade fasta vävnader tillät utredarna att utföra både funktionella och analytiska bedömningar av mitokondrier i olika experimentella modaliteter. Denna studie visar hur man förbereder mitokondriberikade preparat från frusen hjärtvävnad och utför analytiska bedömningar av mitokondrier.

Mätning av mitokondriella elektronöverföringskomplex i tidigare frusen hjärtvävnad från avkomman till sugga: En modell för att bedöma träningsinducerade mitokondriella bioenergetiska förändringar

The mitochondrial electron transfer complex (ETC) profile is modified in the heart tissue of the offspring born to an exercised sow. The hypothesis ...

Detta protokoll är viktigt eftersom det gör det möjligt för användare att förbereda mitokondrier prover från frysta vävnader samlas in från tidigare studier och arkiveras. Detta protokoll minskar också användningen av levande djur för vävnadsskörd. Denna teknik gör det möjligt för användare att använda tidigare frysta arkivvävnader för att förbereda mitokondrier berikade prover genom att använda en mild vävnadsförstörelsemetod.Denna beredningsmetod maximerar utbytet av mitokondrierberedning. Genom att läsa protokollet är det lämpligt att säkerställa tillgängligheten av alla komponenter och verktyg, särskilt den fulladdade strimlardrivningen och även träna med några oönskade vävnader för att bekanta sig med stegen. Edina Kosa, forskare från mitt laboratorium, visar proceduren.Till att börja med, registrera vikten på röret som innehåller hjärtvävnaden. Väg nu det tomma röret och subtrahera det från den tidigare registrerade vikten för att få en nettovikt av hjärtvävnaden. Lägg den frusna hjärtvävnaden direkt i bägaren av iskall lösning.Rör om i fem minuter. Samtidigt med pincett appliceras lätt tryck på vävnaden för att komma ut så mycket blod som möjligt. Ta ut vävnaden med tång och pressa hjärtat med en ren filterpappershandduk för att ta bort blod.Placera sedan vävnaden i en annan bägare av iskall lösning. Efter omrörning av vävnaden i fem minuter, torka försiktigt vävnaden på en pappershandduk och ta bort fettet, clotted blod, öron och fascia. Poola ventrikulär vävnaden.För att strimla vävnadsproverna, placera 50 till 300 milligram hjärtvävnad i vävnadsförstörarkammaren från ramsidan och stäng ramsidan. Tillsätt sedan ca 0,2 till 0,8 milliliter tvättbuffert på rörets locksida. Använd rörverktyget för att täcka strimlarkammaren med strimlingslocket tätt utan att dra åt den för mycket.Placera dokumentförstörarkammaren i strimlarhållaren med ramsidan nedåt för inkopplad montering. Sätt i och koppla in den fulladdade strimlardrivrutinen med strimlarlocket och se till att borrkronan är ordentligt låst på plats och tryck sedan ner på strimlardrivrutinen i strimlarkammaren tills tryckindikatorn på dokumentförstöraren når en inställning på cirka två. Tryck på avtryckaren och kör strimlardrivrutinen i cirka 10 till 12 sekunder samtidigt som du behåller inställningen vid två.Observera röret för att säkerställa strimling och passning av hela eller större delen av vävnadsmassan genom lysskivan i den övre strimlarkammaren och återför vid behov röret till strimlarhållaren för att fortsätta strimla. Efter strimling lyfter provförstörarkammaren ut ur hållarenheten och använd rörverktyget för att ta bort strimlarlocket och placera det på en ren yta för senare användning som rekommenderas endast inom samma prov för att undvika korskontaminering från andra vävnadsprover. Överför den strimlade hjärtvävnaden till den tredje bägaren med 40 ml tvättbuffert med en omrörningsstång och rör om vävnaden i fem minuter med medelhastighet medan du är på omrörningsplattan.Filtrera suspensionen genom en förtätad monofilament i nylonnät. Efter att ha kasserat filtratet tvätta den strimlade vävnaden på filtret tre gånger med 10 ml tvättbuffert. Överför den tvättade vävnaden till en 50 ml bägare med 20 milliliter tvättbuffert placerad i isbadet på magnetröran.Tillsätt 0,5 ml trypsinlösning under ständig omrörning i 15 minuter. Ungefär halvvägs genom omrörningen överför vävnadsfjädringen till en löst monterad handhållen glas-på-glas homogenisator som rymmer 15 milliliter volym. Homogenisera suspensionen med fyra till fem mjuka slag utan att producera skum.Placera sedan homogenatet i en 50 ml bägare och blanda på en omrörningsplatta. Tillsätt sedan 10 ml isoleringsbuffert som innehåller trypsinhämmare till homogenatet och inkubera under försiktigt omrörning. Efter att ha filtrerat fjädringen igen genom ett nylonfilter spara filtret i ett koniskt rör på 50 milliliter och överför partikelfraktionen kvar på filtret till homogenisatorn glas på glas.Vid 15 till 20 ml tvättbuffert och homogenisera försiktigt med handen i 25 till 30 sekunder. Efter att ha kombinerat homogenatet med filtratet och balanserat rören, centrifugera och sedan använda en plastpipett ta bort supernatanten och lämna 0,2 milliliter från toppen av den fluffiga pelleten. Filtrera den resulterande supernatanten till ett nytt koniskt rör med hjälp av ett nylonfilter för att undvika förorening och centrifugera en gång till.Efter att ha kasserat supernatanten tvätta pelleten två till tre gånger genom att tillsätta isoleringsbufferten på sidan av röret för att förhindra att pelleten bryts eller förorenas. Kassera det fluffiga vita yttre kantskiktet varje gång. Tillsätt fem milliliter isoleringsbuffert till varje rör och bryt upp pelleten med en pipett med en en milliliterspets eller en ny överföringspipett Späd sedan suspensionen med 20 ml extra isoleringsbuffert och centrifugera suspensionen vid 8 500 X g i 15 minuter vid fyra grader Celsius.Efter att ha kasserat supernatanten återanvänds pelleten först i fem milliliter och sedan i ytterligare 15 milliliter av den återanvändande bufferten och centrifugen vid 8 500 X g i 15 minuter vid fyra grader Celsius. Kassera nu supernatanten och spara den bruna pelleten som innehåller tvättad intakt mitokondrier. Återsuspend mitokondrierna berikade pelleten i 250 mikroliter av den återupplivande bufferten inklusive proteashämmare.Aliquot suspensionen i 25 mikroliter volym, snabb frysning i flytande kväve och lagra i en 80 grader Celsius djupfrys i flera år. Enligt protokollet framställdes mitokondriberikat protein från hjärtat av avkommor födda till två grupper av suggor. Den ena utövades under graviditeten och den andra var stillasittande.ETC protein profil analys visade att avkomman av utövade suggor presenterade relativt minskade nivåer i några av ETC komplex. Mitokondriella proteiner löstes i en 3 till 8% gradient BN-PAGE och immunprobed med antikropp cocktails. Både motionerade och stillasittande grupper uppvisar flera superkomplex.Den framträdande superkomplexa ökningen som observerades var nio månader i den tränade gruppen jämfört med stillasittande gruppen. Mitokondrier-berikade proteiner som erhållits från olika åldersgrupper på 48 timmar tre månader, sex månader och nio månader analyserades för den komplexa I-II-aktiviteten med hjälp av en kinetisk analys. Den tränade gruppen visade en komplex I-II aktivitet jämfört med den stillasittande gruppen.Genomförbarhet av funktionella studier på mitokondrier som erhållits från frysta vävnader och celler visas av andra prövare. Beredning av mitokondrier som erhållits från frusen vävnad kan tillämpas för en mängd olika vävnader med minimal skada.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Använda Scaffold Liposomer att återskapa Lipid-proximala protein-proteininteraktioner<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Analyzing Supercomplexes of the Mitochondrial Electron Transport Chain with Native Electrophoresis, In-gel Assays, and Electroelution

Analysera superkomplex av den mitokondriella elektrontransportkedjan med naturliga elektrofores, in-gel-analyser och elektrolys

The mitochondrial electron transport chain (ETC) transduces the energy derived from the breakdown of various fuels into the bioenergetic currency of the ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

Optimerat protokoll för extraktion av proteiner från humanmitralventilen

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Analyser av mitokondrie kalcium tillströmningen i isolerade mitokondrier och odlade celler

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Measurement of Mitochondrial Oxygen Consumption in Permeabilized Fibers of Drosophila Using Minimal Amounts of Tissue

Mätning av mitokondriell syreförbrukning i Permeabilized fibrer av Drosophila använder minimala mängder av vävnad

The fruit fly, Drosophila melanogaster, represents an emerging model for the study of metabolism. Indeed, drosophila have structures homologous to human ...

Measuring Liver Mitochondrial Oxygen Consumption and Proton Leak Kinetics to Estimate Mitochondrial Respiration in Holstein Dairy Cattle

Mätning av levern mitokondriell syreförbrukning och Proton läcka kinetik för att uppskatta mitokondriell Respiration i Holstein mjölkkor

Oxygen consumption, proton motive force (PMF) and proton leak are measurements of mitochondrial respiration, or how well mitochondria are able to convert ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Använda i Vitro fluorescens resonans energiöverföring att studera dynamiken i proteinkomplex på en millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Model Membrane Platform for Reconstituting Mitochondrial Membrane Dynamics

En modell membran plattform för rekonstituering mitokondriellt membran Dynamics

Mitochondrial dynamics is essential for the organelle&#8217;s diverse functions and cellular responses. The crowded, spatially complex, mitochondrial ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Märkning och visualisering av mitokondriella genomuttrycksprodukter i bagerijäst Saccharomyces cerevisiae

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Bedömning av mitokondriell funktion i ischiasnerven med högupplöst respirometri

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...