Name: two-layered membrane sandwich method for laodelphax striatellus saliva collection
Uploaded: 2021-08-27T13:00:00
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이 작품은 중국 국립과학재단(2019YFC1200503호)과 청소년혁신진흥협회 32072385(2021084)가 지원했다.

1. SBPH 유지 보수
<ol><li>실험실의 유리 챔버 당 5-6 쌀(Oryza sativa cv. Nipponbare) 모종유리 인큐베이터 (65 x 200mm)에 viruliferous 및 RSV가없는 SBPH 개인을 후면하십시오. 16h 광/8h 다크 포토기간 하에서 쌀 식물을 25°C로 성장시다. 참고: 비수명과 RSV가 없는 SBPH 개인은 처음에는 중국 장쑤성에서 잡혔습니다.</li>
	<li>RSV 리보뉴클레오단백질(RNP)에 대해 제기된 토끼 RSV 특이적 폴리클론 항체(재료?...

<ol>
	<li>Cheng, X., Zhu, L., He, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+understanding+of+molecular+interactions+between+rice+and+the+brown+planthopper.">Towards understanding of molecular interactions between rice and the brown planthopper.</a> Molecular Plant. 6 (3), 621-634 (2013).</li><li>Cho, W. K., Lian, S., Kim, S. M., Park, S. H., Kim, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+insights+into+research+on+Rice+Stripe+Virus.">Current insights into research on Rice Stripe Virus.</a> The Plant Pathology Journal. 29 (3), 223-233 (2013).</li><li>He, M., Guan, S. Y., He, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+rice+stripe+virus.">Evolution of rice stripe virus.</a> Molecular Phylogenetics and Evolution. 109, 343-350 (2017).</li><li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonstructural+protein+NS4+of+Rice+Stripe+Virus+plays+a+critical+role+in+viral+spread+in+the+body+of+vector+insects.">Nonstructural protein NS4 of Rice Stripe Virus plays a critical role in viral spread in the body of vector insects.</a> PLoS One. 9 (2), 88636 (2014).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transovarial+transmission+of+a+plant+virus+is+mediated+by+vitellogenin+of+its+insect+vector.">Transovarial transmission of a plant virus is mediated by vitellogenin of its insect vector.</a> PLoS Pathogens. 10 (3), 1003949 (2014).</li><li>Taning, C. N., Andrade, E. C., Hunter, W. B., Christiaens, O., Smagghe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asian+citrus+psyllid+RNAi+pathway-RNAi+evidence.">Asian citrus psyllid RNAi pathway-RNAi evidence.</a> Scientific Reports. 6, 38082 (2016).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+feeding+Rice+Stripe+Virus+enables+efficient+virus+infection+of+Laodelphax+striatellus.">Artificial feeding Rice Stripe Virus enables efficient virus infection of Laodelphax striatellus.</a> Journal of Virological Methods. 235, 139-143 (2016).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+tissue-specific+vitellogenin+facilitates+transmission+of+plant+virus.">Insect tissue-specific vitellogenin facilitates transmission of plant virus.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), 1006909 (2018).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rice+Stripe+Virus+hitchhikes+the+vector+insect+vitellogenin+ligand-receptor+pathway+for+ovary+entry.">Rice Stripe Virus hitchhikes the vector insect vitellogenin ligand-receptor pathway for ovary entry.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374, 20180312 (2019).</li><li>Bao, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+intestine-specific+transcriptome+of+the+brown+planthopper+Nilaparvata+lugens+revealed+potential+functions+in+digestion,+detoxification+and+immune+response.">De novo intestine-specific transcriptome of the brown planthopper Nilaparvata lugens revealed potential functions in digestion, detoxification and immune response.</a> Genomics. 99 (4), 256-264 (2012).</li><li>Elzinga, D. A., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+protein+effectors+in+plant-aphid+interactions.">The role of protein effectors in plant-aphid interactions.</a> Current Opinion In Plant Biology. 16 (4), 451-456 (2013).</li><li>Chung, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbivore+exploits+orally+secreted+bacteria+to+suppress+plant+defenses.">Herbivore exploits orally secreted bacteria to suppress plant defenses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (39), 15728-15733 (2013).</li><li>Bos, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+genomics+approach+identifies+candidate+effectors+from+the+aphid+species+Myzus+persicae+(green+peach+aphid).">A functional genomics approach identifies candidate effectors from the aphid species Myzus persicae (green peach aphid).</a> PLoS Genetics. 6 (11), 1001216 (2010).</li><li>Liu, X., Zhou, H., Zhao, J., Hua, H., He, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+secreted+watery+saliva+proteins+of+the+rice+brown+planthopper,+Nilaparvata+lugens+(St&#229;l)+by+transcriptome+and+Shotgun+LC-MS/MS+approach.">Identification of the secreted watery saliva proteins of the rice brown planthopper, Nilaparvata lugens (St&#229;l) by transcriptome and Shotgun LC-MS/MS approach.</a> Journal of Insect Physiology. 89, 60-69 (2016).</li><li>Cao, T. T., L&#252;, J., Lou, Y. G., Cheng, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding-induced+interactions+between+two+rice+planthoppers,+Nilaparvata+lugens+and+Sogatella+furcifera+(Hemiptera:+Delphacidae):+effects+on+feeding+and+honeydew+excretion.">Feeding-induced interactions between two rice planthoppers, Nilaparvata lugens and Sogatella furcifera (Hemiptera: Delphacidae): effects on feeding and honeydew excretion.</a> Environmental Entomology. 42 (6), 1281-1291 (2013).</li><li>De Vos, M., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myzus+persicae+(green+peach+aphid)+salivary+components+induce+defence+responses+in+Arabidopsis+thaliana.">Myzus persicae (green peach aphid) salivary components induce defence responses in Arabidopsis thaliana.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 32 (11), 1548-1560 (2009).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+immune+system+architecture+and+transcriptome+responses+to+southern+rice+black-streaked+dwarf+virus+in+Sogatella+furcifera.">Understanding the immune system architecture and transcriptome responses to southern rice black-streaked dwarf virus in Sogatella furcifera.</a> Scientific Reports. 6, 36254 (2016).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penetration+into+rice+tissues+by+brown+planthopper+and+fine+structure+of+the+salivary+sheaths.">Penetration into rice tissues by brown planthopper and fine structure of the salivary sheaths.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 129 (3), 295-307 (2008).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Armet+is+an+effector+protein+mediating+aphid-plant+interactions.">Armet is an effector protein mediating aphid-plant interactions.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 29 (5), 2032-2045 (2015).</li><li>Chaudhary, R., Atamian, H. S., Shen, Z., Briggs, S. P., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GroEL+from+the+endosymbiont+Buchnera+aphidicola+betrays+the+aphid+by+triggering+plant+defense.">GroEL from the endosymbiont Buchnera aphidicola betrays the aphid by triggering plant defense.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (24), 8919-8924 (2014).</li><li>Ma, R., Chen, J. L., Cheng, D. F., Sun, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+defense+mechanism+in+wheat+by+polyphenol+oxidase+from+aphid+saliva.">Activation of defense mechanism in wheat by polyphenol oxidase from aphid saliva.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 58 (4), 2410-2418 (2010).</li><li>Zheng, L., Seon, Y. J., McHugh, J., Papagerakis, S., Papagerakis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+genes+show+circadian+rhythms+in+salivary+glands.">Clock genes show circadian rhythms in salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 91 (8), 783-788 (2012).</li><li>Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+transcriptomic/proteomic+analysis+of+salivary+gland+and+secreted+saliva+in+three+planthopper+species.">Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species.</a> Journal of Proteomics. 172, 25-35 (2018).</li><li>Huang, H. J., Liu, C. W., Xu, H. J., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-like+protein,+a+saliva+component+involved+in+brown+planthopper+virulence+and+host+adaptation.">Mucin-like protein, a saliva component involved in brown planthopper virulence and host adaptation.</a> Journal of Insect Physiology. 98, 223-230 (2017).</li><li>Shangguan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucin-like+protein+of+planthopper+is+required+for+feeding+and+induces+immunity+response+in+plants.">A mucin-like protein of planthopper is required for feeding and induces immunity response in plants.</a> Plant Physiology. 176 (1), 552-565 (2018).</li><li>Petrova, A., Smith, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodetection+of+a+brown+planthopper+(Nilaparvata+lugens+St&#229;l)+salivary+catalase-like+protein+into+tissues+of+rice,+Oryza+sativa.">Immunodetection of a brown planthopper (Nilaparvata lugens St&#229;l) salivary catalase-like protein into tissues of rice, Oryza sativa.</a> Insect Molecular Biology. 23 (1), 13-25 (2014).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+small+brown+planthopper,+Laodelphax+striatellus.">Genome sequence of the small brown planthopper, Laodelphax striatellus.</a> GigaScience. 6 (12), 1-12 (2017).</li><li>Van Bel, A. J., Will, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+proteins+in+watery+and+gel+saliva+of+aphids.">Functional evaluation of proteins in watery and gel saliva of aphids.</a> Frontiers In Plant Science. 7, 1840 (2016).</li><li>Perez-Vilar, J., Hill, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+assembly+of+secreted+mucins.">The structure and assembly of secreted mucins.</a> The Journal of Biological Chemistry. 274 (45), 31751-31754 (1999).</li><li>Pitino, M., Hogenhout, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aphid+protein+effectors+promote+aphid+colonization+in+a+plant+species-specific+manner.">Aphid protein effectors promote aphid colonization in a plant species-specific manner.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions: MPMI. 26 (1), 130-139 (2013).</li><li>Zhang, F., Zhu, L., He, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+gene+expression+in+response+to+brown+planthopper+feeding+in+rice.">Differential gene expression in response to brown planthopper feeding in rice.</a> Journal of Plant Physiology. 161 (1), 53-62 (2004).</li><li>Hogenhout, S. A., Ammar, E. -. D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+vector+interactions+with+persistently+transmitted+viruses.">Insect vector interactions with persistently transmitted viruses.</a> Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).</li><li>Boissot, N., Schoeny, A., Vanlerberghe-Masutti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vat,+an+amazing+gene+conferring+resistance+to+aphids+and+viruses+they+carry:+from+molecular+structure+to+field+effects.">Vat, an amazing gene conferring resistance to aphids and viruses they carry: from molecular structure to field effects.</a> Frontiers In Plant Science. 7, 1420 (2016).</li></ol>

인공 식단에 곤충의 성공적인 양육은 1962년에 미틀러와 Dadd가 인공 식단29,30을보유하기 위해 파라핀 막 기술을 설명했을 때 처음 보고되었습니다. 그리고이 방법은 곤충 생물학 및 행동의 많은 측면에서 탐구 되었습니다., 예를 들어, 영양소 보충, dsRNA 공급, 그리고 바이러스 수집. 타액 분석의 요구 사항에 따라, 5% 자당은 이 연구에서 SBPH의 타액을 수집...

테누이바이러스속의 네거티브 좌초 RNA 바이러스인 쌀줄무늬 바이러스(RSV)는 동아시아1,2,3에서쌀 생산에 심각한 질병을 일으킨다. 감염된 쌀 식물에서 건강한 식물로 RSV를 전송하는 것은 곤충 벡터에 따라 달라집니다, 주로 라오델파엑스 스트트리아텔루스, 이는 지속적인 전파 방식으로 RSV를 전송. SBPH는 RSV 감염 식물에 먹이 후 바이러스를 취득. 곤충 내부에 들어가면 RSV는 먹이기 하루 후 미드구트 상피 세포를 감염시키고 중간 구트 장벽을 통과하여 혈류를 관통합니다. 그 후, RSV는 혈몰리프를 통해 다른 조직으로 퍼지고 전파합니다. 약 10-14일 후의 잠정 기간 후, 침샘 내부의 바이러스는 분비타액을 통해 건강한 숙주 식물로 전염될 수 있으며, SBPH는 플록4,5,6,7,8,9,10에서 수액을 빨아들이는 동안 . 효율적인 공급 과정과 타액의 다양한 요인은 곤충에서 숙주 식물로 RSV의 확산에 필수적입니다.
타액선으로 분비되는 곤충 타액은 곤충, 바이러스 및 숙주 식물을 중재하는 것으로 추정됩니다. Hemipteran 곤충은 일반적으로 타액의 두 가지 유형을 생산 : 타액겔링 과 물 타액11,12,13. 겔링 타액은 주로 숙주 세포 들 사이에서 스타일운동의 움직임을 유지하기 위해 아포플라즘으로 분비되며 식물 성 저항및 면역반응(14,15,16,17)을극복하는 데도 관련이 있다. 먹이기의 탐사 단계에서 곤충은 간헐적으로 겔화 타액을 분비하여 즉시 산화되어 표면 플랜지를 형성합니다. 그런 다음 단일 또는 분기 된 칼집은스타일채널(18,19,20)을예약하도록 스타일이 감싸고 있다. 표피의 표면 플랜지는 앵커 포인트역할을 하여 스타일화의 침투를 용이하게 하는 것으로 추정되며, 스타일주위의 칼집은 기계적 안정성과윤활(16,21,22,23)을제공할 수 있다. Nlshp는 타액 칼집 형성과 갈색 식물호퍼(닐라파르바타 루겐스,BPH)의 성공적인 공급에 대한 필수 단백질로 확인되었다. 진딧물 아시르토시폰 피섬에 의해 분비되는 구조적 칼집 단백질(SHP)의 발현억제는 숙주체튜브(24)로부터의수유를 방해함으로써 번식을 감소시켰다. 더욱이, 몇몇 곤충 종에서는, 젤 타액 요인은 소위 초식동물 관련 분자 패턴 (HAMPs)를 형성해서 식물 면역 반응을 촉발하기 위하여 가정됩니다. N. lugens에서,NlMLP, 칼집 형성과 관련된 mucin 같은 단백질은 세포 사멸, 방위 관련 유전자의 발현 및 칼로스 증착(25,26)을포함하여 공급에 대한 식물 방어를 유도한다. 또한, 진딧물에서 일부 젤 타액 인자는 병원체-관련 분자 패턴12,15,27과유사한 유전자 대 유전자 상호 작용을 통해 식물 방어 반응을 유발하는 것으로 입증되었다.
곤충 수유 및/또는 병원균 전달에 필수적인 타액 인자를 연구하기 위해서는 분비타를 분석할 필요가 있습니다. 여기서, 충분한 양의 타액을 얻기 위한 인공 공급 및 수집 방법은 추가 분석을 위해 설명된다. 단 하나의 영양 원소만 을 함유한 배지를 사용하여, 많은 타액 단백질은 은 염색및 서양 얼룩에 의해 수집되고 분석되었다. 이 방법은 SBPH에 의한 RSV 전송에 필수적인 타액의 요인에 대한 추가 연구에 도움이 될 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-KD centrifugal filter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>R5PA83496</td>
			<td>For concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x Protein Transfer Buffer(wet)</td>
			<td>macGENE</td>
			<td>MP008</td>
			<td>Transfer buffer for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x TBST buffer</td>
			<td>Coolaber</td>
			<td>SL1328-500mL&#215;10</td>
			<td>Wash buffer for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azure c600 biosystems</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Azure c600</td>
			<td>Imaging system for western blotting and silver staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color Prestained protein ladder</td>
			<td>GenStar</td>
			<td>M221-01</td>
			<td>Protein marker for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL&#160;western blotting detection reagents</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>RPN2209</td>
			<td>Western blotting detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enchanced HRP-DAB Chromogenic Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>#PA110</td>
			<td>Chromogenic reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated goat anti-rabbit antibodies</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401393-2ML</td>
			<td>Polyclonal secondary antibody for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon(R)-P Polyvinylidene difluoride membrane</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td>Transfer membrane for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1725125</td>
			<td>For quantitative real-time PCR (qRT-PCR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHES</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708891</td>
			<td>For Reverse-transcriptional PCR (RT-PCR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GP Filter, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td>For filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAB TGX Gels</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>4561043</td>
			<td>For SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-ONEC-W</td>
			<td>Detection of protein concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane</td>
			<td>PALL</td>
			<td>T42754</td>
			<td>Membrane for dot-ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Membrane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7793-1EA</td>
			<td>Making artifical diet sandwichs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-LssgMP polyclonal antibody against LssgMP peptides</td>
			<td>Genstript</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit primary anti-LssgMP polyclonal antibody for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-RSV polyclonal antibody</td>
			<td>Genstript</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit primary anti-RSV polyclonal antibody for western blotting and dot-ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAprep pure Micro Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP420</td>
			<td>For RNA Extraction</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-layered membrane sandwich method for laodelphax striatellus saliva collection

동아시아에서 농업의 상당한 경제적 손실을 일으키는 쌀 줄무늬 바이러스 (RSV),는 전적으로 숙주 쌀 사이에서 효과적인 전송을위한 곤충 벡터에 의존한다. Laodelphax striatellus (작은 갈색 식물호퍼, SBPH)는 phloem에서 수액을 빨아들이면서 RSV를 수평으로 전송하는 1 차 곤충 벡터입니다. 타액은 곤충의 먹이 행동에 중요한 역할을합니다. 피어싱-빠는 먹이 기법으로 곤충의 타액에 대한 연구에 유용한 편리한 방법이 여기에 설명되어 있습니다. 이 방법에서 곤충은 두 개의 뻗은 파라핀 필름 층 사이에 끼어있는 인공 식단을 먹을 수있었습니다. 타액을 함유한 식단은 매일 수집, 여과, 농축등을 통해 추가 분석을 위해 집중되었다. 마지막으로, 수집된 타액의 질은 단백질 염색 및 면역 블로팅에 의해 검사되었다. 이 방법은 SBPH의 타액에서 RSV 와 무신 과 같은 단백질의 존재를 검출함으로써 예시되었다. 이러한 인공 공급 및 타액 수집 방법은 먹이 행동과 바이러스 전송과 관련된 곤충 타액의 요인에 대한 추가 연구를위한 기초를 마련할 것입니다.

인공 공급 설치 및 타액 수집의 회로도 도 1A는 타액을 수집하는 먹이 챔버로 사용되는 유리 실린더(15cm x 2.5cm)를 묘사한다. 첫째, SBPH 애벌레는 수집 효율을 향상시키기 위해 몇 시간 동안 굶주린 다음 5 분 동안 냉각하여 고정되었습니다. 곤충이 유리 실린더로 옮겨진 후, 챔버의 두 개의 열린 끝은 뻗은 파라핀 멤브레인으로 덮여 있었다. 한쪽 끝에서, 5% 자당?...

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Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection

본 프로토콜은 인공 매체를 사용하여 피어싱 빨아 먹는 곤충으로부터 충분한 타액을 수집하는 방법을 설명합니다. 이것은 곤충 타액을 수집하고 곤충 먹이 기법과 벡터 매개 바이러스 전송에 타액 기능을 연구하기위한 편리한 방법입니다.

라오델파엑스 스트리아텔루스 타액 컬렉션을 위한 2층 멤브레인 샌드위치 방법

Rice stripe virus (RSV), which causes significant economic loss of agriculture in East Asia, entirely depends on insect vectors for its effective ...

인공 공급 및 타액 수집은 곤충 타액에서 이펙터를 검출하는 직접적인 방법을 제공합니다. 그러나, 이것은 이전에 자세히 설명되지 않았습니다. 이 프로토콜은 사프로피틱 곤충의 타액 수집에 효과적입니다.또한, 그것은 간단한 기술, 우리는 인공 다이어트로 만 자당을 포함 하는 매체를 사용 하 여. 사프로피틱 곤충의 타액은 수유 행동을 유익하고 병원균을 전송하기 위하여 호스트의 면역 계통에 대하여 영향을 미칠 수 있습니다. 곤충 행동과 곤충 뼈 경로 연구에 사용할 수있는이 약.이것은 수행하는 간단한 방법입니다. 그러나, 이것은 타액이 추가 연구를 위해 수집되고 있기 때문에 깨끗한 실험 환경의 장착을 건의합니다. 먼저 인공 식단을 위한 5% 자당 용액을 준비하고, 0.22 미크론 필터를 통해 용액을 걸기하여 세균 오염 및 불순물을 제거합니다.약 200개의 작은 갈색 식물 호퍼 애벌레를 3~5시간 동안 굶주린 후 먹이실에 도입하십시오. 다음으로, 유리 실린더를 먹이챔버로 준비하고, 실험곤충을 도입하기 전에 파라핀 멤브레인으로 챔버의 한 쪽 끝을 덮은 다음, 곤충을 유리 실린더로 옮기고 챔버의 다른 쪽 끝을 뻗은 파라핀 멤브레인으로 덮는다. 멤브레인에 인공 식단200 마이크로리터를 추가한 다음 액체를 뻗은 파라핀 멤브레인의 또 다른 층으로 덮습니다.마지막으로, 알루미늄 호일로 챔버를 덮고 빛에 노출된 인공 식단 장치로 끝을 남깁니다. 24시간 후, 곤충을 고정하기 위해 섭씨 4도에서 실린더를 냉각하여 SBPH 타액을 수집한 다음 외부 필름을 발견하고 멸균 파이펫을 사용하여 1.5 밀리리터 멸균 튜브로 인공 식단을 수집합니다. 수집된 타액을 분석할 때까지 영하 80도에서 보관하십시오.다음으로, 50 마이크로리터의 신선한 인공 식단으로 내부 막을 부드럽게 배관하여 헹구고 인공 세척 식단을 1.5 밀리리터 멸균 튜브로 수집합니다. 세 번의 헹구기 후, 내부 막에 신선한 인공 식단을 추가하고 갓 뻗은 파라핀 멤브레인을 위에 놓습니다. 마지막으로, 수집된 샘플을 0.22 미크론 필터 유닛을 통해 필터링하여 미생물 및 기타 오염 물질을 제거합니다.500 마이크로리터, 10킬로달톤 원심 필터로 집단 타액 샘플을 전송합니다. 원심분리시 시료를 원심분리합니다. 상체를 수집하고 100 마이크로 리터에 최종 볼륨을 제기.수집된 타액의 농도를 측정하려면 UV 가시 분광광계를 켜고 받침대를 이중 증류수로 세 번 세척합니다. 다음 순서로 화면에 옵션을 선택, 단백질, 단백질 A280. 밀리리터당 1밀리그램에 해당하는 유형과 하나의 흡광도 장치를 선택합니다.그런 다음 340 나노미터의 기준선 보정을 위해 상자를 선택합니다. 다음으로, 5%의 수성 용액을 빈으로 두 개의 마이크로리터를 적재한 다음 화면 하단에 블랭크를 터치합니다. 마지막으로, 표준을 설정한 후 수집된 타액의 마이크로리터 2개를 적재하고 단백질 농도를 기록한다.5%의 자당을 먹일 때, SBPH의 80% 이상이 처음 4일 동안 살아남았습니다. 그러나, 5일째부터 사망률은 40%로 빠르게 증가했고, 7일째에는 SBPH의 절반도 안 되는 사람들이 살아남았습니다. SDS 페이지 분석은 RSV 감염 SBPH 타액에서 농축 타액 샘플이 5% 자당 음성 대조군보다 더 많은 단백질을 함유하고 있음을 보여주었다.RSV 캡시드 단백질, 비감염 및 비생물 곤충의 검출을 위한 서양 얼룩 분석에서. RSV 캡시드 단백질은 LssgMP유전자에 대하여 설계된 항체인 비수명성 샘플에서 성공적으로 검출되었으며, LssgMP는 타액 단백질임을 입증하여 감염되지 않은 비감염 및 비수성 샘플에서 78킬로달톤 단백질을 검출하였다. 다른 조직에서 LssgMP 성적증명서 수준의 QRT PCR 분석은 침샘의 Lssg 성적증명서 수준이 전신과 창자보다 20배 높은 것으로 나타났으며, 타액선에서 LssgMP의 특정 발현을 확인했습니다.타액 수집의 효율성을 보장하기 위해 챔버에 도입하기 전에 실험 곤충을 굶주리고 필요합니다. 게다가, 수집된 견본에 있는 미생물 오염을 감소시키기 위하여 인공 매체를 24 시간마다 수집하고 교환되어야 합니다. 이 기술은 병원균을 전달하는 타액의 기능을 연구하는 직접적인 방법을 제공한다.또한, 그것은 곤충 병원체 호스트 상호 작용을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

Lipidic Mesophases를 사용하여 구조 결정을위한 막 단백질 Crystallizing

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

연구

생물학

High-throughput Crystallization of Membrane Proteins Using the Lipidic Bicelle Method

Lipidic Bicelle 방법을 사용하여 막 단백질의 높은 처리량 결정

Membrane proteins (MPs) play a critical role in many physiological processes such as pumping specific molecules across the otherwise impermeable membrane ...

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

성인 Zebrafish의 생물 화학 분석을위한 혈액 수집

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

Use of a Robot for High-throughput Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Lipidic Mesophases의 막 단백질의 높은 처리량을 결정하기위한 로봇의 사용

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through ...

Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

Macromolecular의 결정학에 의해 구조 결정에 대한 Lipidic Mesophases에서 재배 막 단백질의 수확 및 Cryo 냉각 크리스털

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

플라즈마 단백질 보존을위한 혈액 수집 장비로부터 게놈 DNA를 추출하는 실제적이고 새로운 방법

Laboratory tests can be done on the cellular or  fluid portions of the blood. The use of different blood collection tubes  determines the portion of the ...

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

의 수집과 분석<em&gt; 애기 장대</em&gt; 사부는 EDTA-촉진 방법을 사용하여 삼출물

The plant phloem is essential for the long-distance transport of (photo-) assimilates as well as of signals conveying biotic or abiotic stress. It ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Microperfusion 기술은 쥐 장간막에서 미세 혈관 투과성의 규정을 조사하기 위해

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

성인 Zebrafish의에서 혈액 검사에 대한 반복 채혈

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

포유류 세포에 있는 바닥 상태 고갈 슈퍼 해상도 영상

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...