Name: two-layered membrane sandwich method for laodelphax striatellus saliva collection
Uploaded: 2021-08-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (No. 2019YFC1200503), Çin Ulusal Bilim Vakfı (No. 32072385) ve Gençlik İnovasyonu Teşvik Derneği CAS (2021084) tarafından desteklendi.

1. SBPH bakımı
<ol><li>Virülifer ve RSV içermeyen SBPH bireylerini, laboratuvarda cam oda başına 5-6 pirinç(Oryza sativa cv. Nipponbare) fidesi ile bir cam inkübatörde (65 x 200 mm) arkalayın. Pirinç bitkilerini 25 °C'de 16 saat açık / 8 saat koyu fotoperiyod altında yetiştirin. NOT: Virülifer ve RSV içermeyen SBPH bireyleri başlangıçta Jiangsu Eyaleti, Çin'de yakalandı.</li>
	<li>SBPH'deki RSV'nin, RSV ribonucleoproteinlerine (RNP' ler) karşı yükseltilmiş tavşan RSV'ye özgü po...

<ol>
	<li>Cheng, X., Zhu, L., He, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+understanding+of+molecular+interactions+between+rice+and+the+brown+planthopper.">Towards understanding of molecular interactions between rice and the brown planthopper.</a> Molecular Plant. 6 (3), 621-634 (2013).</li><li>Cho, W. K., Lian, S., Kim, S. M., Park, S. H., Kim, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+insights+into+research+on+Rice+Stripe+Virus.">Current insights into research on Rice Stripe Virus.</a> The Plant Pathology Journal. 29 (3), 223-233 (2013).</li><li>He, M., Guan, S. Y., He, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+rice+stripe+virus.">Evolution of rice stripe virus.</a> Molecular Phylogenetics and Evolution. 109, 343-350 (2017).</li><li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonstructural+protein+NS4+of+Rice+Stripe+Virus+plays+a+critical+role+in+viral+spread+in+the+body+of+vector+insects.">Nonstructural protein NS4 of Rice Stripe Virus plays a critical role in viral spread in the body of vector insects.</a> PLoS One. 9 (2), 88636 (2014).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transovarial+transmission+of+a+plant+virus+is+mediated+by+vitellogenin+of+its+insect+vector.">Transovarial transmission of a plant virus is mediated by vitellogenin of its insect vector.</a> PLoS Pathogens. 10 (3), 1003949 (2014).</li><li>Taning, C. N., Andrade, E. C., Hunter, W. B., Christiaens, O., Smagghe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asian+citrus+psyllid+RNAi+pathway-RNAi+evidence.">Asian citrus psyllid RNAi pathway-RNAi evidence.</a> Scientific Reports. 6, 38082 (2016).</li><li>Garbutt, J. S., Bell&#233;s, X., Richards, E. H., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+double-stranded+RNA+in+insect+hemolymph+as+a+potential+determiner+of+RNA+interference+success:+evidence+from+Manduca+sexta+and+Blattella+germanica.">Persistence of double-stranded RNA in insect hemolymph as a potential determiner of RNA interference success: evidence from Manduca sexta and Blattella germanica.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (2), 171-178 (2013).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+feeding+Rice+Stripe+Virus+enables+efficient+virus+infection+of+Laodelphax+striatellus.">Artificial feeding Rice Stripe Virus enables efficient virus infection of Laodelphax striatellus.</a> Journal of Virological Methods. 235, 139-143 (2016).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+tissue-specific+vitellogenin+facilitates+transmission+of+plant+virus.">Insect tissue-specific vitellogenin facilitates transmission of plant virus.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), 1006909 (2018).</li><li>Huo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rice+Stripe+Virus+hitchhikes+the+vector+insect+vitellogenin+ligand-receptor+pathway+for+ovary+entry.">Rice Stripe Virus hitchhikes the vector insect vitellogenin ligand-receptor pathway for ovary entry.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374, 20180312 (2019).</li><li>Bao, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+intestine-specific+transcriptome+of+the+brown+planthopper+Nilaparvata+lugens+revealed+potential+functions+in+digestion,+detoxification+and+immune+response.">De novo intestine-specific transcriptome of the brown planthopper Nilaparvata lugens revealed potential functions in digestion, detoxification and immune response.</a> Genomics. 99 (4), 256-264 (2012).</li><li>Elzinga, D. A., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+protein+effectors+in+plant-aphid+interactions.">The role of protein effectors in plant-aphid interactions.</a> Current Opinion In Plant Biology. 16 (4), 451-456 (2013).</li><li>Chung, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herbivore+exploits+orally+secreted+bacteria+to+suppress+plant+defenses.">Herbivore exploits orally secreted bacteria to suppress plant defenses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (39), 15728-15733 (2013).</li><li>Bos, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+genomics+approach+identifies+candidate+effectors+from+the+aphid+species+Myzus+persicae+(green+peach+aphid).">A functional genomics approach identifies candidate effectors from the aphid species Myzus persicae (green peach aphid).</a> PLoS Genetics. 6 (11), 1001216 (2010).</li><li>Liu, X., Zhou, H., Zhao, J., Hua, H., He, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+secreted+watery+saliva+proteins+of+the+rice+brown+planthopper,+Nilaparvata+lugens+(St&#229;l)+by+transcriptome+and+Shotgun+LC-MS/MS+approach.">Identification of the secreted watery saliva proteins of the rice brown planthopper, Nilaparvata lugens (St&#229;l) by transcriptome and Shotgun LC-MS/MS approach.</a> Journal of Insect Physiology. 89, 60-69 (2016).</li><li>Cao, T. T., L&#252;, J., Lou, Y. G., Cheng, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding-induced+interactions+between+two+rice+planthoppers,+Nilaparvata+lugens+and+Sogatella+furcifera+(Hemiptera:+Delphacidae):+effects+on+feeding+and+honeydew+excretion.">Feeding-induced interactions between two rice planthoppers, Nilaparvata lugens and Sogatella furcifera (Hemiptera: Delphacidae): effects on feeding and honeydew excretion.</a> Environmental Entomology. 42 (6), 1281-1291 (2013).</li><li>De Vos, M., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myzus+persicae+(green+peach+aphid)+salivary+components+induce+defence+responses+in+Arabidopsis+thaliana.">Myzus persicae (green peach aphid) salivary components induce defence responses in Arabidopsis thaliana.</a> Plant, Cell &amp; Environment. 32 (11), 1548-1560 (2009).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+immune+system+architecture+and+transcriptome+responses+to+southern+rice+black-streaked+dwarf+virus+in+Sogatella+furcifera.">Understanding the immune system architecture and transcriptome responses to southern rice black-streaked dwarf virus in Sogatella furcifera.</a> Scientific Reports. 6, 36254 (2016).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penetration+into+rice+tissues+by+brown+planthopper+and+fine+structure+of+the+salivary+sheaths.">Penetration into rice tissues by brown planthopper and fine structure of the salivary sheaths.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 129 (3), 295-307 (2008).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Armet+is+an+effector+protein+mediating+aphid-plant+interactions.">Armet is an effector protein mediating aphid-plant interactions.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 29 (5), 2032-2045 (2015).</li><li>Chaudhary, R., Atamian, H. S., Shen, Z., Briggs, S. P., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GroEL+from+the+endosymbiont+Buchnera+aphidicola+betrays+the+aphid+by+triggering+plant+defense.">GroEL from the endosymbiont Buchnera aphidicola betrays the aphid by triggering plant defense.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (24), 8919-8924 (2014).</li><li>Ma, R., Chen, J. L., Cheng, D. F., Sun, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+defense+mechanism+in+wheat+by+polyphenol+oxidase+from+aphid+saliva.">Activation of defense mechanism in wheat by polyphenol oxidase from aphid saliva.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 58 (4), 2410-2418 (2010).</li><li>Zheng, L., Seon, Y. J., McHugh, J., Papagerakis, S., Papagerakis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+genes+show+circadian+rhythms+in+salivary+glands.">Clock genes show circadian rhythms in salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 91 (8), 783-788 (2012).</li><li>Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+transcriptomic/proteomic+analysis+of+salivary+gland+and+secreted+saliva+in+three+planthopper+species.">Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species.</a> Journal of Proteomics. 172, 25-35 (2018).</li><li>Huang, H. J., Liu, C. W., Xu, H. J., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-like+protein,+a+saliva+component+involved+in+brown+planthopper+virulence+and+host+adaptation.">Mucin-like protein, a saliva component involved in brown planthopper virulence and host adaptation.</a> Journal of Insect Physiology. 98, 223-230 (2017).</li><li>Shangguan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mucin-like+protein+of+planthopper+is+required+for+feeding+and+induces+immunity+response+in+plants.">A mucin-like protein of planthopper is required for feeding and induces immunity response in plants.</a> Plant Physiology. 176 (1), 552-565 (2018).</li><li>Petrova, A., Smith, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodetection+of+a+brown+planthopper+(Nilaparvata+lugens+St&#229;l)+salivary+catalase-like+protein+into+tissues+of+rice,+Oryza+sativa.">Immunodetection of a brown planthopper (Nilaparvata lugens St&#229;l) salivary catalase-like protein into tissues of rice, Oryza sativa.</a> Insect Molecular Biology. 23 (1), 13-25 (2014).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+small+brown+planthopper,+Laodelphax+striatellus.">Genome sequence of the small brown planthopper, Laodelphax striatellus.</a> GigaScience. 6 (12), 1-12 (2017).</li><li>Van Bel, A. J., Will, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+proteins+in+watery+and+gel+saliva+of+aphids.">Functional evaluation of proteins in watery and gel saliva of aphids.</a> Frontiers In Plant Science. 7, 1840 (2016).</li><li>Perez-Vilar, J., Hill, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+assembly+of+secreted+mucins.">The structure and assembly of secreted mucins.</a> The Journal of Biological Chemistry. 274 (45), 31751-31754 (1999).</li><li>Pitino, M., Hogenhout, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aphid+protein+effectors+promote+aphid+colonization+in+a+plant+species-specific+manner.">Aphid protein effectors promote aphid colonization in a plant species-specific manner.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions: MPMI. 26 (1), 130-139 (2013).</li><li>Zhang, F., Zhu, L., He, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+gene+expression+in+response+to+brown+planthopper+feeding+in+rice.">Differential gene expression in response to brown planthopper feeding in rice.</a> Journal of Plant Physiology. 161 (1), 53-62 (2004).</li><li>Hogenhout, S. A., Ammar, E. -. D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+vector+interactions+with+persistently+transmitted+viruses.">Insect vector interactions with persistently transmitted viruses.</a> Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).</li><li>Boissot, N., Schoeny, A., Vanlerberghe-Masutti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vat,+an+amazing+gene+conferring+resistance+to+aphids+and+viruses+they+carry:+from+molecular+structure+to+field+effects.">Vat, an amazing gene conferring resistance to aphids and viruses they carry: from molecular structure to field effects.</a> Frontiers In Plant Science. 7, 1420 (2016).</li></ol>

Yapay diyetlerde böceklerin başarılı yetiştirimi ilk olarak 1962'de Mittler ve Dadd'ın yapay bir diyet tutmak için Parafin zarı tekniğini tarif ettiği zamanbildirilmiştir 29,30. Ve bu yöntem, böcek biyolojisi ve davranışının birçok yönüyle, örneğin besin takviyesi, dsRNA beslemesi ve virüs kazanımı gibi araştırıldı. Tükürük analizinin gerekliliklerine dayanarak, bu çalışmada SBPH tükürüğü toplamak için genel yapay diyet ol...

Pirinç şerit virüsü (RSV), Tenuivirüscinsinde negatif iplikli bir RNA virüsü , Doğu Asya'da pirinç üretiminde ağır hastalıklara neden olur1,2,3. RSV'nin enfekte pirinç bitkilerinden sağlıklı olanlara iletilmesi, RSV'yi kalıcı-yayılmacı bir şekilde ileten laodelphax striatellus başta olmak üzere böcek vektörlerine bağlıdır. SBPH, RSV ile enfekte olmuş bitkilerle besledikten sonra virüsü alır. Böceğin içine girdikten sonra, RSV beslenmeden bir gün sonra midgut epitel hücresini enfekte eder ve daha sonra hemolimf'e nüfuz etmek için midgut bariyerinden geçer. Daha sonra, RSV hemolimf yoluyla farklı dokulara yayılır ve daha sonra yayılır. Satın alma sonrası yaklaşık 10-14 günlük gizli bir süre sonra, tükürük bezinin içindeki virüs salgılanan tükürük yoluyla sağlıklı konakçı bitkilere bulaşabilirken, SBPH phloem 4 , 5 ,6,7,8, 9,10'dan özsuyu emer. . Etkili bir beslenme süreci ve tükürükteki çeşitli faktörler, RSV'nin böcekten konak bitkiye yayılması için gereklidir.
Tükürük bezleri tarafından salgılanan böcek tükürüğün böceklere, virüslere ve konak bitkilere aracılık ettiğine inanılmaktadır. Hemipteran böcekleri genellikle iki tür tükürük üretir: jelleşme tükürüğü ve sulu tükürük11,12,13. Jelleşme tükürüğü esas olarak konak hücreler arasında stylet hareketini sürdürmek için apoplazmaya salgılanır ve ayrıca bitki direncinin ve bağışıklık tepkilerinin üstesinden gelmekle ilgilidir14,15,16,17. Beslenmenin problama aşamasında, böcekler aralıklı olarak bir yüzey flanşı oluşturmak için hemen oksitlenen jelleşme tükürüğü salgılarlar. Daha sonra, tek veya dallı kılıtlar, borulu bir kanal18 , 19,20rezerve etmek için stiliti kaplar. Epidermis üzerindeki yüzey flanşının, bir bağlantı noktası olarak hizmet ederek stylet'in penetrasyonunu kolaylaştırdığı varsayılırken, stylet etrafındaki kılıfalar mekanik stabilite ve yağlamasağlayabilir 16,21,22,23. Nlshp, tükürük kılıfı oluşumu ve kahverengi planthopper'ın(Nilaparvata lugens, BPH) başarılı beslenmesi için gerekli bir protein olarak tanımlandı. Yaprak biti Acyrthosiphon pisum tarafından salgılanan yapısal kılıt proteininin (SHP) ekspresyonunun inhibisyonu, konak elek tüplerinden beslenmeyi bozarak üremesini azalttı24. Ayrıca, bazı böcek türlerinde, jel tükürük faktörlerinin otçul ilişkili moleküler desenler (HAMP' ler) oluşturarak bitki bağışıklık yanıtlarını tetiklemesi gerekir. N. lugens, NlMLP, kılıfa bağlı bir mucin benzeri protein, hücre ölümü, savunma ile ilgili genlerin ekspresyözü ve callose birikimi de dahil olmak üzere beslenmeye karşı bitki savunmasını teşvik eder 25,26. Ayrıca, yaprak bitlerindeki bazı jel tükürük faktörlerinin patojenle ilişkili moleküler desenlere benzer genden gene etkileşimler yoluyla bitki savunma yanıtlarını tetiklediği kanıtlanmıştır12,15,27.
Böcek besleme ve / veya patojen iletimi için gerekli tükürük faktörlerini incelemek için, salgılanan tükürüğü analiz etmek gerekir. Burada, yeterli miktarda tükürük elde etmek için yapay beslenme ve toplama yöntemleri daha fazla analiz için açıklanmıştır. Sadece tek bir besin öğesi içeren bir ortam kullanılarak, birçok tükürük proteini gümüş boyama ve batı şişkinliği ile toplandı ve analiz edildi. Bu yöntem, SBPH tarafından RSV iletimi için gerekli olan tükürük faktörleri üzerinde daha fazla araştırmada yardımcı olacaktır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-KD centrifugal filter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>R5PA83496</td>
			<td>For concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x Protein Transfer Buffer(wet)</td>
			<td>macGENE</td>
			<td>MP008</td>
			<td>Transfer buffer for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x TBST buffer</td>
			<td>Coolaber</td>
			<td>SL1328-500mL&#215;10</td>
			<td>Wash buffer for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azure c600 biosystems</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Azure c600</td>
			<td>Imaging system for western blotting and silver staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color Prestained protein ladder</td>
			<td>GenStar</td>
			<td>M221-01</td>
			<td>Protein marker for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECL&#160;western blotting detection reagents</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>RPN2209</td>
			<td>Western blotting detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enchanced HRP-DAB Chromogenic Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>#PA110</td>
			<td>Chromogenic reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated goat anti-rabbit antibodies</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>401393-2ML</td>
			<td>Polyclonal secondary antibody for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon(R)-P Polyvinylidene difluoride membrane</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td>Transfer membrane for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1725125</td>
			<td>For quantitative real-time PCR (qRT-PCR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHES</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708891</td>
			<td>For Reverse-transcriptional PCR (RT-PCR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GP Filter, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td>For filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAB TGX Gels</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>4561043</td>
			<td>For SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-ONEC-W</td>
			<td>Detection of protein concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon membrane</td>
			<td>PALL</td>
			<td>T42754</td>
			<td>Membrane for dot-ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Membrane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7793-1EA</td>
			<td>Making artifical diet sandwichs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-LssgMP polyclonal antibody against LssgMP peptides</td>
			<td>Genstript</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit primary anti-LssgMP polyclonal antibody for western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-RSV polyclonal antibody</td>
			<td>Genstript</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit primary anti-RSV polyclonal antibody for western blotting and dot-ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAprep pure Micro Kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP420</td>
			<td>For RNA Extraction</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-layered membrane sandwich method for laodelphax striatellus saliva collection

Doğu Asya'da önemli ekonomik tarım kaybına neden olan pirinç şerit virüsü (RSV), konak pirinç arasında etkili bulaşması için tamamen böcek vektörlerine bağlıdır. Laodelphax striatellus (küçük kahverengi planthopper, SBPH), phloem'den özsuyu emerken RSV'yi yatay olarak ileten birincil böcek vektörüdür. Tükürük, böceklerin beslenme davranışında önemli bir rol oynar. Piercing emici beslenme davranışı ile böceklerin tükürüğü üzerinde araştırma için yararlı olacak uygun bir yöntem burada açıklanmıştır. Bu yöntemde, böceklerin iki gerilmiş parafin film katmanı arasında sıkışmış yapay bir diyetle beslenmesine izin verildi. Tükürüğü içeren diyet her gün toplandı, filtrelendi ve daha fazla analiz için konsantre edildi. Son olarak protein boyama ve immünblotting ile toplanan tükürüğün kalitesi incelendi. Bu yöntem, SBPH tükürüğünde RSV ve mucin benzeri bir proteinin varlığı tespit ederek örneklenmiştir. Bu yapay beslenme ve tükürük toplama yöntemi, beslenme davranışı ve virüs bulaşmasıyla ilgili böcek tükürüğündeki faktörler hakkında daha fazla araştırma için bir temel atacaktır.

Yapay besleme kurulumu ve tükürük toplama şemaları Şekil 1A, tükürüğü toplamak için besleme odası olarak kullanılan cam silindiri (15 cm x 2,5 cm) tasvir eder. İlk olarak, SBPH larvaları toplama verimliliğini artırmak için birkaç saat aç bırakıldı ve daha sonra 5 dakika soğutularak hareketsiz hale getirildi. Böcekler cam silindire aktarıldıktan sonra, odanın her iki açık ucu gerilmiş Parafin zarı ile kaplandı. Bir uçta, 200 μL% 5 sakkar...

Watch this Scientific Journal Video about Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection at JoVE.com

Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection

Mevcut protokol, yapay bir ortam kullanarak delici emen böceklerden yeterli tükürük toplama yöntemini açıklar. Bu, böcek tükürüğü toplamak ve böcek besleme davranışı ve vektör kaynaklı virüs iletimi üzerinde tükürük fonksiyonunu incelemek için uygun bir yöntemdir.

Laodelphax striatellus Tükürük Koleksiyonu için İki Katmanlı Membran Sandviç Yöntemi

Rice stripe virus (RSV), which causes significant economic loss of agriculture in East Asia, entirely depends on insect vectors for its effective ...

Yapay besleme ve tükürük toplama, böcek tükürüğündeki efektörleri tespit etmek için doğrudan bir yöntem sağlar. Ancak, bu daha önce ayrıntılı olarak açıklanmamıştır. Bu protokol saprofitik böceklerden tükürük toplanması için etkilidir.Ek olarak, yapay bir diyet olarak sadece sakkaroz içeren ortam kullandığımız için basit bir tekniktir. Saprofitik böceklerin tükürüğü, beslenme davranışına fayda sağlamak ve patojenleri iletmek için konağın bağışıklık sistemine karşı etkileyebilir. Böcek davranışı ve böcek kemik yolu araştırması için kullanılabilecek bu ilaç.Bu, gerçekleştirilmesi gereken basit bir yöntemdir. Bununla birlikte, bu, daha fazla araştırma için tükürük toplandığı için temiz deneysel ortamın montajını göstermektedir. Yapay diyet için% 5 sakkaroz çözeltisi hazırlayarak başlayın ve bakteriyel kontaminasyonu ve safsızlıkları gidermek için çözeltiyi 0.22 mikron filtreden filtreleyin.Yaklaşık 200 küçük kahverengi bitki hunisi larvasını bir beslenme odasına sokmadan önce üç ila beş saat boyunca aç bırakın. Daha sonra, cam silindirleri besleme odaları olarak hazırlamak için, deneysel böcekleri tanıtmadan önce odanın bir açık ucunu bir parafin zarı ile örtün, ardından böcekleri cam silindire aktarın ve odanın diğer ucunu gerilmiş parafin zarı ile örtün. Membran üzerine 200 mikrolitre yapay diyet ekleyin, ardından sıvıyı başka bir gerilmiş parafin zarı tabakası ile örtün.Son olarak, odayı alüminyum folyo ile örtün ve ucu ışığa maruz kalan yapay diyet cihazı ile bırakın. 24 saat sonra, böcekleri hareketsiz hale getirmek için silindiri dört santigrat derecede soğutarak SBPH tükürüğü toplayın, ardından dış filmi ortaya çıkarın ve yapay diyeti steril bir pipet kullanarak 1,5 mililitre steril tüpler halinde toplayın. Toplanan tükürüğü analize kadar eksi 80 santigrat derecede tutun.Daha sonra, iç zarı 50 mikrolitre taze yapay diyetle üç kez yumuşak bir şekilde pipetle çalkalayarak durulayın ve yapay yıkama diyetini 1,5 mililitre steril tüpler halinde toplayın. Üç durulamadan sonra, iç zara taze yapay diyet ekleyin ve üzerine taze gerilmiş bir parafin zarı yerleştirin. Son olarak, toplanan örnekleri mikropları ve diğer kirleticileri gidermek için 0,22 mikron filtre ünitesinden filtreleyin.Toplu tükürük örneklerini 500 mikrolitre, 10 kilodalton santrifüj filtreye aktarın. Örneği santrifüjle. Süpernatantı toplayın ve son hacmi 100 mikrolitreye getirin.Toplanan tükürüğün konsantrasyonunu ölçmek için UV görünür spektrofotometreyi açın ve kaideleri çift damıtılmış suyla üç kez yıkayın. Ekrandaki seçenekleri aşağıdaki sırayla seçin, proteinler, protein A280. Mililitre başına bir miligrama eşit tip ve bir absorbans ünitesi seçin.Ardından temel düzeltme, 340 nanometre için kutuyu işaretleyin. Ardından, %5 sakkaroz sulu çözeltiden oluşan iki mikrolitreyi boş olarak yükleyin, ardından ekranın altındaki Boş'a dokunun. Son olarak, standartları belirledikten sonra, toplanan tükürüğün iki mikrolitresini yükleyin ve protein konsantrasyonu kaydedin.% 5 sakkarozla beslenirken, SBPH'nin% 80'inden fazlası ilk dört gün hayatta kaldı. Bununla birlikte, beşinci günden itibaren mortalite hızla% 40'a yükseldi ve yedinci günde SBPH'nin yarısından azı hayatta kaldı. Bir SDS sayfa analizi, RSV ile enfekte SBPH tükürüğünden alınan konsantre tükürük örneklerinin% 5 sakkaroz negatif kontrolünden çok daha fazla protein içerdiğini göstermiştir.Enfekte olmayan ve virülifer böcekler olan RSV kapsid proteininin tespiti için batılı bir blot analizinde. RSV kapsid proteini virülifer numunesinde başarıyla tespit edildi, LssgMP gen ürününe karşı tasarlanmış bir antikor, enfekte olmayan ve virülifer örneklerde 78 kilodalton protein tespit etti ve LssgMP'nin tükürük proteini olduğunu gösterdi. Farklı dokulardaki LssgMP transkript seviyelerinin QRT PCR analizi, tükürük bezinde Lssg transkript seviyelerinin tüm vücuttan ve bağırsaktan 20 kat daha yüksek olduğunu ve tükürük bezinde LssgMP'nin spesifik ifadesini doğruladığını göstermiştir.Deneysel böcekleri odaya sokmadan önce aç bırakmak, tükürük koleksiyonumuzun verimliliğini sağlamak için gereklidir. Ayrıca, toplanan numunedeki mikrobiyal kontaminasyonu azaltmak için her 24 saatte bir yapay bir ortam toplanmalı ve değiştirilmelidir. Bu teknik, patojenlerin iletiminde tükürüğün işlevini incelemek için doğrudan bir yöntem sağlar.Ek olarak, böcek patojen konak etkileşimi çalışmaya yardımcı olabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Two-layered Membrane Sandwich Method for Laodelphax striatellus Saliva Collection

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

Lipidik Mesophases kullanarak Yapı Tayini için Membran Proteinleri Kristalize

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

High-throughput Crystallization of Membrane Proteins Using the Lipidic Bicelle Method

Yüksek verim Kristalizasyon lipidik Bicelle Yöntemiyle Membran Proteinleri

Membrane proteins (MPs) play a critical role in many physiological processes such as pumping specific molecules across the otherwise impermeable membrane ...

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

Yetişkin Zebra balığı Biyokimyasal Analiz için Kan Alma

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

Use of a Robot for High-throughput Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Lipidik Mesophases Membran Proteinleri Yüksek throughput Kristalizasyon için bir robot kullanımı

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through ...

Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

Makromoleküler Kristalografi tarafından Yapı Tayini için lipidik Mesophases Yetiştirilen Membran Proteinlerinin Hasat ve Cryo-soğutma Kristaller

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

Plazma Protein Koruma Kan Alma Kitleri Genomik DNA Ayıklama Pratik ve Yeni Bir Yöntem

Laboratory tests can be done on the cellular or  fluid portions of the blood. The use of different blood collection tubes  determines the portion of the ...

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

Collection and Analysis of Arabidopsis Phloem Exudates Using the EDTA-facilitated Method

Toplanması ve analizi<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Floem EDTA-kolaylaştırdı Yöntemi eksuda

The plant phloem is essential for the long-distance transport of (photo-) assimilates as well as of signals conveying biotic or abiotic stress. It ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

Yetişkin Zebra balığı Kan Testleri için Tekrarlanan Kan Alma

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Ground State Depletion Super-resolution Imaging in Mammalian Cells

Memeli hücrelerinde devlet tükenmesi süper kararlılık düşsel yer

Advances in fluorescent microscopy and cell biology are intimately correlated, with the enhanced ability to visualize cellular events often leading to ...