Name: dural stimulation and periorbital von frey testing in mice as a preclinical model of headache
Uploaded: 2021-07-29T15:00:00
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이 연구는 국립 보건원 (NS104200 및 NS072204에서 GD)에 의해 지원되었습니다.

모든 절차는 달라스 텍사스 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 사전 승인을 받아 수행되었습니다. ICR(CD-1)(30-35 g) 및 C57/BL6(25-30 g) 마우스를 6-8주간 숙성시켜 본 연구에 사용하였다.
1. 듀랄 인퓨저
<ol><li>조정 가능한 비금속 용융 실리카 플라스틱 캡으로 상업적으로 이용 가능한 내부 캐뉼라 및 주입기를 일방적 주사용으로 수정하고 내경(I.D.)이 0.18mm이고 외경(O.D.)이 0.35m...

<ol>
	<li>GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+incidence,+prevalence,+and+years+lived+with+disability+for+328+diseases+and+injuries+for+195+countries,+1990-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).</li><li>Woldeamanuel, Y. W., Cowan, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migraine+affects+1+in+10+people+worldwide+featuring+recent+rise:+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+community-based+studies+involving+6+million+participants.">Migraine affects 1 in 10 people worldwide featuring recent rise: A systematic review and meta-analysis of community-based studies involving 6 million participants.</a> Journal of the Neurological Sciences. 372, 307-315 (2017).</li><li>Burch, R. C., Loder, S., Loder, E., Smitherman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prevalence+and+burden+of+migraine+and+severe+headache+in+the+United+States:+updated+statistics+from+government+health+surveillance+studies.">The prevalence and burden of migraine and severe headache in the United States: updated statistics from government health surveillance studies.</a> Headache. 55 (1), 21-34 (2015).</li><li>Ashina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migraine.">Migraine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1866-1876 (2020).</li><li>Ashina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migraine:+integrated+approaches+to+clinical+management+and+emerging+treatments.">Migraine: integrated approaches to clinical management and emerging treatments.</a> Lancet. 397 (10283), 1505-1518 (2021).</li><li>Jacobs, B., Dussor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+contributions+to+migraine:+Moving+beyond+vasodilation.">Neurovascular contributions to migraine: Moving beyond vasodilation.</a> Neuroscience. 338, 130-144 (2016).</li><li>Koyuncu Irmak, D., Kilinc, E., Tore, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shared+Fate+of+Meningeal+Mast+Cells+and+Sensory+Neurons+in+Migraine.">Shared Fate of Meningeal Mast Cells and Sensory Neurons in Migraine.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 136 (2019).</li><li>Levy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migraine+pain,+meningeal+inflammation,+and+mast+cells.">Migraine pain, meningeal inflammation, and mast cells.</a> Current Pain and Headache Reports. 13 (3), 237-240 (2009).</li><li>Levy, D., Labastida-Ramirez, A., MaassenVanDenBrink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+meningeal+and+cerebral+vascular+function+underlying+migraine+headache.">Current understanding of meningeal and cerebral vascular function underlying migraine headache.</a> Cephalalgia. 39 (13), 1606-1622 (2019).</li><li>Phebus, L. A., Johnson, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dural+inflammation+model+of+migraine+pain.">Dural inflammation model of migraine pain.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Fried, N. T., Maxwell, C. R., Elliott, M. B., Oshinsky, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+disruption+of+the+blood-brain+barrier+following+repeated+inflammatory+dural+stimulation+in+a+rat+model+of+chronic+trigeminal+allodynia.">Region-specific disruption of the blood-brain barrier following repeated inflammatory dural stimulation in a rat model of chronic trigeminal allodynia.</a> Cephalalgia. 38 (4), 674-689 (2018).</li><li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dural+calcitonin+gene-related+peptide+produces+female-specific+responses+in+rodent+migraine+models.">Dural calcitonin gene-related peptide produces female-specific responses in rodent migraine models.</a> The Journal of Neuroscience. 39 (22), 4323-4331 (2019).</li><li>Burgos-Vega, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+dural+stimulation+in+mice:+A+novel+preclinical+model+of+migraine.">Non-invasive dural stimulation in mice: A novel preclinical model of migraine.</a> Cephalalgia. 39 (1), 123-134 (2019).</li><li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+CGRP-Prolactin+interaction+evokes+female-specific+migraine+behavior.">Meningeal CGRP-Prolactin interaction evokes female-specific migraine behavior.</a> Annals of Neurology. 89 (6), 1129-1144 (2021).</li><li>Deuis, J. R., Dvorakova, L. 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F., Bolay, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+cognitive+animal+models+in+headache+research.">Behavioral and cognitive animal models in headache research.</a> The Journal of Headache and Pain. 20 (1), 11 (2019).</li><li>Mason, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+migraine-like+photophobic+behavior+in+mice+by+both+peripheral+and+central+CGRP+mechanisms.">Induction of migraine-like photophobic behavior in mice by both peripheral and central CGRP mechanisms.</a> The journal of Neuroscience. 37 (1), 204-216 (2017).</li><li>Dixon, W. J., Mood, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+obtaining+and+analyzing+sensitivity+data.">A method for obtaining and analyzing sensitivity data.</a> The Journal of the American Statistical Association. 43 (241), 109-126 (1948).</li><li>Dixon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+up-and-down+method+for+small+samples.">The up-and-down method for small samples.</a> The Journal of the American Statistical Association. 60, (1965).</li><li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+up-down+method+(SUDO)+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments.">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Molecular Pain. 10, 26 (2014).</li><li>Ramachandran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+inflammation+and+its+role+in+migraine.">Neurogenic inflammation and its role in migraine.</a> Seminars in Immunopathology. 40 (3), 301-314 (2018).</li><li>Edvinsson, L., Haanes, K. 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C., Donelan, J., Kandere-Grzybowska, K., Konstantinidou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mast+cells+in+migraine+pathophysiology.">The role of mast cells in migraine pathophysiology.</a> Brain Research Reviews. 49 (1), 65-76 (2005).</li><li>Conti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+in+migraine:+Role+of+mast+cells+and+pro-inflammatory+and+anti-inflammatory+cytokines.">Progression in migraine: Role of mast cells and pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines.</a> European Journal of Pharmacology. 844, 87-94 (2019).</li><li>Rea, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripherally+administered+calcitonin+gene-related+peptide+induces+spontaneous+pain+in+mice:+implications+for+migraine.">Peripherally administered calcitonin gene-related peptide induces spontaneous pain in mice: implications for migraine.</a> Pain. 159 (11), 2306-2317 (2018).</li></ol>

경막에서 국소 nociceptive system의 부적응 변화는 조직 손상의 부족에도 불구하고 편두통 발작의 두통 단계에 중요한 기여자로 간주됩니다25,26. 여기서 연구는 경막의 최소 침습적 자극이 안면 촉각 과민증을 유도할 수 있는 방법을 제시한다. 두개골과 조직에 손상을 일으키지 않고 경막 nociceptor 활성화에 관련된 메커니즘과 사건을 밝히는 것은 전임상 모?...

편두통 통증은 전 세계적으로 주요 공중 보건 문제로 남아 있습니다. 세계 보건기구 (WHO)는 지구상에서 여섯 번째로 널리 퍼진 질병으로 분류하여 지구 인구의 15 % 미만을 괴롭 히고 사회 2,3에 상당한 사회 경제적 부담을 초래합니다. 치료 옵션과 그 효능은 차선책이었으며 증상 완화만을 제공하고 편두통 발생을 저조하게 하는 병리생리학적 사건을 유의하게 변형시키지 않는다4,5. 치료 성공의 부족은 편두통이 병리학이 제대로 이해되지 않는 다인자 장애이기 때문에 제한된 수의 치료 목표로 이어질 가능성이 큽니다. 편두통은 특히 편두통 진단이 오라, 두통, 광공포증 및 동종 요법과 같은 편두통 특징에 대한 경험을 설명하는 환자와의 구두 의사 소통을 기반으로 이루어 진다는 점을 감안할 때 동물 모델에서 완전히 포착하기가 어렵습니다. 그럼에도 불구하고, 편두통 치료의 최근 발전은 현재 전임상 모델에 의해 잘 검증 된 많은 신경 학적 상태에 대한 치료법을 능가하고 있음을 주목하는 것이 중요합니다. 예를 들어, 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 또는 그의 수용체를 표적으로 하는 모노클로날 항체 및 소분자는 편두통 환자의 삶의 질을 개선하는데 매우 성공적이었으며 잠재적으로 편두통의 임상 관리를 변화시킬 수 있다. 이 장애를 이해하는 데 진전이 있었지만, 아직 해명되지 않은 것이 많이 있습니다.
전임상 동물 모델과 인간 연구에 기초하여, 편두통은 삼차 및 상부 자궁 경부 등근 신경절 6,7,8,9,10을 통해 신호하는 수막 내의 nociceptive 섬유의 비정상적인 활성화에 의해 시작된다는 것이 널리 받아 들여지고 있습니다. 이 이론에도 불구하고, 많은 연구는 편두통의 근본적인 기여 메커니즘을 이해하기 위해 약물의 전신 투여를 여전히 사용합니다. 약물의 전신 투여가 우리의 이해를 실질적으로 강화했지만, 이러한 발견은 관심있는 표적 조직 내의 국소 행동이 편두통에 중요한 역할을하는지 여부를 직접 평가하지는 않습니다. 반대로, 몇몇 연구는 듀라를 자극하는 접근법을 취했다; 그러나 이러한 실험은 침습적 두개골 절제술과 연장 된 회복 시간11,12를 통한 캐뉼라 이식이 필요합니다. 이러한 한계 때문에, 우리는 두개골 절제술의 부족이 수술 후 회복을 제거하고 깨어있는 동물12,13,14에서 즉각적인 검사를 가능하게하는 경막을 국부적으로 자극하는 최소 침습적 접근법을 개발했습니다. 이러한 주사는 가벼운 이소플루란 마취 하에서 수행되고 마우스의 시상과 람도이드 봉합사의 접합부에서 투여된다.
설치류15에서 nociceptive 행동 반응을 평가하기 위해 몇 가지 접근법이 개발되었습니다. 피부 이질통은 편두통 환자16,17의 약 80 %에서보고되었으며 설치류에 사용하기위한 잠재적 인 번역 종점을 나타냅니다. 전임상 모델에서, 설치류 발의 발바닥 영역에 폰 프레이 필라멘트를 적용하는 것은 전임상 편두통 모델에서 통증 행동을 평가하는 데 사용되었습니다. 이 접근법의 주요 한계는 두개 부위를 검사하지 않는다는 것입니다. 얼굴 grimace 점수는 통증 자극18,19의 유도 후 얼굴 표정을 분석하여 설치류의 통증 행동을 포착하는 데 사용되었습니다. 그러나 그 한계는 급성 자극에 대한 반응 만 포착하고 만성 구강 안면 통증 상태가 아닌 것을 포함합니다. 안면 손질과 양육 감소는 편두통20,21의 전임상 모델에서 행동 반응의 결과물로 간주됩니다. 전자의 한계에는 통증 반응을 정상적인 일상적인 손질 및 가려움증과 같은 다른 감각과 구별하는 데 어려움이 포함됩니다. 후자의 경우, 사육 행동은 일반적으로 설치류를 새로운 환경에 도입 한 후 빠르게 감소합니다. 이러한 행동 종점 각각은 통증 상태에 기여하는 다양한 메커니즘의 이해에 가치가 있지만, 편두통과 같은 통증 장애의 전임상 모델에 두개 과민 반응을 특이적으로 포착하는 종점을 포함해야합니다. 경막 자극 후 주변 궤도 피부의 촉각 과민증을 평가하는 것은 감각 증상이 본질적으로 주로 두증인 편두통에 기여하는 메커니즘에 대한 더 나은 통찰력을 제공 할 수있는 방법입니다. 여기에서는 편두통의 전임상 모델로서 마우스 경막에 물질을 투여하는 방법을 설명합니다. 듀럴 적용에 따라, 우리는 또한 딕슨 업다운 방법에 적용된 보정된 폰 프레이 필라멘트를 사용하여 주변 궤도 촉각 과민증을 테스트하기 위한 상세한 방법을 제시합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4 oz Hot Paper Cups</td>
			<td>Choice Paper Company</td>
			<td>5004W</td>
			<td>https://www.webstaurantstore.com/choice-4-oz-white-poly-paper-hot-cup-case/5004W.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-206-65</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-absorbent-underpads-8/p-306048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C313I/SPC Internal 28 G cannula</td>
			<td>P1 Technologies (formerly Plastics One)</td>
			<td>8IC313ISPCXC</td>
			<td>I.D. 18 mm, O.D. 35 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gastight Model 1701 SN Syringes</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80008</td>
			<td>https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80008</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ismatec Pump Tubing, 0.19 mm</td>
			<td>Cole-Palmer</td>
			<td>EW-96460-10</td>
			<td>https://www.coleparmer.com/i/ismatec-pump-tubing-2-stop-tygon-s3-e-lab-0-19-mm-id-12-pk/9646010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stand with chicken wire</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
			<td>The galvanized steel chicken wire dimensions are 0.25 in. x 19-gauge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testing Rack with individual&#160; Chambers</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
			<td>Each chamber should have a division between each mouse and lids to contain the mouse. The chambers should also be large enough to hold a 4 oz. paper cup.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Frey Filaments</td>
			<td>Touch test/Stoelting</td>
			<td>58011</td>
			<td>https://www.stoeltingco.com/touch-test.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dural stimulation and periorbital von frey testing in mice as a preclinical model of headache

경막 매트, 거미류 및 피아 매트로 구성된 두개골 수막은 주로 신경계의 구조적 기능을 제공하는 것으로 생각됩니다. 예를 들어, 그들은 두개골로부터 뇌를 보호하고 피질의 혈관 및 신경 공급을 앵커 / 조직합니다. 그러나 수막은 편두통과 같은 신경계 장애에도 연루되어 편두통 중에 경험되는 통증은 국소 멸균 염증 및 국소 nociceptive 구심증의 후속 활성화에 기인합니다. 수막의 층 중 경막은 편두통의 병리 생리학에 특히 관심이 있습니다. 그것은 고도로 혈관화되고, 국소 nociceptive 뉴런을 보유하고, 면역 세포와 같은 다양한 상주 세포의 본거지입니다. 국소 수막 미세 환경의 미묘한 변화는 경막 혈관 주위 결절기의 활성화 및 감작으로 이어질 수 있으며, 따라서 편두통 통증을 유발할 수 있습니다. 연구는 경막 구심 부심이 생체 내 전기 생리학, 이미징 기술 또는 행동 모델을 사용하여 활성화 / 감작되는 방법을 다루려고 노력했지만, 이들은 일반적으로 매우 침습적 인 수술을 필요로합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 경막에 화합물을 비교적 비침습적으로 적용하는 방법과 경막 자극 후 주변 폰 프레이 테스트를 사용하여 두통과 같은 촉각 감도를 측정하는 적절한 방법을 제시합니다. 이 방법은 경막과 두개골의 무결성을 유지하고 융합되지 않은 시상과 람도이드 봉합사의 교차점에서 0.65mm 변형 된 캐뉼라를 통해 물질을 주입하여 침습적 기술로 인한 혼란스러운 영향을 줄입니다. 이 전임상 모델을 통해 연구자들은 두개골과 수막에 대한 손상없는 상태를 유지하면서 nociceptor 활성화, 면역 세포 활성화, 혈관 변화 및 통증 행동과 같은 편두통의 병리학 적 진행에 대한 광범위한 경막 자극과 그 역할을 조사 할 수 있습니다.

이 주사 방법은 후속 행동 검사가 발생할 수 있도록 마우스의 경막에 자극을 투여하는 데 사용됩니다. 이 모델로 측정 된 가장 일반적인 행동 출력은 von Frey12,13,14를 통해 평가 된 피부 안면 과민증입니다. 여기에서는이 모델을 편두통 병리학에 대한 잠재적 인 성별 별 기여도를 평가하는 데 어떻게 사용할 수 있는지 보여줍니?...

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Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

편두통의 가장 주목할만한 증상은 심한 두부 통증이며, 이것이 수막에 신경을 쓰는 감각 뉴런에 의해 매개된다는 가설이 있습니다. 여기에서는 안면 과민증을 출력으로 사용하면서 최소 침습적 방식으로 경막에 물질을 국부적으로 적용하는 방법을 제시합니다.

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

조직 손상이없는 경우 두통에 기여하는 수막 내에서 어떤 사건이 발생합니까? 래트에서 경막 자극 모델의 이전 사용과는 달리, 그것은 유전자 변형 마우스의 광범위한 카탈로그의 사용을 허용한다. 주요 투쟁은 인젝터로 두개골을 촉지하여 람도이드와 시상 봉합사의 교차점을 찾는 것입니다.시작하려면 시판 된 내부 캐뉼라를 수정하고 조정 가능한 용융 실리카 플라스틱 캡으로 주입기를 만들고 28 게이지 가이드 캐뉼라에 삽입하십시오. 캘리퍼를 사용하여 주입기를 구부리지 않고 주입기의 용융 실리카 플라스틱 캡을 조정하십시오. 주입기를 주입기의 팁에서 실리카 플라스틱 캡의 가장자리까지 측정 된 6 밀리미터의 길이로 조정하십시오.다른 마우스 균주에 대한 파일럿 주사를 수행하고 길이를 조정하여 경막에 정확하게 주입하십시오. 그런 다음 주입기의 긴 끝을 여덟 인치 이상의 플라스틱 튜브에 부착하여 다섯 마이크로 리터 부피를 유지합니다. 튜브를 삽입하면서 금속 부품과 주입기에 위치한 플라스틱 마개 상단을 완전히 덮을 수 있도록 하여 기포가 라인에 축적되는 것을 방지합니다.다음으로, 미세주사기를 채우고 튜브의 다른 쪽 끝을 10 마이크로리터 유리 미세주사기에 부착하여 주사기의 금속 부분 위에 단단히 밀봉하십시오. 이어서, 기포 형성을 방지하기 위해 선택된 PBS 또는 합성 간질액 또는 다른 비히클의 다섯 마이크로리터로 주사기를 백필한다. 필요한 경우 차량으로 라인을 넘치게하여 미리 형성된 거품을 분산시킵니다.대안적으로, 주사기를 미리 채우고, 연결 후, 연결된 라인을 통해 유체를 밀어낸다. 차량으로 채워진 라인이 효율적으로 작동하면 다섯 마이크로 리터의 용액을 해밀턴 주사기에 적재하십시오. 마우스가 완전히 마취되면 멸균 안과 연고를 눈에 바르고 동물의 머리를 면도 한 다음 포비돈 요오드와 에탄올로 피부를 소독하십시오.한 손으로 동물의 머리를 안정시키고 다른 한 손에는 약물이 든 주사기로 주입기를 잡으십시오. 그런 다음 주입기를 사용하여 마우스의 두개골에있는 시상과 람도이드 봉합사의 접합부를 조심스럽게 조사하고 찾아 확인합니다. 봉합사가 위치되고 주입기가 제자리에 놓이면 in 주입기가 피부를 관통하고 플라스틱 마개까지 접합부로 떨어질 때까지 천천히 부드럽게 인퓨저를 앞뒤로 흔들어 전체 6mm 주입기 팁을 접합부에 삽입하십시오.그런 다음 주사기의 플런저를 천천히 밀어 다섯 마이크로 리터의 유체를 경막 매트로 배출합니다. 시험 당일, 방에 순응 한 후, 각 챔버에서 컵과 함께 하나의 마우스를 제거하십시오. 불평등 한 체중 분포가 동물의 반응을 변경하거나 방해 할 수 있으므로 컵을 균등하게 분포 된 체중을 위해 수평 위치에 유지하십시오.마우스와 함께 컵을 테스트 랙 아래의 테이블에 보관된 흡수 패드에 놓습니다. 그런 다음 주변 궤도 폰 프레이 테스트를 위해 07 그램 폰 프레이 필라멘트를 눈 사이의 얼굴 중앙에 놓고 필라멘트에 충분한 압력을 가하여 폰 프레이 모발이 C 자형 형태로 구부러지게합니다. 필라멘트 접촉을 약 삼 ~ 다섯 초 동안 또는 마우스가 머리나 발을 사용하여 필라멘트를 쓸어 넘길 때까지 유지하십시오.Dixon 업다운 방법을 따르려면 마우스가 필라멘트에 반응하는 경우 다음 저중량 필라멘트를 적용하고, 그렇지 않으면 더 높은 중량의 필라멘트를 적용하십시오. 이 절차는 기계적으로 유발 된 안면 과민증에 대한 경막 외 프로락틴의 효과를 조사하는 데 사용되었습니다. 이 연구의 결과는 다섯 마이크로 그램의 듀랄 프로락틴에 대한 반응으로 여성 ICR 마우스에서 안면 금단 역치가 현저하게 감소한 것으로 나타났습니다.5 마이크로 그램의 프로락틴의 열 배 낮은 복용량은 또한 높은 용량의 프로락틴과 비슷한 안면 금단 역치 감소를 보였다. 프롤락틴 주사는 자발적인 통증 관련 행동을 만들어 냈으며, 이는 grimace를 통해 평가되었습니다. 듀랄 5 마이크로 그램의 프로락틴은 암컷 마우스에서 상당한 슬픔을 일으켰고 여성 편두통과 같은 행동에서 경막 프로락틴에 대한 명확한 역할을 입증했습니다 폰 프레이 필라멘트 또는 안면 슬픔을 이용한 행동 테스트는 부상이없는 자극이 두통 반응을 유발하는지 여부를 결정합니다.이 기술은 이제 두개골 및 후속 염증에 의해 유발되는주의 사항에 대한 우려없이 수막의 염증 기반 메커니즘을 조사하는 데 사용될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Combining Transcranial Magnetic Stimulation and fMRI to Examine the Default Mode Network

기본 모드 네트워크를 검사하기 위해 Transcranial 자석 자극과 fMRI를 결합

The default mode network is a group of brain regions that are active when an individual is not focused on the outside world and the brain is at "wakeful ...

연구

신경과학

TMS: Using the Theta-Burst Protocol to Explore Mechanism of Plasticity in Individuals with Fragile X Syndrome and Autism

TMS : 연약한 X 증후군 및 자폐증과 개인의 소성의 Mechasnism를 탐험하는 세타 - 버스트 프로토콜을 사용하여

Fragile X Syndrome (FXS), also known as Martin-Bell Syndrome, is a genetic abnormality found on the X chromosome.1,2 Individuals suffering from FXS ...

The NeuroStar TMS Device: Conducting the FDA Approved Protocol for Treatment of Depression

NeuroStar TMS 장치 : FDA를 실시는 우울증 치료 프로토콜을 승인

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Transcranial 직접 전류 자극의 전극 위치와 몬티지

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Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

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모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는<em&gt; 생체</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

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마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

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동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

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인슐린 모방 화합물 테스트용 비켜에서 모델

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

Transcranial Direct Current Stimulation (tDCS) in Mice

Transcranial Direct Current Stimulation tDCS in Mice

Transcranial 직류 자극 (tDCS) 마우스

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a non-invasive neuromodulation technique proposed as an alternative or complementary treatment for ...