Name: free-floating immunostaining of mouse brains
Uploaded: 2021-10-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Free-floating Immunostaining of Mouse Brains at JoVE.com

Etterforskerne ble støttet av tilskudd fra NIH (K01DK119471 til CW; P01DK113954, R01DK115761, R01DK117281, R01DK125480 og R01DK120858 til YX), USDA/CRIS (51000-064-01S til YX) og American Heart Association Postdoctoral Fellowship (#829565) til LT.

C57BL/6J mus av begge kjønn (8-16 ukers alder) ble brukt i denne studien. Pleie av alle dyr og alle prosedyrer ble godkjent av Baylor College of Medicine's Institutional Animal Care and Use Committees.
1. Perfusjon
MERK: Trinn 1.1 - 1.6 utføres i en avtrekkshette.
<ol><li>Anestesi<ol>
<li>Hell 5 ml isofluran (se materialbordet) på et papirhåndkle plassert på bunnen av en desiccator. Introduser musen på den holed barrieren in...

<ol>
	<li>Must, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Disease+burden+associated+with+overweight+and+obesity.">The Disease burden associated with overweight and obesity.</a> Journal of the American Medical Association. 282 (16), 1523-1529 (1999).</li><li>Apovian, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity:+definition,+comorbidities,+causes,+and+burden.">Obesity: definition, comorbidities, causes, and burden.</a> The American Journal of Managed Care. 22 (7), 176-185 (2016).</li><li>Wong, S. K., Chin, K. Y., Suhaimi, F. H., Fairus, A., Ima-Nirwana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+metabolic+syndrome:+a+review.">Animal models of metabolic syndrome: a review.</a> Nutrition &amp; Metabolism. 13 (1), 1-12 (2016).</li><li>Kennedy, A. J., Ellacott, K. L., King, V. L., Hasty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+the+metabolic+syndrome.">Mouse models of the metabolic syndrome.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 3 (3-4), 156-166 (2010).</li><li>Schacht, V., Kern, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+immunohistochemistry.">Basics of immunohistochemistry.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 135 (3), 1-4 (2015).</li><li>Mepham, B. L., Britten, K. J. M., Jones, D. B., Wright, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunostaining+methods+for+frozen+and+paraffin+sections.">Immunostaining methods for frozen and paraffin sections.</a> Lymphoproliferative Diseases. 15, 187-211 (1990).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TPH2+in+the+dorsal+raphe+nuclei+regulates+energy+balance+in+a+sex-dependent+manner.">TPH2 in the dorsal raphe nuclei regulates energy balance in a sex-dependent manner.</a> Endocrinology. 162 (1), 1-16 (2021).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+vitamin+D+receptor+expression+in+the+brain+using+a+novel+VDR(Cre)+mouse.">Defining vitamin D receptor expression in the brain using a novel VDR(Cre) mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 529 (9), 2362-2375 (2020).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3564 (2012).</li><li>Whittington, N. C., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+red+blood+cell+autofluorescence+for+immunocytochemistry+on+fixed+embryonic+mouse+tissue.">Suppression of red blood cell autofluorescence for immunocytochemistry on fixed embryonic mouse tissue.</a> Current Protocols in Neuroscience. 81 (1), 2-28 (2017).</li><li>Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation,+embedding,+and+sectioning+of+tissues,+embryos,+and+single+cells.">Fixation, embedding, and sectioning of tissues, embryos, and single cells.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2001).</li><li>Potts, E. M., Coppotelli, G., Ross, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological-based+stainings+using+free-floating+tissue+sections.">Histological-based stainings using free-floating tissue sections.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (162), e61622 (2020).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+potassium+current+in+AgRP/NPY+neurons+regulates+feeding+behavior+and+energy+metabolism.">A small potassium current in AgRP/NPY neurons regulates feeding behavior and energy metabolism.</a> Cell Reports. 17 (7), 1807-1818 (2016).</li><li>Xu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+serotonin+2C+receptors+in+dopamine+neurons+inhibits+binge-like+eating+in+mice.">Activation of serotonin 2C receptors in dopamine neurons inhibits binge-like eating in mice.</a> Biololgical Psychiatry. 81 (9), 737-747 (2017).</li></ol>

Denne protokollen gir en etablert metode for nevroanatomiske studier av musehjernen, inkludert perfusjon, vevsseksjon, frittflytende immunstaining, vevsmontering og avbildning. Noen få viktige detaljer som er avgjørende for konsistente og pålitelige resultater, må imidlertid optimaliseres.
Kvaliteten på perfusjon er avgjørende for vellykket farging. Fargingsresultater kan påvirkes hvis blodet forblir i hjernen, gitt at blodceller (f.eks. røde blodlegemer) kan generere en kunstig 'posit...

Utbredelsen av fedme og tilhørende komorbiditeter har nådd epidemiske nivåer, noe som forårsaker en enorm sosioøkonomisk byrde1,2. Ulike musemodeller er utviklet for å bedre forstå de biologiske prosessene som er ansvarlige for fedme3,4. Fordi sentrale mekanismer er viktige for regulering av energi homeostase i disse dyremodellene, har nevroanatomiske studier av musehjerner blitt en nødvendig teknikk på dette feltet. Kvaliteten, påliteligheten og reproduserbarheten av hjerne histologiteknikker varierer imidlertid betydelig mellom laboratorier og til og med forskere i samme laboratorium av ulike årsaker (f.eks. antistoffer, vev, behandlinger, arter, forskningsmål). Derfor er det nødvendig å etablere en generell protokoll for histologiske studier av musehjernen, inkludert perfusjon, hjerneseksjon, frittflytende immunostaining, vevsmontering og avbildning. I mellomtiden kan nybegynnere raskt lære, mestre og justere denne protokollen for å tilfredsstille deres individuelle behov.
Immunhiistokjemisk farging er en etablert metode som har blitt brukt mye for å visualisere spesifikke celletyper, mRNAer og proteiner i en rekke vev (f.eks. hjerne- og perifert vev)5,6. Mer spesifikt kan et antigen av interesse merkes av et bestemt primært antistoff og et tilsvarende sekundært antistoff knyttet til et enzym (f.eks. kromogene immunhiistokjemi) eller et fluorescerende fargestoff (fluorescein isothiocyanate)6. Som et eksempel på nytten av disse teknikkene ble β-endorfin [ett peptid kodet av pro-opiomelanocortin (POMC)] og c-fos (en markør for nevronal aktivitet) farget i den buede kjernen. Sletting av tryptofan hydroksylase 2 (et enzym integrert i serotoninsyntese) i dorsal raphe kjernen ble vist å redusere c-fos uttrykk i POMC nevroner i arcuate kjernen7. I tillegg ble fordelingen av vitamin D-reseptor mRNA kartlagt i musehjernen via in situ hybridisering (RNAscope)8. Dette dokumentet presenterer en pålitelig og effektiv metode med en trinnvis arbeidsflyt for frittflytende immunostaining, med sikte på å forbedre kvaliteten og reproduserbarheten av histologiske studier av musehjernen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Flour 594 donkey anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;30% Sucrose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470302</td>
			<td>30 g Sucrose dissoved into 100 mL of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-128</td>
			<td>10%, 25 &#176;C, pH 6.8-7.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Sub-Q Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifading mounting media with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable plastic desiccator</td>
			<td>Thermo Scientific Nalgene</td>
			<td>5315-0150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AVP antibody</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals</td>
			<td>H-065-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryoprotectant buffer</td>
			<td>User preference</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>20% glycerol, 30% ethylene glycol, and 50% PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>11695-6777-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DFC310FX microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slide Boxes (50-place)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBT</td>
			<td>User preference</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td>2.5 mL of Triton X-100 dissolved into 1000 mL of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion two automated Perfusion System</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39471005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS) 20x</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRVE703-1L</td>
			<td>25 &#176;C, pH 7.3-7.5, 1x composition:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 9.8 mM Phosphate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slideing Microtome Microm HM450</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>Microm HM450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7220-32</td>
			<td>0.9%, 25 &#176;C, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Protein, DyLight 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>#21832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>089k01921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WFA antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L1516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axio Z1 Scanner</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen 3.1 software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>scanner software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

free-floating immunostaining of mouse brains

Immunhiistokjemisk farging av musehjerner er en rutinemessig teknikk som vanligvis brukes i nevrovitenskap for å undersøke sentrale mekanismer som ligger til grunn for regulering av energimetabolisme og andre nevrobiologiske prosesser. Kvaliteten, påliteligheten og reproduserbarheten av hjerne histologiresultater kan imidlertid variere mellom laboratorier. For hvert fargingsforsøk er det nødvendig å optimalisere nøkkelprosedyrene basert på forskjeller i arter, vev, målrettede proteiner og reagensenes arbeidsforhold. Dette dokumentet demonstrerer en pålitelig arbeidsflyt i detalj, inkludert intraaortisk perfusjon, hjerneseksjon, frittflytende immunostaining, vevsmontering og avbildning, som lett kan følges av forskere på dette feltet.
Også diskutert er hvordan du endrer disse prosedyrene for å tilfredsstille forskernes individuelle behov. For å illustrere påliteligheten og effektiviteten til denne protokollen ble perineuronale garn farget med biotin-merket Wisteria florbunda agglutinin (WFA) og arginin vasopressin (AVP) med et anti-AVP-antistoff i musehjernen. Til slutt er de kritiske detaljene for hele prosedyren adressert, og fordelene med denne protokollen sammenlignet med andre protokoller. Samlet sett presenterer dette papiret en optimalisert protokoll for frittflytende immunstaining av musens hjernevev. Å følge denne protokollen gjør denne prosessen enklere for både junior- og seniorforskere å forbedre kvaliteten, påliteligheten og reproduserbarheten til immundempende studier.

Flytskjemaet for denne protokollen er kort illustrert i figur 1. Dette laboratoriets kryosectioning prosedyre er demonstrert i figur 2A, der 5 hjerneprøver ble seksjonert samtidig. Montering av hjerneseksjoner er vist i figur 2B, og en fullt montert lysbilde med hjerneseksjoner er illustrert i figur 2C. I figur 3 ble det observert representative fluorescensimmunohistokjemi...

Watch this Scientific Journal Video about Free-floating Immunostaining of Mouse Brains at JoVE.com

Free-floating Immunostaining of Mouse Brains

Denne protokollen beskriver en effektiv og reproduserbar tilnærming for musehjerne histologiske studier, inkludert perfusjon, hjerneseksjon, frittflytende immunostaining, vevsmontering og avbildning.

Frittflytende immunostaining av musehjerner

Immunohistochemical staining of mouse brains is a routine technique commonly used in neuroscience to investigate central mechanisms underlying the ...

Immuno-histokjemisk farging av musehjerner er en vanlig brukt teknikk i nevrovitenskapelig forskning. Kvaliteten, påliteligheten og reproduserbarheten av hjerne histologiresultater kan imidlertid variere mellom forskjellige forskere og laboratorier. Vi presenterer en etablert metodikk for histologiske studier av musehjerner som har vist seg å være reproduserbare, pålitelige og effektive.Bidrar til å demonstrere prosedyren vil være Dr.Chunmei Wang, en assisterende professor fra laboratoriet mitt Etter å ha bekreftet vellykket bedøvelse i en åtte til 16 uker gammel C57 svart / 6J mus, Fest musen på et skumbrett og gjør et langsgående overfladisk snitt langs midtlinjen over thorax og mage, og flytt deretter huden til side for å eksponere muskelveggen til thoraxen og magen. Deretter gjør du et snitt i muskellaget for å eksponere leveren og tarmen. Deretter, ved hjelp av saks, kutt ribben for å åpne thoraxen og eksponere hjerte og lunger.Bruk hemostatiske tang, trekk ribbeina til side for å utvide arbeidsområdet. Neste. å plassere en perfusjonskanyle, trenger direkte inn i venstre hjerte ventrikel med en stump kanyle og setter den forsiktig inn i stigende aorta. Plasser pinner rundt konjunksjonen av kanylen og koblet rør på skumplaten for å fikse kanylen på plass under perfusjonen, og fortsett å kutte riktig atrium for å tillate utstrømning av blod fra sirkulasjon.For perfusjon med saltvann, slå på saltvannstrykkbryteren og perfuse musen transcardialt med 40 til 60 milliliter saltvann. Vær oppmerksom på utstrømningen fra høyre atrium og fargen på leveren nøye. Deretter, for å parfyme med formalin, slå av saltvannstrykkbryteren og slå på formalintrykkbryteren for å parfyme musen med 40 milliliter 10% nøytralbufret formalin.Observer dyrets lemmer for bevis på skjelvinger. For hjerneisolasjon, bruk saks for å fjerne hodet og lage et midtlinjeinnsnitt langs integumentet for å eksponere skallen, og trim deretter av huden og muskelfestet. Deretter lager du et kutt på orbitalryggen og legger den skarpe enden av irissaksen inn i foramen magnum.Før saksen langs skallens indre overflate, og opprettholde oppadgående trykk for å unngå skade på hjernen. Fjern deretter forsiktig parietal og frontale bein og meninger før du fjerner hjernen fra den åpne skallen. Legg tørris på toppen av høydejusteringsplaten til en glidende mikrotom og vent til hvit frost er synlig, spred deretter forsiktig fem milliliter 30% sukrose på toppen av platen for å danne et solid underlag etter at sukrose har frosset.Deretter plasserer du alle hjerneprøver horisontalt i en linje på toppen av sukrosebasen med 500 mikroliter 30% sukrose. Etter fem til 10 minutters frysing, når hjernen har blitt hard og hvit, trim hjernen til ønsket lag eller region er nådd, bytt deretter fra trimmodus til fôrmodus og seksjon hjernevev for å generere 25-mikrometer tykke seksjoner. Deretter forbereder du en 48-brønns plate fylt med PBS og markerer fem brønner for en musehjerne.Bruk en pensel, samle en seksjon og legg den i en brønn, samle deretter den etterfølgende delen av samme mus og plasser den i den andre brønnen. Gjenta prosedyren til den femte brønnen er nådd å plassere seksjoner seks til 10 i den første til femte brønnen, og så videre. Plasser en cellesil i en brønn av en seksbrønns cellekulturplate fylt med PBS, og overfør en serie hjerneseksjoner til cellesilen ved hjelp av en pensel.Skyll disse seksjonene i PBS ved å overføre cellesilen til en annen brønn fylt med PBS på shakeren. Overfør deretter hjerneseksjonene fra cellesilen til et 1,5 milliliter rør som inneholder en milliliter biotinmerket WFA og inkuber på en gyngeplattform ved 50 RPM over natten. Neste dag, skyll hjerneseksjonene med PBS som vist tidligere, og overfør deretter seksjonene til et rør som inneholder en milliliter streptavidin-dagslys 488-løsning og inkuber i to timer på en gyngeplattform.Etter å ha skyllet hjerneseksjonene med PBS igjen, inkuber dem i å blokkere buffer i to timer, etterfulgt av inkubasjon i primært antistoff over natten på en gyngeplattform. Neste dag, etter PBS-skylling, inkuberer du seksjonene i sekundært antistoff i to timer. Fyll to Petri-retter med 100 milliliter PBS og overfør alle hjerneseksjonene fra en sil til den første parabolen.Juster hjerneseksjonene i nevroanatomisk rekkefølge fra kaudal til rostral. Deretter senker du en glide inn i den andre parabolen med den ene enden litt vippet med et stativ, og ved hjelp av en fin pensel plasserer du forsiktig en hjerneseksjon like under luftbuffergrensesnittet på den vippede lysbildet. Deretter bruker du en overføringspipette, sakte og forsiktig fjerne bufferen for å senke nivået til hjernedelen er helt over luftbuffergrensesnittet.Fortsett å gjenta denne prosessen til bunnen av lysbildet er nådd og alle seksjonene er montert på lysbildet. For avbildning slår du på skanneren og datamaskinen, plasserer lysbildene i skyveholderen med lasteenheten og setter holderen inn i skanneren. Åpne programvaren for skanneren, og velg riktig lagringssted og skanneprofil.Start forhåndsvisningsskanningen ved å klikke på Start forhåndsvisningsskanning-knappen. Etter skanningen åpner du veiviseren for vevsdeteksjon og sirkler rundt områdene av interesse for avbildning. Etter å ha valgt områdene for bildebehandling, klikker du på Start skanning-knappen og venter på at maskinen er ferdig med skanningen.Kontroller resultatfilen, og eksporter bildene. Vist her er representative fluorescens immuno-histokjemi bilder av coronal mus hjerne seksjoner på Bregma-negative 0,82 millimeter, viser distribusjonen av wisteria floribunda agglutinin, arginin vasopressin, og DAPI. Wisteria floribunda agglutinin signaler observeres i det periforniske området av den fremre hypothalamus og retikulære kjernen, mens arginin vasopressin signaler observeres i paraventrikulær kjerne.Når du prøver denne protokollen for første gang, foreslår vi å utføre den under tilsyn av en erfaren forsker. Protokollen vil bidra til å generere optimale og konsistente histologiske resultater blant forskjellige forskere og laboratorier, og vil fungere som en referanse for nybegynnere som lærer denne teknikken.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Preparering og farging av Mouse Sensoriske nervefibre Innervating Hud og Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo dyrking av Whole, Utviklingsland Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Micron-skala Resolution Optical Tomography av hele mus hjerner med Confocal Lett Sheet Mikros

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Stereotaxic kirurgi for genetisk manipulasjon i Striatal celler Neonatal musen hjerner

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation og Organotypic stykke kulturer embryonale musen hjerner for Live-Imaging av overføring av GABAergic Interneurons

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

Homochronic transplantasjon av Interneuron forløpere til tidlig Postnatal musen hjerner

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolsk analyse av Drosophila melanogaster Larval og voksen hjerner

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...

Simultaneous Cryosectioning of Multiple Rodent Brains

Samtidig og kryosnitt flere gnager hjerner

Histology and immunohistochemistry are routine methods of analysis to visualize microscopic anatomy and localize proteins within biological tissue. In ...

Targeting Alpha Synuclein Aggregates in Cutaneous Peripheral Nerve Fibers by Free-floating Immunofluorescence Assay

Målretting Alpha Synuclein aggregater i hud perifere nerve fibre av fri-flytende Immunofluorescence analysen

To date, for most neurodegenerative diseases only a post-mortem histopathological definitive diagnosis is available. For Parkinson&#39;s disease (PD), the ...

Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains

Transplantasjon av Chemogenetically utviklet kortikale Interneuron forfedre inn tidlig postnatal Mouse hjerner

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is ...