Name: in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals
Uploaded: 2022-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

Deze studie werd gefinancierd door de volgende beurzen: National Key R& D Program of China (2021YFA1101200); Medisch onderzoeksproject van Wenzhou (Y20170188), Nationaal Belangrijk R & D-programma van China (2016YFC1101200); National Natural Science Foundation of China (81770926;81800842); Belangrijk R & D-programma van de provincie Zhejiang (2018C03G2090634); en key R&D-programma van wenzhou eye hospital (YNZD1201902). De sponsor of financierende organisatie had geen rol in het ontwerp of de uitvoering van dit onderzoek.

Experimenten werden uitgevoerd strikt in overeenstemming met de ARRIVE-richtlijnen en de National Institutes of Health-gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren, en houden zich aan de protocollen die zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee in Wenzhou Medical University (WMU) en Joinn Laboratory (Suzhou). De mannelijke Saanen geiten, in de leeftijd van 4 tot 6 maanden met een gewicht van 19-23 kg, werden gehuisvest in de WMU-dierenfaciliteit. De mannelijke resusapen, van 5 tot 6 j...

<ol>
	<li>Benowitz, L., Yin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rewiring+the+injured+CNS:+lessons+from+the+optic+nerve.">Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).</li><li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN/mTOR+pathway.">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li><li>Duan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype-specific+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+following+axotomy:+effects+of+osteopontin+and+mTOR+signaling.">Subtype-specific regeneration of retinal ganglion cells following axotomy: effects of osteopontin and mTOR signaling.</a> Neuron. 85 (6), 1244-1256 (2015).</li><li>Bei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+visual+function+by+enhancing+conduction+in+regenerated+axons.">Restoration of visual function by enhancing conduction in regenerated axons.</a> Cell. 164 (1-2), 219-232 (2016).</li><li>He, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+control+of+axon+regeneration.">Intrinsic control of axon regeneration.</a> Neuron. 90 (3), 437-451 (2016).</li><li>Yang, S. -. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+promote+long-distance+optic+nerve+regeneration.">Strategies to promote long-distance optic nerve regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 119 (2020).</li><li>Foroozan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+treatments+for+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">New treatments for nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Neurologic Clinics. 35 (1), 1-15 (2017).</li><li>Singman, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+traumatic+optic+neuropathy.">Indirect traumatic optic neuropathy.</a> Military Medical Research. 3, 2 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+retinal+ganglion+cells+and+optic+nerve's+integrity+in+large+animals+by+multi-modality+analysis.">In vivo evaluation of retinal ganglion cells and optic nerve's integrity in large animals by multi-modality analysis.</a> Experimental Eye Research. 197, 108117 (2020).</li><li>Tolbert, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Rhesus+macaque+to+human:+structural+evolutionary+pathways+for+immunoglobulin+G+subclasses.">From Rhesus macaque to human: structural evolutionary pathways for immunoglobulin G subclasses.</a> mAbs. 11 (4), 709-724 (2019).</li><li>Preuss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Specializations of the human visual system: the monkey model meets human reality. , 231-259 (2004).</li><li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates.">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+assessment+of+retinal+ganglion+cell+function.">Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.</a> Experimental Eye Research. 141, 164-170 (2015).</li><li>Smith, C. A., Vianna, J. R., Chauhan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+retinal+ganglion+cell+damage.">Assessing retinal ganglion cell damage.</a> Eye. 31 (2), 209-217 (2017).</li><li>Schuman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+histologic+measurements+of+nerve+fiber+layer+thickness+in+normal+and+glaucomatous+monkey+eyes.">Optical coherence tomography and histologic measurements of nerve fiber layer thickness in normal and glaucomatous monkey eyes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 48 (8), 3645-3654 (2007).</li><li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats:+electrodes,+stimulus+source+and+peak+analysis.">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Documenta Ophthalmologica. 123 (2), 109-119 (2011).</li><li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ISCEV+standard+for+clinical+visual+evoked+potentials:+(2016+update).">ISCEV standard for clinical visual evoked potentials: (2016 update).</a> Documenta Ophthalmologica. 133 (1), 1-9 (2016).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse.">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> eLife. 8, 45881 (2019).</li><li>Seidman, S. H., Telford, L., Paige, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical,+horizontal,+and+torsional+eye+movement+responses+to+head+roll+in+the+squirrel+monkey.">Vertical, horizontal, and torsional eye movement responses to head roll in the squirrel monkey.</a> Experimental Brain Research. 104 (2), 218-226 (1995).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+pattern+electroretinogram.">The mouse pattern electroretinogram.</a> Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 145-153 (2007).</li></ol>

In deze studie presenteren we een protocol van VEP, PERG en OCT bij geiten- en resusaap. Deze in vivo methoden kunnen worden toegepast in grote diermodellen van verschillende optische neuropathieën, zoals glaucoom, ischemische of traumatische optische neuropathie en optische neuritis9.
PVEP is stabieler en gevoeliger dan FVEP17; het kan echter niet worden uitgelokt in goat9. Als zodanig wordt FVEP uitgevoerd bij ...

De oogzenuw (ON), die bestaat uit axonen van de retinale ganglioncellen (RGC), zendt een visueel signaal van het netvlies naar de hersenen. ON-ziekten, zoals glaucoom, traumatische of ischemische optische neuropathie, veroorzaakten vaak onomkeerbare ON / RGC-degeneratie en verwoestend gezichtsverlies. Hoewel er momenteel veel doorbraken zijn in ON-regeneratie en RGC-bescherming in knaagdiermodellen1,2,3,4,5,6, bleven de klinische behandelingen voor de meeste ON-ziekten de afgelopen halve eeuw in wezen hetzelfde met een onbevredigend resultaat7,8 . Om de kloof tussen fundamenteel onderzoek en klinische praktijk te dichten, zijn translationele studies met behulp van grote diermodellen van ON-ziekten vaak noodzakelijk en nuttig vanwege hun nauwere anatomische gelijkenis met mensen dan knaagdiermodellen.
Geiten- en resusapen zijn twee grote diersoorten die in ons laboratorium worden gebruikt om de ON-ziekte van de mens te modelleren. De grootte van de oogbol van een geit, ON, en de aangrenzende structuur (orbitale en nasale holte, schedelbasis, enz.) is vergelijkbaar met die van een mens op basis van schedel CT-scan9. Als zodanig biedt het geitenmodel de mogelijkheid om therapeutische apparaten of chirurgische procedures te evalueren en te verfijnen voorafgaand aan gebruik bij mensen. De resusaap heeft als niet-menselijke primaat (NHP) een mensachtig uniek visueel systeem dat bij andere soorten niet bestaat10,11. Bovendien zijn pathofysiologische reacties op verwondingen en behandelingen bij NHP vergelijkbaar met die bij mensen12.
In vivo tests om de structuur en functie van de ON en RGC longitudinaal te beoordelen zijn belangrijk in grote dierstudies. Patroon elektroretinogram (PERG) is gebruikt om de RGC-functie te evalueren. Flash visual evoked potential (FVEP) weerspiegelt de integriteit van retino-geniculo-corticale route in het visuele systeem. Zo kan PERG in combinatie met FVEP de AAN-functie weerspiegelen9,13,14 . De beeldvorming van retinale optische coherentietomografie (OCT) kan de retinale structuur met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie laten zien, waardoor de dikte van het retinale ganglioncomplex (GCC) kan worden gemeten 9,15. Voor elektrofysiologische onderzoeken in deze studie zijn het monitoren van vitale functies (warmtesnelheid, breuksnelheid, bloeddruk) en het niveau van zuurstofverzadiging (SpO2) vóór het testen cruciaal, omdat deze parameters een krachtige invloed hebben op de oculaire bloedstroom en dus de functie van het visuele systeem. We hebben echter niet de vitale functies gecontroleerd bij het uitvoeren van OCT retinale beeldvorming omwille van de eenvoud. Volgens onze eerdere studie9 is de GCC-dikte gemeten door OCT retinale beeldvorming vrij stabiel, met een variatiecoëfficiënt tussen sessies van bijna 3%. Deze in vivo tests bij geiten en resusapen zijn in detail beschreven in onze eerdere studie9. Hier presenteren we deze methoden om de experimentele transparantie en reproduceerbaarheid te vergroten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>47.6 x 26.8 cm monitors</td>
			<td>DELL Inc.</td>
			<td>E2216HV</td>
			<td>The visual stimuli of contrast-reversal black-white checkerboards were displayed on screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm tracheal tube</td>
			<td>Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>PVC 6.0</td>
			<td>ensure the airway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alligator clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atropine</td>
			<td>Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>reduce bronchial secretion and protect heart from vagal nerve activation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbomer Eye Gel</td>
			<td>Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>moisten the cornea and stabilize the recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet recording electrodes</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>2300 La Chaux-De-Fonds</td>
			<td>ERG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye speculum</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>ZYD020</td>
			<td>open palpebral fissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis OCT system</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td></td>
			<td>OCT system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td>isoflurane anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>male Saanen goats</td>
			<td>Caimu Livestock Company, country (Hangzhou, China)</td>
			<td></td>
			<td>The male Saanen goats, aged from 4 to 6 months with weight of 19&#8211;23 kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle electrode</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>U51-426-G-D</td>
			<td>use for FVEP ground electrode and PERG reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periphery venous catheter intravenously</td>
			<td>BD shanghai Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>383019</td>
			<td>intravenous access for atropine and propofol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propofol</td>
			<td>Xian Lipont Enterprise Union Management Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td>
			<td>SANTEN OY, Japan</td>
			<td></td>
			<td>5% tropicamide and 5% phenylephrine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>visual electrophysiology device</td>
			<td>Gotec Co., Ltd</td>
			<td>GT-2008V-III</td>
			<td>use for FVEP &#38; PERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Huamu Animal Health Products Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>xylazine anesthesia: intramuscular injection of xylazine 3mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in monkey</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals

De oogzenuw verzamelt axonensignalen van de retinale ganglioncellen en stuurt visueel signaal naar de hersenen. Grote diermodellen van oogzenuwletsel zijn essentieel voor het vertalen van nieuwe therapeutische strategieën van knaagdiermodellen naar klinische toepassing vanwege hun nauwere overeenkomsten met mensen in grootte en anatomie. Hier beschrijven we enkele in vivo methoden om de functie en structuur van de retinale ganglioncellen (RGC's) en oogzenuw (ON) bij grote dieren te evalueren, waaronder visueel opgeroepen potentieel (VEP), patroonelektroretinogram (PERG) en optische coherentietomografie (OCT). Zowel geiten- als niet-menselijke primaten werden in deze studie gebruikt. Door deze in vivo methoden stap voor stap te presenteren, hopen we de experimentele reproduceerbaarheid tussen verschillende laboratoria te vergroten en het gebruik van grote diermodellen van optische neuropathieën te vergemakkelijken.

Figuur 1A toont representatieve resultaten van FVEP bij geiten. Hoewel de golfvormen in dezelfde flitsintensiteit relatief vergelijkbaar zijn, raden we toch aan om de golfvormen twee keer te onderzoeken. Elektromagnetische golven gegenereerd door elektronische apparaten zullen interfereren met de verzamelde elektrische signalen, wat resulteert in hoge basislijnruis en slechte herhaalbaarheid van de golfvorm. Daarom wordt aanbevolen ervoor te zorgen dat er tijdens elektrofysiologisch onderzoe...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Hier analyseren we verschillende in vivo tests (flash visual evoked potential, patroonelektroretinogram en optische coherentietomografie) bij geiten- en resusaap om de structuur en functie van de oogzenuw en zijn neuronen te begrijpen.

In vivo Methoden om retinale ganglioncel en oogzenuwfunctie en -structuur bij grote dieren te beoordelen

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

Hallo allemaal. Dit is Yikui Zhang van het Wenzhou Eye Hospital. De bovenste zenuw mist Exxons van de orexine ganglioncellen en stuurt vervolgens het visuele signaal naar de hersenen.Een groter model van bovenste zenuwletsel is essentieel om de nieuwe behandeling van robotmodel naar lymfetoepassing te vertalen. Hier beschrijven we enkele in vivo methoden om de structuur en functie van de orexine ganglioncellen in de bovenste zenuw bij grote dieren te evalueren. Door deze methode stap voor stap te presenteren, hopen we experimentele reproductieve handicaps te vergroten en het gebruik van grotere modellen van optische neurose te vergemakkelijken.Scheer het met een elektronisch scheermes. En bereid het drie keer voor met 70% alcohol, om de huid te reinigen en de onderhuidse ader bloot te leggen. Breng intraveneus een perifeer veneus castor in.Druppel vervolgens atropine en propofol. Intubeer de geit met een zes millimeter tracheale buis en sluit aan op een kunstmatig gasmasker. Anesthesie werd gehandhaafd met 3,5% isofluraan in zuurstof bij een constante stroomsnelheid van twee liter.Plaats de temperatuursensor onder de tong van de geit. Klem de zuurstofverzadigingskloof aan het proximale uiteinde van het geitenoor. Bind de bloeddrukmanchet aan de basis van de dij.Klem ECG splijt op de ledematen in volgorde. Vervolgens kunnen we de vitale indicatoren van de geit volgen. Scheer het haar en desinfecteer de huid met betadine en 70% alcohol drie keer in het midden van het frontale bot.Open de sterilisatiezak met daarin de schaar en de nagels. Maak huidincisies om de schedel bloot te leggen met een schaar. Stalen schroeven voor geïmplanteerd in het midden van het frontale bot.Scheer het haar en desinfecteer de huid met betadine en 70% alcohol drie keer op een middelste punt van twee oren in het achterhoofdsbeen. Maak huidincisies. Stalen schroeven voor geïmplanteerd op het middelste punt van twee oren in achterhoofdsbeen.De geslepen naaldelektrode wordt subcutaan onder de frontale schedelschroef ingebracht. De actieve elektrode en de referentie-elektrode zijn verbonden met respectievelijk frontale en occipitale schroeven met alligatorclips om de impotentie van de elektrode te verminderen. Pleister één oog.Breng actuele anesthesie oogdruppels aan op het oogoppervlak. Pupillen aan beide zijden worden verwijd door mydriasis oogdruppels. Plaats de kop van de geit in een met gas gevulde stimulator gericht ambulant licht.Leg de zwarte deken over de stimulator en de geitenkop voor vijf minuten aanpassing. Ooglidspeculum wordt gebruikt om zijn pupil volledig bloot te leggen. Controleer de impotentie van het elektrodeweefselcontact.Zorg ervoor dat de impotentie voor elk minder dan 10 kilometer is om elektromagnetische interferentie van andere elektrische apparaten in dezelfde kamer te voorkomen. Controleer het basisgeluid zonder lichtstimulatie. Start de FVEP-opname.Merk op dat FVEP-opname bij elke lichtintensiteit twee keer wordt uitgevoerd. Merk op dat bevochtig het hoornvlies met kunstmatige scheur als het droog lijkt. Herhaal ongeveer stappen voor het contralaterale oog.Start de FVEP-opname met verschillende lichtintensiteiten achter elkaar. Voor elke opname worden 64 sporen gemiddeld om één golfvorm op te leveren. De eerste positieve en actieve piek in de FVEP-golfvorm werd aangeduid als P1 en N1. De gesteriliseerde grondelektrode wordt in de oorlel geplaatst.De gesteriliseerde actieve en referentie-elektroden worden subcutaan ingebracht langs respectievelijk de middellijn en het frontale en occipitale bot. Ooglidspeculum wordt gebruikt om zijn pupil volledig bloot te leggen. Pleister één oog.Registreer patroon VEP-reacties van het andere oog op verschillende ruimtelijke frequenties achter elkaar. Sluit aan op de grondelektrode met een krokodillenclip. Twee gesteriliseerde naaldreferentie-elektroden worden onder de huid geplaatst, een centimeter achter de laterale canthus aan beide zijden.Ooglidspeculum wordt gebruikt om zijn pupil volledig bloot te leggen. Twee gedesinfecteerde ERG-opname-elektroden zijn beide hoornvlies gecentreerd na topische toepassing van kunstmatige scheur. Voor elk oog worden twee stimulatoren geplaatst met een kijkafstand van 50 centimeter.Zorg ervoor dat impotentie onder de 10 kilometer is. Volg de basislijnruis zonder lichtstimulatie. Richt het ambulante licht.Start patroon ERG-opname van beide ogen tegelijkertijd op verschillende ruimtelijke frequenties achter elkaar. Ten slotte, terugkeer van het scherm om patroon ERG op te nemen zonder visuele stimulatoren en een actieve controle. Het bandpassfilter is ingesteld om te variëren van één tot 75 Hertz voor drie CPD-patroon ERG.Het bandpassfilter is van één tot 50 Hertz om de vorm glad te strijken zonder de amplitude te beïnvloeden. De eerste positieve en actieve pieken in de golfvorm worden aangeduid als P1 en N1. Het patroon ERG-amplitude gemeten van N1 tot P1.To elektrode-impotentie te verminderen, wordt een gesteriliseerde naaldreferentie onder de frontale huid geplaatst. En een gesteriliseerde naaldreferentieelektrode wordt onder de huid geplaatst, een centimeter achter de laterale canthus aan één kant.Een gedesinfecteerde ERG-opname-elektrode wordt op het hoornvlies geplaatst bij een topische toepassing van kunstmatige scheur. Pleister één oog. Een display wordt geplaatst op kijkafstand van 50 centimeter.Ooglidspeculum wordt gebruikt om zijn pupil volledig bloot te leggen. Vervolgens wordt de geit op de kinsteun geplaatst. Lijn de geit uit met de camera om zijn oogzenuwkop in het confocale scanlaser oftalmoscopiebeeld te sturen door de koppositie te wijzigen.Klik op de startknop om de eindfase van de detectie in te gaan. Wacht tot het apparaat klaar is met laden. Druk op de gele startknop om de formele beeldvorming te starten.Pas de joystick aan om het infraroodbeeld gelijkmatig te verlichten om de beeldkwaliteit te verbeteren. Schuif de camera naar voren totdat het rechtopstaande retinale OCT-beeld op het scherm rechtsboven wordt weergegeven. Pas de joystick aan om deze gelijkmatig te laten dansen in een horizontaal retinaal OCT-beeld.Druk op de knop op de joystick om uw afbeelding automatisch op te vangen. Houd deze joystick ingedrukt om de beeldkwaliteit op het livebeeldscherm te behouden totdat de uitvoering van het beeld is voltooid. Dan pers verwerven.Selecteer een eerste foto van hoge kwaliteit. Klik met de rechtermuisknop en selecteer referentie instellen. Druk op de vervolgknop om het programma toe te staan de huidige scan automatisch af te stemmen op de basislijnscan.Eenmaal gematcht, drukt u op de knop op de joystick om automatische real-time tracking te activeren. Klik op de meetknop om het meetplatform te openen. Kies de gum een gereedschap en veeg de RFL-lijn, die automatisch door de machine wordt gelabeld.Kies het gereedschap Lijntekenen om handmatig de grens tussen IPL en INL te schetsen. Tussen de rode en blauwe lijnen ligt het GCC-complex. Retina-veranderde beeldvorming bij resusaap wordt uitgevoerd met behulp van dezelfde apparatuur en procedure als die gebruikt bij geiten.Figuur A toont representatieve FVEP bij geiten. Figuur B toont representatief patroon ERG golfvorm bij geit. Figuur C toont een representatief patroon FVEP bij resusaap.En figuur D toont een representatief patroon ERG-golfvorm in resusaap. Figuur twee toont representatieve retinale OCT-beelden rond de oogzenuwkop en de dikte van het GCC-complex in verschillende perifere gebieden bij geiten en de resusaap. Het model van grote dieren speelt een belangrijke rol in translationeel onderzoek.In veel gevallen werden veelbelovende therapeutische effecten in kleine diermodellen niet vertaald naar menselijke patiënten. In deze studie presenteerden we het videoprotocol van FVEP, PERG en OCT bij geit en de resusaap. Deze in vivo methode kan worden toegepast in grotere modellen van verschillende optische neurose, zoals glaucoom ischemische of traumatische optische neuropathie en optische neuritis.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Methoden voor experimentele manipulaties na Optic Nerve doorsnijding in het zoogdier CZS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfectie van Mouse retinale ganglioncellen door In vivo Elektroporatie

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Een Optic Nerve Crush letsel muismodel om retinale ganglion cel Survival Study

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Retrograde Labeling van retinale ganglioncellen in Adult zebravis met fluorescente kleurstoffen

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo beeldvorming van Optic Nerve Fiber Integrity by-Contrast Enhanced MRI in Muizen

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Beeldvorming Serotonerge vezels in de muis Spinal Cord Met behulp van de DUIDELIJKHEID / CUBIC Techniek

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

Single-cell RNA-Seq van gedefinieerde subsetjes van retinale Ganglion-cellen

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optische coherentie tomografie: Beeldvorming muis retinale Ganglion cellen In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Gedeeltelijke oogzenuw transect bij ratten: een Model tot stand gebracht met een nieuwe operationele aanpak om te beoordelen van secundaire degeneratie van het netvlies peesknoopcellen

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...