Name: in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals
Uploaded: 2022-02-26T13:00:00
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इस अध्ययन को निम्नलिखित अनुदानों द्वारा वित्त पोषित किया गया था: चीन के राष्ट्रीय प्रमुख आर एंड डी कार्यक्रम (2021YFA1101200); वेनझोउ की चिकित्सा अनुसंधान परियोजना (Y20170188), चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2016YFC1101200); चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81770926;81800842); Zhejiang प्रांत के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2018C03G2090634); और वेनझोउ आई हॉस्पिटल (YNZD1201902) के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम। प्रायोजक या वित्त पोषण संगठन की इस शोध के डिजाइन या संचालन में कोई भूमिका नहीं थी।

प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए आगमन दिशानिर्देशों और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान गाइड के अनुसार प्रयोगों को सख्ती से आयोजित किया गया था, और वेनझोउ मेडिकल यूनिवर्सिटी (डब्ल्यूएमयू) और ज...

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	<li>Benowitz, L., Yin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rewiring+the+injured+CNS:+lessons+from+the+optic+nerve.">Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).</li><li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN/mTOR+pathway.">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li><li>Duan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype-specific+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+following+axotomy:+effects+of+osteopontin+and+mTOR+signaling.">Subtype-specific regeneration of retinal ganglion cells following axotomy: effects of osteopontin and mTOR signaling.</a> Neuron. 85 (6), 1244-1256 (2015).</li><li>Bei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+visual+function+by+enhancing+conduction+in+regenerated+axons.">Restoration of visual function by enhancing conduction in regenerated axons.</a> Cell. 164 (1-2), 219-232 (2016).</li><li>He, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+control+of+axon+regeneration.">Intrinsic control of axon regeneration.</a> Neuron. 90 (3), 437-451 (2016).</li><li>Yang, S. -. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+promote+long-distance+optic+nerve+regeneration.">Strategies to promote long-distance optic nerve regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 119 (2020).</li><li>Foroozan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+treatments+for+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">New treatments for nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Neurologic Clinics. 35 (1), 1-15 (2017).</li><li>Singman, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+traumatic+optic+neuropathy.">Indirect traumatic optic neuropathy.</a> Military Medical Research. 3, 2 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+retinal+ganglion+cells+and+optic+nerve's+integrity+in+large+animals+by+multi-modality+analysis.">In vivo evaluation of retinal ganglion cells and optic nerve's integrity in large animals by multi-modality analysis.</a> Experimental Eye Research. 197, 108117 (2020).</li><li>Tolbert, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Rhesus+macaque+to+human:+structural+evolutionary+pathways+for+immunoglobulin+G+subclasses.">From Rhesus macaque to human: structural evolutionary pathways for immunoglobulin G subclasses.</a> mAbs. 11 (4), 709-724 (2019).</li><li>Preuss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Specializations of the human visual system: the monkey model meets human reality. , 231-259 (2004).</li><li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates.">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+assessment+of+retinal+ganglion+cell+function.">Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.</a> Experimental Eye Research. 141, 164-170 (2015).</li><li>Smith, C. A., Vianna, J. R., Chauhan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+retinal+ganglion+cell+damage.">Assessing retinal ganglion cell damage.</a> Eye. 31 (2), 209-217 (2017).</li><li>Schuman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+histologic+measurements+of+nerve+fiber+layer+thickness+in+normal+and+glaucomatous+monkey+eyes.">Optical coherence tomography and histologic measurements of nerve fiber layer thickness in normal and glaucomatous monkey eyes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 48 (8), 3645-3654 (2007).</li><li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats:+electrodes,+stimulus+source+and+peak+analysis.">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Documenta Ophthalmologica. 123 (2), 109-119 (2011).</li><li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ISCEV+standard+for+clinical+visual+evoked+potentials:+(2016+update).">ISCEV standard for clinical visual evoked potentials: (2016 update).</a> Documenta Ophthalmologica. 133 (1), 1-9 (2016).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse.">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> eLife. 8, 45881 (2019).</li><li>Seidman, S. H., Telford, L., Paige, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical,+horizontal,+and+torsional+eye+movement+responses+to+head+roll+in+the+squirrel+monkey.">Vertical, horizontal, and torsional eye movement responses to head roll in the squirrel monkey.</a> Experimental Brain Research. 104 (2), 218-226 (1995).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+pattern+electroretinogram.">The mouse pattern electroretinogram.</a> Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 145-153 (2007).</li></ol>

इस अध्ययन में, हम बकरी और रीसस मकाक में VEP, PERG, और OCT का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। विवो विधियों में ये विभिन्न ऑप्टिक न्यूरोपैथी के बड़े पशु मॉडल में लागू किए जा सकते हैं, जैसे कि ग्लूकोमा, इस्केमिक,...

ऑप्टिक तंत्रिका (ओएन), जिसमें रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं (आरजीसी) से अक्षतंतु होते हैं, रेटिना से मस्तिष्क तक दृश्य संकेत प्रसारित करता है। डॉडरामस, दर्दनाक या इस्केमिक ऑप्टिक न्यूरोपैथी जैसे रोगों पर, अक्सर अपरिवर्तनीय ON / RGC अध: पतन और विनाशकारी दृश्य हानि का कारण बनता है। यद्यपि वर्तमान में कृंतक मॉडल 1,2,3,4,5,6 में ऑन पुनर्जनन और आरजीसी संरक्षण में कई सफलताएं हैं, अधिकांश ऑन बीमारियों के लिए नैदानिक उपचार असंतोषजनक परिणाम के साथ पिछली आधी शताब्दी में अनिवार्य रूप से समान रहे 7,8 . बुनियादी अनुसंधान और नैदानिक अभ्यास के बीच के अंतर को भरने के लिए, ON बीमारियों के बड़े पशु मॉडल का उपयोग करके ट्रांसलेशनल अध्ययन अक्सर आवश्यक और फायदेमंद होते हैं क्योंकि कृंतक मॉडल की तुलना में मनुष्यों के लिए उनकी करीबी शारीरिक समानता होती है।
बकरी और रीसस मकाक दो बड़ी जानवरों की प्रजातियां हैं जिनका उपयोग हमारी प्रयोगशाला में मानव की ऑन बीमारी के मॉडल के लिए किया जाता है। एक बकरी की नेत्रगोलक, ओएन, और आसन्न संरचना (कक्षीय और नाक गुहा, खोपड़ी आधार, आदि) का आकार खोपड़ी सीटी स्कैन 9 पर आधारित मानव के समान है। जैसे, बकरी मॉडल मनुष्यों में उपयोग करने से पहले चिकित्सीय उपकरणों या सर्जिकल प्रक्रियाओं का मूल्यांकन और परिष्कृत करने का अवसर प्रदान करता है। रीसस मकाक, गैर-मानव प्राइमेट (एनएचपी) के रूप में, मानव जैसी अद्वितीय दृश्य प्रणाली है जो अन्य प्रजातियों में मौजूद नहीं है10,11। इसके अलावा, एनएचपी में चोटों और उपचारों के लिए pathophysiological प्रतिक्रियाएं मनुष्यों में बहुत समान हैं।
विवो परीक्षणों में ON और RGC की संरचना का आकलन करने के लिए और अनुदैर्ध्य रूप से कार्य बड़े पशु अध्ययनों में महत्वपूर्ण हैं। पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम (PERG) का उपयोग RGC फ़ंक्शन का मूल्यांकन करने के लिए किया गया है। फ़्लैश दृश्य evoked क्षमता (FVEP) दृश्य प्रणाली में रेटिनो-geniculo-cortical मार्ग की अखंडता को दर्शाता है। इस प्रकार, FVEP के साथ संयुक्त PERG ON फ़ंक्शन9,13,14 को प्रतिबिंबित कर सकता है। रेटिना ऑप्टिक सुसंगतता टोमोग्राफी (ओसीटी) इमेजिंग उच्च अस्थायी और स्थानिक संकल्प के साथ रेटिना संरचना को दिखा सकती है, जो रेटिना गैंग्लियन कॉम्प्लेक्स (जीसीसी) 9,15 की मोटाई के माप को सक्षम बनाता है। इस अध्ययन में इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परीक्षाओं के लिए, परीक्षण से पहले महत्वपूर्ण संकेतों (गर्मी दर, उल्लंघन दर, रक्तचाप) और ऑक्सीजन संतृप्ति (एसपीओ 2) के स्तर की निगरानी करना महत्वपूर्ण है क्योंकि इन मापदंडों का ओकुलर रक्त प्रवाह पर शक्तिशाली प्रभाव पड़ता है और इस प्रकार दृश्य प्रणाली का कार्य होता है। हालांकि, सादगी की खातिर ओसीटी रेटिना इमेजिंग करते समय हमने महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी नहीं की। हमारे पिछले अध्ययन 9 के अनुसार, ओसीटी रेटिना इमेजिंग द्वारा मापा गया जीसीसी मोटाई काफी स्थिर है, जिसमें भिन्नता का अंतर-सत्र गुणांक 3% के करीब है। बकरी और रीसस मकाक में विवो परीक्षणों में ये हमारे पिछले अध्ययन 9 में विस्तार से वर्णित किए गए हैं। यहां हम प्रयोगात्मक पारदर्शिता और पुनरुत्पादन को बढ़ाने में मदद करने के लिए इन तरीकों को प्रस्तुत करते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>47.6 x 26.8 cm monitors</td>
			<td>DELL Inc.</td>
			<td>E2216HV</td>
			<td>The visual stimuli of contrast-reversal black-white checkerboards were displayed on screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm tracheal tube</td>
			<td>Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>PVC 6.0</td>
			<td>ensure the airway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alligator clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atropine</td>
			<td>Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>reduce bronchial secretion and protect heart from vagal nerve activation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbomer Eye Gel</td>
			<td>Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>moisten the cornea and stabilize the recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet recording electrodes</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>2300 La Chaux-De-Fonds</td>
			<td>ERG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye speculum</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>ZYD020</td>
			<td>open palpebral fissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis OCT system</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td></td>
			<td>OCT system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td>isoflurane anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>male Saanen goats</td>
			<td>Caimu Livestock Company, country (Hangzhou, China)</td>
			<td></td>
			<td>The male Saanen goats, aged from 4 to 6 months with weight of 19&#8211;23 kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle electrode</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>U51-426-G-D</td>
			<td>use for FVEP ground electrode and PERG reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periphery venous catheter intravenously</td>
			<td>BD shanghai Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>383019</td>
			<td>intravenous access for atropine and propofol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propofol</td>
			<td>Xian Lipont Enterprise Union Management Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td>
			<td>SANTEN OY, Japan</td>
			<td></td>
			<td>5% tropicamide and 5% phenylephrine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>visual electrophysiology device</td>
			<td>Gotec Co., Ltd</td>
			<td>GT-2008V-III</td>
			<td>use for FVEP &#38; PERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Huamu Animal Health Products Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>xylazine anesthesia: intramuscular injection of xylazine 3mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in monkey</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals

ऑप्टिक तंत्रिका रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं से अक्षतंतु संकेतों को एकत्र करती है और मस्तिष्क को दृश्य संकेत प्रसारित करती है। ऑप्टिक तंत्रिका चोट के बड़े पशु मॉडल आकार और शरीर रचना विज्ञान में मनुष्यों के लिए उनकी करीबी समानताओं के कारण कृंतक मॉडल से नैदानिक अनुप्रयोग के लिए उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों का अनुवाद करने के लिए आवश्यक हैं। यहां हम बड़े जानवरों में रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं (आरजीसी) और ऑप्टिक तंत्रिका (ओएन) के कार्य और संरचना का मूल्यांकन करने के लिए विवो विधियों में कुछ का वर्णन करते हैं, जिसमें दृश्य संभावित (वीईपी), पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम (पीईईआरजी) और ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी (ओसीटी) शामिल हैं। बकरी और गैर-मानव प्राइमेट दोनों को इस अध्ययन में नियोजित किया गया था। कदम दर कदम विवो विधियों में इन्हें प्रस्तुत करके, हम विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच प्रयोगात्मक पुनरुत्पादन में वृद्धि करने और ऑप्टिक न्यूरोपैथी के बड़े पशु मॉडल के उपयोग की सुविधा प्रदान करने की उम्मीद करते हैं।

चित्रा 1A बकरी में FVEP के प्रतिनिधि परिणाम दिखाता है। यद्यपि एक ही फ्लैश तीव्रता में waveforms सापेक्ष समानता है, हम अभी भी दो बार waveforms की जांच करने की सलाह देते हैं। इलेक्ट्रॉनिक उपकरणों द्वारा उत्पन...

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In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

यहां हम ऑप्टिक तंत्रिका और इसके न्यूरॉन्स की संरचना और कार्य को समझने के लिए बकरी और रीसस मकाक में विवो परीक्षणों (फ्लैश विजुअल इवोक्ड पोटेंशियल, पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम और ऑप्टिक सुसंगतता टोमोग्राफी) में कई लोगों को डेमोस्ट्रैट करते हैं।

Vivo में बड़े जानवरों में रेटिना गैंग्लियन सेल और ऑप्टिक तंत्रिका समारोह और संरचना का आकलन करने के तरीके

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

हेलो सब लोग। यह वेनझोउ आई अस्पताल से Yikui झांग है। ऊपरी तंत्रिका में ओरेक्सिन गैंग्लियन कोशिकाओं से एक्सॉन की कमी होती है, और फिर दृश्य संकेत को मस्तिष्क में प्रसारित किया जाता है।ऊपरी तंत्रिका चोट का बड़ा मॉडल रोबोट मॉडल से लिम्फ आवेदन के लिए उपन्यास उपचार का अनुवाद करने के लिए आवश्यक हैं। यहां, हम बड़े जानवरों में ऊपरी तंत्रिका में ओरेक्सिन गैंग्लियन कोशिकाओं की संरचना और कार्य का मूल्यांकन करने के लिए विवो विधियों में कुछ का वर्णन करते हैं। इस विधि को चरण-दर-चरण प्रस्तुत करके, हम प्रयोगात्मक प्रजनन अक्षमताओं को बढ़ाने और ऑप्टिक न्यूरोसिस के बड़े मॉडल के उपयोग की सुविधा प्रदान करने की उम्मीद करते हैं।इलेक्ट्रॉनिक रेजर के साथ शेव करें। और, त्वचा को साफ करने और चमड़े के नीचे की नस को उजागर करने के लिए इसे तीन बार 70% अल्कोहल के साथ तैयार करें। एक परिधीय शिरापरक अरंडी अंतःशिरा रूप से सम्मिलित करें.फिर ड्रिप एट्रोपिन और प्रोपोफोल। एक छह मिलीमीटर श्वासनली ट्यूब के साथ बकरी intubate और एक कृत्रिम श्वसन यंत्र से कनेक्ट. संज्ञाहरण को ऑक्सीजन में 3.5% आइसोफ्लुरेन के साथ एक निरंतर दो लीटर प्रबंधित प्रवाह दर पर बनाए रखा गया था।तापमान सेंसर को बकरी की जीभ के नीचे रखें। बकरी कान के समीपस्थ छोर के लिए ऑक्सीजन संतृप्ति cleave क्लिप. रक्तचाप कफ को जांघ के आधार पर बांधें।क्लैंप ईसीजी क्रम में अंगों पर cleaves. फिर, हम बकरी के महत्वपूर्ण संकेतकों की निगरानी कर सकते हैं। बालों को शेव करें और ललाट की हड्डी के केंद्र में तीन बार बीटाडीन और 70% अल्कोहल के साथ त्वचा को कीटाणुरहित करें।कैंची और नाखूनों से युक्त स्टरलाइज़र बैग को खोलें। एक कैंची के साथ खोपड़ी को उजागर करने के लिए त्वचा के चीरों बनाओ। ललाट हड्डी के केंद्र में प्रत्यारोपित के लिए स्टील शिकंजा.बालों को शेव करें और ओसीसीपटल हड्डी में दो कानों के मध्य बिंदु पर तीन बार बीटाडीन और 70% अल्कोहल के साथ त्वचा को कीटाणुरहित करें। त्वचा चीरों बनाओ. पश्चकपाल हड्डी में दो कानों के मध्य बिंदु पर प्रत्यारोपित करने के लिए स्टील शिकंजा।जमीन सुई इलेक्ट्रोड ललाट खोपड़ी पेंच के नीचे चमड़े के नीचे डाला जाता है। सक्रिय इलेक्ट्रोड और संदर्भ इलेक्ट्रोड इलेक्ट्रोड नपुंसकता को कम करने के लिए मगरमच्छ क्लिप के साथ क्रमशः एक ललाट और पश्चकपाल शिकंजा से जुड़े होते हैं। पैच एक आंख.ओकुलर सतह पर सामयिक संज्ञाहरण आंखों की बूंदों को लागू करें। दोनों तरफ की पुतलियों को mydriasis आंखों की बूंदों द्वारा फैलाया जाता है। बकरी के सिर को गैस से भरे उत्तेजक में रखें जिसका उद्देश्य एम्बुलेंट लाइट है।पांच मिनट के अनुकूलन के लिए उत्तेजक और बकरी के सिर पर काले कंबल रखें। पलक स्पेकुलम का उपयोग इसकी पुतली को पूरी तरह से उजागर करने के लिए किया जाता है। इलेक्ट्रोड ऊतक संपर्क नपुंसकता की जाँच करें।सुनिश्चित करें कि नपुंसकता एक ही कमरे में अन्य विद्युत उपकरणों से विद्युत चुम्बकीय हस्तक्षेप से बचने के लिए प्रत्येक के लिए 10 किलोमीटर से नीचे है। प्रकाश उत्तेजना के बिना आधार रेखा शोर की जाँच करें। FVEP रिकॉर्डिंग प्रारंभ करें.ध्यान दें कि प्रत्येक प्रकाश तीव्रता पर FVEP रिकॉर्डिंग दो बार किया जाता है। ध्यान दें कि कृत्रिम आंसू के साथ कॉर्निया को नम करें यदि यह सूखा दिखाई देता है। contralateral आंख के लिए चरणों के बारे में दोहराएँ।विभिन्न प्रकाश तीव्रता पर FVEP रिकॉर्डिंग लगातार प्रारंभ करें। प्रत्येक रिकॉर्डिंग के लिए, 64 निशान एक लहर रूप उत्पन्न करने के लिए औसत कर रहे हैं। FVEP तरंग रूप में पहला सकारात्मक और सक्रिय शिखर P1 और N1 के रूप में नामित किया गया था। निष्फल भूमि इलेक्ट्रोड earlobe में स्थित है.निष्फल सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड क्रमशः मध्य रेखा और ललाट और पश्चकपाल हड्डी के साथ चमड़े के नीचे डाले जाते हैं। पलक स्पेकुलम का उपयोग इसकी पुतली को पूरी तरह से उजागर करने के लिए किया जाता है। पैच एक आंख.विभिन्न स्थानिक आवृत्तियों पर दूसरी आंख की रिकॉर्ड पैटर्न वीईपी प्रतिक्रियाएं लगातार। एक मगरमच्छ क्लिप के साथ जमीन इलेक्ट्रोड से कनेक्ट करें। दो निष्फल सुई संदर्भ इलेक्ट्रोड को त्वचा के नीचे दोनों तरफ पार्श्व कैन्थस के पीछे एक सेंटीमीटर रखा जाता है।पलक स्पेकुलम का उपयोग इसकी पुतली को पूरी तरह से उजागर करने के लिए किया जाता है। कृत्रिम आंसू के सामयिक अनुप्रयोग के बाद दो कीटाणुरहित ERG रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड दोनों कॉर्निया केंद्रित होते हैं। दो उत्तेजकों को 50 सेंटीमीटर की देखने की दूरी के साथ प्रत्येक आंख के सामने रखा जाता है।सुनिश्चित करें कि नपुंसकता 10 किलोमीटर से कम है। प्रकाश उत्तेजना के बिना आधार रेखा शोर को ट्रैक करें। अम्बुलेंट प्रकाश का लक्ष्य रखें।अलग-अलग स्थानिक आवृत्तियों पर एक साथ दोनों आंखों से पैटर्न ERG रिकॉर्डिंग शुरू करें। अंत में, दृश्य उत्तेजक और एक सक्रिय नियंत्रण के बिना पैटर्न ERG रिकॉर्ड करने के लिए स्क्रीन की वापसी। बैंडपास फ़िल्टर तीन CPD पैटर्न ERG के लिए एक से 75 हर्ट्ज तक की सीमा के लिए सेट किया गया है।बैंडपास फ़िल्टर एक से 50 हर्ट्ज तक है ताकि इसके आयाम को प्रभावित किए बिना आकार को चिकना किया जा सके। तरंग रूप में पहली सकारात्मक और सक्रिय चोटियों को P1 और N1 के रूप में नामित किया गया है। पैटर्न ERG आयाम N1 से मापा P1.To इलेक्ट्रोड नपुंसकता को कम करने के लिए, एक निष्फल सुई संदर्भ ललाट त्वचा के नीचे रखा जाता है। और एक निष्फल सुई संदर्भ इलेक्ट्रोड एक तरफ पार्श्व canthus के पीछे एक सेंटीमीटर त्वचा के नीचे रखा जाता है।कृत्रिम आंसू के एक सामयिक अनुप्रयोग पर कॉर्निया पर एक कीटाणुरहित ERG रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड रखा जाता है। पैच एक आंख. एक डिस्प्ले को 50 सेंटीमीटर की दूरी पर रखा गया है।पलक स्पेकुलम का उपयोग इसकी पुतली को पूरी तरह से उजागर करने के लिए किया जाता है। फिर, बकरी को ठोड़ी के आराम पर रखा जाता है। अपने सिर की स्थिति को संशोधित करके कॉन्फोकल स्कैन लेजर ऑप्थाल्मोस्कोपी छवि में अपने ऑप्टिक तंत्रिका सिर को भेजने के लिए कैमरे के साथ बकरी को संरेखित करें।डिटेक्शन एंड फेज दर्ज करने के लिए प्रारंभ बटन पर क्लिक करें. लोड िंग समाप्त करने के लिए मशीन की प्रतीक्षा करें। औपचारिक इमेजिंग प्रारंभ करने के लिए पीले रंग का प्रारंभ बटन दबाएँ.छवि गुणवत्ता में सुधार करने के लिए समान रूप से अवरक्त छवि को रोशन करने के लिए जॉयस्टिक को समायोजित करें। कैमरे को तब तक स्लाइड करें जब तक कि ईमानदार रेटिना ओसीटी छवि ऊपरी दाईं ओर स्क्रीन पर नहीं दिखाई जाती है। जॉयस्टिक को संशोधित करने के लिए यह एक क्षैतिज रेटिना OCT छवि में समान रूप से नृत्य है.अपनी छवि को स्वचालित रूप से पकड़ने के लिए जॉयस्टिक पर बटन दबाएं। छवि निष्पादन पूरा होने तक लाइव छवि स्क्रीन पर छवि की गुणवत्ता बनाए रखने के लिए इस जॉयस्टिक को पकड़ो। फिर प्रेस प्राप्त करें।एक उच्च गुणवत्ता वाली प्रारंभिक तस्वीर का चयन करें। राइट क्लिक करें और सेट संदर्भ का चयन करें। प्रोग्राम को वर्तमान स्कैन को बेसलाइन स्कैन से स्वचालित रूप से मिलान करने की अनुमति देने के लिए फ़ॉलो अप बटन दबाएँ.एक बार मिलान करने के बाद, स्वचालित वास्तविक समय ट्रैकिंग को सक्रिय करने के लिए जॉयस्टिक पर बटन दबाएं। माप प्लेटफ़ॉर्म दर्ज करने के लिए माप बटन पर क्लिक करें. इरेज़र को एक उपकरण चुनें और आरएफएल लाइन को पोंछें, जिसे स्वचालित रूप से मशीन द्वारा लेबल किया जाता है।मैन्युअल रूप से आईपीएल और INL के बीच सीमा को रेखांकित करने के लिए लाइन ड्राइंग उपकरण चुनें। लाल और नीली रेखाओं के बीच जीसीसी परिसर है। रीसस मकाक में रेटिना परिवर्तित इमेजिंग बकरी में उपयोग किए जाने वाले समान उपकरण और प्रक्रिया का उपयोग करके किया जाता है।चित्र A बकरी में प्रतिनिधि FVEP दिखाता है। चित्रा बी बकरी में प्रतिनिधि पैटर्न ERG तरंग रूप से पता चलता है. चित्रा C रीसस मकाक में प्रतिनिधि पैटर्न FVEP दिखाता है।और, आंकड़ा डी रीसस मकाक में प्रतिनिधि पैटर्न ERG तरंग रूप से पता चलता है। चित्रा दो ऑप्टिक तंत्रिका सिर के चारों ओर प्रतिनिधि रेटिना OCT छवियों और बकरी और रीसस मकाक में विभिन्न परिधीय क्षेत्रों में जीसीसी परिसर की मोटाई से पता चलता है। बड़े पशु मॉडल ट्रांसलेशनल अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।कई मामलों में, छोटे पशु मॉडल में चिकित्सीय प्रभावों का वादा करना मानव रोगियों के लिए अनुवादित करने में विफल रहा। इस अध्ययन में, हमने बकरी और रीसस मकाक में FVEP, PERG और OCT के वीडियो प्रोटोकॉल प्रस्तुत किए। विवो विधि में इसे विभिन्न ऑप्टिक न्यूरोसिस के बड़े मॉडल में लागू किया जा सकता है, जैसे कि ग्लूकोमा इस्केमिक या दर्दनाक ऑप्टिक न्यूरोपैथी और ऑप्टिक न्यूरिटिस।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती के लिए स्तनधारी CNS में ऑप्टिक तंत्रिका transection के बाद के तरीके

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

माउस रेटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के द्वारा अभिकर्मक Vivo में Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

एक ऑप्टिक तंत्रिका क्रश चोट murine रेटिनल नाड़ीग्रन्थि सेल जीवन रक्षा अध्ययन मॉडल

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

कार्यात्मक न्यूरोइमेजिंग अल्ट्रासोनिक रक्त मस्तिष्क बाधा विघटन और मैंगनीज बढ़ाकर एमआरआई का उपयोग

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

फ्लोरोसेंट रंगों के साथ वयस्क zebrafish में रेटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के प्रतिगामी लेबलिंग

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

चूहे में विपरीत बढ़ाकर एमआरआई द्वारा ऑप्टिक तंत्रिका फाइबर वफ़ादारी के vivo इमेजिंग में

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

माउस रीढ़ की हड्डी में serotonergic फाइबर इमेजिंग स्पष्टता का उपयोग / क्यूबिक तकनीक

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

रीटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के परिभाषित सैकट्स के सिंगल-सेल आरएनए-सैक

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी: इमेजिंग माउस रेटिना नाड़ीग्रंथि कोशिकाओं में Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

आंशिक ऑप्टिक चूहों में तंत्रिका Transection: एक नया ऑपरेटिव दृष्टिकोण के साथ स्थापित एक मॉडल रेटिना नाड़ीग्रंथि कोशिकाओं के माध्यमिक उत्थान का आकलन करने के लिए

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...