Name: in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals
Uploaded: 2022-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

Este estudo foi financiado pelas seguintes bolsas: National Key P&D Program of China (2021YFA1101200); Projeto de Pesquisa Médica de Wenzhou (Y20170188), Programa Nacional de P&D da China (2016YFC1101200); Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81770926;81800842); Principal Programa de P&D da província de Zhejiang (2018C03G2090634); e Programa de P&D chave do Wenzhou Eye Hospital (YNZD1201902). O patrocinador ou organização de financiamento não teve papel no projeto ou condução desta pesquisa.

Os experimentos foram realizados estritamente de acordo com as diretrizes da ARRIVE e o guia dos Institutos Nacionais de Saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório, e seguem os protocolos aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais na Universidade Médica de Wenzhou (WMU) e pelo Laboratório Joinn (Suzhou). As cabras Saanen machos, com idades entre 4 e 6 meses com peso de 19 a 23 kg, estavam alojadas na instalação de animais da OMH. Os macaques Rhesus machos, com idades entre 5 e 6 ano...

<ol>
	<li>Benowitz, L., Yin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rewiring+the+injured+CNS:+lessons+from+the+optic+nerve.">Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).</li><li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN/mTOR+pathway.">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li><li>Duan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype-specific+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+following+axotomy:+effects+of+osteopontin+and+mTOR+signaling.">Subtype-specific regeneration of retinal ganglion cells following axotomy: effects of osteopontin and mTOR signaling.</a> Neuron. 85 (6), 1244-1256 (2015).</li><li>Bei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+visual+function+by+enhancing+conduction+in+regenerated+axons.">Restoration of visual function by enhancing conduction in regenerated axons.</a> Cell. 164 (1-2), 219-232 (2016).</li><li>He, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+control+of+axon+regeneration.">Intrinsic control of axon regeneration.</a> Neuron. 90 (3), 437-451 (2016).</li><li>Yang, S. -. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+promote+long-distance+optic+nerve+regeneration.">Strategies to promote long-distance optic nerve regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 119 (2020).</li><li>Foroozan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+treatments+for+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">New treatments for nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Neurologic Clinics. 35 (1), 1-15 (2017).</li><li>Singman, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+traumatic+optic+neuropathy.">Indirect traumatic optic neuropathy.</a> Military Medical Research. 3, 2 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+retinal+ganglion+cells+and+optic+nerve's+integrity+in+large+animals+by+multi-modality+analysis.">In vivo evaluation of retinal ganglion cells and optic nerve's integrity in large animals by multi-modality analysis.</a> Experimental Eye Research. 197, 108117 (2020).</li><li>Tolbert, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Rhesus+macaque+to+human:+structural+evolutionary+pathways+for+immunoglobulin+G+subclasses.">From Rhesus macaque to human: structural evolutionary pathways for immunoglobulin G subclasses.</a> mAbs. 11 (4), 709-724 (2019).</li><li>Preuss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Specializations of the human visual system: the monkey model meets human reality. , 231-259 (2004).</li><li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates.">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+assessment+of+retinal+ganglion+cell+function.">Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.</a> Experimental Eye Research. 141, 164-170 (2015).</li><li>Smith, C. A., Vianna, J. R., Chauhan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+retinal+ganglion+cell+damage.">Assessing retinal ganglion cell damage.</a> Eye. 31 (2), 209-217 (2017).</li><li>Schuman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+histologic+measurements+of+nerve+fiber+layer+thickness+in+normal+and+glaucomatous+monkey+eyes.">Optical coherence tomography and histologic measurements of nerve fiber layer thickness in normal and glaucomatous monkey eyes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 48 (8), 3645-3654 (2007).</li><li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats:+electrodes,+stimulus+source+and+peak+analysis.">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Documenta Ophthalmologica. 123 (2), 109-119 (2011).</li><li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ISCEV+standard+for+clinical+visual+evoked+potentials:+(2016+update).">ISCEV standard for clinical visual evoked potentials: (2016 update).</a> Documenta Ophthalmologica. 133 (1), 1-9 (2016).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse.">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> eLife. 8, 45881 (2019).</li><li>Seidman, S. H., Telford, L., Paige, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical,+horizontal,+and+torsional+eye+movement+responses+to+head+roll+in+the+squirrel+monkey.">Vertical, horizontal, and torsional eye movement responses to head roll in the squirrel monkey.</a> Experimental Brain Research. 104 (2), 218-226 (1995).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+pattern+electroretinogram.">The mouse pattern electroretinogram.</a> Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 145-153 (2007).</li></ol>

Neste estudo, apresentamos um protocolo de VEP, PERG e OCT em cabra e rhesus macaque. Esses métodos in vivo podem ser aplicados em grandes modelos animais de várias neuropatias ópticas, como glaucoma, neuropatia isquêmica ou óptica traumática e neurite óptica9.
PvEP é mais estável e sensível que o FVEP17; no entanto, não pode ser provocado em cabra9. Como tal, a FVEP é realizada em cabra e pvep é real...

O nervo óptico (ON), que consiste em axônios das células gânglios da retina (RGC), transmite sinal visual da retina para o cérebro. Doenças on, como glaucoma, neuropatia óptica traumática ou isquêmica, muitas vezes causaram degeneração irreversível on/RGC e perda visual devastadora. Embora existam atualmente muitos avanços na regeneração ON e na proteção do RGC em modelos de roedores1,2,3,4,5,6, os tratamentos clínicos para a maioria das doenças ON permaneceram essencialmente os mesmos ao longo do último meio século com resultados insatisfatórios7,8 . Para preencher a lacuna entre a pesquisa básica e a prática clínica, estudos translacionais utilizando um grande modelo animal de doenças ON são muitas vezes necessários e benéficos devido à sua semelhança anatômica mais próxima com os humanos do que os modelos de roedores.
Os macaques de cabra e rhesus são duas grandes espécies animais usadas em nosso laboratório para modelar a doença ON humana. O tamanho do globo ocular de uma cabra, ON, e a estrutura adjacente (cavidade orbital e nasal, base do crânio, etc.) é semelhante ao de um humano baseado na tomografia do crânio 9. Como tal, o modelo de cabra oferece uma oportunidade de avaliar e refinar dispositivos terapêuticos ou procedimentos cirúrgicos antes do uso em humanos. O macaque rhesus, como primata não humano (NHP), tem um sistema visual único semelhante ao humano que não existe em outras espécies10,11. Além disso, as respostas fisiopatológicas a lesões e tratamentos em NHP são muito semelhantes às dos seres humanos12.
Testes in vivo para avaliar a estrutura e função on e RGC longitudinalmente são importantes em grandes estudos em animais. O eletroretinograma padrão (PERG) tem sido usado para avaliar a função RGC. O potencial evocado visual flash (FVEP) reflete a integridade da via retino-geniculo-cortical no sistema visual. Assim, o PERG combinado com o FVEP pode refletir a função ON9,13,14 . A tomografia de coerência óptica da retina (OCT) pode mostrar a estrutura da retina com alta resolução temporal e espacial, o que permite a medição da espessura do complexo gânglio da retina (GCC)9,15. Para exames eletrofisiológicos neste estudo, o monitoramento de sinais vitais (taxa de calor, taxa de quebra, pressão arterial) e nível de saturação de oxigênio (SpO2) antes dos testes são cruciais, pois esses parâmetros têm impactos potentes no fluxo sanguíneo ocular e, portanto, na função do sistema visual. No entanto, não monitoramos os sinais vitais ao realizar imagens de retina OCT por uma questão de simplicidade. De acordo com nosso estudo anterior9, a espessura do GCC medida pela imagem da retina OCT é bastante estável, com coeficiente inter-sessão de variação próximo a 3%. Estes testes in vivo em cabra e rhesus macaque foram descritos em detalhes em nosso estudo anterior9. Aqui apresentamos esses métodos para ajudar a aumentar a transparência experimental e a reprodutibilidade.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>47.6 x 26.8 cm monitors</td>
			<td>DELL Inc.</td>
			<td>E2216HV</td>
			<td>The visual stimuli of contrast-reversal black-white checkerboards were displayed on screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm tracheal tube</td>
			<td>Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>PVC 6.0</td>
			<td>ensure the airway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alligator clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atropine</td>
			<td>Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>reduce bronchial secretion and protect heart from vagal nerve activation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbomer Eye Gel</td>
			<td>Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>moisten the cornea and stabilize the recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet recording electrodes</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>2300 La Chaux-De-Fonds</td>
			<td>ERG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye speculum</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>ZYD020</td>
			<td>open palpebral fissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis OCT system</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td></td>
			<td>OCT system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td>isoflurane anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>male Saanen goats</td>
			<td>Caimu Livestock Company, country (Hangzhou, China)</td>
			<td></td>
			<td>The male Saanen goats, aged from 4 to 6 months with weight of 19&#8211;23 kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle electrode</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>U51-426-G-D</td>
			<td>use for FVEP ground electrode and PERG reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periphery venous catheter intravenously</td>
			<td>BD shanghai Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>383019</td>
			<td>intravenous access for atropine and propofol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propofol</td>
			<td>Xian Lipont Enterprise Union Management Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td>
			<td>SANTEN OY, Japan</td>
			<td></td>
			<td>5% tropicamide and 5% phenylephrine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>visual electrophysiology device</td>
			<td>Gotec Co., Ltd</td>
			<td>GT-2008V-III</td>
			<td>use for FVEP &#38; PERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Huamu Animal Health Products Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>xylazine anesthesia: intramuscular injection of xylazine 3mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in monkey</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals

O nervo óptico coleta sinais de axônios das células gânglios da retina e transmite sinal visual para o cérebro. Grandes modelos animais de lesão do nervo óptico são essenciais para traduzir novas estratégias terapêuticas desde modelos de roedores até aplicação clínica devido às suas semelhanças mais próximas com os humanos em tamanho e anatomia. Aqui descrevemos alguns métodos in vivo para avaliar a função e estrutura das células gânglios da retina (RGCs) e nervo óptico (ON) em animais de grande porte, incluindo potencial visual evocado (VEP), eletroretinograma padrão (PERG) e tomografia de coerência óptica (OUT). Tanto o primata de cabra quanto o não-humano foram empregados neste estudo. Ao apresentar esses métodos in vivo passo a passo, esperamos aumentar a reprodutibilidade experimental entre diferentes laboratórios e facilitar o uso de grandes modelos animais de neuropatias ópticas.

Figura 1A mostra resultados representativos da FVEP em cabra. Embora as formas de onda na mesma intensidade flash tenham relativa semelhança, ainda recomendamos examinar as formas de onda duas vezes. Ondas eletromagnéticas geradas por dispositivos eletrônicos interferirão com os sinais elétricos coletados, resultando em alto ruído de linha de base e baixa repetibilidade da forma de onda. Portanto, recomenda-se garantir que não haja dispositivos eletrônicos redundantes conectados ao a...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Aqui demostramos vários testes in vivo (flash visual evocado potencial, eletroretinograma padrão e tomografia de coerência óptica) em cabra e macaque rhesus para entender a estrutura e função do nervo óptico e seus neurônios.

In vivo Métodos para avaliar a função e estrutura do gânglio de gânglios da retina e da estrutura em animais grandes

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

Oi, pessoal. Este é Yikui Zhang do Hospital Wenzhou Eye. O nervo superior não tem Exxons das células gânglios de orexina, e depois transmite o sinal visual para o cérebro.Modelo maior de lesão nervosa superior são essenciais para traduzir o novo tratamento do modelo robô para a aplicação linfática. Aqui, descrevemos alguns métodos in vivo para avaliar a estrutura e a função das células gânglios orexinas no nervo superior em animais de grande porte. Ao apresentar este método passo a passo, esperamos aumentar as deficiências reprodutivas experimentais e facilitar o uso de modelos maiores de neurose óptica.Raspe a lâmina eletrônica. E, prepare-o com 70% de álcool três vezes, para limpar a pele e expor a veia subcutânea. Insira um rodízio venoso periférico por via intravenosa.Em seguida, gotejar atropina e propofol. Entubar a cabra com um tubo traqueal de seis milímetros e conectar-se a um respirador artificial. A anestesia foi mantida com 3,5% de isoflurane em oxigênio a uma taxa de fluxo gerenciada constante de dois litros.Coloque o sensor de temperatura sob a língua da cabra. Corte a saturação de oxigênio na extremidade proximal da orelha de cabra. Amarre o manguito da pressão arterial na base da coxa.Grampo ECG ceia nos membros em ordem. Então, podemos monitorar os indicadores vitais da cabra. Raspe o cabelo e desinfete a pele com betadina e 70% de álcool três vezes no centro do osso frontal.Abra o saco de esterilizador contendo tesouras e as unhas. Faça incisões de pele para expor o crânio com uma tesoura. Parafusos de aço para implantados no centro do osso frontal.Raspe o cabelo e desinfete a pele com betadina e 70% de álcool três vezes em um ponto médio de duas orelhas no osso occipital. Faça incisões na pele. Parafusos de aço para implantados no ponto médio de duas orelhas em osso occipital.O eletrodo da agulha moída é inserido subcutâneamente sob o parafuso frontal do crânio. O eletrodo ativo e o eletrodo de referência estão conectados a parafusos frontais e occipitais, respectivamente, com clipes de jacaré para reduzir a impotência do eletrodo. Remendar um olho.Aplique colírios de anestesia tópico na superfície ocular. Pupilas de ambos os lados são dilatadas por colírios de micose. Coloque a cabeça da cabra em um estimulador cheio de gás com luz ambulante.Coloque o cobertor preto sobre o estimulador e a cabeça de cabra por cinco minutos de adaptação. O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Verifique a impotência de contato do tecido eletrodo.Certifique-se de que a impotência seja inferior a 10 quilômetros para cada um evitar interferência eletromagnética de outros dispositivos elétricos na mesma sala. Verifique o ruído da linha de base sem estimulação da luz. Inicie a gravação do FVEP.Observe que a gravação de FVEP em cada intensidade de luz é realizada duas vezes. Note que úmido a córnea com lágrima artificial se ela parecer seca. Repita sobre os passos para o olho contralateral.Inicie a gravação do FVEP em diferentes intensidades de luz consecutivamente. Para cada gravação, 64 traços são mediados para produzir uma forma de onda. O primeiro pico positivo e ativo na forma de onda FVEP foi designado como P1 e N1. O eletrodo terrestre esterilizado está posicionado no lóbulo da orelha.Os eletrodos ativos e de referência esterilizados são inseridos subcutâneamente ao longo da linha média e do osso frontal e occipital, respectivamente. O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Remendar um olho.Regisso padrão de respostas VEP do outro olho em diferentes frequências espaciais consecutivamente. Conecte-se ao eletrodo de terra com um clipe de jacaré. Dois eletrodos de referência de agulha esterilizado são colocados sob a pele um centímetro atrás do canthus lateral em ambos os lados.O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Dois eletrodos de gravação ERG desinfetados são centrados em ambas as córneas após a aplicação tópica de lágrima artificial. Dois estimuladores são colocados na frente de cada olho com uma distância de visualização de 50 centímetros.Certifique-se de que a impotência está abaixo de 10 quilômetros. Rastreie o ruído da linha de base sem estimulação da luz. Aponte a luz ambulante.Inicie a gravação do ERG padrão de ambos os olhos simultaneamente em diferentes frequências espaciais consecutivamente. Finalmente, o retorno da tela para gravar o padrão ERG sem estimuladores visuais e um controle ativo. O filtro bandpass está programado para variar de um a 75 Hertz para três ERG padrão CPD.O filtro bandpass é de um a 50 Hertz para suavizar a forma sem afetar sua amplitude. Os primeiros picos positivos e ativos na forma de onda são designados como P1 e N1. O padrão de amplitude ERG medido de N1 a P1.To reduzir a impotência de eletrodos, uma referência de agulha esterilizada é colocada sob a pele frontal. E um eletrodo de referência de agulha esterilizado é colocado sob a pele um centímetro atrás do canthus lateral de um lado.Um eletrodo de gravação ERG desinfetado é colocado na córnea em uma aplicação tópica de lágrima artificial. Remendar um olho. Um display é colocado a uma distância de visualização de 50 centímetros.O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Em seguida, a cabra é colocada no descanso do queixo. Alinhe a cabra com a câmera para enviar sua cabeça de nervo óptico na imagem de oftalmoscopia a laser do scan confocal modificando sua posição da cabeça.Clique no botão iniciar para entrar na fase final de detecção. Espere a máquina terminar de carregar. Pressione o botão de partida amarelo para iniciar a imagem formal.Ajuste o joystick para iluminar uniformemente a imagem infravermelha para melhorar a qualidade da imagem. Deslize a câmera para a frente até que a imagem OCT de retina vertical seja mostrada na tela superior direita. Modifique o joystick para que dance uniformemente em uma imagem de OCT de retina horizontal.Pressione o botão no joystick para capturar sua imagem automaticamente. Segure este joystick para manter a qualidade da imagem na tela de imagem ao vivo até que a execução da imagem seja concluída. Em seguida, pressione adquirir.Selecione uma foto inicial de alta qualidade. Clique com o botão direito do mouse e selecione definir referência. Pressione o botão de acompanhamento para permitir que o programa corresponda automaticamente à varredura atual com a varredura da linha de base.Uma vez combinado, pressionou o botão no joystick para ativar o rastreamento automático em tempo real. Clique no botão de medição para entrar na plataforma de medição. Escolha a borracha de uma ferramenta e limpe a linha RFL, que é automaticamente rotulada por máquina.Escolha a ferramenta de desenho de linha para delinear manualmente o limite entre IPL e INL. Entre as linhas vermelha e azul está o complexo GCC. A imagem alterada de retina no macaque rhesus é realizada utilizando-se o mesmo equipamento e procedimento que os utilizados em cabra.Figura A mostra representante FVEP em cabra. A figura B mostra forma de onda ERG padrão representativa em cabra. Figura C mostra padrão representativo FVEP em rhesus macaque.E, figura D mostra forma de onda ERG padrão representativa em rhesus macaque. A Figura dois mostra imagens representativas de OCT de retina ao redor da cabeça do nervo óptico e a espessura do complexo GCC em diferentes regiões periféricas em cabra e no macaque rhesus. O grande modelo animal desempenha um papel importante na pesquisa translacional.Em muitos casos, efeitos terapêuticos promissores em pequenos modelos animais não foram traduzidos para pacientes humanos. Neste estudo, apresentamos protocolo de vídeo da FVEP, PERG e OCT em cabra e o macaque rhesus. Este método in vivo pode ser aplicado em modelo maior de várias neurose óptica, como neuropatia isquêmica de glaucoma ou traumática óptica e neurite óptica.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Métodos para manipulações experimentais após a transecção do nervo óptico no sistema nervoso central de mamíferos

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Neurociência

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfecção de células de camundongo por Ganglionares da Retina In vivo Eletroporação

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Nervo Óptico um modelo murino de lesão por esmagamento Estudo de Sobrevivência de células da retina Gânglio

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Neuroimagem Funcional Usando rompimento da barreira hemato-encefálica ultra-sônico e Manganês-RM

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Marcação retrógrada de células ganglionares da retina em Zebrafish Adulto com corantes fluorescentes

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

Imagem in vivo da fibra óptica Nerve Integrity por ressonância magnética com contraste em Ratos

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Imagiologia Fibras Serotoninérgicos na medula espinhal mouse usando o CLARIDADE / Técnica CUBIC

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

Single-cell RNA-Seq de subgrupos definidos de células de gânglio retiniano

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Tomografia de coerência óptica: Imagens Mouse ganglionares da retina células In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Transecção parcial nervo óptico em ratos: um modelo estabelecido com uma nova abordagem operativa para avaliar secundária degeneração das células ganglionares da retina

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...