Name: in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals
Uploaded: 2022-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

Denna studie finansierades av följande bidrag: National Key R&D Program of China (2021YFA1101200); Medicinskt forskningsprojekt i Wenzhou (Y20170188), Kinas nationella nyckelforskningsprogram (2016YFC1101200); Medborgarevetenskapfundament av Kina (81770926;81800842); Viktigt R&D-program i provinsen Zhejiang (2018C03G2090634); och Key R&D Program för Wenzhou Eye Hospital (YNZD1201902). Sponsorn eller finansieringsorganisationen hade ingen roll i utformningen eller genomförandet av denna forskning.

Experiment utfördes strikt i enlighet med ARRIVE-riktlinjerna och National Institutes of Health guide för vård och användning av laboratoriedjur, och följer de protokoll som godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee i Wenzhou Medical University (WMU) och Joinn Laboratory (Suzhou). Hanen Saanen getter, i åldern från 4 till 6 månader med en vikt av 19-23 kg, var inhyst i WMU djur anläggning. De manliga Rhesus makakerna, i åldern 5 till 6 år med en vikt på 5-7 kg, var inrymda i Joinn djuranläggni...

<ol>
	<li>Benowitz, L., Yin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rewiring+the+injured+CNS:+lessons+from+the+optic+nerve.">Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).</li><li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN/mTOR+pathway.">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li><li>Duan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtype-specific+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+following+axotomy:+effects+of+osteopontin+and+mTOR+signaling.">Subtype-specific regeneration of retinal ganglion cells following axotomy: effects of osteopontin and mTOR signaling.</a> Neuron. 85 (6), 1244-1256 (2015).</li><li>Bei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+visual+function+by+enhancing+conduction+in+regenerated+axons.">Restoration of visual function by enhancing conduction in regenerated axons.</a> Cell. 164 (1-2), 219-232 (2016).</li><li>He, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+control+of+axon+regeneration.">Intrinsic control of axon regeneration.</a> Neuron. 90 (3), 437-451 (2016).</li><li>Yang, S. -. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+promote+long-distance+optic+nerve+regeneration.">Strategies to promote long-distance optic nerve regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 119 (2020).</li><li>Foroozan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+treatments+for+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">New treatments for nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Neurologic Clinics. 35 (1), 1-15 (2017).</li><li>Singman, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+traumatic+optic+neuropathy.">Indirect traumatic optic neuropathy.</a> Military Medical Research. 3, 2 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+retinal+ganglion+cells+and+optic+nerve's+integrity+in+large+animals+by+multi-modality+analysis.">In vivo evaluation of retinal ganglion cells and optic nerve's integrity in large animals by multi-modality analysis.</a> Experimental Eye Research. 197, 108117 (2020).</li><li>Tolbert, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Rhesus+macaque+to+human:+structural+evolutionary+pathways+for+immunoglobulin+G+subclasses.">From Rhesus macaque to human: structural evolutionary pathways for immunoglobulin G subclasses.</a> mAbs. 11 (4), 709-724 (2019).</li><li>Preuss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Specializations of the human visual system: the monkey model meets human reality. , 231-259 (2004).</li><li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates.">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+assessment+of+retinal+ganglion+cell+function.">Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.</a> Experimental Eye Research. 141, 164-170 (2015).</li><li>Smith, C. A., Vianna, J. R., Chauhan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+retinal+ganglion+cell+damage.">Assessing retinal ganglion cell damage.</a> Eye. 31 (2), 209-217 (2017).</li><li>Schuman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+histologic+measurements+of+nerve+fiber+layer+thickness+in+normal+and+glaucomatous+monkey+eyes.">Optical coherence tomography and histologic measurements of nerve fiber layer thickness in normal and glaucomatous monkey eyes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 48 (8), 3645-3654 (2007).</li><li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats:+electrodes,+stimulus+source+and+peak+analysis.">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Documenta Ophthalmologica. 123 (2), 109-119 (2011).</li><li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ISCEV+standard+for+clinical+visual+evoked+potentials:+(2016+update).">ISCEV standard for clinical visual evoked potentials: (2016 update).</a> Documenta Ophthalmologica. 133 (1), 1-9 (2016).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse.">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> eLife. 8, 45881 (2019).</li><li>Seidman, S. H., Telford, L., Paige, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical,+horizontal,+and+torsional+eye+movement+responses+to+head+roll+in+the+squirrel+monkey.">Vertical, horizontal, and torsional eye movement responses to head roll in the squirrel monkey.</a> Experimental Brain Research. 104 (2), 218-226 (1995).</li><li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+pattern+electroretinogram.">The mouse pattern electroretinogram.</a> Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 145-153 (2007).</li></ol>

I denna studie presenterar vi ett protokoll av VEP, PERG och OCT i get och rhesus makaker. Dessa in vivo metoder kan tillämpas i stora djur modeller av olika optik neuropathies, såsom glaukom, skandinaviska eller traumatiska optik neurotoxiskt och optisk neurit9.
PVEP är stabilare och känsligare än FVEP17; Det kan dock inte framkallas i get9. Som sådan utförs FVEP i get och PVEP utförs i rhesus makaker i v...

Den optiska nerven (ON), som består av axoner från näthinnans ganglionceller (RGC), överför visuell signal från näthinnan till hjärnan. ON sjukdomar, såsom glaukom, traumatiska eller skandinaviska optik neurotoxiskt, ofta orsakade irreversibla ON/RGC degeneration och förödande visuella förlust. Även om det för närvarande finns många genombrott inom ON-regenerering och RGC-skydd i gnagaremodeller1,2,3,4,5,6, förblev kliniska behandlingar för de flesta ON-sjukdomar i huvudsak desamma under det senaste halvseklet med otillfredsställande resultat7,8 . För att fylla klyftan mellan grundforskning och klinisk praxis är translationella studier med stor djurmodell av ON-sjukdomar ofta nödvändiga och fördelaktiga på grund av deras närmare anatomiska likhet med människor än gnagaremodeller.
Get- och rhesusmakaker är två stora djurarter som används i vårt labb för att modellera människans ON-sjukdom. Storleken på en getöga, ON och den intilliggande strukturen (orbital och nasal hålighet, skallebas, etc.) liknar en människas som baseras på skalle CT scan9. Som sådan ger getmodellen en möjlighet att utvärdera och förfina terapeutiska enheter eller kirurgiska ingrepp före användning på människor. Rhesus makaker, som icke-mänsklig primat (NHP), har människoliknande unikt visuellt system som inte finns i andra arter10,11. Dessutom är patofysiologiska svar på skador och behandlingar i NHP mycket lik det hos människor12.
In vivo-tester för att bedöma ON och RGC:s struktur och funktion längsgående är viktiga i stora djurstudier. Mönsterelektroretinogram (PERG) har använts för att utvärdera funktionen RGC. Flash visual evoked potential (FVEP) återspeglar integriteten hos retino-geniculo-cortical utbildningsavsnittet i det visuella systemet. Således kan PERG i kombination med FVEP återspegla ON-funktionen9,13,14 . Retinal optic coherence tomography (OCT) imaging kan visa retinal struktur med hög tidsmässiga och rumslig upplösning, vilket möjliggör mätning av tjockleken på retinal ganglion komplex (GCC)9,15. För elektrofysiologiska undersökningar i denna studie är övervakning av vitala tecken (värmehastighet, brottsfrekvens, blodtryck) och nivå av syremättnad (SpO2) före testning avgörande eftersom dessa parametrar har potenta effekter på okulärt blodflöde och därmed det visuella systemets funktion. Vi övervakade dock inte de vitala tecknen när vi utförde OCT retinal imaging för enkelhetens skull. Enligt vår tidigare studie9 är GCC-tjockleken mätt med OCT retinal imaging ganska stabil, med intersessionskoefficient för variation nära 3%. Dessa in vivo-tester i get- och rhesusmakaque har beskrivits i detalj i vår tidigare studie9. Här presenterar vi dessa metoder för att öka experimentell transparens och reproducerbarhet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>47.6 x 26.8 cm monitors</td>
			<td>DELL Inc.</td>
			<td>E2216HV</td>
			<td>The visual stimuli of contrast-reversal black-white checkerboards were displayed on screens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm tracheal tube</td>
			<td>Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>PVC 6.0</td>
			<td>ensure the airway</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alligator clip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atropine</td>
			<td>Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>reduce bronchial secretion and protect heart from vagal nerve activation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbomer Eye Gel</td>
			<td>Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>moisten the cornea and stabilize the recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet recording electrodes</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>2300 La Chaux-De-Fonds</td>
			<td>ERG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye speculum</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>ZYD020</td>
			<td>open palpebral fissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis OCT system</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td></td>
			<td>OCT system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22</td>
			<td>isoflurane anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>male Saanen goats</td>
			<td>Caimu Livestock Company, country (Hangzhou, China)</td>
			<td></td>
			<td>The male Saanen goats, aged from 4 to 6 months with weight of 19&#8211;23 kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle electrode</td>
			<td>Roland Consult Stasche&#38;Finger GmbH</td>
			<td>U51-426-G-D</td>
			<td>use for FVEP ground electrode and PERG reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>periphery venous catheter intravenously</td>
			<td>BD shanghai Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>383019</td>
			<td>intravenous access for atropine and propofol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propofol</td>
			<td>Xian Lipont Enterprise Union Management Co.,Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in goat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide Phenylephrine Eye Drops</td>
			<td>SANTEN OY, Japan</td>
			<td></td>
			<td>5% tropicamide and 5% phenylephrine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>visual electrophysiology device</td>
			<td>Gotec Co., Ltd</td>
			<td>GT-2008V-III</td>
			<td>use for FVEP &#38; PERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Huamu Animal Health Products Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>xylazine anesthesia: intramuscular injection of xylazine 3mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>zoletil50</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>induce Isoflurane anesthesia in monkey</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo methods to assess retinal ganglion cell and optic nerve function and structure in large animals

Synnerven samlar in axoner signaler från näthinnan ganglion celler och överför visuell signal till hjärnan. Stora djurmodeller av optisk nervskada är viktiga för att översätta nya terapeutiska strategier från gnagare modeller till klinisk tillämpning på grund av deras närmare likheter med människor i storlek och anatomi. Här beskriver vi några in vivo metoder för att utvärdera funktionen och strukturen hos retinal ganglion celler (RGCs) och optik nerv (ON) i stora djur, inklusive visuella framkallade potential (VEP), mönster elektroretinogram (PERG) och optisk koherens tomografi (OCT). Både get och icke-mänskliga primater användes i denna studie. Genom att presentera dessa in vivo-metoder steg för steg hoppas vi kunna öka experimentell reproducerbarhet bland olika laboratorier och underlätta användningen av stora djurmodeller av optiska neuropatier.

Figur 1A visar representativa resultat av FVEP hos getter. Även om vågformerna i samma blixtintensitet har relativ likhet, rekommenderar vi fortfarande att undersöka vågformerna två gånger. Elektromagnetiska vågor som genereras av elektroniska enheter kommer att störa de insamlade elektriska signalerna, vilket resulterar i högt baslinjebrus och dålig repeterbarhet hos vågformen. Därför rekommenderas att säkerställa att det inte finns några redundanta elektroniska enheter ansl...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals at JoVE.com

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Här demostrate vi flera in vivo tester (flash visuella framkallad potential, mönster elektroretinogram och optisk koherens tomografi) i get och rhesus makak för att förstå strukturen och funktionen av optik nerv och dess nervceller.

In Vivo Metoder för att bedöma Retinal Ganglion Cell och Optisk nerv funktion och struktur hos stora djur

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

Hej, allihopa. Det här är Yikui Zhang från Wenzhou Eye Hospital. Den övre nerven saknar Exxoner från orexin ganglion cellerna, och sedan överföra den visuella signalen till hjärnan.Större modell av övre nervskada är avgörande för att översätta den nya behandlingen från robotmodell till lymfapplikation. Här beskriver vi några in vivo metoder för att utvärdera strukturen och funktionen hos orexin ganglion celler i övre nerven i stora djur. Genom att presentera denna metod steg för steg hoppas vi kunna öka experimentella reproduktiva funktionshinder och underlätta användningen av större modeller av optisk neuros.Raka den med elektronisk rakhyvel. Och förbered det med 70% alkohol tre gånger, för att rengöra huden och exponera den subkutana venen. Sätt in en perifer venös castor intravenöst.Droppa sedan atropin och propofol. Intubera geten med ett sex millimeters trakealrör och anslut till en konstgjord andningsskydd. Anestesi bibehölls med 3,5%isofluran i syre med en konstant två liter hanterad flödeshastighet.Placera temperatursensorn under getens tunga. Fäst syremättnadsklyftan i getörats proximala ände. Knyt blodtrycksmanschetten vid lårets botten.Kläm ECG klyver på benen i ordning. Sedan kan vi övervaka getens vitala indikatorer. Raka håret och desinficera huden med betadin och 70% alkohol tre gånger i mitten av frontbenet.Öppna sterilisatorpåsen som innehåller sax och naglar. Gör hudsnitt för att exponera skallen med en sax. Stålskruvar för implanterade i mitten av frontbenet.Raka håret och desinficera huden med betadin och 70% alkohol tre gånger vid en mittpunkt med två öron i occipital ben. Gör hudsnitt. Stålskruvar för implanterade i mitten av två öron i occipitalt ben.Den malda nålelektroden sätts in subkutant under den främre skallskruven. Den aktiva elektroden och referenselektroden är anslutna till front- respektive occipitala skruvar med alligatorklämmor för att minska elektrod impotensen. Lappa ett öga.Applicera aktuella anestesi ögondroppar på okulär yta. Elever på båda sidor vidgas av mydriasis ögondroppar. Placera gethuvudet i en gasfylld stimulator riktad ambulantlampa.Placera den svarta filten över stimulatorn och gethuvudet i fem minuters anpassning. Ögonlocksspekulum används för att helt exponera sin pupill. Kontrollera elektrodvävnadens kontakt impotens.Se till att impotensen är under 10 kilometer för var och en för att undvika elektromagnetisk interferens från andra elektriska enheter i samma rum. Kontrollera baslinjeljudet utan ljusstimulering. Starta FVEP-inspelning.Observera att FVEP-inspelning vid varje ljusintensitet utförs två gånger. Observera att fukta hornhinnan med konstgjord reva om den verkar torr. Upprepa om steg för det kontralaterala ögat.Starta FVEP-inspelning med olika ljusintensiteter i följd. För varje inspelning beräknas 64 spår ge ett vågformulär. Den första positiva och aktiva toppen i FVEP-vågformen betecknades som P1 och N1. Den steriliserade jordelektroden är placerad i örsnibben.De steriliserade aktiva elektroderna och referenselektroderna sätts in subkutant längs mittlinjen respektive front- respektive occipitalbenet. Ögonlocksspekulum används för att helt exponera sin pupill. Lappa ett öga.Registrera mönster VEP svar av det andra ögat på olika rumsliga frekvenser i följd. Anslut till jordelektroden med ett alligatorklämma. Två steriliserade nålreferenselektroder placeras under huden en centimeter bakom den laterala canthus på båda sidor.Ögonlocksspekulum används för att helt exponera sin pupill. Två desinficerade ERG-inspelningselektroder är centrerade båda hornhinnan efter aktuell applicering av konstgjord tår. Två stimulatorer placeras framför varje öga med ett visningsavstånd på 50 centimeter.Se till att impotensen är under 10 kilometer. Spåra baslinjeljudet utan ljusstimulering. Sikta det ambulanta ljuset.Starta mönster ERG inspelning från båda ögonen samtidigt vid olika rumsliga frekvenser i följd. Slutligen, retur av skärmen för att spela in mönster ERG utan visuella stimulatorer och en aktiv kontroll. Bandpassfiltret är inställt på att variera från en till 75 Hertz för tre CPD-mönster ERG.Bandpassfiltret är från en till 50 Hertz för att jämna ut formen utan att påverka dess amplitud. De första positiva och aktiva topparna i vågformen betecknas som P1 och N1. Mönstret ERG amplitud mätt från N1 till P1.To minska elektrod impotens, placeras en steriliserad nålreferens under fronthuden. Och en steriliserad nålreferenselektrod placeras under huden en centimeter bakom den laterala canthus på ena sidan.En desinficerad ERG-registreringselektrod placeras på hornhinnan på en topikal applicering av konstgjord tår. Lappa ett öga. En display placeras på ett visningsavstånd på 50 centimeter.Ögonlocksspekulum används för att helt exponera sin pupill. Sedan placeras geten på hakstödet. Justera geten med kameran för att skicka hans optiska nervhuvud i den konfokala skanningslaser oftalmoskopibilden genom att ändra dess huvudposition.Klicka på startknappen för att gå in i identifieringsslutfasen. Vänta tills maskinen har lastmats klart. Tryck på den gula startknappen för att starta den formella avbildningen.Justera styrspaken så att den infraröda bilden lyser jämnt för att förbättra bildkvaliteten. Skjut kameran framåt tills den upprättstående retinala OCT-bilden visas på den övre högra skärmen. Ändra joysticken så att den dansar jämnt i en horisontell retinal OCT-bild.Tryck på knappen på joysticken för att fånga bilden automatiskt. Håll den här styrspaken för att upprätthålla bildkvaliteten på livebildskärmen tills bildkörningen är klar. Tryck sedan på acquire.Välj ett första foto av hög kvalitet. Högerklicka och välj ange referens. Tryck på uppföljningsknappen så att programmet automatiskt kan matcha den aktuella genomsökningen med baslinjegenomsökningen.När du har matchat tryckte du på knappen på joysticken för att aktivera automatisk realtidsspårning. Klicka på mätknappen för att komma in på mätplattformen. Välj radergummit ett verktyg och torka av RFL-linjen, som automatiskt märks av maskinen.Välj linjeritningsverktyget för att manuellt beskriva gränsen mellan IPL och INL. Mellan de röda och blå linjerna ligger GCC-komplexet. Näthinnan förändrad avbildning i rhesus makak utförs med hjälp av samma utrustning och förfarande som de som används i get.Figur A visar representativ FVEP i get. Figur B visar representativt mönster ERG våg form i get. Bild C visar representativt mönster FVEP i rhesus makaker.Och figur D visar representativt mönster ERG våg form i rhesus makaker. Figur två visar representativa retinal OCT bilder runt optiska nerv huvudet och tjockleken på GCC komplex i olika perifera regioner i get och rhesus makak. Stor djurmodell spelar en viktig roll i translationell forskning.I många fall, lovande terapeutiska effekter i smådjur modeller misslyckades att översättas till mänskliga patienter. I denna studie presenterade vi video protokoll av FVEP, PERG och OCT i get och rhesus makaker. Denna in vivo-metod kan tillämpas i större modell av olika optisk neuros, såsom glaukom ischemisk eller traumatisk optik neurotoxiskt och optisk neurit.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Metoder för experimentell manipulationer efter Optic Nerve transection i Mammalian CNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfektion av Mouse retinal ganglion celler genom att In vivo Elektroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

En Optic Nerve krosskada Murine modell för att studera näthinnan Survival Ganglion Cell

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionell hjärnavbildning med ultraljud Blod-hjärnbarriären störningar och mangan-förstärkt MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Retrograd Märkning av retinal ganglion celler i vuxna zebrafisk med fluorescerande färger

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

In vivo avbildning av Optic Nerve Fiber Integrity genom Contrast-Enhanced MRI hos möss

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Imaging Serotonerga Fibrer i ryggmärgen hos möss med hjälp av CLARITY / CUBIC teknik

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

En-cell-RNA-Seq av definierade deluppsättningar av retinala Ganglion-celler

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Optisk koherenstomografi: Imaging mus Retinal Ganglion celler In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Partiell synnerven Transection råttor: en förebild som upprättats med en ny operativ metod att bedöma sekundära Degeneration av retinala ganglionceller

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...