Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

أجريت هذه الدراسة من خلال تعاون تموله المعاهد الوطنية للصحة بين مركز أبحاث إصابات الدماغ بجامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس (BIRC).

تتوافق جميع طرق المناولة والإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول مع إرشادات رعاية واستخدام الحيوانات التابعة للمعاهد الوطنية للصحة (NIH) وقد تمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) بجامعة Pepperdine ولجنة أبحاث الحيوان التابعة لجامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس (ARC)....

الخطوات الرئيسية والاعتبارات الهامة تتطلب بعض الخطوات الحاسمة في البروتوكول المقدم التركيز ، خاصة داخل مجموعة الخلايا المهبلية. أثناء استخراج السائل المهبلي ، يعد ضمان الزاوية والعمق المناسبين لإدخال المحقنة أمرا أساسيا لتحقيق نتائج مرضية ومنع التهيج أو الإصابة أو تحفيز عنق...

مساهمات جديدة تم تحديد دورة استروس القوارض كمؤشر أساسي للعافية. ومع ذلك ، فإن التحيزات اللاواعية للمحققين والتفسيرات غير الدقيقة فيما يتعلق بالجسد الأنثوي تعيق المجتمع العلمي. إن أصل كلمة "estrous" ينطوي على شعور بالدونية والسلبية. استخدم يوريبيدس المصطلح لوصف "الجنون" أو الجنون ، وهوميروس لوصف الذعر ، وأفلاطون لوصف الدافع غير العقلاني. تسلط هذه الدراسة الضوء على كيفية تأثير هذه المنظورات البدائية على المجتمع العلمي الحالي وتعالج هذه المخاوف من خلال نموذج فسيفساء جديد - وهو مزيج محدث من الأساليب التي تمت دراستها سابقا ، وتم توسيعها في نطاق نهج أكثر شمولا.
ودراسة هذه التقنية واستخدامها ضروريان، أولا، نظرا لعدم وجود تقنية رصد موحدة وشاملة، ويمكن أن تكون ممارسات تفسير البيانات غير واضحة. ثانيا ، على الرغم من أن خصائص دورة estrous تعتمد على الفئران الفردية التي تتم دراستها ، إلا أنها غالبا ما تكون عالمية. ثالثا ، في حين أن الدورات الهرمونية هي عمليات روتينية ومفيدة ، إلا أنها محاطة بوصمة عار خطيرة تم استكشافها في قسم "الترجمة إلى البشر". تهدف هذه الدراسة إلى معالجة هذه القضايا الثلاث بثلاث طرق - (أ) من خلال وصف تقنية مراقبة دورة استروس متعمقة وتوضيح كيفية تفسير النتائج ، (ب) من خلال تحديد الطرق التي تحافظ على سلامة وفردية كل دورة ، و (ج) من خلال لفت الانتباه إلى المفاهيم الخاطئة التي تديم الممارسات غير المثبتة.
هذه الدراسة فريدة من نوعها أيضا في تركيزها على الفئران المراهقة ، وهي فترة تميزت بتغيرات تنموية حاسمة تلقي الضوء على مختلف المظاهر السلوكية والتشريحية والفسيولوجية في مرحلة البلوغ1. إن بناء تصميم تجريبي موحد لمراقبة الدورات الهرمونية في مجموعة سكانية لم يتم بحثها بشكل كاف مع تفكيك التحيزات الشائعة سيسمح بتطوير ارتباطات هرمونية موثوقة وصالحة2،3،4 وتحديد اضطرابات الدورة المعتمدة على الحالة5،6،7،8،9،10 . في نهاية المطاف ، تعمل هذه المستجدات على توسيع معايير التشخيص والعلاجات والتدخلات لمختلف المخاوف الصحية.
التعاريف والاستخدامات الأساسية دورة estrous هي مجموعة من العمليات الفسيولوجية الديناميكية التي تحدث استجابة لهرمونات الستيرويد الجنسية الأنثوية الثلاثة المتذبذبة: استراديول ، هرمون leuteinizing (LH) ، والبروجسترون (الشكل 1A ، B). التفاعلات بين الغدد الصماء والجهاز العصبي المركزي تنظم الدورة ، والتي غالبا ما تستمر لمدة 4-5 أيام وتتكرر من بداية النضج الجنسي حتى الشيخوخة الإنجابية و / أو التوقف. وهي مقسمة إلى فئات منفصلة بناء على مستويات الهرمونات - الأكثر شيوعا في 4 مراحل من diestrus (DIE) ، proestrus (PRO) ، شبق (EST) ، و metestrus (MET) ، والتي تتطور بطريقة دائرية. يمكن أن يتراوح عدد الأقسام من 3 مراحل11 إلى 13 مرحلة 12 ، اعتمادا على طبيعة الدراسة13. وغالبا ما يستبعد العدد الأدنى من الشعب برنامج العمل المتعدد الأطراف كمرحلة ويصنفه على أنه فترة انتقالية قصيرة الأجل. يتضمن العدد الأكبر عادة أقساما فرعية تسمح بإجراء فحص دقيق لظواهر مثل تطور الورم أو الحمل الكاذب التلقائي ، والحالة الفسيولوجية للحمل دون زرع جنيني12،14،15.
في هذه الدراسة ، تم تحديد المراحل من خلال مكونات القناة المهبلية ، وسميت 3 محددات تصنيف - نوع (أنواع) الخلايا الموجودة ، وترتيب الخلايا ، وكمية الخلية (الشكل 2A-D). في حين لم يتم رصد حالة السائل المهبلي في هذه الدراسة ، فمن المستحسن إدراجه كمكون تصنيف رابع. يمكن العثور على مزيد من المعلومات حول فحص السائل المهبلي في القائمة المرجعية16. يمكن فحص مكونات التصنيف عن طريق استخراج الخلايا عن طريق غسل المهبل ، وهي التقنية الأساسية الموصى بها في مراقبة دورة استروس في العصر الحديث. في حين أن العمليات الفسيولوجية المتعمقة داخل كل مرحلة هي خارج نطاق هذه الدراسة ، يمكن العثور على مزيد من المعلومات في الأدبيات17.
إن استخدام تقنية مراقبة دورة estrous هذه وتطويرها المستمر متجذر في الروابط بين هرمونات الستيرويد الجنسية ووظيفة الأنظمة الجسدية مثل نظام القلب والأوعية الدموية18 ونظام الغدد الصماء8 والجهاز العصبي المركزي19،20،21. في الوقت نفسه ، قد لا يكون من الضروري دائما مراقبة دورة estrous عندما تشارك القوارض الإناث22،23،24،25. بدلا من ذلك ، من المهم أولا النظر فيما إذا كان قد تم الإبلاغ عن الاختلافات بين الجنسين في مجال الدراسة المحدد ، والذي يمكن استكشافه بشكل أكبر في المراجعات المنشورة22,23. على الرغم من أن مراقبة دورة الاستروس أمر حيوي في مجموعة واسعة من التحقيقات البحثية ، إلا أنه لا ينبغي النظر إليها على أنها عقبة أمام إشراك القوارض الإناث في التجارب. في حين أن هذه التقنية قد تبدو معقدة وتستغرق وقتا طويلا ، إلا أن الإجراء نفسه قد يستغرق أقل من 15 دقيقة لإكماله ، اعتمادا على المحقق ، وهو فعال من حيث التكلفة. بشكل عام ، فإن إدراج القوارض الإناث في الدراسات العلمية مفيد لفهم أنظمة الجسم ، والظروف والأمراض المختلفة ، والعافية العامة ، حيث استندت هذه التطورات بشكل أساسي إلى قالب جسم الذكور.
المعلمات العالمية والتغيرات الطبيعية في القوارض ومن الضروري تحديد نطاقات للجوانب التي ينظر إليها على أنها "نموذجية" لتحديد أنماط الدورات القياسية، ووضع بارامترات لأغراض المقارنة والتحليل، والكشف عن التشوهات والقيم المتطرفة. في الوقت نفسه ، من المهم أيضا إدراك أن دورة كل فأر فريدة من نوعها ، ومن المتوقع حدوث انحرافات بناء على سلالة الحيوان والعمليات الفسيولوجية والظروف البيئية. في الواقع ، واحدة من أكثر الجوانب "الطبيعية" لدورة estrous هي التباين. وينظر إلى هذا في طول الدورة الإجمالية, مع مجموعة من 3-38 يوما26,27; عمر النضج الجنسي الذي يمكن أن يتراوح من 32-34 يوما إلى عدة أسابيع28،29،30 ؛ ما يعتبر غير دوري 11 ، وتصنيف الأنماط المحددة11,13. بشكل عام ، لا يوجد قالب عالمي لدورة estrous ، وترجمة ذلك إلى كل من المجتمع العلمي وعامة الناس هو جزء مهم من العملية التجريبية.
النقاط الزمنية التجريبية وعمر النمو إن الاعتراف بمبدأ التباين هذا يساعد في بناء تصميم تجريبي موثوق وصالح. على سبيل المثال ، تعتمد بداية مراقبة ركوب الدراجات الاستروس على التطور التشريحي والفسيولوجي للفئران ، والذي يختلف بناء على العوامل البيئية والفسيولوجية. لا يمكن أن تبدأ المراقبة حتى تطور الفتحة المهبلية (VO) ، وهي الفتحة المهبلية الخارجية المحاطة بالفرج التي تؤدي إلى الجزء الداخلي من القناة المهبلية (الشكل 3A-D). في حين أن VO غالبا ما يتطور بشكل كامل بين سن 32 و 34 يوما ، إلا أنه يظل فرديا لكل موضوع ، ولا يزال الكثير عن العملية غير معروف. تم استخدام هذه الفتحة لتحديد بداية النضج الجنسي ، والتي تم ربطها بزيادة استراديول31 ، ونضج محور ما تحت المهاد والغدة النخامية والمبيض32 ، والإباضة الأولى في الفئران17،33،34،35. ومع ذلك ، فقد وجدت المنشورات الحديثة أنه ليس سوى علامة غير مباشرة على التطور التناسلي ، حيث يمكن أن يصبح منفصلا عن الأحداث الهرمونية والتنموية في البيئات غير المواتية31 وقد يمثل تغيرات في مستويات الاستراديول بدلا من النضج الجنسي33. لذلك ، يوصى بعدم الاعتماد فقط على VO لتحديد عمر النمو وكمؤهل لمراقبة دورة estrous36 ولكن أيضا الاستفادة من ظهور المرحلة الأولى من EST وكورن الخلايا الظهارية30 للاحتفال ببداية النضج الجنسي.
يرتبط وزن الجسم بشكل ملحوظ بعمر النمو خلال فترة المراهقة في القوارض30,37 وبالتالي يمكن أن يساعد أيضا في تحديد عمر النمو في هذه الفترة. تشمل الآليات المقترحة المتعلقة بهذه الظاهرة تحفيز الهرمونات اللازمة للنمو التناسلي ، مثل هرمون النمو ، وتثبيط محور الغدة الكظرية تحت المهاد والغدة النخامية (HPA) بواسطة منظم الشهية ، اللبتين30. ومع ذلك ، لا ينصح باستخدام هذا المقياس كمؤشر وحيد لعمر النمو بسبب التباين الكبير الذي شوهد بين الفئران عبر الأنواع ومقدمي البائعين38. التباين الذي شوهد في تطوير VO ووزن الجسم يجسد أهمية المفهوم في العملية التجريبية الشاملة.
الترجمة إلى البشر: السياقات الثقافية والعلمية العلاقة الانتقالية للدراسات الإنجابية بين الحيوان والإنسان ثنائية الاتجاه. تؤثر نتائج الدراسات القائمة على الحيوانات على كيفية تقييم العمليات البشرية والتعامل معها وتحليلها39. يؤثر تصور الجهاز التناسلي البشري والعمليات المرتبطة به على كيفية دراسة الحيوانات. في الواقع ، تنبع واحدة من أعلى المؤشرات لمزيد من البحث في هذا المجال من المعتقدات الاجتماعية والثقافية المتحيزة المتعلقة بالدورات الهرمونية التي تؤثر على العملية العلمية. العديد من هذه الاتفاقيات مستمدة من نفور ثقافي عام من مناقشة الحيض ، مما أدى إلى فجوة في البيانات في المعرفة المثبتة جيدا40,41. هذا له مجموعة من العواقب التي تمتد من طفيفة إلى قاتلة - من ارتفاع الرفوف وحجم الهاتف الذكي إلى تركيب دروع جسم الشرطة وتشخيص السرطان الفائت42.
إن وصف الحيض بأنه غير صحي ومدمر وسام - ينظر إليه في النصوص الموقرة ووسائل الإعلام والقواميس والتعاليم الطبية - محفوظ من خلال المنشورات العلمية. يحدث هذا من خلال أوصاف غير دقيقة ومتحيزة للدورات الهرمونية ، وعزل الجهاز التناسلي عن نظرائه من الغدد الصماء العصبية والتأثيرات البيئية ، والمنظور الاختزالي لإكمال الدورة على أنها "فشل في الحمل"43,44. وهذا يؤدي إلى خلق ممارسات تجريبية غير سليمة، مثل إغفال المتغيرات الخارجية التي تؤثر على الدورات الهرمونية، وتحديد نقاط البداية والنهاية استنادا فقط إلى التطورات التشريحية، وقياس تقدم الدورة بطريقة خطية بدلا من دائرية. على الرغم من العلاقة المباشرة بين العوامل الاجتماعية والثقافية والعواقب البيولوجية ، إلا أنه لا يتم النظر فيها غالبا في الأدبيات العلمية. من خلال فحص المنشورات الأكثر شمولية43،44،45 ، يمكن للباحثين تفكيك هذه الوصمات وإنشاء تصميمات تجريبية أكثر موثوقية وصلاحية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

تضع المنهجية الحالية نهجا قابلا للتكرار وموحدا وفعالا من حيث التكلفة لرصد الدورة الاستروسية لإناث الفئران المراهقة Sprague Dawley (SD). توضح هذه الدراسة مدى تعقيد الدورات الهرمونية والطيف الواسع من الفهم المطلوب لبناء تقنية مراقبة موثوقة وصالحة. ومن خلال دراسة متعمقة للتصميم التجريبي الرئيسي والعناصر الإجرائية، يوفر هذا الوصف للدورة ومبادئها الأساسية إطارا لمزيد من الفهم وتفكيك المفاهيم الخاطئة لتكرارها في المستقبل.
جنبا إلى جنب مع مخطط لعملية جمع العينات التي تستخدم غسل المهبل ، يصف الإجراء آلية تصنيف البيانات في نموذج من أربع مراحل من proestrus ، شبق ، metestrus ، و diestrus. تتميز هذه المراحل بنهج مقترح جديد ، باستخدام محددات تصنيف 4 لحالة السائل المهبلي ، ونوع (أنواع) الخلايا الموجودة ، وترتيب الخلايا ، وكمية الخلية في وقت الجمع. يتم تقديم الاختلافات في كل مرحلة ، والعينات المواتية وغير المواتية ، والتمييز بين الدورية واللادورية ، والصور البيانية لمكونات التصنيف التي تم جمعها جنبا إلى جنب مع الممارسات التفسيرية والتنظيمية الفعالة للبيانات. وعموما، تسمح هذه الأدوات بنشر نطاقات بيانات قابلة للقياس الكمي لأول مرة، مما يؤدي إلى توحيد عوامل التصنيف عند تكرارها.

وتعكس البيانات الحالية بيانات المراهقات في البرنامج الدولي للتوحيد الجيني SD (IGS) في وجود ذكور من فئران SD. كانت هذه الحيوانات موجودة في كل من جامعة بيبردين ومختبرات جامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس كجزء من دراسة تعاونية. يعرض الشكل 5 اختلافات متعددة لمراحل الدورة ال 4. تم تحديد ...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

تفصل هذه الدراسة العوامل الحاسمة التي يجب مراعاتها في التصاميم التجريبية التي تشمل إناث الفئران. وبمعنى أوسع، تعمل هذه البيانات على تقليل وصمة العار والمساعدة في تطوير أدوات تشخيص وتدخل أكثر شمولا.

مراقبة دورة القوارض الحثالة باستخدام غسل المهبل: لا يوجد شيء مثل الدورة العادية

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

هذا البروتوكول مهم من حيث أنه يوفر تقنية شاملة ومنخفضة التكلفة وفعالة من حيث الوقت. وهو يجيب على العناصر الرئيسية للبحث الانتقالي ويصنف بيانات المكونات على المستويين الفردي والجماعي. هذه التقنية مفيدة بسبب إجمالي كمية المعلومات التي يمكن استخراجها فيما يتعلق بالملف العام للحيوان.ويشمل ذلك مكونات التصنيف والاستنتاجات اللاحقة. يمكن أن توفر هذه التقنية نظرة ثاقبة على مجموعة واسعة من مجالات البحث ، بما في ذلك أمراض القلب والأعصاب والصيدلة. هذه التقنية لا تنطبق فقط على الدراسات الإنجابية.ابدأ بالتعامل مع الفئران بقبضة مناسبة للعمر ، مثل عقد نمط الضغط للفئران المراهقة ، عن طريق وضع الموضوع على منطقة الصدر العليا مع توجيه أنفه لأسفل على الأرض. كشف القناة المهبلية للموضوع عن طريق ثني الذيل بلطف قبل إدخال المحقنة. أثناء تثبيت المحقنة بإصبع السبابة والإصبع الأوسط ، أدخل طرف المحقنة في القناة المهبلية بزاوية موازية لها ، واطرد كلوريد الصوديوم ببطء إلى القناة عن طريق دفع المكبس إلى الداخل باستخدام الإبهام.استخرجي كلوريد الصوديوم من القناة المهبلية عن طريق سحب مكبس المحقنة بعيدا عن البطانة الظهارية. استخدم معايير كل نوع من أنواع الخلايا لتوصيف الخلايا الموجودة في العينة وتسجيل النتائج. ستظهر الخلايا الظهارية الكيراتينية النواة أو الخلايا الظهارية الكمية خشنة أو ذات حواف زاوية.على الرغم من عدم وجود نوى ، فقد تظهر مناطق مستديرة ضوئية داخل الخلية تمثل المكان الذي كانت توجد فيه نواة ذات يوم تسمى نوى الأشباح. عادة ما تكون الخلايا الظهارية الكبيرة ذات النواة ، أو الخلايا LNE ، مستديرة إلى خلايا متعددة الأضلاع مغطاة بحدود خشنة أو زاوية غير منتظمة. يمكن أن تتراوح نواتها من سليمة إلى منحلة أو pyknotic المتعلقة بالتكثيف الذي لا رجعة فيه للكروماتين في نواة خلية تمر بالموت أو التدهور.تشغل النوى مساحة أقل من السيتوبلازم داخل الخلية ، مع نسبة نووية إلى سيتوبلازمية أقل من الخلايا الظهارية الصغيرة. الكريات البيض هي خلايا كروية مدمجة. الأصغر عند مقارنته بجميع أنواع الخلايا الموصوفة الأخرى.خلايا SNE هي خلايا غير كيراتينية ذات نوى مستديرة تشغل مساحة أكبر من السيتوبلازم داخل الخلية ، مما يخلق نسبة نواة إلى سيتوبلازم أعلى بالنسبة للخلايا الظهارية الكبيرة. استخدم التجسيد السفلي، مثل أربعة X للحصول على عرض تمثيلي لترتيب الخلايا بشكل عام. سجل ما إذا كانت الخلايا مجمعة معا أو مشتتة بالتساوي أو مشتتة عشوائيا، ولاحظ التنظيم المحدد لكل نوع من أنواع الخلايا.ثم قم بتقدير وتسجيل إجمالي كمية الخلايا بصريا ، كذرة أو معتدلة أو عديدة ، وكميات الخلايا الفردية كنسبة مئوية من كل نوع خلية موجود. مع هذه المكونات تصنيف مجتمعة، وتحديد أي مرحلة دورة estrous يتم تقديمها. ضمن مرحلة diestrus ، يمكن ملاحظة أن الكريات البيض هي النوع المهيمن أو الوحيد من الخلايا.عادة ما يتم ترتيبها بطريقة متكتلة في البداية ، ولكنها أكثر تشتتا في المراحل المتأخرة. قد تكون الكمية الإجمالية للخلايا منخفضة نسبيا ، وغالبا في المراحل اللاحقة من فترة الديسترس في اليوم الثاني أو الثالث. يمكن ملاحظة خيوط مركزة من الكريات البيض بسبب الكمية العالية من المخاط التي قد تكون موجودة في هذه المرحلة.يمكن رؤية كتل صغيرة من الخيوط الخلوية لخلايا SNE المصاحبة لكريات الدم البيضاء خلال المراحل المتأخرة في الانتقال إلى proestrus. يبدو السائل المهبلي ، عند الانتقال إليه ، والانتقال الكامل إليه ، والانتقال منه ، لزجا وغير شفاف. خلال مرحلة proestrus ، خلايا SNE هي الخلايا المهيمنة بينما يمكن العثور على خلايا الكريات البيض و LNE و AKE بأعداد منخفضة.عادة ما يتم ترتيب خلايا SNE في مجموعات أو صفائح أو خيوط خلال هذه المرحلة ولها مظهر حبيبي يمكن ملاحظته عند تكبير أعلى. يصبح السائل المهبلي غير لزج وشفاف بمجرد انتقال الموضوع بالكامل إلى مرحلة البروستروس. خلايا AKE هي المهيمنة خلال مرحلة estrous ، مع انخفاض في خلايا SNE ، وزيادة عامة في عدد وحجم الخلايا مع استمرار estrous.غالبا ما تتجمع خلايا AKE في شكل قضبان الكيراتين. قد تحتوي أيضا على نوى أشباح يمكن أن تصبح أكثر تشتتا في الانتقال من proestrus إلى metestrus. السائل المهبلي غير لزج وشفاف لأن الفئران تنتقل إلى ، وتنتقل بالكامل ، وتنتقل من استروس.مع انتقال الفئران إلى metestrus ، ابحث عن جميع أنواع الخلايا ، على الرغم من أنه غالبا ما يكون هناك كمية أعلى من خلايا SNE و LNE مقارنة ب LEUs. لوحظ وجود كمية أكبر من الحطام أثناء metestrus والتحولات بسبب اضمحلال الخلايا الظهارية بعد estrous. خلال هذه المرحلة ، هناك نقص في الترتيب المتسق حيث يتم رؤية جميع أنواع الخلايا وبكميات مختلفة.ومع ذلك ، فإن الكريات البيض التي يتم تعبئتها بالقرب من الخلايا الظهارية في المراحل الأولى قد تعود إلى الترتيب المتكتل عند الانتقال إلى diestrus. يظهر السائل المهبلي غير لزج وشفاف في المرحلة. ويتغير إلى مظهر أكثر لزوجة وغير شفاف أثناء الانتقال إلى diestrus.داخل كل مرحلة ، يمكن رؤية العديد من الاختلافات ، على سبيل المثال داخل مرحلة diestrus ، لوحظت كل من الخلايا الظهارية والكريات البيض. في الترتيبات ، شوهدت أيضا خيوط مخاطية متكتلة ، تتكون من الكريات البيض ، والتكتل الأولي لكريات الدم البيضاء ، وصرف عشوائي أو حتى في وقت لاحق. عند جمع عينة السائل المهبلي ، كانت هناك مجموعات غير ممثلة تبرر تكرار عمليات الغسل ، والتي شملت استخراج الخلايا الحرشفية من جدار القناة المهبلية بسبب إدخال حقنة غير سليمة.مجموعة من الحطام فقط، وعدد الخلايا الذي كان منخفضا جدا بحيث لا يمكن تصنيفه، وتلك التي كانت خارج نطاق التركيز. من الشائع رسم تقدم المرحلة على الرسوم البيانية الشريطية ، مما يسمح للباحثين بفحص نمط الدورة الكلي وتحديد الدورية. ويمكن بعد ذلك تحليل العينات حسب طول الدورة ونمط تقدم المرحلة.يمكن إنشاء ملفات تعريف دورة Estrous باستخدام رسم بياني شريطي مكدس ، إما تتبع تقدم المرحلة لكل فأر أو لكل مجموعة. حيث يتم رسم مكونات التصنيف لكل يوم إما في اليوم الواحد أو في كل مرحلة. يمكن أيضا تنظيم بيانات مكونات التصنيف رقميا لإنشاء نطاقات موحدة وجمع الإحصاءات.مارس هذه التقنية بحيث تكون طفيفة التوغل ومسح شريحة المجهر بحثا عن عينات تمثيلية لتقليل تحيز الاختيار. بشكل عام ، تذكر أنه لا يوجد شيء اسمه دورة طبيعية. بعد هذا الإجراء ، يمكن إدخال المتغيرات التجريبية ، مثل التمرين والنماذج السلوكية.وهذا من شأنه أن يسمح للبحوث بإنشاء خط الأساس لتدوير الحيوانات مسبقا والكشف عن الاستجابات الهرمونية لتدخلات محددة بعد ذلك. تسمح هذه الطريقة للباحثين باستكشاف العلاقة بين هرمونات الستيرويد الجنسية والأنظمة الجسدية الأخرى. مثال على ذلك هو كيف ترتبط مستقبلات القلب لهرمونات الستيرويد الجنسية بوظائف النظام.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

رصد كيناز والفوسفاتيز الأنشطة من خلال دورة الخلية التي Ratiometric الحنق

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

تحليل المركز دورة الخلية في خلايا الثدييات

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

قياس حركية تقدم دورة الخلية مع وصفها الأيض والتدفق الخلوي

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

أداء الغسل المهبلي، كريستال تلوين بنفسجي، والتقييم النسيجية المهبلية لتحديد دورة دقي الماوس التدريج

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

تزامن<em&gt; العنيقاء Crescentus</em&gt; للتحقيق في دورة الخلية البكتيرية

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

تتبع الزمني للتقدم دورة الخلية باستخدام التدفق الخلوي دون الحاجة إلى مزامنة

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

المناهج التجريبية لدراسة الميتوكوندريا التعريب وظيفة من دورة الخلية النووية كيناز، Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

تطبيق مشفرة وراثيا نيون اكسيد النيتريك (NO •) تحقيقات، وgeNOps، التصوير في الوقت الحقيقي من NO • إشارات في زنازين انفرادية

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

الجمع بين الخلية الانقسامية المزامنة وعالية الدقة [كنفوكل] الفحص المجهري لدراسة دور البروتينات المتعددة الوظائف دورة الخلية أثناء الانقسام

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

التصوير الحي للخلايا من دورة حياة البكتيريا المفترس Bdellovibrio bacteriovorus باستخدام المجهر الفلوري الوقت الفاصل

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...