Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Denne undersøgelse blev udført gennem et NIH-finansieret samarbejde mellem University of California Los Angeles Brain Injury Research Center (BIRC).

Alle håndterings- og proceduremetoder, der er beskrevet i denne protokol, er i overensstemmelse med National Institutes of Health (NIH) retningslinjer for dyrepleje og brug og er blevet godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Pepperdine University og UCLA Chancellor's Animal Research Committee (ARC).
1. Pleje og brug af dyr
<ol><li>Erhverv hunrotter, i antal ifølge effektanalyse, og hanrotter for at fremme Whitten-effekten eller mere konsekvent cykling<sup class...

Vigtige trin og vigtige overvejelser Visse kritiske trin i den medfølgende protokol kræver vægt, især inden for indsamling af vaginale celler. Under vaginal væskeekstraktion er sikring af den rette vinkel og dybde af sprøjteindsættelse nøglen til at producere tilfredsstillende resultater og i sidste ende forhindre irritation, skade eller cervikal stimulering af dyret. Stimuleringen af livmoderhalsen kan være en kilde til pseudopregnancy induktion, indikeret ved 12-14 dage af en leukocyt-kun v...

Nye bidrag Gnaverens østrocyklus er blevet identificeret som en væsentlig indikator for velvære. Imidlertid hindrer ubevidste forstyrrelser af efterforskere og unøjagtige fortolkninger vedrørende den kvindelige krop det videnskabelige samfund. Selve etymologien af ordet "estrous" indebærer en følelse af underlegenhed og negativitet. Euripides brugte udtrykket til at beskrive en "vanvid" eller galskab, Homer til at beskrive panik og Platon til at beskrive en irrationel drift. Denne undersøgelse fremhæver, hvordan disse oprindelige perspektiver påvirker det nuværende videnskabelige samfund og adresserer disse bekymringer gennem et nyt mosaikparadigme - en opdateret kombination af tidligere studerede metoder, udvidet i omfang for en mere omfattende tilgang.
Undersøgelsen og brugen af denne teknik er for det første nødvendig, da der ikke er nogen standardiseret og omfattende overvågningsteknik, og datafortolkningspraksis kan være uklar. For det andet, selvom østrocyklusegenskaber er afhængige af individuelle rotter, der undersøges, er de ofte universaliserede. For det tredje, mens hormonelle cyklusser er rutinemæssige og gavnlige processer, er de omgivet af farlig stigmatisering udforsket i afsnittet 'Oversættelse til mennesker'. Denne undersøgelse har til formål at løse disse tre problemer på tre måder - (A) ved at beskrive en dybdegående østrøs cyklusovervågningsteknik og afklare, hvordan resultaterne kan fortolkes, (B) ved at skitsere metoder, der opretholder integriteten og individualiteten af hver cyklus, og (C) ved at henlede opmærksomheden på misforståelser, der opretholder udokumenterede praksis.
Denne undersøgelse er også unik i sit fokus på unge rotter, en periode præget af afgørende udviklingsændringer, der kaster lys over forskellige adfærdsmæssige, anatomiske og fysiologiske manifestationer i voksenalderen1. Opbygning af et standardiseret eksperimentelt design til overvågning af hormoncyklusser i en underforsket population, samtidig med at almindelige forstyrrelser dekonstrueres, vil muliggøre udvikling af pålidelige og gyldige hormonelle korrelationer 2,3,4 og bestemmelse af tilstandsafhængige cyklusforstyrrelser 5,6,7,8,9,10 . I sidste ende tjener disse nyheder til at udvide diagnostiske kriterier, behandlinger og interventioner af forskellige wellness-bekymringer.
Grundlæggende definitioner og anvendelser Den østrøse cyklus er en samling af dynamiske fysiologiske processer, der forekommer som reaktion på de tre oscillerende kvindelige kønssteroidhormoner: østradiol, leuteiniserende hormon (LH) og progesteron (figur 1A, B). Interaktioner mellem det endokrine og centralnervesystemet regulerer cyklussen, som oftest vedvarer i 4-5 dage og gentager sig fra begyndelsen af seksuel modning til reproduktiv ældning og / eller ophør. Det er opdelt i separate kategorier baseret på hormonniveauer - oftest i de 4 faser af diestrus (DIE), proestrus (PRO), østrus (EST) og metestrus (MET), som udvikler sig på en cirkulær måde. Antallet af divisioner kan variere fra 3 trin11 til 13 trin12 afhængigt af undersøgelsens art13. Det lavere antal divisioner udelukker ofte MET som en fase og klassificerer det som en overgangsperiode af kort varighed. Det højere tal inkluderer typisk underafsnit, der giver mulighed for en nærmere undersøgelse af fænomener som tumorudvikling eller spontan pseudograviditet, den fysiologiske tilstand af graviditet uden embryonal implantation 12,14,15.
I denne undersøgelse blev stadierne identificeret gennem komponenter i vaginalkanalen, navngivet de 3 kategoriserende determinanter-celletype (r) til stede, cellearrangement og cellemængde (figur 2A-D). Mens tilstanden af vaginalvæsken ikke blev overvåget i denne undersøgelse, anbefales det at inkludere det som en fjerde kategoriseringskomponent. Yderligere oplysninger om undersøgelse af vaginalvæsken findes i referencelisten16. De kategoriserende komponenter kan undersøges ved at ekstrahere celler via vaginal skylning, den primære teknik, der anbefales i moderne østrocyklusovervågning. Mens de dybtgående fysiologiske processer inden for hvert trin ligger uden for rammerne af denne undersøgelse, kan flere oplysninger findes i litteraturen17.
Brugen og den fortsatte udvikling af denne østrocyklusovervågningsteknik er forankret i forbindelserne mellem kønssteroidhormoner og funktionen af kropslige systemer såsom det kardiovaskulære system18, endokrine system8 og centralnervesystemet 19,20,21. Samtidig er det ikke altid nødvendigt at overvåge østrocyklus, når hungnavere er involveret 22,23,24,25. Det er snarere vigtigt først at overveje, om kønsforskelle er blevet rapporteret inden for det specifikke undersøgelsesområde, som kan undersøges yderligere i offentliggjorte anmeldelser 22,23. Selv om overvågning af skumringscyklus er afgørende i et bredt spektrum af forskningsundersøgelser, bør det ikke ses som en hindring for at inkludere hungnavere i forsøg. Selvom denne teknik kan virke kompleks og tidskrævende, kan selve proceduren tage mindre end 15 minutter at gennemføre, afhængigt af efterforskeren, og er omkostningseffektiv. Samlet set er inddragelsen af kvindelige gnavere i videnskabelige undersøgelser fordelagtig for forståelsen af kropslige systemer, forskellige tilstande og patologier og generel velvære, da denne udvikling hovedsageligt har været baseret på den mandlige kropsskabelon.
Universelle parametre og naturlige variationer i gnaveren Etablering af intervaller for aspekter, der betragtes som "typiske", er nødvendig for at definere standardcyklusmønstre, indstille parametre til komparative og analytiske formål og detektere abnormiteter og outliers. Samtidig er det også vigtigt at erkende, at hver rottes cyklus er unik, og afvigelser baseret på dyrestamme, fysiologiske processer og miljøforhold forventes. Faktisk er et af de mest "normale" aspekter af den østrøse cyklus variabilitet. Dette ses i den samlede cykluslængde med et interval på 3-38 dage26,27; alderen for seksuel modning, der kan variere fra 32-34 dage til flere uger 28,29,30; hvad der betragtes som acyklisk11, og de kategoriserende determinantmønstre 11,13. Samlet set er der ingen universel skabelon for den estrous cyklus, og at oversætte det til både det videnskabelige samfund og offentligheden er en vigtig del af den eksperimentelle proces.
Eksperimentelle tidspunkter og udviklingsalder At anerkende dette princip om variabilitet hjælper med at opbygge et pålideligt og gyldigt eksperimentelt design. For eksempel er starten på overvågning af østrocykling afhængig af rotternes anatomiske og fysiologiske udvikling, som varierer afhængigt af miljømæssige og fysiologiske faktorer. Overvågning kan ikke begynde før udviklingen af vaginalåbningen (VO), som er den eksterne vaginale åbning omgivet af vulva, der fører til den indre del af vaginalkanalen (figur 3A-D). Mens VO ofte udvikler sig fuldt ud mellem 32 og 34 dage, forbliver den individualiseret til hvert emne, og meget om processen forbliver ukendt. Denne åbning er blevet brugt til at identificere begyndelsen af seksuel modning, som har været forbundet med stigningen i østradiol31, modningen af hypothalamus-hypofyse-ovarieaksen32 og den første ægløsning hos rotter 17,33,34,35. Nylige publikationer har imidlertid fundet ud af, at det kun er en indirekte markør for reproduktiv udvikling, da det kan blive afkoblet fra hormonelle og udviklingsmæssige forekomster i ugunstige miljøer31 og kan repræsentere ændringer i østradiolniveauer snarere end seksuel modning33. Derfor anbefales det ikke udelukkende at stole på VO for at bestemme udviklingsalder og som en kvalifikation til overvågning af østruscyklus36, men også at udnytte udseendet af det første EST-trin og cornificering af epitelcellerne30 for at markere begyndelsen af seksuel modning.
Kropsvægt er især korreleret med udviklingsalder i ungdomsperioden hos gnavere30,37 og kan derfor også hjælpe med at bestemme udviklingsalderen i denne periode. Foreslåede mekanismer relateret til dette fænomen omfatter stimulering af hormoner, der er nødvendige for reproduktiv udvikling, såsom væksthormon, og inhibering af hypothalamus-hypofyse adrenal (HPA) akse af appetitregulatoren, leptin30. Det anbefales dog ikke at bruge denne foranstaltning som den eneste indikator for udviklingsalder på grund af den store varians, der ses mellem rotter på tværs af arter og leverandørudbydere38. Den variation, der ses i udviklingen af VO og kropsvægt, eksemplificerer konceptets betydning i den samlede eksperimentelle proces.
Oversættelse til mennesker: kulturelle og videnskabelige sammenhænge Det translationelle forhold mellem dyr-til-menneske reproduktive undersøgelser er tovejs. Resultaterne fra dyrebaserede undersøgelser påvirker, hvordan de menneskelige processer vurderes, nærmer sig og analyseres39. Opfattelsen af det menneskelige reproduktive system og dets relaterede processer påvirker, hvordan dyr studeres. Faktisk stammer en af de højeste indikationer for yderligere forskning på dette område fra partiske sociokulturelle overbevisninger relateret til hormonelle cyklusser, der påvirker den videnskabelige proces. Mange af disse konventioner er afledt af en generel kulturel modvilje mod at diskutere menstruation, hvilket har ført til et datagab i velunderbygget viden 40,41. Dette har et spektrum af konsekvenser, der spænder fra mindre til dødelig - fra reolhøjde og smartphonestørrelse til politiets kropspansertilpasning og ubesvarede kræftdiagnoser42.
Beskrivelsen af menstruation som uhygiejnisk, destruktiv og giftig - set i ærede tekster, medier, ordbøger og medicinsk lære - bevares af videnskabelige publikationer. Dette sker gennem unøjagtige og partiske beskrivelser af hormonelle cyklusser, isoleringen af reproduktionssystemet fra dets neuroendokrine modstykker og miljøpåvirkninger og det reduktionistiske perspektiv på afslutningen af en cyklus som en 'manglende undfangelse'43,44. Dette fører til skabelsen af usund eksperimentel praksis, såsom udeladelse af eksterne variabler, der påvirker hormonelle cyklusser, bestemmelse af start og endepunkter udelukkende baseret på anatomiske udviklinger og måling af cyklusfremskridt på en lineær snarere end cirkulær måde. På trods af den direkte sammenhæng mellem sociokulturelle faktorer og biologiske konsekvenser overvejes det ikke ofte i videnskabelig litteratur. Gennem inspektion af mere holistiske publikationer 43,44,45 kan forskere dekonstruere disse stigmas og skabe mere pålidelige og gyldige eksperimentelle designs.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

Den nuværende metode etablerer en reproducerbar, standardiseret og omkostningseffektiv tilgang til overvågning af den estrouscyklus hos kvindelige Sprague Dawley (SD) unge rotter. Denne undersøgelse demonstrerer kompleksiteten af hormonelle cyklusser og det brede spektrum af forståelse, der kræves for at konstruere en pålidelig og gyldig overvågningsteknik. Gennem en grundig undersøgelse af de vigtigste eksperimentelle design- og proceduremæssige elementer giver denne beskrivelse af cyklussen og dens grundlæggende principper en ramme for yderligere forståelse og dekonstruerer misforståelser til fremtidig replikation.
Sammen med en oversigt over prøveindsamlingsprocessen, der anvender vaginal skylning, beskriver proceduren mekanismen for datakategorisering i firetrinsmodellen af proestrus, østrus, metestrus og diestrus. Disse stadier er kendetegnet ved en ny foreslået tilgang, der anvender de 4 kategoriserende determinanter for vaginal væsketilstand, celletype (r) til stede, cellearrangement og cellemængde på indsamlingstidspunktet. Variationer af hvert trin, gunstige og ugunstige prøver, sondringen mellem cyklisk og acykliskitet og grafiske skildringer af de indsamlede kategoriseringskomponenter præsenteres sammen med effektiv fortolkning og organisatorisk praksis af dataene. Samlet set giver disse værktøjer mulighed for offentliggørelse af kvantificerbare dataområder for første gang, hvilket fører til standardisering af kategoriseringsfaktorer ved replikering.

De nuværende data afspejler det kvindelige unge SD International Genetic Standardization Program (IGS) i nærværelse af mandlige SD-rotter. Disse dyr blev placeret på både Pepperdine University og UCLA laboratorier som en del af en samarbejdsundersøgelse. Figur 5 viser flere variationer af de 4 cyklusfaser. Figur 5A1 blev identificeret som en diestrus-prøve med flere celletyper til stede. Dette eksempel viser, at prøver med et større ant...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Denne undersøgelse beskriver de afgørende faktorer, der skal overvejes i eksperimentelle designs, der involverer hunrotter. I en større forstand tjener disse data til at mindske stigmatisering og hjælpe med udviklingen af mere inkluderende diagnostiske og interventionsværktøjer.

Gnaver estrous cyklus overvågning ved hjælp af vaginal skylning: Ikke sådan noget som en normal cyklus

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Denne protokol er vigtig, fordi den giver både en omfattende og billig tidseffektiv teknik. Det besvarer nøgleelementer i translationel forskning og kategorisering af komponentdata på både individ- og gruppeniveau. Denne teknik er fordelagtig på grund af den samlede mængde information, der kan udvindes vedrørende dyrets overordnede profil.Dette omfatter kategoriseringskomponenterne og de efterfølgende konklusioner. Denne teknik kan give indsigt i en bred vifte af forskningsområder, herunder kardiologi, neurologi og farmakologi. Denne teknik er ikke udelukkende anvendelig til reproduktive undersøgelser.Begynd med at håndtere rotten med et alderssvarende hold, såsom kompressionsstilhold for unge rotter, ved at placere motivet mod det øvre brystområde med næsen peget ned mod jorden. Udsæt forsøgspersonens vaginalkanal ved forsigtigt at bøje halen, inden sprøjten indsættes. Mens du holder sprøjten stabil med pegefingeren og langfingeren, skal du indsætte spidsen af sprøjten i vaginalkanalen i en vinkel parallelt med den og langsomt skubbe natriumchloridet ud i kanalen ved at skubbe stemplet indad med tommelfingeren.Ekstraher natriumchloridet fra vaginalkanalen ved at trække sprøjtens stempel væk fra epitelforingen. Brug kriterierne for hver celletype til at karakterisere de celler, der er til stede i prøven, og registrer resultaterne. En nukleeret keratiniseret epitel eller kvantificerede epitelceller vil fremstå takkede eller kantede.På trods af manglen på kerner kan det vise lysrunde områder i cellen, der repræsenterer, hvor en kerne engang var til stede kaldet spøgelseskerner. De store nukleerede epitelceller eller LNE-celler er typisk runde til polygonale formede celler indkapslet af uregelmæssige takkede eller kantede kanter. Deres kerner kan variere fra intakt til degenereret eller pyknotisk relateret til den irreversible kondensation af kromatin i kernen i en celle, der gennemgår død eller forringelse.Kernerne optager mindre plads end cytoplasmaet i cellen, med et lavere nukleart til cytoplasmisk forhold end de små epitelceller. Leukocytter er kompakte sfæriske celler. Den mindste sammenlignet med alle andre beskrevne celletyper.SNE-celler er ikke-keratiniserede celler med runde kerner, der optager et større rum end cytoplasmaet inde i cellen, hvilket skaber et højere forhold mellem kerne og cytoplasma i forhold til store epitelceller. Brug den nederste objektivering, f.eks. fire X, til at få et repræsentativt billede af det samlede cellearrangement. Registrer, om cellerne er klumpet sammen, jævnt fordelt eller tilfældigt spredt, og noter den specifikke organisation af hver celletype.Estimer og registrer derefter visuelt den samlede cellemængde som en smidge, moderat eller talrig og de enkelte cellemængder som en procentdel af hver tilstedeværende celletype. Med disse kategoriseringskomponenter kombineret skal du bestemme, hvilket østroscyklusstadium der præsenteres. Inden for diestrus-stadiet kan det ses, at leukocytter er den dominerende eller den eneste celletype.Disse er typisk arrangeret på en klumpet måde i begyndelsen af, men mere spredt i sene stadier. Den samlede mængde celler kan være forholdsvis lav, oftest i de senere stadier af diestrusperioden på den anden eller tredje dag. Koncentrerede tråde af leukocytter kan observeres på grund af den store mængde slim, der kan være til stede i dette stadium.Små klumper af cellulære tråde af SNE-celler, der ledsager leukocytterne, kan ses i sene faser i overgangen til fremestrus. Den vaginale væske, når den overgår til, fuldt overgået til og overgår ud af diestrus, fremstår tyktflydende og uigennemsigtig. Under fremestrusstadiet er SNE-celler de dominerende celler, mens leukocytter, LNE- og AKE-celler kan findes i lave tal.SNE-celler er typisk arrangeret i klynger, ark eller tråde i løbet af dette trin og har et granulært udseende, der kan observeres ved højere forstørrelse. Den vaginale væske bliver ikke viskøs og gennemsigtig, når motivet overgår fuldt ud til proestrusstadiet. AKE-cellerne er dominerende i østrøsstadiet med et fald i SNE-cellerne og en samlet stigning i antallet og størrelsen af celler, når østrus fortsætter.AKE-cellerne er ofte grupperet i form af keratinstænger. De kan også indeholde spøgelseskerner, der kan blive mere spredt i overgangen fra proestrus til metestrus. Vaginalvæsken er ikke viskøs og gennemsigtig, da rotterne overgår til, overgår fuldt ud til og overgår ud af østro.Når rotterne overgår til metestrus, skal du kigge efter alle celletyper, selvom der ofte er en højere mængde SNE- og LNE-celler sammenlignet med LEU'erne. En større mængde affald observeres under metestrus og overgangene på grund af epitelcellehenfaldet efter østrøs. I løbet af denne fase mangler der et ensartet arrangement, da alle celletyper ses og i forskellige mængder.Leukocytterne, der er pakket i nærheden af epitelcellerne i begyndelsesstadierne, kan imidlertid vende tilbage til det klumpede arrangement, når de overgår til diestrus. Den vaginale væske forekommer ikke viskøs og gennemsigtig i scenen. Og skifter til et mere tyktflydende og uigennemsigtigt udseende, mens du bevæger dig ind i diestrus.Inden for hvert trin kan der ses mange variationer, for eksempel inden for diestrus-stadiet, både epitelceller og leukocytter blev observeret. I arrangementerne blev der også set klumpede slimstrenge, sammensat af leukocytter og indledende sammenklumpning af leukocytter og en senere tilfældig eller endog udbetaling. Ved indsamling af vaginalvæskeprøven var der ikke-repræsenterede samlinger, der berettigede gentagne skylninger, som omfattede ekstraktion af pladeceller fra vaginalkanalvæggen på grund af forkert sprøjteindsættelse.En samling af udelukkende affald, et celleantal, der var for lavt til at kategorisere, og dem, der var ude af fokus. Det er almindeligt at tegne trinprogressionerne på søjlediagrammer, som giver forskere mulighed for at undersøge det overordnede cyklusmønster og identificere a-cyklisme. Og prøverne kan derefter analyseres af cykluslængden og trinprogressionsmønsteret.Estrous-cyklusprofiler kan oprettes ved hjælp af et stablet søjlediagram, der enten sporer trinprogressionen pr. rotte eller pr. kohorte. Hvor kategoriseringskomponenterne for hver dag er tegnet enten pr. dag eller pr. Trin. Kategoriseringskomponentdataene kan også organiseres numerisk for at oprette standardiserede intervaller og indsamle statistikker.Øv teknikken, så den er minimalt invasiv, og scan mikroskopglasset for repræsentative prøver for at mindske selektionsbias. Samlet set skal du huske, at der ikke er sådan noget som en normal cyklus. Efter denne procedure kunne eksperimentelle variabler introduceres, såsom motion og adfærdsmæssige paradigmer.Dette ville gøre det muligt for forskning at etablere baseline-cyklus af dyr på forhånd og at detektere hormonelle reaktioner på specifikke interventioner bagefter. Denne metode giver forskere mulighed for at undersøge forbindelsen mellem kønssteroidhormoner og andre kropslige systemer. Et eksempel på dette er, hvordan hjertereceptorer for kønssteroidhormoner vedrører systemets funktionalitet.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Overvågning kinase og fosfatasesæt aktiviteter gennem cellecyklus ved Ratiometrisk FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Analyse af Cell Cycle Position i pattedyrceller

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Måling cellecyklusprogression Kinetics med metabolisk mærkning og Flowcytometri

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, og Vaginal Cytologisk Evaluation for Mouse estrale periode Staging Identifikation

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synkronisering af<em&gt; Caulobacter Crescentus</em&gt; Til undersøgelse af bakteriecellen Cycle

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Temporal Sporing af cellecyklusprogression anvendelse af flowcytometri uden behov for synkronisering

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Eksperimentelle tilgange til at studere mitokondrie Lokalisering og funktion af en nuklear Cell Cycle kinase, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Anvendelse af genetisk indkodede fluorescerende nitrogenoxid (NO •) Probes, de geNOps, for Real-time Imaging af NO • Signaler i enkeltceller

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Kombinere mitotiske celle synkronisering og høj opløsning Konfokal mikroskopi for at studere rollen af multifunktionelle cellecyklus proteiner under mitosen

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging af livscyklus bakteriel Predator Bdellovibrio bacteriovorus ved hjælp af Time-Lapse Fluorescens mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...