Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Deze studie werd uitgevoerd door een door de NIH gefinancierde samenwerking tussen het University of California Los Angeles Brain Injury Research Center (BIRC).

Alle behandelings- en proceduremethoden die in dit protocol worden beschreven, komen overeen met de richtlijnen voor dierverzorging en -gebruik van de National Institutes of Health (NIH) en zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van Pepperdine University en de UCLA Chancellor's Animal Research Committee (ARC).
1. Verzorging en gebruik van dieren
<ol><li>Verkrijg vrouwelijke ratten, in aantallen volgens krachtanalyse, en mannelijke ratten om het Whitten-e...

Belangrijkste stappen en belangrijke overwegingen Bepaalde kritische stappen in het verstrekte protocol vereisen nadruk, vooral binnen de verzameling vaginale cellen. Tijdens de vaginale vloeistofextractie is het zorgen voor de juiste hoek en diepte van het inbrengen van de spuit de sleutel tot het produceren van bevredigende resultaten en uiteindelijk het voorkomen van irritatie, letsel of cervicale stimulatie van het dier. De stimulatie van de baarmoederhals kan een bron van pseudozwaartekrachtinduc...

Nieuwe bijdragen De oestruscyclus van knaagdieren is geïdentificeerd als een essentiële indicator van welzijn. Onbewuste vooroordelen van onderzoekers en onnauwkeurige interpretaties met betrekking tot het vrouwelijk lichaam belemmeren echter de wetenschappelijke gemeenschap. De etymologie van het woord "oestrus" impliceert een gevoel van minderwaardigheid en negativiteit. Euripides gebruikte de term om een "razernij" of waanzin te beschrijven, Homerus om paniek te beschrijven en Plato om een irrationele drift te beschrijven. Deze studie benadrukt hoe deze oerperspectieven de huidige wetenschappelijke gemeenschap beïnvloeden en pakt deze zorgen aan door middel van een nieuw mozaïekparadigma - een bijgewerkte combinatie van eerder bestudeerde methoden, uitgebreid in reikwijdte voor een meer omvattende benadering.
De studie en het gebruik van deze techniek zijn ten eerste noodzakelijk, omdat er geen gestandaardiseerde en uitgebreide monitoringtechniek is en gegevensinterpretatiepraktijken onduidelijk kunnen zijn. Ten tweede, hoewel oestruscycluskenmerken afhankelijk zijn van individuele ratten die worden bestudeerd, zijn ze vaak universeel. Ten derde, hoewel hormonale cycli routinematige en nuttige processen zijn, worden ze omgeven door gevaarlijk stigma dat wordt onderzocht in de sectie 'Vertaling naar mensen'. Deze studie heeft tot doel deze drie problemen op drie manieren aan te pakken- (A) door een diepgaande oestruscyclusmonitoringtechniek te beschrijven en te verduidelijken hoe de resultaten kunnen worden geïnterpreteerd, (B) door methoden te schetsen die de integriteit en individualiteit van elke cyclus behouden, en (C) door de aandacht te vestigen op misvattingen die ongefundeerde praktijken in stand houden.
Deze studie is ook uniek in zijn focus op adolescente ratten, een periode die wordt gekenmerkt door cruciale ontwikkelingsveranderingen die licht werpen op verschillende gedrags-, anatomische en fysiologische manifestaties op volwassen leeftijd1. Het bouwen van een gestandaardiseerd experimenteel ontwerp om hormonale cycli in een onderbelichte populatie te monitoren en tegelijkertijd gemeenschappelijke vooroordelen te deconstrueren, zal de ontwikkeling van betrouwbare en geldige hormonale correlaties 2,3,4 en de bepaling van conditieafhankelijke cyclusverstoringen mogelijk maken 5,6,7,8,9,10 . Uiteindelijk dienen deze nieuwigheden om diagnostische criteria, behandelingen en interventies van verschillende welzijnsproblemen uit te breiden.
Fundamentele definities en toepassingen De oestruscyclus is een verzameling dynamische fysiologische processen die optreden als reactie op de drie oscillerende vrouwelijke geslachtssteroïde hormonen: oestradiol, leuteiniserend hormoon (LH) en progesteron (figuur 1A, B). Interacties tussen het endocriene en centrale zenuwstelsel reguleren de cyclus, die meestal 4-5 dagen aanhoudt en terugkeert vanaf het begin van seksuele rijping tot reproductieve senescentie en / of stopzetting. Het is verdeeld in afzonderlijke categorieën op basis van hormoonspiegels - meestal in de 4 stadia van diestrus (DIE), proestrus (PRO), oestrus (EST) en metestrus (MET), die op een circulaire manier vorderen. Het aantal divisies kan variëren van 3 fasen11 tot 13 fasen12, afhankelijk van de aard van het onderzoek13. Het lagere aantal divisies sluit met als fase vaak uit en classificeert het als een kortdurende overgangsperiode. Het hogere aantal omvat meestal subsecties die een nadere inspectie mogelijk maken van verschijnselen zoals tumorontwikkeling of spontane pseudozwangerschap, de fysiologische toestand van zwangerschap zonder embryonale implantatie 12,14,15.
In deze studie werden de stadia geïdentificeerd door componenten van het vaginale kanaal, genaamd de 3 categoriserende determinanten - aanwezige celtype (s), celschikking en celhoeveelheid (figuur 2A-D). Hoewel de toestand van de vaginale vloeistof niet werd gecontroleerd in deze studie, wordt aanbevolen om het op te nemen als een vierde categoriserende component. Meer informatie over het onderzoeken van de vaginale vloeistof is te vinden in de referentielijst16. De categoriserende componenten kunnen worden onderzocht door cellen te extraheren via vaginale lavage, de primaire techniek die wordt aanbevolen in de hedendaagse oestruscyclusmonitoring. Hoewel de diepgaande fysiologische processen binnen elke fase buiten het bestek van deze studie vallen, is meer informatie te vinden in de literatuur17.
Het gebruik en de verdere ontwikkeling van deze oestruscyclusmonitoringtechniek is geworteld in de verbanden tussen geslachtssteroïde hormonen en de functie van lichaamssystemen zoals het cardiovasculaire systeem18, endocriene systeem8 en het centrale zenuwstelsel 19,20,21. Tegelijkertijd is oestruscyclusmonitoring niet altijd nodig wanneer vrouwelijke knaagdieren 22,23,24,25 betrokken zijn. Integendeel, het is belangrijk om eerst te overwegen of sekseverschillen zijn gemeld in het specifieke studiegebied, dat verder kan worden onderzocht in gepubliceerde beoordelingen22,23. Hoewel estrouscyclusmonitoring van vitaal belang is in een breed spectrum van onderzoeken, moet het niet worden gezien als een obstakel voor het opnemen van vrouwelijke knaagdieren in experimenten. Hoewel deze techniek complex en tijdrovend kan lijken, kan de procedure zelf minder dan 15 minuten duren om te voltooien, afhankelijk van de onderzoeker, en is kosteneffectief. Over het algemeen is de opname van vrouwelijke knaagdieren in wetenschappelijke studies gunstig voor het begrip van lichaamssystemen, verschillende aandoeningen en pathologieën en algemeen welzijn, omdat deze ontwikkelingen voornamelijk zijn gebaseerd op de mannelijke lichaamssjabloon.
Universele parameters en natuurlijke variabiliteiten bij het knaagdier Het vaststellen van bereiken voor aspecten die als "typisch" worden beschouwd, is noodzakelijk om standaardcycluspatronen te definiëren, parameters in te stellen voor vergelijkende en analytische doeleinden en afwijkingen en uitschieters te detecteren. Tegelijkertijd is het ook belangrijk om te erkennen dat de cyclus van elke rat uniek is en dat afwijkingen op basis van dierlijke stam, fysiologische processen en omgevingsomstandigheden worden verwacht. In feite is een van de meest "normale" aspecten van de oestruscyclus variabiliteit. Dit is te zien in de totale cycluslengte, met een bereik van 3-38 dagen26,27; de leeftijd van seksuele rijping die kan variëren van 32-34 dagen tot meerdere weken 28,29,30; wat wordt beschouwd als acyclisch11, en de categoriserende determinante patronen11,13. Over het algemeen is er geen universeel sjabloon voor de oestruscyclus, en het vertalen daarvan naar zowel de wetenschappelijke gemeenschap als het grote publiek is een belangrijk onderdeel van het experimentele proces.
Experimentele tijdspunten en ontwikkelingsleeftijd Het herkennen van dit principe van variabiliteit helpt bij het bouwen van een betrouwbaar en geldig experimenteel ontwerp. Het begin van oestruscyclusmonitoring is bijvoorbeeld afhankelijk van de anatomische en fysiologische ontwikkeling van de ratten, die varieert op basis van omgevings- en fysiologische factoren. Monitoring kan niet beginnen tot de ontwikkeling van de vaginale opening (VO), de externe vaginale opening omringd door de vulva die naar het inwendige deel van het vaginale kanaal leidt (figuur 3A-D). Hoewel de VO zich vaak volledig ontwikkelt tussen de leeftijd van 32 en 34 dagen, blijft het geïndividualiseerd voor elk onderwerp en veel over het proces blijft onbekend. Deze opening is gebruikt om het begin van seksuele rijping te identificeren, wat in verband is gebracht met de toename van oestradiol31, de rijping van de hypothalamus-hypofyse-ovariële as32 en de eerste ovulatie bij ratten 17,33,34,35. Recente publicaties hebben echter aangetoond dat het slechts een indirecte marker van reproductieve ontwikkeling is, omdat het kan worden losgekoppeld van hormonale en ontwikkelingsgebeurtenissen in ongunstige omgevingen31 en veranderingen in oestradiolniveaus kan vertegenwoordigen in plaats van seksuele rijping33. Daarom wordt aanbevolen om niet alleen op de VO te vertrouwen om de ontwikkelingsleeftijd te bepalen en als een kwalificatie voor oestruscyclusmonitoring36, maar ook om het uiterlijk van de eerste EST-fase en de cornificatie van de epitheelcellen30 te gebruiken om het begin van seksuele rijping te markeren.
Het lichaamsgewicht is met name gecorreleerd met de ontwikkelingsleeftijd tijdens de adolescentieperiode bij knaagdieren30,37 en kan daarom ook helpen bij het bepalen van de ontwikkelingsleeftijd in deze periode. Voorgestelde mechanismen die verband houden met dit fenomeen omvatten de stimulatie van hormonen die nodig zijn voor de voortplantingsontwikkeling, zoals groeihormoon, en de remming van de hypothalamus-hypofyse bijnier (HPA) -as door de eetlustregulator, leptine30. Het wordt echter niet aanbevolen om deze maatregel te gebruiken als de enige indicator van ontwikkelingsleeftijd vanwege de grote variatie tussen ratten tussen soorten en leveranciers38. De variabiliteit die wordt gezien in de ontwikkeling van de VO en het lichaamsgewicht illustreren het belang van het concept in het algehele experimentele proces.
Vertaling naar de mens: culturele en wetenschappelijke contexten De translationele relatie van dier-op-mens voortplantingsstudies is bidirectioneel. De resultaten van dierstudies beïnvloeden hoe de menselijke processen worden beoordeeld, benaderd en geanalyseerd39. De perceptie van het menselijke voortplantingssysteem en de bijbehorende processen beïnvloeden hoe dieren worden bestudeerd. In feite komt een van de luidste aanwijzingen voor verder onderzoek op dit gebied voort uit bevooroordeelde sociaal-culturele overtuigingen met betrekking tot hormonale cycli die het wetenschappelijke proces beïnvloeden. Veel van deze conventies zijn afgeleid van een algemene culturele afkeer van het bespreken van menstruatie, wat heeft geleid tot een datakloof in goed onderbouwde kennis 40,41. Dit heeft een spectrum van gevolgen die zich uitstrekken van klein tot dodelijk - van plankhoogte en smartphonegrootte tot het passen van kogelvrije vesten door de politie en gemiste kankerdiagnoses42.
De beschrijving van menstruatie als onhygiënisch, destructief en giftig - gezien in gerespecteerde teksten, media, woordenboeken en medische leringen - wordt bewaard door wetenschappelijke publicaties. Dit gebeurt door onnauwkeurige en bevooroordeelde beschrijvingen van hormonale cycli, de isolatie van het voortplantingssysteem van zijn neuro-endocriene tegenhangers en omgevingsinvloeden, en het reductionistische perspectief van de voltooiing van een cyclus als een 'falen om zwanger te worden'43,44. Dit leidt tot het creëren van ondeugdelijke experimentele praktijken, zoals het weglaten van externe variabelen die hormonale cycli beïnvloeden, het bepalen van start en eindpunten uitsluitend op basis van anatomische ontwikkelingen en het meten van cyclusvoortgang op een lineaire in plaats van circulaire manier. Ondanks de directe correlatie tussen sociaal-culturele factoren en biologische gevolgen, wordt het niet vaak overwogen in de wetenschappelijke literatuur. Door de inspectie van meer holistische publicaties 43,44,45, kunnen onderzoekers deze stigma's deconstrueren en betrouwbaardere en valide experimentele ontwerpen maken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

De huidige methodologie stelt een reproduceerbare, gestandaardiseerde en kosteneffectieve aanpak vast voor het monitoren van de oestruscyclus van vrouwelijke Sprague Dawley (SD) adolescente ratten. Deze studie toont de complexiteit van hormonale cycli en het brede spectrum van begrip dat nodig is om een betrouwbare en geldige monitoringtechniek te construeren. Door middel van een diepgaand onderzoek van de belangrijkste experimentele ontwerp- en procedurele elementen, biedt deze beschrijving van de cyclus en de fundamentele principes ervan een kader voor verder begrip en deconstrueert misvattingen voor toekomstige replicatie.
Samen met een overzicht van het monsterverzamelingsproces met behulp van vaginale lavage, beschrijft de procedure het mechanisme van gegevenscategorisatie in het viertrapsmodel van proestrus, oestrus, metestrus en diestrus. Deze stadia worden gekenmerkt door een nieuwe voorgestelde aanpak, waarbij gebruik wordt gemaakt van de 4 categoriserende determinanten van vaginale vloeistofconditie, aanwezige celtype (s), celschikking en celhoeveelheid op het moment van verzameling. Variaties van elke fase, gunstige en ongunstige steekproeven, het onderscheid tussen cycliciteit en acycliciteit en grafische afbeeldingen van de verzamelde categoriserende componenten worden gepresenteerd naast effectieve interpretatieve en organisatorische praktijken van de gegevens. Over het algemeen maken deze tools het mogelijk om voor het eerst kwantificeerbare gegevensbereiken te publiceren, wat leidt tot de standaardisatie van categorisatiefactoren bij replicatie.

De huidige gegevens weerspiegelen die van vrouwelijke adolescente SD International Genetic Standardization Program (IGS) in aanwezigheid van mannelijke SD-ratten. Deze dieren werden gelokaliseerd in zowel Pepperdine University als UCLA-laboratoria als onderdeel van een gezamenlijke studie. Figuur 5 toont meerdere variaties van de 4 cyclusfasen. Figuur 5A1 werd geïdentificeerd als een diestrusmonster met verschillende aanwezige celtypen. Dit voo...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Deze studie beschrijft de cruciale factoren waarmee rekening moet worden gehouden bij experimentele ontwerpen met vrouwelijke ratten. In bredere zin dienen deze gegevens om stigma te verminderen en te helpen bij de ontwikkeling van meer inclusieve diagnostische en interventietools.

Knaagdier Estrous Cycle Monitoring met behulp van vaginale lavage: niet zoiets als een normale cyclus

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Dit protocol is belangrijk omdat het zowel een uitgebreide als een goedkope tijdbesparende techniek biedt. Het beantwoordt belangrijke elementen van translationeel onderzoek en categoriseert componentgegevens op zowel individueel als groepsniveau. Deze techniek is voordelig vanwege de totale hoeveelheid informatie die kan worden geëxtraheerd over het algehele profiel van het dier.Dit omvat de categoriserende componenten en de daaropvolgende conclusies. Deze techniek kan inzicht geven in een breed scala aan onderzoeksgebieden, waaronder cardiologie, neurologie en farmacologie. Deze techniek is niet alleen van toepassing op voortplantingsstudies.Begin met het hanteren van de rat met een leeftijdsgeschikte greep, zoals de compressiestijlgreep voor adolescente ratten, door de proefpersoon tegen het bovenste borstgebied te plaatsen met zijn neus naar beneden gericht op de grond. Stel het vaginale kanaal van de proefpersoon bloot door de staart voorzichtig te buigen voordat u de spuit inbrengt. Terwijl u de spuit stabiel houdt met de voorvinger en middelvinger, steekt u de punt van de spuit in het vaginale kanaal in een hoek parallel daaraan, waarna u het natriumchloride langzaam in het kanaal verdrijft door de zuiger met de duim naar binnen te duwen.Extraheer het natriumchloride uit het vaginale kanaal door de zuiger van de spuit weg te trekken van de epitheliale voering. Gebruik de criteria voor elk celtype om de cellen in het monster te karakteriseren en de bevindingen vast te leggen. Een nucleated keratinized epithelial of gekwantificeerde epitheelcellen zullen grillig of hoekig lijken.Ondanks het ontbreken van kernen, kan het lichtronde gebieden in de cel laten zien die vertegenwoordigen waar ooit een kern aanwezig was, spookkernen genaamd. De grote nucleated epitheliale, of LNE-cellen, zijn meestal ronde tot veelhoekige cellen omhuld door onregelmatige gekartelde of hoekige randen. Hun kernen kunnen variëren van intact tot gedegenereerd of pyknotisch met betrekking tot de onomkeerbare condensatie van chromatine in de kern van een cel die de dood of verslechtering ondergaat.De kernen nemen minder ruimte in beslag dan het cytoplasma in de cel, met een lagere nucleaire tot cytoplasmatische verhouding dan de kleine epitheelcellen. Leukocyten zijn compacte bolvormige cellen. De kleinste in vergelijking met alle andere beschreven celtypen.SNE-cellen zijn niet-verhoornde cellen met ronde kernen die een grotere ruimte innemen dan het cytoplasma in de cel, waardoor een hogere kern-cytoplasmaverhouding ontstaat ten opzichte van grote epitheelcellen. Gebruik de onderste objectivering, zoals vier X, om een representatief beeld te krijgen van de algehele celindeling. Noteer of de cellen samengeklonterd, gelijkmatig verspreid of willekeurig verspreid zijn en noteer de specifieke organisatie van elk celtype.Schat en noteer vervolgens visueel de totale celhoeveelheid, als een smidge, matig of talrijk, en de individuele celhoeveelheden als een percentage van elk aanwezig celtype. Met deze categoriserende componenten gecombineerd, bepaal welke oestruscyclusfase wordt gepresenteerd. Binnen het diestrusstadium is te zien dat leukocyten het dominante of het enige celtype zijn.Deze zijn meestal gerangschikt op een samengeklonterde manier aan het begin van, maar meer verspreid in late stadia. De totale hoeveelheid cellen kan relatief laag zijn, meestal in de latere stadia van de diestrus-periode op de tweede of derde dag. Geconcentreerde strengen leukocyten kunnen worden waargenomen vanwege de hoge hoeveelheid slijm die in dit stadium aanwezig kan zijn.Kleine klonten cellulaire strengen SNE-cellen die de leukocyten vergezellen, kunnen worden gezien tijdens late fasen in de overgang naar proestrus. De vaginale vloeistof, bij de overgang naar, volledig overgegaan in en overgaand uit diestrus, lijkt stroperig en ondoorzichtig. Tijdens het proestrusstadium zijn SNE-cellen de dominante cellen, terwijl leukocyten, LNE- en AKE-cellen in lage aantallen kunnen worden gevonden.SNE-cellen zijn meestal gerangschikt in clusters, vellen of strengen tijdens deze fase en hebben een granulair uiterlijk dat kan worden waargenomen bij een hogere vergroting. De vaginale vloeistof wordt niet stroperig en transparant zodra het onderwerp volledig overgaat in het proestrusstadium. De AKE-cellen zijn dominant tijdens het oestrusstadium, met een afname van de SNE-cellen en een algehele toename van het aantal en de grootte van cellen naarmate oestrus doorgaat.De AKE-cellen zijn vaak geclusterd in de vorm van keratinestaven. Ze kunnen ook spookkernen bevatten die meer verspreid kunnen raken in de overgang van proestrus naar metestrus. De vaginale vloeistof is niet stroperig en transparant als de ratten overgaan in, volledig overgaan in en overgang uit oestrus.Terwijl de ratten overgaan in metestrus, zoek dan naar alle celtypen, hoewel er vaak een hogere hoeveelheid SNE- en LNE-cellen is in vergelijking met de LEUs. Een grotere hoeveelheid puin wordt waargenomen tijdens metestrus en de overgangen als gevolg van het epitheelcelverval na oestrus. Tijdens deze fase is er een gebrek aan consistente rangschikking omdat alle celtypen worden gezien en in verschillende hoeveelheden.De leukocyten die in de beginfase in de nabijheid van de epitheelcellen zijn verpakt, kunnen echter terugkeren naar de samengeklonterde opstelling bij de overgang naar diestrus. De vaginale vloeistof lijkt niet stroperig en transparant in het stadium. En verandert in een meer stroperig en ondoorzichtig uiterlijk tijdens het bewegen in diestrus.Binnen elke fase zijn veel variaties te zien, bijvoorbeeld binnen het diestrusstadium werden zowel epitheelcellen als leukocyten waargenomen. In de arrangementen werden ook samengeklonterde slijmstrengen, samengesteld uit leukocyten, en initiële klontering van leukocyten en een latere willekeurige of zelfs uitbetaling gezien. Bij het verzamelen van het vaginale vloeistofmonster waren er niet-vertegenwoordigde verzamelingen die herhaalde lavages rechtvaardigden, waaronder de extractie van plaveiselcellen uit de vaginale kanaalwand als gevolg van onjuiste injectie van de spuit.Een verzameling van uitsluitend puin, een celgetal dat te laag was om te categoriseren en degenen die onscherp waren. Het is gebruikelijk om de faseprogressies in staafdiagrammen in kaart te brengen, waardoor onderzoekers het algemene cycluspatroon kunnen onderzoeken en a-cyclisiteit kunnen identificeren. En de monsters kunnen vervolgens worden geanalyseerd op basis van de cycluslengte en het progressiepatroon van de fase.Estrous-cyclusprofielen kunnen worden gemaakt met behulp van een gestapeld staafdiagram, waarbij de faseprogressie per rat of per cohort wordt bijgehouden. Waarbij de categoriserende componenten voor elke dag per dag of per fase in een grafiek worden weergegeven. De categoriserende componentgegevens kunnen ook numeriek worden georganiseerd om gestandaardiseerde bereiken te maken en statistieken te verzamelen.Oefen de techniek zodat deze minimaal invasief is en scan de microscoopglaas op representatieve monsters om selectiebias te verminderen. Over het algemeen, onthoud dat er niet zoiets bestaat als een normale cyclus. Na deze procedure kunnen experimentele variabelen worden geïntroduceerd, zoals oefening en gedragsparadigma's.Dit zou onderzoek mogelijk maken om vooraf de basiscyclus van dieren vast te stellen en om hormonale reacties op specifieke interventies achteraf te detecteren. Met deze methode kunnen onderzoekers het verband tussen geslachtssteroïde hormonen en andere lichaamssystemen onderzoeken. Een voorbeeld hiervan is hoe cardiale receptoren voor geslachtssteroïde hormonen zich verhouden tot de systeemfunctionaliteit.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Monitoring Kinase en fosfatase activiteiten door middel van de celcyclus door Ratiometrische FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Analyse van celcyclus Positie in zoogdiercellen

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Het meten van voortgang van de celcyclus Kinetics met metabolische labeling en Flow cytometrie

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Het uitvoeren van vaginale lavage, Crystal Violet kleuring, en vaginale cytologische Evaluatie Mouse loopsheid Staging identificatie

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronisatie van<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; Voor Onderzoek van de bacteriële cel Cyclus

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Temporal Tracking van celcyclusprogressie behulp van flowcytometrie zonder de noodzaak voor synchronisatie

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Experimentele benaderingen om te studeren mitochondriale lokalisatie en functie van een nucleair celcyclus Kinase, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Toepassing van genetisch gecodeerde Fluorescent stikstofoxide (NO •) Probes, de geNOps, voor real-time beeldvorming van NO • Signalen in afzonderlijke cellen

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Het combineren van de mitotische cel synchronisatie en hoge resolutie confocale microscopie om te bestuderen van de rol van multifunctionele celcyclus eiwitten tijdens de mitose

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Beeldvorming van de levenscyclus van bacteriële Predator Bdellovibrio bacteriovorus met behulp van Time-Lapse Fluorescentie Microscopie

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...