Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

מחקר זה נערך באמצעות שיתוף פעולה במימון NIH בין המרכז לחקר פגיעות מוחיות באוניברסיטת קליפורניה בלוס אנג'לס (BIRC).

כל שיטות הטיפול והפרוצדורה המפורטות בפרוטוקול זה תואמות את הנחיות הטיפול והשימוש בבעלי חיים של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת פפרדיין והוועדה לחקר בעלי חיים של אוניברסיטת קליפורניה בלוס אנג'לס (ARC).
1. טיפ...

צעדים מרכזיים ושיקולים חשובים שלבים קריטיים מסוימים בפרוטוקול המסופק דורשים דגש, במיוחד באוסף תאי הנרתיק. במהלך מיצוי נוזל הנרתיק, הבטחת הזווית והעומק הנכונים של החדרת המזרק היא המפתח להפקת תוצאות משביעות רצון ובסופו של דבר למניעת גירוי, פציעה או גירוי צוואר הרחם לבעל החיים. ה?...

תרומות חדשות מחזור האסטרוס של מכרסמים זוהה כאינדיקטור חיוני לבריאות. עם זאת, הטיות לא מודעות של חוקרים ופרשנויות לא מדויקות לגבי הגוף הנשי מעכבות את הקהילה המדעית. עצם האטימולוגיה של המילה "estrous" מרמזת על תחושה של נחיתות ושליליות. אוריפידס השתמש במונח כדי לתאר "טירוף" או טירוף, הומרוס כדי לתאר פאניקה, ואפלטון כדי לתאר דחף לא רציונלי. מחקר זה מדגיש כיצד נקודות מבט ראשוניות אלה משפיעות על הקהילה המדעית הנוכחית ומתייחס לחששות אלה באמצעות פרדיגמת פסיפס חדשנית – שילוב מעודכן של שיטות שנחקרו בעבר, שהורחבו בהיקפן לגישה מקיפה יותר.
המחקר והשימוש בטכניקה זו נחוצים, ראשית, מכיוון שאין טכניקת ניטור סטנדרטית ומקיפה, ושיטות פרשנות נתונים יכולות להיות לא ברורות. שנית, למרות שמאפייני מחזור האסטרוס תלויים בכך שחולדות בודדות נחקרות, הם לעתים קרובות אוניברסליים. שלישית, בעוד שמחזורים הורמונליים הם תהליכים שגרתיים ומועילים, הם מוקפים בסטיגמה מסוכנת הנחקרת בפרק 'תרגום לבני אדם'. מחקר זה נועד לטפל בשלוש הסוגיות הללו בשלוש דרכים – (A) על ידי תיאור טכניקת ניטור מחזורית אסטרוס מעמיקה והבהרת האופן שבו ניתן לפרש את התוצאות, (B) על ידי התוויית שיטות השומרות על השלמות והאינדיבידואליות של כל מחזור, ו-(C) על ידי הפניית תשומת הלב לתפיסות מוטעות המנציחות פרקטיקות לא מבוססות.
מחקר זה ייחודי גם בהתמקדותו בחולדות מתבגרות, תקופה המאופיינת בשינויים התפתחותיים מכריעים השופכים אור על ביטויים התנהגותיים, אנטומיים ופיזיולוגיים שונים בבגרות1. בניית תכנון ניסיוני סטנדרטי לניטור מחזורים הורמונליים באוכלוסייה שאינה נחקרת כראוי תוך פירוק הטיות נפוצות תאפשר פיתוח של מתאמים הורמונליים אמינים ותקפים 2,3,4 וקביעת שיבושים במחזור התלויים במצב 5,6,6,7,8,9,10 . בסופו של דבר, חידושים אלה משמשים להרחבת קריטריונים לאבחון, טיפולים והתערבויות של חששות בריאותיים שונים.
הגדרות ושימושים בסיסיים מחזור האסטרוס הוא אוסף של תהליכים פיזיולוגיים דינמיים המתרחשים בתגובה לשלושת הורמוני המין הסטרואידים הנשיים המתנדנדים: אסטרדיול, הורמון לוטיניזציה (LH) ופרוגסטרון (איור 1A,B). אינטראקציות בין מערכת העצבים האנדוקרינית והמרכזית מווסתות את המחזור, שנמשך לרוב 4-5 ימים וחוזר על עצמו מתחילת ההבשלה המינית ועד לסנסנציה ו/או הפסקה של הרבייה. הוא מחולק לקטגוריות נפרדות המבוססות על רמות ההורמונים – לרוב ל-4 השלבים של diestrus (DIE), proestrus (PRO), estrus (EST) ו-metestrus (MET), המתקדמים באופן מעגלי. מספר החטיבות יכול לנוע בין 3 שלבים11 ל -13 שלבים12, בהתאם לאופי המחקר13. המספר הנמוך יותר של החטיבות אינו כולל לעתים קרובות את MET כשלב ומסווג אותו כתקופת מעבר קצרה למשך זמן. המספר הגבוה יותר כולל בדרך כלל תתי-סעיפים המאפשרים בחינה מדוקדקת יותר של תופעות כגון התפתחות הגידול או פסאודו-אופרגנטיה ספונטנית, המצב הפיזיולוגי של ההריון ללא השתלה עוברית 12,14,15.
במחקר זה זוהו השלבים באמצעות מרכיבים של תעלת הנרתיק, שנקראו 3 הדטרמיננטים המסווגים - סוג(ים) של תאים, סידור תאים וכמות תאים (איור 2A-D). אמנם מצבו של נוזל הנרתיק לא היה במעקב במחקר זה, אך מומלץ לכלול אותו כמרכיב סיווג רביעי. מידע נוסף על בדיקת נוזל הנרתיק ניתן למצוא ברשימת ההפניות16. ניתן לבחון את מרכיבי הסיווג על ידי חילוץ תאים באמצעות שטיפה נרתיקית, הטכניקה העיקרית המומלצת בניטור מחזורי אסטרוס מודרני. בעוד שהתהליכים הפיזיולוגיים המעמיקים בתוך כל שלב נמצאים מחוץ לתחום מחקר זה, מידע נוסף ניתן למצוא בספרות17.
השימוש והמשך הפיתוח של טכניקת ניטור מחזור אסטרוס זו מושרש בקשרים בין הורמוני סטרואידים מיניים לבין תפקוד מערכות הגוף כגון מערכת הלב וכלי הדם18, מערכת אנדוקרינית8 ומערכת העצבים המרכזית 19,20,21. יחד עם זאת, ייתכן שלא תמיד יהיה צורך בניטור מחזורי אסטרוס כאשר נקבות מכרסמים מעורבות 22,23,24,25. במקום זאת, חשוב תחילה לשקול אם דווחו הבדלים בין המינים בתחום הספציפי של המחקר, אותם ניתן לבחון עוד יותר בסקירות שפורסמו22,23. אף על פי שניטור מחזורי אסטרוס הוא חיוני במגוון רחב של מחקרים, אין לראות בו מכשול להכללת מכרסמים נקבות בניסויים. בעוד שטכניקה זו עשויה להיראות מורכבת וגוזלת זמן רב, ההליך עצמו יכול להימשך פחות מ -15 דקות, תלוי בחוקר, והוא חסכוני. באופן כללי, הכללתם של מכרסמים נקבות במחקרים מדעיים היא יתרון להבנת מערכות הגוף, מצבים ופתולוגיות שונות ובריאות כללית, שכן התפתחויות אלה התבססו בעיקר על תבנית הגוף הגברי.
פרמטרים אוניברסליים ושונות טבעית במכרסם קביעת טווחים להיבטים הנתפסים כ"טיפוסיים" נחוצה כדי להגדיר דפוסי מחזור סטנדרטיים, לקבוע פרמטרים למטרות השוואתיות ואנליטיות, ולזהות חריגות וחריגות. יחד עם זאת, חשוב גם להכיר בכך שהמחזור של כל חולדה הוא ייחודי, וצפויות סטיות המבוססות על זן בעלי חיים, תהליכים פיזיולוגיים ותנאי סביבה. למעשה, אחד ההיבטים ה"נורמליים" ביותר של מחזור האסטרוס הוא השתנות. זה נראה באורך המחזור הכולל, עם טווח של 3-38 ימים26,27; גיל ההתבגרות המינית שיכול לנוע בין 32-34 ימים למספר שבועות 28,29,30; מה שנחשב אציקלי11, והדפוסים הדטרמיננטיים המסווגים 11,13. באופן כללי, אין תבנית אוניברסלית למחזור האסטרוס, ותרגום זה הן לקהילה המדעית והן לציבור הרחב הוא חלק חשוב בתהליך הניסויי.
נקודות זמן ניסיוניות וגיל התפתחותי הכרה בעקרון זה של השתנות מסייעת בבניית תכנון ניסיוני אמין ותקף. לדוגמה, תחילתו של ניטור מחזורי אסטרוס מסתמכת על ההתפתחות האנטומית והפיזיולוגית של החולדות, המשתנה בהתאם לגורמים סביבתיים ופיזיולוגיים. הניטור לא יכול להתחיל עד להתפתחות פתח הנרתיק (VO), שהוא פתח הנרתיק החיצוני המוקף בפות שמוביל לחלק הפנימי של תעלת הנרתיק (איור 3A-D). בעוד שה-VO מתפתח לעתים קרובות באופן מלא בין הגילאים 32 ל-34 ימים, הוא נשאר אינדיבידואלי לכל נושא, והרבה על התהליך עדיין לא ידוע. פתח זה שימש לזיהוי הופעת ההבשלה המינית, אשר נקשרה לעלייה של אסטרדיול31, ההבשלה של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-השחלות32, והביוץ הראשון בחולדות 17,33,34,35. עם זאת, פרסומים אחרונים מצאו כי הוא רק סמן עקיף של התפתחות הרבייה, שכן הוא יכול להיות מנותק מהתרחשויות הורמונליות והתפתחותיות בסביבות שליליות31 ועשוי לייצג שינויים ברמות האסטרדיול ולא התבגרות מינית33. לכן, מומלץ לא להסתמך אך ורק על VO כדי לקבוע את הגיל ההתפתחותי וכמזהה לניטור מחזור אסטרוס36 אלא גם לנצל את המראה של שלב ה- EST הראשון וקורניפיקציה של תאי האפיתל30 כדי לסמן את תחילת ההבשלה המינית.
משקל הגוף מתואם באופן בולט עם הגיל ההתפתחותי בתקופת ההתבגרות במכרסמים30,37 ולכן יכול גם לסייע בקביעת הגיל ההתפתחותי בתקופה זו. המנגנונים המוצעים הקשורים לתופעה זו כוללים גירוי של הורמונים הדרושים להתפתחות הרבייה, כגון הורמון גדילה, ועיכוב ציר יותרת הכליה ההיפותלמית-יותרת המוח (HPA) על ידי וסת התיאבון, לפטין30. עם זאת, לא מומלץ להשתמש במדד זה כאינדיקטור היחיד לגיל ההתפתחותי בשל השונות הגדולה שנראתה בין חולדות על פני מינים שונים לבין ספקי הספקים38. השונות הנראית בהתפתחות ה-VO ומשקל הגוף מדגימה את חשיבותו של המושג בתהליך הניסוי הכולל.
תרגום לבני אדם: הקשרים תרבותיים ומדעיים מערכת היחסים התרגומית של מחקרי רבייה בין בעלי חיים לבני אדם היא דו-כיוונית. התוצאות ממחקרים המבוססים על בעלי חיים משפיעות על האופן שבו מעריכים, ניגשים ומנתחים את התהליכים האנושיים39. התפיסה של מערכת הרבייה האנושית והתהליכים הקשורים אליה משפיעים על האופן שבו נחקרים בעלי חיים. למעשה, אחת האינדיקציות הקולניות ביותר למחקר נוסף בתחום זה נובעת מאמונות חברתיות-תרבותיות מוטות הקשורות למחזורים הורמונליים המשפיעים על התהליך המדעי. רבות מהמוסכמות הללו נגזרות מסלידה תרבותית כללית מדיון במחזור החודשי, מה שהוביל לפער נתונים בידע מבוסס היטב40,41. יש לכך ספקטרום של השלכות המשתרעות בין מינוריות לקטלניות – מגובה מדפים וגודל הסמארטפון ועד התאמת שריון גוף משטרתי והחמצת אבחנות סרטן42.
התיאור של הווסת כבלתי סניטרית, הרסנית ורעילה – הנראה בטקסטים, בתקשורת, במילונים ובתורות רפואיות נערצות – נשמר על ידי פרסומים מדעיים. זה קורה באמצעות תיאורים לא מדויקים ומוטים של מחזורים הורמונליים, בידוד מערכת הרבייה ממקביליה הנוירואנדוקריניים והשפעותיה הסביבתיות, והפרספקטיבה הרדוקציוניסטית של השלמת מחזור כ'כישלון להרות'43,44. זה מוביל ליצירת פרקטיקות ניסיוניות לא מבוססות, כגון השמטת משתנים חיצוניים המשפיעים על מחזורים הורמונליים, קביעת נקודות התחלה וסיום המבוססות אך ורק על התפתחויות אנטומיות, ומדידת התקדמות המחזור באופן ליניארי ולא מעגלי. למרות הקשר הישיר בין גורמים סוציו-תרבותיים לבין השלכות ביולוגיות, הוא אינו נחשב לעתים קרובות בספרות המדעית. באמצעות בדיקה של פרסומים הוליסטיים יותר 43,44,45, חוקרים יכולים לפרק את הסטיגמות הללו וליצור עיצובים ניסיוניים אמינים ותקפים יותר.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

המתודולוגיה הנוכחית קובעת גישה ניתנת לשחזור, סטנדרטית וחסכונית לניטור המחזור האסטרוס של חולדות מתבגרות מסוג ספראג דאולי (SD) נקבות. מחקר זה מדגים את המורכבות של מחזורים הורמונליים ואת הספקטרום הרחב של ההבנה הנדרשת לבניית טכניקת ניטור אמינה ותקפה. באמצעות בחינה מעמיקה של תכנון ניסויי עיקרי ואלמנטים פרוצדורליים, תיאור זה של המחזור ועקרונות היסוד שלו מספק מסגרת להבנה נוספת ולפירוק תפיסות מוטעות לשכפול עתידי.
יחד עם מתווה של תהליך איסוף הדגימות תוך שימוש בשטיפה נרתיקית, ההליך מתאר את המנגנון של סיווג הנתונים למודל בן ארבעת השלבים של בלטו, אסטרוס, מטסטרו ו-diestrus. שלבים אלה מאופיינים בגישה מוצעת חדשה, תוך שימוש ב-4 הדטרמיננטים המסווגים של מצב נוזל הנרתיק, סוג התאים הנוכחי, סידור התאים וכמות התאים בזמן האיסוף. וריאציות של כל שלב, דוגמאות חיוביות ושליליות, ההבחנה בין מחזוריות לאציקליות ותיאורים גרפיים של מרכיבי הסיווג שנאספו מוצגים לצד פרקטיקות פרשניות וארגוניות יעילות של הנתונים. באופן כללי, כלים אלה מאפשרים פרסום של טווחי נתונים הניתנים לכימות בפעם הראשונה, מה שמוביל לסטנדרטיזציה של גורמי סיווג עם שכפול.

הנתונים הנוכחיים משקפים את זה של תוכנית התקינה הגנטית הבינלאומית של SD מתבגרת (IGS) בנוכחות חולדות SD זכריות. בעלי חיים אלה היו ממוקמים הן באוניברסיטת פפרדין והן במעבדות UCLA כחלק ממחקר משותף. איור 5 מציג וריאציות מרובות של 4 שלבי המחזור. איור 5A1 זוהה כדגי...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

מחקר זה מפרט את הגורמים המכריעים שיש לקחת בחשבון בתכנון ניסיוני המערב חולדות נקבות. במובן רחב יותר, נתונים אלה משמשים להפחתת הסטיגמה ומסייעים בפיתוח כלי אבחון והתערבות כוללניים יותר.

ניטור מחזור אסטרוס מכרסמים תוך שימוש בשטיפה נרתיקית: אין דבר כזה מחזור רגיל

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי בכך שהוא מספק טכניקה מקיפה ובעלות נמוכה של זמן יעיל. הוא עונה על מרכיבים מרכזיים של מחקר תרגומי וסיווג נתוני רכיבים הן ברמה האישית והן ברמת הקבוצה. טכניקה זו היא יתרון בשל הכמות הכוללת של מידע שניתן לחלץ לגבי הפרופיל הכולל של החיה.זה כולל את מרכיבי הסיווג ואת המסקנות הבאות. טכניקה זו יכולה לספק תובנות על מגוון רחב של תחומי מחקר, כולל קרדיולוגיה, נוירולוגיה ופרמקולוגיה. טכניקה זו אינה ישימה רק למחקרי רבייה.התחילו בטיפול בחולדה עם אחיזה המתאימה לגיל, כגון אחיזת סגנון הדחיסה לחולדות בגיל ההתבגרות, על ידי הצבת הנבדק על אזור החזה העליון כאשר האף שלו מכוון כלפי מטה אל הקרקע. חשוף את תעלת הנרתיק של הנושא על ידי כיפוף בעדינות של הזנב לפני החדרת המזרק. תוך כדי החזקת המזרק יציב עם האצבע הקדמית והאצבע האמצעית מכניסים את קצה המזרק לתעלת הנרתיק בזווית מקבילה לה, מוציאים באיטיות את הנתרן כלורי לתעלה על ידי דחיפת הבוכנה פנימה עם האגודל.הוציאו את הנתרן כלורי מהתעלה הנרתיקית על ידי משיכת הבוכנה של המזרק הרחק מציפוי האפיתל. השתמש בקריטריונים עבור כל סוג תא כדי לאפיין את התאים הקיימים בדגימה ולרשום את הממצאים. אפיתל קרטיניזציה גרעינית או תאי אפיתל מכמתים ייראו משוננים או בעלי קצוות זוויתיים.למרות המחסור בגרעינים, הוא עשוי להראות אזורים עגולים בהירים בתוך התא המייצגים את המקום שבו היה בעבר גרעין שנקרא גרעיני רפאים. תאי האפיתל הגדולים, או תאי LNE, הם בדרך כלל תאים עגולים עד מצולעים, עטופים בגבולות משוננים או זוויתיים לא סדירים. הגרעינים שלהם יכולים לנוע בין שלם לניוון או פיקנוטיים הקשורים לעיבוי בלתי הפיך של כרומטין בגרעין של תא העובר מוות או הידרדרות.הגרעינים תופסים פחות מקום מאשר הציטופלסמה בתוך התא, עם יחס גרעיני לציטופלסמי נמוך יותר מאשר תאי האפיתל הקטנים. לויקוציטים הם תאים כדוריים קומפקטיים. הקטן ביותר בהשוואה לכל סוגי התאים האחרים המתוארים.תאי SNE הם תאים לא קרטיניים עם גרעינים עגולים שתופסים מקום גדול יותר מהציטופלסמה בתוך התא, ויוצרים יחס גרעין-ציטופלסמה גבוה יותר ביחס לתאי אפיתל גדולים יותר. השתמש בהחפצה הנמוכה יותר, כגון ארבעה X כדי לקבל תצוגה מייצגת של סידור התאים הכולל. רשום אם התאים דחוסים יחד, מפוזרים באופן שווה או מפוזרים באופן אקראי, ושימו לב לארגון הספציפי של כל סוג תא.לאחר מכן, העריכו באופן חזותי ותעדו את כמות התאים הכוללת, כמספר קטן, בינוני או רב, ואת כמויות התא הבודדות כאחוז מכל סוג תא נוכח. כאשר רכיבים מסווגים אלה משולבים, קבעו איזה שלב מחזור אסטרוס מוצג. בתוך שלב הדיסטרוס, ניתן לראות כי לויקוציטים הם סוג התא הדומיננטי או היחיד.אלה מסודרים בדרך כלל בצורה דחוסה בתחילת, אך מפוזרים יותר בשלבים מאוחרים. הכמות הכוללת של התאים עשויה להיות נמוכה יחסית, לרוב בשלבים המאוחרים יותר של תקופת הדיסטרוס ביום השני או השלישי. גדילים מרוכזים של לויקוציטים ניתן לראות בשל כמות גבוהה של ריר שעשוי להיות נוכח בשלב זה.גושים קטנים של גדילים תאיים של תאי SNE המלווים את הלויקוציטים עשויים להיראות בשלבים מאוחרים במעבר לבולטים. נוזל הנרתיק, בעת המעבר לתוך, המעבר המלא לתוך, ומעבר מתוך diestrus, נראה צמיג ואטום. במהלך שלב הבליטה, תאי SNE הם התאים הדומיננטיים בעוד שתאי לויקוציטים, LNE ו-AKE עשויים להימצא במספרים נמוכים.תאי SNE מסודרים בדרך כלל באשכולות, יריעות או גדילים בשלב זה ויש להם מראה גרגירי שניתן לראות בהגדלה גבוהה יותר. נוזל הנרתיק הופך ללא צמיג ושקוף ברגע שהנבדק עובר באופן מלא לשלב הבליטה. תאי ה-AKE דומיננטיים בשלב האסטרוס, עם ירידה בתאי ה-SNE, ועלייה כוללת במספר התאים ובגודלם ככל שהאסטרוס נמשך.תאי AKE מקובצים לעתים קרובות בצורה של חטיפי קרטין. הם עשויים גם להכיל גרעיני רפאים שיכולים להתפזר יותר במעבר מבולט למטסטרוס. נוזל הנרתיק אינו צמיג ושקוף כאשר החולדות עוברות לתוך, עוברות באופן מלא לתוך האסטרוס ועוברות ממנו.כאשר החולדות הופכות למטסטרו, חפשו את כל סוגי התאים, אם כי לעתים קרובות יש כמות גבוהה יותר של תאי SNE ו-LNE בהשוואה ל-LEUs. כמות גדולה יותר של פסולת נצפית במהלך ההסטרוס והמעברים עקב דעיכת תאי האפיתל בעקבות אסטרוס. בשלב זה, קיים חוסר סידור עקבי שכן כל סוגי התאים נראים ובכמויות שונות.עם זאת, הלויקוציטים הארוזים בסמיכות לתאי האפיתל בשלבים הראשונים עשויים לחזור לסידור הגושים בעת המעבר לדיסטרוס. נוזל הנרתיק נראה לא צמיג ושקוף בשלב. ומשתנה למראה צמיג ואטום יותר תוך כדי מעבר ל-diestrus.בתוך כל שלב ניתן לראות וריאציות רבות, למשל בשלב הדיסטרוס, נצפו גם תאי אפיתל וגם לויקוציטים. בסידורים נראו גם גדילי ריר גושים, המורכבים מלוקוציטים, וגושים ראשוניים של לויקוציטים, ומאוחר יותר אקראיים או אפילו תשלומים. בעת איסוף דגימת נוזל הנרתיק, היו אוספים לא מיוצגים שהצדיקו שטיפות חוזרות, שכללו מיצוי של תאי קשקש מדופן תעלת הנרתיק עקב החדרת מזרק לא נכונה.אוסף של פסולת בלבד, ספירת תאים שהייתה נמוכה מכדי לקטלג אותה, וכאלה שלא היו בפוקוס. מקובל לשרטט את התקדמות הבמה בגרפים של עמודות, מה שמאפשר לחוקרים לבחון את תבנית המחזור הכוללת ולזהות מחזוריות. לאחר מכן ניתן לנתח את הדגימות לפי אורך המחזור ודפוס התקדמות הבמה.ניתן ליצור פרופילי מחזור Estrous באמצעות גרף עמודות מוערם, העוקב אחר התקדמות השלב לכל חולדה או לכל קבוצה. כאשר הרכיבים המסווגים עבור כל יום מוצגים בגרף ליום או לכל שלב. ניתן גם לארגן את נתוני הרכיבים המסווגים באופן מספרי כדי ליצור טווחים סטנדרטיים ולאסוף נתונים סטטיסטיים.תרגלו את הטכניקה כך שתהיה זעיר פולשנית וסרקו את שקופית המיקרוסקופ בחיפוש אחר דגימות מייצגות כדי להפחית את הטיית הבחירה. בסך הכל, זכרו, אין דבר כזה מחזור רגיל. בעקבות הליך זה, ניתן היה להציג משתנים ניסיוניים, כגון פרדיגמות פעילות גופנית והתנהגותיות.זה יאפשר למחקר לקבוע מראש רכיבה על אופניים בסיסית של בעלי חיים ולזהות תגובות הורמונליות להתערבויות ספציפיות לאחר מכן. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לחקור את הקשר בין הורמוני סטרואידים מיניים לבין מערכות גופניות אחרות. דוגמה לכך היא כיצד קולטני לב להורמוני סטרואידים מיניים מתייחסים לתפקוד המערכת.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

ניטור פעילות קינאז ו phosphatase דרך מחזור התא על ידי Ratiometric סריג

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

ניתוח של עמדת מחזור התא בתאי יונקים

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

מדידת מחזור התא קינטיקס התקדמות עם סימון מטבוליות cytometry זרימה

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

ביצוע שטיפת נרתיק, כתמים ויולטו קריסטל, והערכת ציטולוגית נרתיק לאחסון זמני מחזור הייחום חולל זיהוי עכבר

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

סנכרון של<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; לחקירה של מחזור תא החיידק

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

מעקב זמני של התקדמות תא מחזור שימוש cytometry הזרימה ללא הצורך בסנכרון

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

גישות ניסוייות לחקר מיטוכונדריאלי לוקליזציה ותפקוד של מחזור התא הגרעיני קינאז, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

יישום של תחמוצת החנקן פלורסנט מקודדים גנטית (NO •) בדיקות, את geNOps, הדמיה בזמן אמת של אותות NO • ב תאים בודדים

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

שילוב תא Mitotic סינכרון ברזולוציה גבוהה מיקרוסקופיה קונפוקלית ללמוד את התפקיד של מחזור התא רב תכליתיים חלבונים במהלך מיטוזה

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

הדמיה חיה של מחזור החיים של החיידק טורף Bdellovibrio bacteriovorus באמצעות מיקרוסקופית פלואורסצני זמן לשגות

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...