Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Denne studien ble gjennomført gjennom et NIH-finansiert samarbeid mellom University of California Los Angeles Brain Injury Research Center (BIRC).

Alle håndterings- og prosedyremetoder som er skissert i denne protokollen er i tråd med Nasjonale institutter for helse (NIH) dyrepleie og bruksretningslinjer og er godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Pepperdine University og UCLA Chancellor's Animal Research Committee (ARC).
1. Dyrepleie og bruk
<ol><li>Skaff kvinnelige rotter, i antall i henhold til kraftanalyse, og mannlige rotter for å fremme Whitten-effekten eller mer konsistent sykling<sup class="xref...

Viktige trinn og viktige hensyn Visse kritiske trinn i den medfølgende protokollen krever vekt, spesielt innenfor samlingen av vaginale celler. Under vaginal væskeutvinning er det viktig å sikre riktig vinkel og dybde for sprøyteinnsetting for å produsere tilfredsstillende resultater og til slutt forhindre irritasjon, skade eller cervical stimulering til dyret. Stimuleringen av livmorhalsen kan være en kilde til pseudopregnancy induksjon, indikert med 12-14 dager med en leukocytt-bare vaginal sm...

Nye bidrag Gnagerens østrogensyklus har blitt identifisert som en viktig indikator på velvære. Imidlertid hindrer ubevisste fordommer av etterforskere og unøyaktige tolkninger angående kvinnekroppen det vitenskapelige samfunnet. Selve etymologien til ordet "estrous" innebærer en følelse av underlegenhet og negativitet. Euripides brukte begrepet for å beskrive en "vanvidd" eller galskap, Homer for å beskrive panikk, og Platon for å beskrive en irrasjonell stasjon. Denne studien fremhever hvordan disse urbefolkningsperspektivene påvirker det nåværende vitenskapelige samfunnet og adresserer disse bekymringene gjennom et nytt mosaikkparadigme – en oppdatert kombinasjon av tidligere studerte metoder, utvidet i omfang for en mer omfattende tilnærming.
Studiet og bruken av denne teknikken er nødvendig, for det første, da det ikke er noen standardisert og omfattende overvåkingsteknikk, og datatolkningspraksis kan være uklar. For det andre, selv om østrogen syklusegenskaper er avhengige av individuelle rotter som studeres, blir de ofte universalisert. For det tredje, mens hormonelle sykluser er rutinemessige og fordelaktige prosesser, er de omgitt av farlig stigma utforsket i delen "Oversettelse til mennesker". Denne studien tar sikte på å løse disse tre problemene på tre måter – (A) ved å beskrive en dyptgående estrous syklusovervåkingsteknikk og avklare hvordan resultatene kan tolkes, (B) ved å skissere metoder som opprettholder integriteten og individualiteten til hver syklus, og (C) ved å rette oppmerksomheten mot misforståelser som opprettholder ubegrunnet praksis.
Denne studien er også unik i sitt fokus på unge rotter, en periode preget av viktige utviklingsendringer som kaster lys over ulike atferdsmessige, anatomiske og fysiologiske manifestasjoner i voksen alder1. Å bygge en standardisert eksperimentell design for å overvåke hormonelle sykluser i en underforsket befolkning mens dekonstruerer vanlige skjevheter, vil tillate utvikling av pålitelige og gyldige hormonelle korrelasjoner 2,3,4 og bestemmelse av tilstandsavhengige syklusforstyrrelser 5,6,7,8,9,10 . Til syvende og sist tjener disse nyhetene til å utvide diagnostiske kriterier, behandlinger og intervensjoner av ulike velværeproblemer.
Grunnleggende definisjoner og bruksområder Den estrous syklus er en samling av dynamiske fysiologiske prosesser som oppstår som svar på de tre oscillerende kvinnelige sex steroid hormoner: østradiol, leuteinizing hormon (LH), og progesteron (Figur 1A, B). Interaksjoner mellom det endokrine og sentralnervesystemet regulerer syklusen, som oftest vedvarer i 4-5 dager og gjentar seg fra utbruddet av seksuell modning til reproduktiv senescence og / eller opphør. Den er delt inn i separate kategorier basert på hormonnivåer – oftest i de 4 stadiene av diestrus (DIE), proestrus (PRO), østrus (EST) og metestrus (MET), som utvikler seg på en sirkulær måte. Antall divisjoner kan variere fra 3 trinn11 til 13 trinn12, avhengig av arten av studien13. Det lavere antallet divisjoner utelukker ofte MET som et stadium og klassifiserer det som en overgangsperiode med kort varighet. Det høyere tallet inkluderer vanligvis subseksjoner som muliggjør en nærmere inspeksjon av fenomener som tumorutvikling eller spontan pseudopregnancy, den fysiologiske tilstanden til graviditet uten embryonal implantasjon 12,14,15.
I denne studien ble stadiene identifisert gjennom komponenter i vaginalkanalen, kalt de 3 kategoriserende determinantene-celletype (er) til stede, cellearrangement og cellemengde (figur 2A-D). Mens tilstanden til vaginalvæsken ikke ble overvåket i denne studien, anbefales det å inkludere den som en fjerde kategoriserende komponent. Ytterligere informasjon om å undersøke vaginalvæsken finnes i referanselisten16. De kategoriserende komponentene kan undersøkes ved å trekke ut celler via vaginal lavage, den primære teknikken som anbefales i moderne østrogen syklus overvåking. Mens de dyptgående fysiologiske prosessene i hvert trinn er utenfor omfanget av denne studien, finnes mer informasjon i litteraturen17.
Bruken og fortsatt utvikling av denne østrogen syklus overvåking teknikken er forankret i sammenhenger mellom sex steroid hormoner og funksjonen av kroppslige systemer som kardiovaskulærsystemet18, endokrine system8, og sentralnervesystemet 19,20,21. Samtidig kan estrous syklus overvåking ikke alltid være nødvendig når kvinnelige gnagere er involvert 22,23,24,25. Snarere er det viktig først å vurdere om kjønnsforskjeller er rapportert i det spesifikke studieområdet, som kan utforskes nærmere i publiserte vurderinger22,23. Selv om estrous syklus overvåking er viktig i et bredt spekter av forskningsundersøkelser, bør det ikke ses på som et hinder for å inkludere kvinnelige gnagere i eksperimenter. Selv om denne teknikken kan virke kompleks og tidkrevende, kan selve prosedyren ta mindre enn 15 minutter å fullføre, avhengig av undersøkeren, og er kostnadseffektiv. Totalt sett er inkludering av kvinnelige gnagere i vitenskapelige studier fordelaktig for forståelsen av kroppslige systemer, ulike forhold og patologier, og generell velvære, da denne utviklingen hovedsakelig har vært basert på den mannlige kroppsmalen.
Universelle parametere og naturlige variasjoner i gnageren Etablering av områder for aspekter sett på som "typiske" er nødvendig for å definere standard syklusmønstre, angi parametere for komparative og analytiske formål og oppdage abnormiteter og outliers. Samtidig er det også viktig å erkjenne at hver rottes syklus er unik, og avvik basert på dyrestamme, fysiologiske prosesser og miljøforhold forventes. Faktisk er en av de mest "normale" aspektene av østrogensyklusen variasjon. Dette ses i den totale sykluslengden, med et område på 3-38 dager26,27; alderen på seksuell modning som kan variere fra 32-34 dager til flere uker 28,29,30; hva regnes som acyklisk11, og kategoriserende determinante mønstre11,13. Totalt sett er det ingen universell mal for østrogensyklusen, og oversettelse av det til både det vitenskapelige samfunnet og allmennheten er en viktig del av den eksperimentelle prosessen.
Eksperimentelle tidspunkter og utviklingsalder Å gjenkjenne dette prinsippet om variasjon hjelper til med å bygge en pålitelig og gyldig eksperimentell design. For eksempel er starten på estrous sykling overvåking avhengig av rottens anatomiske og fysiologiske utvikling, som varierer basert på miljømessige og fysiologiske faktorer. Overvåking kan ikke begynne før utviklingen av vaginalåpningen (VO), som er den eksterne vaginale åpningen omgitt av vulvaen som fører til den indre delen av vaginalkanalen (figur 3A-D). Mens VO ofte utvikler seg fullt ut mellom 32 og 34 dager, forblir det individualisert til hvert emne, og mye om prosessen forblir ukjent. Denne åpningen har blitt brukt til å identifisere utbruddet av seksuell modning, som har vært knyttet til økningen av østradiol31, modning av hypothalamus-hypofyse-ovarieaksen32, og den første eggløsningen hos rotter 17,33,34,35. Nyere publikasjoner har imidlertid funnet ut at det bare er en indirekte markør for reproduktiv utvikling, da det kan bli usammenhengende fra hormonelle og utviklingsmessige forekomster i ugunstige miljøer31 og kan representere endringer i østradiolnivåer i stedet for kjønnsmodning33. Derfor anbefales det å ikke stole utelukkende på VO for å bestemme utviklingsalder og som en kvalifikator for estrous syklusovervåking36, men også å utnytte utseendet på den første EST-fasen og cornification av epitelcellene30 for å markere utbruddet av seksuell modning.
Kroppsvekt er spesielt korrelert med utviklingsalder i ungdomstiden hos gnagere30,37 og kan derfor også bidra til å bestemme utviklingsalder i denne perioden. Foreslåtte mekanismer relatert til dette fenomenet inkluderer stimulering av hormoner som er nødvendige for reproduktiv utvikling, for eksempel veksthormon, og hemming av hypothalamus-hypofysen binyre (HPA) aksen av appetittregulatoren, leptin30. Det anbefales imidlertid ikke å bruke dette tiltaket som eneste indikator på utviklingsalder på grunn av den store variansen sett mellom rotter på tvers av arter og leverandørleverandører38. Variasjonen sett i utviklingen av VO og kroppsvekt eksemplifiserer betydningen av konseptet i den generelle eksperimentelle prosessen.
Oversettelse til mennesker: kulturelle og vitenskapelige sammenhenger Det translasjonelle forholdet mellom dyre-til-menneske reproduktive studier er toveis. Resultatene fra dyrebaserte studier påvirker hvordan de menneskelige prosessene vurderes, nærmer seg og analyseres39. Oppfatningen av det menneskelige reproduktive systemet og dets relaterte prosesser påvirker hvordan dyr studeres. Faktisk stammer en av de høyeste indikasjonene for videre forskning på dette området fra partisk sosiokulturell tro knyttet til hormonelle sykluser som påvirker den vitenskapelige prosessen. Mange av disse konvensjonene er avledet fra en generell kulturell aversjon mot å diskutere menstruasjon, noe som har ført til et datagap i velbegrunnet kunnskap40,41. Dette har et spekter av konsekvenser som spenner fra mindre til dødelige - fra hyller høyde og smarttelefonstørrelse til politiets kroppspansertilpasning og tapte kreftdiagnoser42.
Beskrivelsen av menstruasjon som uhygienisk, destruktiv og giftig – sett i ærverdige tekster, medier, ordbøker og medisinske læresetninger – bevares av vitenskapelige publikasjoner. Dette skjer gjennom unøyaktige og partiske beskrivelser av hormonelle sykluser, isolering av reproduktive systemet fra nevroendokrine kolleger og miljøpåvirkninger, og det reduksjonistiske perspektivet på fullføring av en syklus som en "unnlatelse av å tenke'43,44. Dette fører til opprettelsen av unsound eksperimentell praksis, for eksempel utelatelse av eksterne variabler som påvirker hormonelle sykluser, bestemmer start og endepunkter basert utelukkende på anatomisk utvikling, og måler syklusutvikling på en lineær snarere enn sirkulær måte. Til tross for den direkte sammenhengen mellom sosiokulturelle faktorer og biologiske konsekvenser, vurderes det ikke ofte i vitenskapelig litteratur. Gjennom inspeksjon av mer helhetlige publikasjoner 43,44,45 kan forskere dekonstruere disse stigmaene og skape mer pålitelige og gyldige eksperimentelle design.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

Den nåværende metodikken etablerer en reproduserbar, standardisert og kostnadseffektiv tilnærming til overvåking av østrogensyklusen til kvinnelige Sprague Dawley (SD) ungdomsrotter. Denne studien viser kompleksiteten i hormonelle sykluser og det brede spekteret av forståelse som kreves for å konstruere en pålitelig og gyldig overvåkingsteknikk. Gjennom en grundig undersøkelse av grunnleggende eksperimentell design og prosedyreelementer gir denne beskrivelsen av syklusen og dens grunnleggende prinsipper et rammeverk for videre forståelse og dekonstruerer misforståelser for fremtidig replikering.
Sammen med en oversikt over prøveinnsamlingsprosessen som bruker vaginal lavage, beskriver prosedyren mekanismen for datakategorisering i firetrinnsmodellen av proestrus, østrus, metestrus og diestrus. Disse stadiene er preget av en ny foreslått tilnærming, ved hjelp av de 4 kategoriserende determinantene av vaginal væsketilstand, celletype (er) til stede, cellearrangement og cellemengde på innsamlingstidspunktet. Variasjoner av hvert trinn, gunstige og ugunstige prøver, skillet mellom syklisitet og acykliitet og grafiske skildringer av de innsamlede kategoriseringskomponentene presenteres sammen med effektiv fortolkende og organisatorisk praksis av dataene. Samlet sett tillater disse verktøyene publisering av kvantifiserbare dataområder for første gang, noe som fører til standardisering av kategoriseringsfaktorer ved replikering.

De nåværende dataene gjenspeiler den for kvinnelige ungdommer SD International Genetic Standardization Program (IGS) i nærvær av mannlige SD-rotter. Disse dyrene var lokalisert ved både Pepperdine University og UCLA laboratorier som en del av en samarbeidsstudie. Figur 5 viser flere variasjoner av de fire syklusstadiene. Figur 5A1 ble identifisert som en diestrus-prøve med flere celletyper til stede. Dette eksemplet viser at prøver med et...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Denne studien beskriver de avgjørende faktorene å vurdere i eksperimentelle design som involverer kvinnelige rotter. I større forstand tjener disse dataene til å redusere stigma og bistå i utviklingen av mer inkluderende diagnostiske og intervensjonsverktøy.

Gnager estrous syklus overvåking ved hjelp av vaginal lavage: ingen slik ting som en normal syklus

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Denne protokollen er viktig ved at den gir både en omfattende og rimelig tidseffektiv teknikk. Den besvarer sentrale elementer i translasjonell forskning og kategoriserer komponentdata på både individ- og gruppenivå. Denne teknikken er fordelaktig på grunn av den totale mengden informasjon som kan trekkes ut angående dyrets generelle profil.Dette inkluderer kategoriseringskomponentene og de påfølgende konklusjonene. Denne teknikken kan gi innsikt i et bredt spekter av forskningsområder, inkludert kardiologi, nevrologi og farmakologi. Denne teknikken gjelder ikke bare for reproduktive studier.Begynn med å håndtere rotten med et alderstilpasset hold, for eksempel kompresjonsstilhold for ungdom i alderen rotter, ved å plassere motivet mot øvre brystregion med nesen pekte ned på bakken. Utsett motivets vaginale kanal ved å bøye halen forsiktig før du setter inn sprøyten. Mens du holder sprøyten stødig med forfingeren og langfingeren, setter du spissen av sprøyten inn i vaginalkanalen i en vinkel parallelt med den, og utviser sakte natriumkloridet inn i kanalen ved å skyve stempelet innover med tommelen.Trekk ut natriumkloridet fra vaginalkanalen ved å trekke sprøytens stempel bort fra epitelforingen. Bruk vilkårene for hver celletype til å karakterisere cellene som finnes i eksemplet, og registrere funnene. En nukleert keratinisert epitel eller kvantifiserte epitelceller vil virke hakkete eller kantet kantet.Til tross for mangel på kjerner, kan det vise lyse runde områder i cellen som representerer hvor en kjerne en gang var til stede kalt spøkelseskjerner. De store nukleerte epitel- eller LNE-cellene er vanligvis runde til polygonale formede celler innkapslet av uregelmessige ujevne eller kantede kantlinjer. Deres kjerner kan variere fra intakt til degenerert eller pyknotisk relatert til irreversibel kondensering av kromatin i kjernen av en celle som gjennomgår død eller forverring.Kjernen tar mindre plass enn cytoplasma i cellen, med et lavere kjernefysisk til cytoplasmisk forhold enn de små epitelcellene. Leukocytter er kompakte sfæriske celler. Den minste sammenlignet med alle andre beskrevne celletyper.SNE-celler er ikke-keratiniserte celler med runde kjerner som tar opp et større rom enn cytoplasma inne i cellen, og skaper et høyere kjerne- til cytoplasmaforhold i forhold til store epitelceller. Bruk den lavere objektiviseringen, for eksempel fire X, til å få en representativ visning av den totale celleordningen. Registrer om cellene er klumpet sammen, jevnt spredt eller tilfeldig spredt, og noter den spesifikke organiseringen av hver celletype.Deretter beregner og registrerer du det totale celleantallet visuelt, som en smidge, moderat eller mange, og de enkelte cellemengdene som en prosentandel av hver celletype som finnes. Med disse kategoriseringskomponentene kombinert, bestem hvilket estetisk syklusstadium som presenteres. Innenfor diestrusstadiet kan det ses at leukocytter er de dominerende eller den eneste celletypen.Disse er vanligvis ordnet på en klumpet måte i begynnelsen av, men mer spredt i sene stadier. Den totale mengden celler kan være relativt lav, oftest i de senere stadiene av diestrus-perioden på den andre eller tredje dagen. Konsentrerte tråder av leukocytter kan observeres på grunn av den høye mengden slim som kan være til stede i dette stadiet.Små klumper av cellulære tråder av SNE-celler som følger med leukocyttene, kan ses i sene faser i overgangen til proestrus. Vaginalvæsken, når den går over til, helt overgang til, og overgang ut av diestrus, vises viskøs og ugjennomsiktig. Under proestrusstadiet er SNE-celler de dominerende cellene, mens leukocytter, LNE og AKE-celler kan bli funnet i lave tall.SNE-celler er vanligvis ordnet i klynger, ark eller tråder i dette stadiet og har et detaljert utseende som kan observeres ved høyere forstørrelse. Vaginalvæsken blir ikke viskøs og gjennomsiktig når motivet helt går over til proestrusstadiet. AKE-cellene er dominerende i estrous stadium, med en nedgang i SNE-cellene, og en samlet økning i antall og størrelse på celler som østrogen fortsetter.AKE-cellene er ofte gruppert i form av keratinstenger. De kan også inneholde spøkelseskjerner som kan bli mer spredt i overgangen fra proestrus til metestrus. Vaginalvæsken er ikke viskøs og gjennomsiktig når rottene går over til, går helt over til og overgangen ut av østrogen.Når rottene går over til metestrus, se etter alle celletyper, selv om det ofte er en høyere mengde SNE- og LNE-celler sammenlignet med LEUene. En større mengde rusk observeres under metestrus og overgangene på grunn av epitelcellen forfaller etter østrogen. I løpet av dette stadiet er det mangel på konsistent arrangement, da alle celletyper blir sett og i forskjellige mengder.Leukocyttene som er pakket i nærheten av epitelcellene i startfasen, kan imidlertid gå tilbake til det klumpede arrangementet når de går over til diestrus. Vaginalvæsken vises ikke viskøs og gjennomsiktig i scenen. Og endres til et mer viskøs og ugjennomsiktig utseende mens du beveger deg inn i diestrus.Innenfor hvert trinn kan mange variasjoner ses, for eksempel innenfor diestrusstadiet, ble både epitelceller og leukocytter observert. I arrangementene ble klumpete slimstrenger, sammensatt av leukocytter og innledende klumping av leukocytter, og en senere tilfeldig eller til og med utbetaling også sett. Ved innsamling av vaginal væskeprøve var det ikke-representerte samlinger som garanterte gjentatte toaletter, som inkluderte utvinning av squamousceller fra vaginal kanalvegg på grunn av feil sprøyteinnsetting.En samling av utelukkende rusk, et celleantall som var for lavt til å kategorisere, og de som var ute av fokus. Det er vanlig å grafere sceneprogresjonene på bargrafer, noe som gjør det mulig for forskere å undersøke det generelle syklusmønsteret og identifisere a-cyclisity. Og prøvene kan deretter analyseres av sykluslengden og faseprogresjonsmønsteret.Estrous syklus profiler kan opprettes ved hjelp av en stablet stolpe graf, enten spore scenen progresjon per rotte eller per kohort. Der kategoriseringskomponentene for hver dag vises i en grafisk grafisk fremstilling enten per dag eller per fase. Kategorisering av komponentdata kan også organiseres numerisk for å opprette standardiserte områder og samle inn statistikk.Øv på teknikken slik at den er minimalt invasiv og skann mikroskoplysbildet for representative prøver for å redusere utvalgsbias. Totalt sett, husk at det ikke er noe som heter en vanlig syklus. Etter denne prosedyren kan eksperimentelle variabler introduseres, for eksempel trenings- og atferdsparadigmer.Dette ville tillate forskning å etablere baseline sykling av dyr på forhånd og å oppdage hormonelle responser på spesifikke intervensjoner etterpå. Denne metoden gjør det mulig for forskere å utforske sammenhengen mellom kjønns steroidhormoner og andre kroppslige systemer. Et eksempel på dette er hvordan hjertereseptorer for kjønns steroidhormoner er relatert til systemfunksjonalitet.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Overvåking Kinase og fosfatase Aktiviteter Gjennom Cell Cycle av Ratiometric FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Analyse av Cell Cycle Posisjon i pattedyrceller

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Måling cellesyklusprogresjon Kinetics med metabolsk Merking og flowcytometrisystemer

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Utføre Vaginal lavage, Crystal Violet Staining, og vaginal cytologisk Taksering Mouse brunst Staging Identifikasjon

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synkronisering av<em&gt; Caulobacter Crescentus</em&gt; For etterforskning av bakteriecellen Cycle

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Temporal Sporing av cellecyklusprogresjonen Bruke flowcytometrisystemer uten behov for synkronisering

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Eksperimentelle tilnærminger til å studere mitokondrie lokalisering og funksjon for en kjernefysisk Cell Cycle Kinase, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Bruk av genetisk kodet Fluorescent Nitrogenoksid (NO •) sonder, de geNOps, for Real-time Imaging av NO • Signaler i enkeltceller

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Kombinere mitotisk celle synkronisering og høy oppløsning AC Confocal mikroskopi å studere rollen til multifunksjonelle celle syklus proteiner under mitose

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging av livssyklusen til bakteriell Predator Bdellovibrio bakteriovorus ved hjelp av Time-Lapse Fluorescence Mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...