Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Este estudo foi conduzido através de uma colaboração financiada pelo NIH entre o Centro de Pesquisa de Lesões Cerebrais da Universidade da Califórnia em Los Angeles (BIRC).

Todos os métodos de manuseio e procedimento descritos neste protocolo estão alinhados com as diretrizes de cuidados e uso de animais dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Pepperdine University e pelo Comitê de Pesquisa Animal (ARC) do Chanceler da UCLA.
1. Cuidados e uso de animais
<ol><li>Adquirir ratos fêmeas, em números de acordo com a análise de energia, e ratos machos para promover o efeito Whi...

Principais passos e considerações importantes Certas etapas críticas no protocolo fornecido requerem ênfase, especialmente dentro da coleta de células vaginais. Durante a extração do fluido vaginal, garantir o ângulo adequado e a profundidade da inserção da seringa é fundamental para produzir resultados satisfatórios e, em última instância, prevenir irritação, lesão ou estimulação cervical ao animal. A estimulação do colo do útero pode ser uma fonte de indução de pseudopregnaç...

Novas contribuições O ciclo estrous de roedores tem sido identificado como um indicador essencial de bem-estar. No entanto, vieses inconscientes de investigadores e interpretações imprecisas sobre o corpo feminino dificultam a comunidade científica. A própria etimologia da palavra "estrous" implica um senso de inferioridade e negatividade. Eurípides usou o termo para descrever um "frenesi" ou loucura, Homer para descrever pânico, e Platão para descrever um impulso irracional. Este estudo destaca como essas perspectivas primitivas influenciam a comunidade científica atual e abordam essas preocupações através de um novo paradigma de mosaico — uma combinação atualizada de métodos previamente estudados, expandida em escopo para uma abordagem mais abrangente.
O estudo e o uso dessa técnica são necessários, em primeiro lugar, pois não há técnica de monitoramento padronizada e abrangente, e as práticas de interpretação de dados podem ser pouco claras. Em segundo lugar, embora as características do ciclo estrous dependam da estudo de ratos individuais, elas são muitas vezes universalizadas. Em terceiro lugar, enquanto os ciclos hormonais são processos rotineiros e benéficos, eles são cercados por estigmas perigosos explorados na seção "Tradução para Humanos". Este estudo tem como objetivo abordar essas três questões de três maneiras — (A) descrevendo uma técnica de monitoramento de ciclo estrous profunda e esclarecendo como os resultados podem ser interpretados, (B) delineando métodos que mantêm a integridade e a individualidade de cada ciclo, e (C) chamando a atenção para equívocos que perpetuam práticas infundadas.
Este estudo também é único em seu foco em ratos adolescentes, período marcado por mudanças cruciais de desenvolvimento que lançam luz sobre diversas manifestações comportamentais, anatômicas e fisiológicas na idadeadulta 1. A construção de um projeto experimental padronizado para monitorar ciclos hormonais em uma população sub-pesquisada, ao mesmo tempo em que a desconstrução de vieses comuns permitirá o desenvolvimento de correlações hormonais confiáveis e válidas 2,3,4 e a determinação de interrupções do ciclo dependentes da condição 5,6,7,8,9,10 . Em última análise, essas novidades servem para ampliar critérios diagnósticos, tratamentos e intervenções de várias preocupações com o bem-estar.
Definições e usos fundamentais O ciclo estrous é uma coleção de processos fisiológicos dinâmicos que ocorrem em resposta aos três hormônios esteroides sexuais femininos oscilantes: estradiol, hormônio leuteinizador (LH) e progesterona (Figura 1A,B). As interações entre o sistema nervoso endócrino e central regulam o ciclo, que na maioria das vezes persiste por 4-5 dias e se repete desde o início da maturação sexual até senescência reprodutiva e/ou cessação. Ele é dividido em categorias separadas com base nos níveis hormonais — mais comumente nos 4 estágios de diestrus (DIE), proestrus (PRO), estrus (EST) e metestrus (MET), que progridem de forma circular. O número de divisões pode variar de 3 estágios11 a 13 estágios12, dependendo da natureza do estudo13. O menor número de divisões muitas vezes exclui o MET como um estágio e classifica-o como um período de transição de curta duração. O número maior normalmente inclui subseções que permitem uma inspeção mais aprofundada de fenômenos como desenvolvimento de tumores ou pseudopregnação espontânea, o estado fisiológico da gravidez sem implantação embrionária 12,14,15.
Neste estudo, os estágios foram identificados por meio de componentes do canal vaginal, denominados os 3 classificados de determinantes-células presentes, arranjo celular e quantidade celular (Figura 2A-D). Embora a condição do fluido vaginal não tenha sido monitorada neste estudo, recomenda-se incluí-lo como um quarto componente categorizador. Mais informações sobre o exame do fluido vaginal podem ser encontradas na lista de referência16. Os componentes categorizadores podem ser examinados extraindo células através de lavagem vaginal, a técnica primária recomendada no monitoramento do ciclo estrous moderno. Embora os processos fisiológicos aprofundados dentro de cada etapa estejam fora do escopo deste estudo, mais informações podem ser encontradas na literatura17.
O uso e o desenvolvimento contínuo desta técnica de monitoramento de ciclo estrous está enraizado nas conexões entre hormônios esteroides sexuais e a função de sistemas corporais como o sistema cardiovascular18, sistema endócrino8 e sistema nervoso central 19,20,21. Ao mesmo tempo, o monitoramento do ciclo estrous pode nem sempre ser necessário quando os roedores femininos estão envolvidos 22,23,24,25. Em vez disso, é importante primeiro considerar se as diferenças sexuais foram relatadas na área específica do estudo, o que pode ser ainda mais explorado nas revisões publicadas22,23. Embora o monitoramento do ciclo estrous seja vital em um amplo espectro de investigações de pesquisa, não deve ser visto como um obstáculo para incluir roedores fêmeas em experimentos. Embora essa técnica possa parecer complexa e demorada, o procedimento em si pode levar menos de 15 minutos para ser concluído, dependendo do investigador, e é econômico. No geral, a inclusão de roedores femininos em estudos científicos é vantajosa para a compreensão dos sistemas corporais, das diversas condições e patologias e do bem-estar geral, uma vez que esses desenvolvimentos têm sido baseados principalmente no modelo corporal masculino.
Parâmetros universais e variabilidades naturais no roedor Estabelecer faixas para aspectos vistos como "típicos" é necessário para definir padrões de ciclo padrão, definir parâmetros para fins comparativos e analíticos e detectar anormalidades e outliers. Ao mesmo tempo, também é importante reconhecer que o ciclo de cada rato é único, e são esperados desvios baseados em cepas animais, processos fisiológicos e condições ambientais. Na verdade, um dos aspectos mais "normais" do ciclo estrous é a variabilidade. Isso é visto no comprimento total do ciclo, com um intervalo de 3-38 dias26,27; a idade de maturação sexual que pode variar de 32 a 34 dias a várias semanas 28,29,30; o que é considerado acíclico11, e os padrões determinantes categorizadores 11,13. No geral, não há um modelo universal para o ciclo estrous, e traduzir isso tanto para a comunidade científica quanto para o público em geral é uma parte importante do processo experimental.
Pontos de tempo experimentais e idade do desenvolvimento Reconhecer esse princípio de variabilidade auxilia na construção de um design experimental confiável e válido. Por exemplo, o início do monitoramento do ciclismo estrous depende do desenvolvimento anatômico e fisiológico dos ratos, que varia de acordo com fatores ambientais e fisiológicos. O monitoramento não pode começar até o desenvolvimento da abertura vaginal (VO), que é o orifício vaginal externo cercado pela vulva que leva à porção interna do canal vaginal (Figura 3A-D). Embora o VO muitas vezes se desenvolva plenamente entre as idades de 32 e 34 dias, ele permanece individualizado para cada sujeito, e muito sobre o processo permanece desconhecido. Esta abertura tem sido utilizada para identificar o início do amadurecimento sexual, que tem sido associado ao aumento do estradiol31, ao amadurecimento do eixo hipotalâmica-pituitário-ovário32 e à primeira ovulação em ratos 17,33,34,35. No entanto, publicações recentes descobriram que é apenas um marcador indireto do desenvolvimento reprodutivo, pois pode se desacoplar de ocorrências hormonais e de desenvolvimento em ambientes desfavoráveis31 e pode representar mudanças nos níveis estradiol em vez de maturação sexual33. Portanto, recomenda-se não depender apenas do VO para determinar a idade do desenvolvimento e como qualificação para o monitoramento do ciclo estrous36, mas também utilizar o aparecimento do primeiro estágio EST e a cornificação das células epiteliais30 para marcar o início da maturação sexual.
O peso corporal está notavelmente correlacionado com a idade de desenvolvimento durante o período adolescente em roedores30,37 e, portanto, também pode auxiliar na determinação da idade do desenvolvimento nesse período. Os mecanismos propostos relacionados a esse fenômeno incluem a estimulação de hormônios necessários para o desenvolvimento reprodutivo, como o hormônio do crescimento, e a inibição do eixo adrenal hipotalâmico-pituitário (HPA) pelo regulador do apetite, a leptina30. No entanto, não é recomendável utilizar essa medida como único indicador da idade do desenvolvimento devido à grande variância observada entre ratos entre espécies e fornecedores de fornecedores38. A variabilidade observada no desenvolvimento do VO e do peso corporal exemplificam a importância do conceito no processo experimental global.
Tradução para humanos: contextos culturais e científicos A relação translacional dos estudos reprodutivos animal-humano é bidirecional. Os resultados de estudos em animais influenciam a forma como os processos humanos são avaliados, abordados e analisados39. A percepção do sistema reprodutivo humano e seus processos relacionados influenciam a forma como os animais são estudados. De fato, uma das indicações mais altas para novas pesquisas nessa área decorre de crenças socioculturais tendenciosas relacionadas a ciclos hormonais que influenciam o processo científico. Muitas dessas convenções são derivadas de uma aversão cultural geral à discussão da menstruação, o que levou a uma lacuna de dados no conhecimento bem fundamentado40,41. Isso tem um espectro de consequências que vão de menor a letal — desde altura de prateleira e tamanho do smartphone até a montagem da armadura da polícia e diagnósticos de câncer perdidos42.
A descrição da menstruação como insalubre, destrutiva e tóxica — vista em textos reverenciados, mídia, dicionários e ensinamentos médicos — é conservada por publicações científicas. Isso ocorre através de descrições imprecisas e tendenciosas de ciclos hormonais, o isolamento do sistema reprodutivo de suas contrapartes neuroendócrinas e influências ambientais, e a perspectiva reducionista da conclusão de um ciclo como uma "falha na concepção"43,44. Isso leva à criação de práticas experimentais insalubres, como a omissão de variáveis externas que influenciam os ciclos hormonais, determinando os pontos de partida e os pontos finais baseados apenas em desenvolvimentos anatômicos e medindo o avanço do ciclo de forma linear e não circular. Apesar da correlação direta entre fatores socioculturais e consequências biológicas, muitas vezes não é considerada na literatura científica. Através da inspeção de publicações mais holísticas 43,44,45, os pesquisadores podem desconstruir esses estigmas e criar projetos experimentais mais confiáveis e válidos.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
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		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
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		</tr>
		<tr>
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			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
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		</tr>
		<tr>
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			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
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		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
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		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
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			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
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			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
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			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
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			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

A metodologia atual estabelece uma abordagem reprodutível, padronizada e econômica para monitorar o ciclo estrous de ratos adolescentes estrous fêmeas Sprague Dawley (SD). Este estudo demonstra a complexidade dos ciclos hormonais e o amplo espectro de compreensão necessário para a construção de uma técnica de monitoramento confiável e válida. Através de um exame aprofundado do desenho experimental principal e dos elementos processuais, esta descrição do ciclo e seus princípios fundamentais fornece um quadro para maior compreensão e desconstrói equívocos para replicação futura.
Juntamente com um esboço do processo de coleta de amostras empregando lavage vaginal, o procedimento descreve o mecanismo de categorização de dados no modelo de quatro estágios de proestrus, estrus, metestrus e diestrus. Essas etapas são caracterizadas por uma nova abordagem proposta, utilizando os 4 determinantes categorizadores da condição de fluido vaginal, tipo celular(s) presente, arranjo celular e quantidade celular no momento da coleta. Variações de cada estágio, amostras favoráveis e desfavoráveis, a distinção entre cíclica e acicllicidade e representações gráficas dos componentes categorizadores coletados são apresentadas juntamente com práticas interpretativas e organizacionais eficazes dos dados. No geral, essas ferramentas permitem a publicação de faixas de dados quantificáveis pela primeira vez, levando à padronização dos fatores de categorização após a replicação.

Os dados atuais refletem o do Programa Internacional de Padronização Genética (IGS) da adolescente na presença de ratos SD masculinos. Esses animais foram localizados nos laboratórios pepperdine e ucla como parte de um estudo colaborativo. A Figura 5 apresenta múltiplas variações dos 4 estágios do ciclo. A Figura 5A1 foi identificada como uma amostra de diestrus com vários tipos de células presentes. Este exemplo demonstra que amostra...

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Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Este estudo detalha os fatores cruciais a serem considerados em projetos experimentais envolvendo ratos fêmeas. Em um sentido maior, esses dados servem para diminuir o estigma e auxiliar no desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico e intervenção mais inclusivas.

Monitoramento do ciclo estrous de roedores utilizando lavage vaginal: não existe tal coisa como um ciclo normal

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Este protocolo é significativo na sua formação, uma técnica abrangente e de baixo custo. Responde a elementos-chave da pesquisa translacional e categorizando dados de componentes em níveis individuais e de grupo. Essa técnica é vantajosa devido à quantidade total de informações que podem ser extraídas em relação ao perfil geral do animal.Isso inclui os componentes de categorização e as conclusões subsequentes. Essa técnica poderia fornecer insights sobre uma ampla gama de áreas de pesquisa, incluindo cardiologia, neurologia e farmacologia. Esta técnica não é aplicável exclusivamente a estudos reprodutivos.Comece manuseando o rato com um porão apropriado para a idade, como o estilo de compressão para ratos idosos adolescentes, colocando o sujeito contra a região superior do tórax com o nariz apontado para o chão. Exponha o canal vaginal do sujeito flexionando suavemente a cauda antes de inserir a seringa. Enquanto segura a seringa firme com o dedo do pé e o dedo médio insira a ponta da seringa no canal vaginal em um ângulo paralelo a ele, expulse lentamente o cloreto de sódio para dentro do canal empurrando o êmbolo para dentro com o polegar.Extrair o cloreto de sódio do canal vaginal puxando o êmbolo da seringa para longe do forro epitelial. Use os critérios para cada tipo celular para caracterizar as células presentes na amostra e registrar os achados. Uma célula epitelial queratinizada nucleada ou células epiteliais quantificadas aparecerá irregular ou bordada angular.Apesar da falta de núcleos, pode mostrar áreas redondas de luz dentro da célula representando onde um núcleo já esteve presente chamado núcleos fantasmas. As grandes células epiteliais nucleadas, ou células LNE, são tipicamente redondas para células em forma poligonal envoltas por bordas irregulares irregulares ou angulares. Seus núcleos podem variar de intacto a degenerado ou pienotico relacionado à condensação irreversível da cromatina no núcleo de uma célula submetida à morte ou deterioração.Os núcleos tomam menos espaço do que o citoplasma dentro da célula, com uma relação nuclear menor para citoplasmática do que as pequenas células epiteliais. Leucócitos são células esféricas compactas. O menor quando comparado com todos os outros tipos de células descritas.As células SNE são células não queratinizadas com núcleos redondos que tomam um espaço maior do que o citoplasma dentro da célula, criando um núcleo maior para a razão citoplasma relativa às grandes células epiteliais. Use a objetificação inferior, como quatro X para obter uma visão representativa do arranjo geral da célula. Regissuor se as células estão agrupadas, dispersas uniformemente ou dispersas aleatoriamente, e observe a organização específica de cada tipo de célula.Em seguida, estimar visualmente e registrar a quantidade celular total, como um smidge, moderado ou numeroso, e as quantidades celulares individuais como uma porcentagem de cada tipo de célula presente. Com esses componentes categorizados combinados, determine qual estágio de ciclo estrous está sendo apresentado. Dentro do estágio diestrus, pode-se ver que os leucócitos são o dominante ou o único tipo de célula.Estes são tipicamente organizados de forma desajeitada no início, mas mais dispersos em estágios finais. A quantidade total de células pode ser relativamente baixa, na maioria das vezes nos estágios posteriores do período diestrus no segundo ou terceiro dia. Fios concentrados de leucócitos podem ser observados devido à alta quantidade de muco que pode estar presente nesta fase.Pequenos aglomerados de fios celulares de células SNE que acompanham os leucócitos podem ser vistos durante fases tardias na transição para proestrus. O fluido vaginal, ao fazer a transição para, totalmente transicionada e a transição para fora de diestrus, parece viscoso e opaco. Durante o estágio proestrus, as células SNE são as células dominantes, enquanto as células leucócitos, LNE e AKE podem ser encontradas em números baixos.As células SNE são tipicamente dispostas em aglomerados, folhas ou fios durante esta fase e têm uma aparência granular que pode ser observada em uma ampliação mais elevada. O fluido vaginal torna-se não viscoso e transparente uma vez que o sujeito se transforma totalmente na fase proestrus. As células AKE são dominantes durante o estágio estrous, com uma diminuição nas células SNE, e um aumento geral no número e tamanho das células à medida que o estrous continua.As células AKE são frequentemente agrupadas na forma de barras de queratina. Eles também podem conter núcleos fantasmas que podem se tornar mais dispersos na transição de proestrus para metestrus. O fluido vaginal não é viscoso e transparente à medida que os ratos estão em transição, totalmente transição para, e transição para fora do estrous.À medida que os ratos transitam para metestrus, procure todos os tipos de células, embora muitas vezes haja uma maior quantidade de células SNE e LNE em comparação com as LEUs. Uma maior quantidade de detritos é observada durante o metestrus e as transições devido à decadência das células epiteliais após o estrous. Durante esta etapa, há uma falta de arranjo consistente, pois todos os tipos de células são vistos e em várias quantidades.No entanto, os leucócitos que estão embalados nas proximidades das células epiteliais nos estágios iniciais podem retornar ao arranjo desajeitado ao fazer a transição para diestrus. O fluido vaginal parece não viscoso e transparente no palco. E muda para uma aparência mais viscosa e opaca enquanto se move em diestrus.Dentro de cada estágio, muitas variações podem ser vistas, por exemplo, dentro do estágio diestrus, tanto células epiteliais quanto leucócitos foram observadas. Nos arranjos, fios de muco desajeitados, compostos de leucócitos, e agrupamento inicial de leucócitos, e um desembolso aleatório ou mesmo posterior também foram vistos. Ao coletar a amostra de fluido vaginal, havia coleções não representadas que justificavam lavages repetidas, que incluíam a extração de células escânomas da parede do canal vaginal devido à inserção inadequada da seringa.Uma coleção de detritos, uma contagem de células que era muito baixa para categorizar, e aqueles que estavam fora de foco. É comum gráfico das progressões de estágio em gráficos de barras, o que permite aos pesquisadores examinar o padrão geral do ciclo e identificar a-cíclisidade. E as amostras podem então ser analisadas pelo comprimento do ciclo e pelo padrão de progressão do estágio.Perfis de ciclo estrous podem ser criados usando um gráfico de barra empilhado, rastreando a progressão de estágio por rato ou por coorte. Quando os componentes de categorização para cada dia são gráficos por dia ou por etapa. Os dados dos componentes de categorização também podem ser organizados numericamente para criar faixas padronizadas e coletar estatísticas.Pratique a técnica para que seja minimamente invasiva e escaneie o slide do microscópio para que as amostras representativas diminuam o viés de seleção. No geral, lembre-se, não existe um ciclo normal. Após esse procedimento, variáveis experimentais poderiam ser introduzidas, como exercícios e paradigmas comportamentais.Isso permitiria que a pesquisa estabelecesse o ciclismo de base de animais de antemão e detecte respostas hormonais a intervenções específicas posteriormente. Este método permite que os pesquisadores explorem a conexão entre hormônios esteroides sexuais e outros sistemas corporais. Um exemplo disso é como receptores cardíacos para hormônios esteroides sexuais se relacionam com a funcionalidade do sistema.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Atividades de monitoramento quinases e fosfatases através do ciclo celular por raciométrica FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Biologia

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Análise da posição do ciclo celular em células de mamíferos

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Medindo a progressão do ciclo celular Cinética com marcação metabólica e Citometria de Fluxo

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Realizando lavado vaginal, Crystal coloração violeta, e avaliação citológica vaginal para Rato Identificação ciclo estral Staging

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Sincronização de<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; Para Investigação do Ciclo Celular Bacteriana

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Acompanhamento Temporal de progressão do ciclo celular utilizando citometria de fluxo, sem a necessidade de sincronização

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Abordagens experimentais para estudar mitocondrial Localização e função de um ciclo celular Nuclear Kinase, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Aplicação de codificados geneticamente fluorescente óxido nítrico (NO •) Sondas, as geNOps, para imagens em tempo real de NO • Os sinais em células individuais

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Combinando células mitóticas sincronização e microscopia Confocal de alta resolução para estudar o papel das proteínas Multifunctional ciclo celular durante a mitose

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Imagem de células vivas do ciclo de vida do predador bacteriano Bdellovibrio bacteriovorus usando microscopia de fluorescência de lapso de tempo

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...