Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Это исследование было проведено в рамках финансируемого NIH сотрудничества между Центром исследований черепно-мозговых травм Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе (BIRC).

Все методы обработки и процедуры, изложенные в этом протоколе, соответствуют руководящим принципам по уходу за животными и их использованию Национальными институтами здравоохранения (NIH) и были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Универс...

Ключевые шаги и важные соображения Некоторые критические шаги в предоставленном протоколе требуют акцента, особенно в коллекции вагинальных клеток. Во время экстракции влагалищной жидкости обеспечение надлежащего угла и глубины введения шприца является ключом к получени?...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

Нынешняя методология устанавливает воспроизводимый, стандартизированный и экономически эффективный подход к мониторингу эстрального цикла самок крыс-подростков Sprague Dawley (SD). Это исследование демонстрирует сложность гормональных циклов и широкий спектр понимания, необходимого для построения надежной и достоверной техники мониторинга. Благодаря углубленному изучению основных экспериментальных и процедурных элементов это описание цикла и его основополагающих принципов обеспечивает основу для дальнейшего понимания и деконструирует заблуждения для будущего воспроизведения.
Наряду с описанием процесса сбора образцов с использованием влагалищного лаважа, процедура описывает механизм категоризации данных в четырехступенчатую модель проэструса, течки, метеструса и диэструса. Эти стадии характеризуются новым предлагаемым подходом, использующим 4 категоризирующих детерминанты состояния влагалищной жидкости, типа (типов) клеток, расположения клеток и количества клеток во время сбора. Вариации каждого этапа, благоприятные и неблагоприятные выборки, различие между цикличностью и ацикличностью, а также графические изображения собранных компонентов категоризации представлены наряду с эффективной интерпретационной и организационной практикой данных. В целом, эти инструменты позволяют впервые публиковать поддающиеся количественной оценке диапазоны данных, что приводит к стандартизации коэффициентов категоризации при репликации.

Текущие данные отражают данные о женском подростковом SD International Genetic Standardization Program (IGS) в присутствии самцов крыс SD. Эти животные были обнаружены как в лабораториях Университета Пеппердайна, так и в лабораториях UCLA в рамках совместного исследования. На рисунке 5 представле...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

В этом исследовании подробно описываются важнейшие факторы, которые следует учитывать в экспериментальных проектах с участием самок крыс. В более широком смысле эти данные служат снижению стигмы и помогают в разработке более инклюзивных диагностических и интервенционных инструментов.

Мониторинг эстрального цикла грызунов с использованием вагинального лаважа: нет такой вещи, как нормальный цикл

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Этот протокол важен тем, что он обеспечивает как комплексный, так и экономичный эффективный метод. Он отвечает ключевым элементам трансляционных исследований и категоризации компонентных данных как на индивидуальном, так и на групповом уровнях. Этот метод выгоден из-за общего количества информации, которая может быть извлечена относительно общего профиля животного.Это включает в себя компоненты категоризации и последующие выводы. Этот метод может дать представление о широком спектре областей исследований, включая кардиологию, неврологию и фармакологию. Этот метод применим не только к репродуктивным исследованиям.Начните с обращения с крысой с соответствующим возрасту удержанием, таким как удержание в стиле сжатия для крыс подросткового возраста, путем размещения субъекта против верхней части грудной клетки с носом, направленным вниз на землю. Обнажите влагалищный канал субъекта, осторожно согнув хвост перед введением шприца. Удерживая шприц неподвижно передним пальцем, а средний палец вставьте кончик шприца во влагалищный канал под углом, параллельным ему, медленно выталкивайте хлорид натрия в канал, проталкивая поршень внутрь большим пальцем.Извлеките хлорид натрия из влагалищного канала, оттянув поршень шприца от эпителиальной оболочки. Используйте критерии для каждого типа клеток, чтобы охарактеризовать клетки, присутствующие в образце, и записать результаты. Ядро ороговевших эпителиальных или количественных эпителиальных клеток будет казаться зубчатыми или угловатыми краями.Несмотря на отсутствие ядер, он может показывать легкие круглые области внутри клетки, представляющие собой место, где когда-то присутствовало ядро, называемое ядрами-призраками. Большие ядра эпителиальных клеток, или LNE, обычно представляют собой клетки от круглых до полигональной формы, заключенных в неправильные зубчатые или угловатые границы. Их ядра могут варьироваться от интактных до дегенеративных или пикнотических, связанных с необратимой конденсацией хроматина в ядре клетки, подвергающейся гибели или ухудшению.Ядра занимают меньше места, чем цитоплазма внутри клетки, с более низким соотношением ядер к цитоплазме, чем маленькие эпителиальные клетки. Лейкоциты представляют собой компактные сферические клетки. Наименьший по сравнению со всеми другими описанными типами клеток.Клетки SNE представляют собой неорогатые клетки с круглыми ядрами, которые занимают больше места, чем цитоплазма внутри клетки, создавая более высокое отношение ядра к цитоплазме относительно крупных эпителиальных клеток. Используйте более низкую объективацию, например четыре X, чтобы получить репрезентативное представление об общем расположении ячеек. Запишите, сгруппированы ли клетки вместе, равномерно распределены или рассеяны случайным образом, и обратите внимание на конкретную организацию каждого типа клеток.Затем визуально оцените и запишите общее количество клеток, как небольшое, умеренное или многочисленное, и отдельные количества клеток в процентах от каждого присутствующего типа клеток. Объединив эти компоненты категоризации, определите, какая стадия эстрального цикла представлена. В стадии диэструса можно увидеть, что лейкоциты являются доминантным или единственным типом клеток.Они, как правило, расположены в сгруппированном виде в начале, но более рассредоточены на поздних стадиях. Общее количество клеток может быть сравнительно низким, чаще всего на поздних стадиях диструсного периода на второй или третий день. Концентрированные нити лейкоцитов могут наблюдаться из-за большого количества слизи, которая может присутствовать на этой стадии.Небольшие скопления клеточных нитей клеток SNE, сопровождающих лейкоциты, могут наблюдаться во время поздних фаз перехода к проэстру. Влагалищная жидкость при переходе внутрь, полностью переходящая в диструс и выходящая из него, кажется вязкой и непрозрачной. Во время стадии проэструса клетки SNE являются доминирующими клетками, в то время как лейкоциты, LNE и AKE-клетки могут быть найдены в небольшом количестве.Клетки SNE обычно расположены в кластерах, листах или нитях на этой стадии и имеют зернистый вид, который можно наблюдать при более высоком увеличении. Влагалищная жидкость становится невязкой и прозрачной, как только субъект полностью переходит в стадию проэструса. Клетки AKE являются доминирующими во время эструсной стадии, с уменьшением клеток SNE и общим увеличением количества и размера клеток по мере продолжения эструса.Клетки AKE часто группируются в виде кератиновых стержней. Они также могут содержать ядра призраков, которые могут стать более рассеянными при переходе от проэструса к метестру. Вагинальная жидкость невязкая и прозрачная, поскольку крысы переходят внутрь, полностью переходят и выходят из эструса.Когда крысы переходят в метеструс, ищите все типы клеток, хотя часто существует более высокое количество клеток SNE и LNE по сравнению с НОУ. Большее количество мусора наблюдается во время метеструса и переходы из-за распада эпителиальных клеток после эструса. На этом этапе отсутствует последовательное расположение, так как все типы клеток видны и в различных количествах.Однако лейкоциты, которые упакованы в непосредственной близости от эпителиальных клеток на начальных стадиях, могут вернуться в слипшееся расположение при переходе в диеструс. Вагинальная жидкость выглядит невязкой и прозрачной в стадии. И изменяется на более вязкий и непрозрачный внешний вид при переходе в диеструс.В пределах каждой стадии можно увидеть много вариаций, например, в стадии диэструса наблюдались как эпителиальные клетки, так и лейкоциты. В аранжировках также наблюдались слипшиеся нити слизи, состоящие из лейкоцитов, и первоначальное слипание лейкоцитов, а также более позднее случайное или даже выделение. При сборе образца влагалищной жидкости были непредставленные коллекции, которые требовали повторных промываний, которые включали извлечение плоских клеток из стенки влагалищного канала из-за неправильного введения шприца.Коллекция исключительно мусора, количество клеток, которое было слишком низким, чтобы классифицировать, и те, которые были вне фокуса. Обычно на гистограммах строится график прогрессии стадий, что позволяет исследователям изучить общую картину цикла и определить цикличность. Затем образцы могут быть проанализированы по длине цикла и схеме прогрессирования стадии.Профили эструсных циклов могут быть созданы с использованием гистограммы со сложенным сложением, отслеживая либо прогрессию стадии на крысу, либо на когорту. Где компоненты категоризации для каждого дня отображаются либо в день, либо в каждом этапе. Данные компонента категоризации также могут быть организованы численно для создания стандартизированных диапазонов и сбора статистики.Практикуйте технику, чтобы она была минимально инвазивной, и сканируйте слайд микроскопа для репрезентативных образцов, чтобы уменьшить смещение отбора. В целом, помните, что не существует такого понятия, как нормальный цикл. После этой процедуры могут быть введены экспериментальные переменные, такие как физические упражнения и поведенческие парадигмы.Это позволило бы исследованиям заранее установить базовый цикл животных и обнаружить гормональные реакции на конкретные вмешательства впоследствии. Этот метод позволяет исследователям исследовать связь между половыми стероидными гормонами и другими системами организма. Примером этого является то, как сердечные рецепторы для половых стероидных гормонов связаны с функциональностью системы.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Мониторинг киназы и фосфатазы деятельности путем клеточного цикла Логометрический FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Анализ сотового Позиция цикла в клетках млекопитающих

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Измерительная ячейка Кинетика цикла прогрессии с метаболическим Маркировка и проточной цитометрии

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Выполнение промывание влагалища, кристаллический фиолетовый окрашивания и вагинальные цитологические Оценка для мыши эстрального идентификации Постановка цикла

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Синхронизация<em&gt; Caulobacter Crescentus</em&gt; По расследованию бактериального клеточного цикла

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Временная Отслеживание клеточного цикла прогрессии Использование проточной цитометрии без необходимости синхронизации

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Экспериментальные подходы к изучению Митохондриальная локализации и функции цикла ядерных клеток киназа, CDK1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Применение Генетически кодируемые Флуоресцентные окиси азота (NO •) зондов geNOps, в режиме реального времени изображений NO • Сигналы в одиночных камерах

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Сочетание митотическая клеток синхронизации и конфокальная микроскопия высокого разрешения для изучения роли многофункциональный клеточного цикла белков во время митоза

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging жизненного цикла бактериального хищника Bdellovibrio бактериоворуса с использованием Time-Lapse флуоресценции микроскопии

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...