Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Este estudio se realizó a través de una colaboración financiada por los NIH entre el Centro de Investigación de Lesiones Cerebrales de la Universidad de California en Los Ángeles (BIRC).

Todos los métodos de manejo y procedimiento descritos en este protocolo se alinean con las pautas de cuidado y uso de animales de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) y han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Pepperdine y el Comité de Investigación Animal (ARC) del Canciller de UCLA.
1. Cuidado y uso de animales
<ol><li>Adquirir ratas hembra, en número según el análisis de potencia, y ratas macho para promover el efe...

Pasos clave y consideraciones importantes Ciertos pasos críticos en el protocolo proporcionado requieren énfasis, especialmente dentro de la recolección de células vaginales. Durante la extracción de líquido vaginal, garantizar el ángulo y la profundidad adecuados de la inserción de la jeringa es clave para producir resultados satisfactorios y, en última instancia, prevenir la irritación, lesiones o estimulación cervical del animal. La estimulación del cuello uterino puede ser una fuente d...

Contribuciones novedosas El ciclo estral de roedores ha sido identificado como un indicador esencial de bienestar. Sin embargo, los sesgos inconscientes de los investigadores y las interpretaciones inexactas con respecto al cuerpo femenino obstaculizan a la comunidad científica. La etimología misma de la palabra "estro" implica un sentido de inferioridad y negatividad. Eurípides usó el término para describir un "frenesí" o locura, Homero para describir el pánico y Platón para describir un impulso irracional. Este estudio destaca cómo estas perspectivas primigenias influyen en la comunidad científica actual y aborda estas preocupaciones a través de un nuevo paradigma de mosaico: una combinación actualizada de métodos previamente estudiados, ampliados en alcance para un enfoque más integral.
El estudio y el uso de esta técnica son necesarios, en primer lugar, ya que no existe una técnica de monitoreo estandarizada y completa, y las prácticas de interpretación de datos pueden no estar claras. En segundo lugar, aunque las características del ciclo estral dependen de las ratas individuales que se están estudiando, a menudo se universalizan. En tercer lugar, si bien los ciclos hormonales son procesos rutinarios y beneficiosos, están rodeados de estigmas peligrosos explorados en la sección "Traducción a humanos". Este estudio tiene como objetivo abordar estos tres problemas de tres maneras: (A) describiendo una técnica de monitoreo del ciclo estral en profundidad y aclarando cómo se pueden interpretar los resultados, (B) delineando métodos que mantienen la integridad e individualidad de cada ciclo, y (C) llamando la atención sobre conceptos erróneos que perpetúan prácticas sin fundamento.
Este estudio también es único en su enfoque en ratas adolescentes, un período marcado por cambios cruciales en el desarrollo que arrojan luz sobre diversas manifestaciones conductuales, anatómicas y fisiológicas en la edad adulta1. La construcción de un diseño experimental estandarizado para monitorear los ciclos hormonales en una población poco investigada mientras se deconstruyen los sesgos comunes permitirá el desarrollo de correlaciones hormonales confiables y válidas 2,3,4 y la determinación de interrupciones del ciclo dependientes de la condición 5,6,7,8,9,10 . En última instancia, estas novedades sirven para ampliar los criterios de diagnóstico, tratamientos e intervenciones de diversas preocupaciones de bienestar.
Definiciones y usos fundamentales El ciclo estral es una colección de procesos fisiológicos dinámicos que ocurren en respuesta a las tres hormonas esteroides sexuales femeninas oscilantes: estradiol, hormona leuteinizante (LH) y progesterona (Figura 1A, B). Las interacciones entre el sistema endocrino y el sistema nervioso central regulan el ciclo, que con mayor frecuencia persiste durante 4-5 días y se repite desde el inicio de la maduración sexual hasta la senescencia reproductiva y / o el cese. Se divide en categorías separadas basadas en los niveles hormonales, más comúnmente en las 4 etapas de diestro (DIE), proestro (PRO), estro (EST) y metestro (MET), que progresan de manera circular. El número de divisiones puede variar de 3 etapas11 a 13 etapas12, dependiendo de la naturaleza del estudio13. El menor número de divisiones a menudo excluye el MET como una etapa y lo clasifica como un período de transición de corta duración. El número más alto generalmente incluye subsecciones que permiten una inspección más cercana de fenómenos como el desarrollo tumoral o el pseudoembarazo espontáneo, el estado fisiológico del embarazo sin implantación embrionaria 12,14,15.
En este estudio, las etapas se identificaron a través de componentes del canal vaginal, llamados los 3 determinantes de categorización: tipo(s) de célula(s) presente(s), disposición celular y cantidad de células (Figura 2A-D). Si bien la condición del fluido vaginal no se monitoreó en este estudio, se recomienda incluirlo como un cuarto componente de categorización. Se puede encontrar más información sobre el examen del fluido vaginal en la lista dereferencias 16. Los componentes de categorización se pueden examinar mediante la extracción de células a través del lavado vaginal, la técnica principal recomendada en el monitoreo del ciclo estral moderno. Si bien los procesos fisiológicos en profundidad dentro de cada etapa están fuera del alcance de este estudio, se puede encontrar más información en la literatura17.
El uso y desarrollo continuo de esta técnica de monitoreo del ciclo estral se basa en las conexiones entre las hormonas esteroides sexuales y la función de los sistemas corporales como el sistema cardiovascular18, el sistema endocrino8 y el sistema nervioso central 19,20,21. Al mismo tiempo, el monitoreo del ciclo estral puede no ser siempre necesario cuando los roedores hembra están involucrados 22,23,24,25. Más bien, es importante considerar primero si se han reportado diferencias de sexo en el área específica de estudio, que pueden explorarse más a fondo en las revisiones publicadas22,23. Aunque el monitoreo del ciclo estral es vital en un amplio espectro de investigaciones de investigación, no debe verse como un obstáculo para incluir roedores hembra en los experimentos. Si bien esta técnica puede parecer compleja y llevar mucho tiempo, el procedimiento en sí puede tardar menos de 15 minutos en completarse, dependiendo del investigador, y es rentable. En general, la inclusión de roedores hembra en estudios científicos es ventajosa para la comprensión de los sistemas corporales, diversas afecciones y patologías, y el bienestar general, ya que estos desarrollos se han basado principalmente en la plantilla corporal masculina.
Parámetros universales y variabilidades naturales en el roedor El establecimiento de rangos para aspectos vistos como "típicos" es necesario para definir patrones de ciclo estándar, establecer parámetros con fines comparativos y analíticos, y detectar anomalías y valores atípicos. Al mismo tiempo, también es importante reconocer que el ciclo de cada rata es único, y se esperan desviaciones basadas en la tensión animal, los procesos fisiológicos y las condiciones ambientales. De hecho, uno de los aspectos más "normales" del ciclo estral es la variabilidad. Esto se ve en la duración total del ciclo, con un rango de 3-38 días 26,27; la edad de maduración sexual que puede variar de 32-34 días a múltiples semanas 28,29,30; lo que se considera acíclico11, y los patrones determinantes de categorización 11,13. En general, no existe una plantilla universal para el ciclo estral, y traducir eso tanto a la comunidad científica como al público en general es una parte importante del proceso experimental.
Puntos de tiempo experimentales y edad de desarrollo Reconocer este principio de variabilidad ayuda a construir un diseño experimental confiable y válido. Por ejemplo, el inicio del monitoreo del ciclo estral se basa en el desarrollo anatómico y fisiológico de las ratas, que varía según los factores ambientales y fisiológicos. El monitoreo no puede comenzar hasta el desarrollo de la abertura vaginal (VO), que es el orificio vaginal externo rodeado por la vulva que conduce a la porción interior del canal vaginal (Figura 3A-D). Si bien el VO a menudo se desarrolla completamente entre las edades de 32 y 34 días, permanece individualizado para cada sujeto, y mucho sobre el proceso sigue siendo desconocido. Esta abertura se ha utilizado para identificar el inicio de la maduración sexual, que se ha relacionado con el aumento del estradiol31, la maduración del eje hipotalámico-hipofisario-ovárico32 y la primera ovulación en ratas 17,33,34,35. Sin embargo, publicaciones recientes han encontrado que es solo un marcador indirecto del desarrollo reproductivo, ya que puede desacoplarse de las ocurrencias hormonales y de desarrollo en ambientes desfavorables31 y puede representar cambios en los niveles de estradiol en lugar de la maduración sexual33. Por lo tanto, se recomienda no confiar únicamente en el VO para determinar la edad de desarrollo y como calificador para el monitoreo del ciclo estral36, sino también utilizar la aparición de la primera etapa EST y la cornificación de las células epiteliales30 para marcar el inicio de la maduración sexual.
El peso corporal se correlaciona notablemente con la edad de desarrollo durante el período adolescente en roedores30,37 y, por lo tanto, también puede ayudar a determinar la edad de desarrollo en este período. Los mecanismos propuestos relacionados con este fenómeno incluyen la estimulación de hormonas necesarias para el desarrollo reproductivo, como la hormona del crecimiento, y la inhibición del eje suprarrenal hipotalámico-hipofisario (HPA) por el regulador del apetito, la leptina30. Sin embargo, no se recomienda utilizar esta medida como el único indicador de la edad de desarrollo debido a la gran varianza observada entre las ratas entre las especies y los proveedores de proveedores38. La variabilidad observada en el desarrollo de la VO y el peso corporal ejemplifican la importancia del concepto en el proceso experimental general.
Traducción a humanos: contextos culturales y científicos La relación traslacional de los estudios reproductivos de animales a humanos es bidireccional. Los resultados de estudios basados en animales influyen en cómo se evalúan, abordan y analizan los procesos humanos39. La percepción del sistema reproductivo humano y sus procesos relacionados influyen en cómo se estudian los animales. De hecho, una de las indicaciones más fuertes para futuras investigaciones en esta área proviene de creencias socioculturales sesgadas relacionadas con los ciclos hormonales que influyen en el proceso científico. Muchas de estas convenciones se derivan de una aversión cultural general a discutir la menstruación, lo que ha llevado a una brecha de datos en el conocimiento bien fundamentado40,41. Esto tiene un espectro de consecuencias que van desde menores hasta letales, desde la altura de las estanterías y el tamaño del teléfono inteligente hasta el ajuste de la armadura corporal de la policía y los diagnósticos de cáncer perdidos42.
La descripción de la menstruación como insalubre, destructiva y tóxica, vista en textos venerados, medios de comunicación, diccionarios y enseñanzas médicas, se conserva en publicaciones científicas. Esto ocurre a través de descripciones inexactas y sesgadas de los ciclos hormonales, el aislamiento del sistema reproductivo de sus contrapartes neuroendocrinas e influencias ambientales, y la perspectiva reduccionista de la finalización de un ciclo como un "fracaso en la concepción"43,44. Esto conduce a la creación de prácticas experimentales poco sólidas, como la omisión de variables externas que influyen en los ciclos hormonales, la determinación de los inicios y puntos finales basados únicamente en los desarrollos anatómicos y la medición del avance del ciclo de una manera lineal en lugar de circular. A pesar de la correlación directa entre los factores socioculturales y las consecuencias biológicas, a menudo no se considera en la literatura científica. A través de la inspección de publicaciones más holísticas 43,44,45, los investigadores pueden deconstruir estos estigmas y crear diseños experimentales más confiables y válidos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

La metodología actual establece un enfoque reproducible, estandarizado y rentable para monitorear el ciclo estral de las ratas adolescentes hembra Sprague Dawley (SD). Este estudio demuestra la complejidad de los ciclos hormonales y el amplio espectro de comprensión requerido para construir una técnica de monitoreo confiable y válida. A través de un examen en profundidad de los principales elementos de diseño experimental y procedimiento, esta descripción del ciclo y sus principios fundamentales proporciona un marco para una mayor comprensión y deconstruye conceptos erróneos para su futura replicación.
Junto con un esquema del proceso de recolección de muestras que emplea el lavado vaginal, el procedimiento describe el mecanismo de categorización de datos en el modelo de cuatro etapas de proestro, estro, metestro y diestro. Estas etapas se caracterizan por un nuevo enfoque propuesto, utilizando los 4 determinantes de categorización de la condición del fluido vaginal, tipo (s) de célula (s) presente, disposición celular y cantidad de células en el momento de la recolección. Las variaciones de cada etapa, las muestras favorables y desfavorables, la distinción entre ciclicidad y aciclicidad, y las representaciones gráficas de los componentes de categorización recopilados se presentan junto con prácticas interpretativas y organizativas efectivas de los datos. En general, estas herramientas permiten la publicación de rangos de datos cuantificables por primera vez, lo que lleva a la estandarización de los factores de categorización tras la replicación.

Los datos actuales reflejan los de las hembras adolescentes del Programa Internacional de Normalización Genética (IGS) SD en presencia de ratas SD macho. Estos animales fueron localizados en los laboratorios de la Universidad de Pepperdine y ucla como parte de un estudio colaborativo. La Figura 5 presenta múltiples variaciones de las 4 etapas del ciclo. La Figura 5A1 se identificó como una muestra de diestro con varios tipos de células pres...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Este estudio detalla los factores cruciales a considerar en diseños experimentales que involucran ratas hembras. En un sentido más amplio, estos datos sirven para disminuir el estigma y ayudar en el desarrollo de herramientas de diagnóstico e intervención más inclusivas.

Monitoreo del ciclo estral de roedores utilizando lavado vaginal: no hay tal cosa como un ciclo normal

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Este protocolo es importante porque proporciona una técnica integral y de bajo costo efectivo en el tiempo. Responde a elementos clave de la investigación traslacional y categoriza los datos de los componentes tanto a nivel individual como grupal. Esta técnica es ventajosa debido a la cantidad total de información que se puede extraer con respecto al perfil general del animal.Esto incluye los componentes de categorización y las conclusiones posteriores. Esta técnica podría proporcionar información sobre una amplia gama de áreas de investigación, incluidas la cardiología, la neurología y la farmacología. Esta técnica no es únicamente aplicable a los estudios reproductivos.Comience por manejar la rata con una sujeción apropiada para la edad, como la sujeción de estilo de compresión para ratas adolescentes, colocando al sujeto contra la región superior del pecho con la nariz apuntando hacia abajo en el suelo. Exponga el canal vaginal del sujeto flexionando suavemente la cola antes de insertar la jeringa. Mientras mantiene la jeringa firme con el dedo índice y el dedo medio, inserte la punta de la jeringa en el canal vaginal en un ángulo paralelo a él, expulse lentamente el cloruro de sodio en el canal empujando el émbolo hacia adentro con el pulgar.Extraiga el cloruro de sodio del canal vaginal tirando del émbolo de la jeringa lejos del revestimiento epitelial. Utilice los criterios para cada tipo de célula para caracterizar las células presentes en la muestra y registrar los hallazgos. Un epitelial queratinizado nucleado o células epiteliales cuantificadas aparecerá dentada o con bordes angulares.A pesar de la falta de núcleos, puede mostrar áreas redondas de luz dentro de la célula que representan donde una vez estuvo presente un núcleo llamado núcleo fantasma. Los grandes epiteliales nucleados, o células LNE, son típicamente células de forma redonda a poligonal encerradas por bordes irregulares dentados o angulares. Sus núcleos pueden variar de intactos a degenerados o picnóticos relacionados con la condensación irreversible de la cromatina en el núcleo de una célula que sufre muerte o deterioro.Los núcleos ocupan menos espacio que el citoplasma dentro de la célula, con una relación nuclear a citoplasmática más baja que las células epiteliales pequeñas. Los leucocitos son células esféricas compactas. El más pequeño en comparación con todos los demás tipos de células descritas.Las células SNE son células no queratinizadas con núcleos redondos que ocupan un espacio más grande que el citoplasma dentro de la célula, creando una mayor proporción de núcleo a citoplasma en relación con las células epiteliales grandes. Utilice la objetivación inferior, como cuatro X para obtener una vista representativa de la disposición general de las celdas. Registre si las células están agrupadas, dispersas uniformemente o dispersas aleatoriamente, y anote la organización específica de cada tipo de célula.Luego, estime visualmente y registre la cantidad total de células, como una pizca, moderada o numerosa, y las cantidades de células individuales como un porcentaje de cada tipo de célula presente. Con estos componentes de categorización combinados, determine qué etapa del ciclo estral se presenta. Dentro de la etapa de diestro, se puede ver que los leucocitos son el tipo de célula dominante o el único.Estos generalmente se organizan de manera agrupada al comienzo de, pero más dispersos en las últimas etapas. La cantidad total de células puede ser comparativamente baja, con mayor frecuencia en las últimas etapas del período de diestro en el segundo o tercer día. Se pueden observar hebras concentradas de leucocitos debido a la alta cantidad de moco que puede estar presente en esta etapa.Se pueden observar pequeños grupos de hebras celulares de células SNE que acompañan a los leucocitos durante las últimas fases de la transición al proestro. El fluido vaginal, cuando se hace la transición, se hace la transición completa y se sale del diestro, parece viscoso y opaco. Durante la etapa de proestro, las células SNE son las células dominantes, mientras que los leucocitos, LNE y células AKE se pueden encontrar en números bajos.Las células SNE generalmente están dispuestas en grupos, láminas o hebras durante esta etapa y tienen una apariencia granular que se puede observar a mayor aumento. El fluido vaginal se vuelve no viscoso y transparente una vez que el sujeto pasa completamente a la etapa de proestro. Las células AKE son dominantes durante la etapa estral, con una disminución en las células SNE y un aumento general en el número y tamaño de las células a medida que continúa el estro.Las células AKE a menudo se agrupan en forma de barras de queratina. También pueden contener núcleos fantasmas que pueden dispersarse más en la transición del proestro al meteestro. El fluido vaginal no es viscoso y transparente a medida que las ratas están en transición, transición completa y transición fuera del estro.A medida que las ratas hacen la transición al metestro, busque todos los tipos de células, aunque a menudo hay una mayor cantidad de células SNE y LNE en comparación con las LEU. Se observa una mayor cantidad de desechos durante el metestro y las transiciones debido a la desintegración celular epitelial después del estro. Durante esta etapa, hay una falta de disposición consistente ya que se ven todos los tipos de células y en varias cantidades.Sin embargo, los leucocitos que se empaquetan cerca de las células epiteliales en las etapas iniciales pueden volver a la disposición agrupada cuando se hace la transición al diestro. El fluido vaginal aparece no viscoso y transparente en la etapa. Y cambia a una apariencia más viscosa y opaca mientras se pasa al diestro.Dentro de cada etapa, se pueden ver muchas variaciones, por ejemplo, dentro de la etapa de diestro, se observaron tanto células epiteliales como leucocitos. En los arreglos, también se observaron hebras de moco agrupadas, compuestas de leucocitos, y aglutinamiento inicial de leucocitos, y un posterior desembolso aleatorio o incluso de desembolso. Al recolectar la muestra de fluido vaginal, hubo colecciones no representadas que justificaron lavados repetidos, que incluyeron la extracción de células escamosas de la pared del canal vaginal debido a la inserción inadecuada de la jeringa.Una colección de escombros exclusivos, un recuento de células que era demasiado bajo para categorizar y aquellos que estaban fuera de foco. Es común graficar las progresiones de etapa en gráficos de barras, lo que permite a los investigadores examinar el patrón general del ciclo e identificar la ciclicidad. Y las muestras se pueden analizar por la duración del ciclo y el patrón de progresión de la etapa.Los perfiles de ciclo estral se pueden crear utilizando un gráfico de barras apiladas, ya sea rastreando la progresión de la etapa por rata o por cohorte. Donde los componentes de categorización para cada día se grafican por día o por etapa. Los datos del componente de categorización también se pueden organizar numéricamente para crear rangos estandarizados y recopilar estadísticas.Practique la técnica para que sea mínimamente invasiva y escanee el portaobjetos del microscopio en busca de muestras representativas para disminuir el sesgo de selección. En general, recuerde, no existe tal cosa como un ciclo normal. Siguiendo este procedimiento, se podrían introducir variables experimentales, como el ejercicio y los paradigmas conductuales.Esto permitiría a la investigación establecer de antemano el ciclo de referencia de los animales y detectar respuestas hormonales a intervenciones específicas posteriores. Este método permite a los investigadores explorar la conexión entre las hormonas esteroides sexuales y otros sistemas corporales. Un ejemplo de esto es cómo los receptores cardíacos para las hormonas esteroides sexuales se relacionan con la funcionalidad del sistema.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Seguimiento de las actividades de quinasa y fosfatasa través del ciclo celular por Proporcional FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Investigación

Biología

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Análisis de la posición del ciclo celular en células de mamífero

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Célula de medida Cinética la progresión del ciclo con el etiquetado metabólico y Citometría de Flujo

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Realizar el lavado de la vagina, tinción de cristal violeta y Evaluación citológica vaginal para ratón Celo identificación Staging Ciclo

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Sincronización de<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; Para la Investigación del Ciclo Celular Bacteriana

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Seguimiento temporal de la progresión del ciclo celular El uso de citometría de flujo sin la necesidad de sincronización

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Los enfoques experimentales para estudiar mitocondrial localización y función de un ciclo celular quinasa nuclear, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Aplicación de la codificados genéticamente fluorescente óxido nítrico (NO •) Probes, los geNOps, para imágenes en tiempo real de NO • Las señales en las células individuales

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Combina la sincronización celular mitótica y microscopia Confocal de alta resolución para estudiar el papel de las proteínas multifuncional ciclo celular durante la Mitosis

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Imágenes de células vivas del ciclo de vida del depredador bacteriavo Bdellovibrio mediante microscopía de fluorescencia Time-Lapse

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...