Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Denna studie genomfördes genom ett NIH-finansierat samarbete mellan University of California Los Angeles Brain Injury Research Center (BIRC).

Alla hanterings- och procedurmetoder som beskrivs i detta protokoll överensstämmer med National Institutes of Health (NIH) riktlinjer för djurvård och användning och har godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Pepperdine University och UCLA Chancellor's Animal Research Committee (ARC).
1. Djurvård och användning
<ol><li>Skaffa honråttor, i antal enligt kraftanalys, och hanråttor för att främja Whitten-effekten eller mer konsekvent cykling<sup class="xr...

Viktiga steg och viktiga överväganden Vissa kritiska steg i det tillhandahållna protokollet kräver betoning, särskilt inom samlingen av vaginala celler. Under vaginal vätskeutvinning är det viktigt att säkerställa rätt vinkel och djup för sprrutinsättning för att ge tillfredsställande resultat och i slutändan förhindra irritation, skada eller livmoderhalsstimulering till djuret. Stimuleringen av livmoderhalsen kan vara en källa till pseudogravinduktion, indikerad av 12-14 dagar av ett...

Nya bidrag Gnagarens estrouscykel har identifierats som en viktig indikator på välbefinnande. Men omedvetna fördomar hos utredare och felaktiga tolkningar om kvinnokroppen hindrar det vetenskapliga samfundet. Själva etymologin av ordet "estrous" innebär en känsla av underlägsenhet och negativitet. Euripides använde termen för att beskriva en "frenesi" eller galenskap, Homeros för att beskriva panik och Platon för att beskriva en irrationell drivkraft. Denna studie belyser hur dessa urtidsperspektiv påverkar det nuvarande vetenskapliga samfundet och tar itu med dessa problem genom ett nytt mosaikparadigm - en uppdaterad kombination av tidigare studerade metoder, utökad i omfattning för ett mer omfattande tillvägagångssätt.
Studien och användningen av denna teknik är nödvändig, för det första eftersom det inte finns någon standardiserad och omfattande övervakningsteknik, och datatolkningspraxis kan vara oklar. För det andra, även om estrous cykelegenskaper är beroende av att enskilda råttor studeras, är de ofta universaliserade. För det tredje, medan hormonella cykler är rutinmässiga och fördelaktiga processer, är de omgivna av farlig stigma som utforskas i avsnittet "Översättning till människor". Denna studie syftar till att ta itu med dessa tre frågor på tre sätt - (A) genom att beskriva en djupgående estrous cykelövervakningsteknik och klargöra hur resultaten kan tolkas, (B) genom att beskriva metoder som upprätthåller integriteten och individualiteten i varje cykel och (C) genom att uppmärksamma missuppfattningar som upprätthåller ogrundade metoder.
Denna studie är också unik i sitt fokus på tonårsråttor, en period som präglas av avgörande utvecklingsförändringar som belyser olika beteendemässiga, anatomiska och fysiologiska manifestationer i vuxen ålder1. Att bygga en standardiserad experimentell design för att övervaka hormonella cykler i en underbeforskad population samtidigt som man dekonstruerar vanliga fördomar kommer att möjliggöra utveckling av tillförlitliga och giltiga hormonella korrelationer 2,3,4 och bestämning av tillståndsberoende cykelstörningar 5,6,7,8,9,10 . I slutändan tjänar dessa nyheter till att utöka diagnostiska kriterier, behandlingar och interventioner av olika hälsoproblem.
Grundläggande definitioner och användningsområden Den estrouscykeln är en samling dynamiska fysiologiska processer som uppstår som svar på de tre oscillerande kvinnliga könssteroidhormonerna: östradiol, leuteiniserande hormon (LH) och progesteron (Figur 1A,B). Interaktioner mellan det endokrina och centrala nervsystemet reglerar cykeln, som oftast kvarstår i 4-5 dagar och återkommer från början av sexuell mognad till reproduktiv åldrande och / eller upphörande. Det är indelat i separata kategorier baserat på hormonnivåer - oftast i de 4 stadierna av diestrus (DIE), proestrus (PRO), estrus (EST) och metestrus (MET), som utvecklas på ett cirkulärt sätt. Antalet divisioner kan sträcka sig från 3 steg11 till 13 steg12, beroende på studiens art13. Det lägre antalet divisioner utesluter ofta MET som ett stadium och klassificerar det som en kortvarig övergångsperiod. Det högre antalet innehåller vanligtvis underavsnitt som möjliggör en närmare inspektion av fenomen som tumörutveckling eller spontan pseudograviditet, det fysiologiska tillståndet för graviditet utan embryonal implantation 12,14,15.
I denna studie identifierades stadierna genom komponenter i vaginalkanalen, som heter de 3 kategoriserande determinanterna-celltyperna närvarande, cellarrangemang och cellkvantitet (figur 2A-D). Medan tillståndet för vaginalvätskan inte övervakades i denna studie, rekommenderas det att inkludera det som en fjärde kategoriserande komponent. Mer information om undersökning av vaginalvätskan finns i referenslistan16. De kategoriserande komponenterna kan undersökas genom att extrahera celler via vaginal sköljning, den primära tekniken som rekommenderas i dagens estrouscykelövervakning. Medan de djupgående fysiologiska processerna inom varje steg ligger utanför ramen för denna studie, kan mer information hittas i litteraturen17.
Användningen och den fortsatta utvecklingen av denna estrous cykelövervakningsteknik är rotad i kopplingarna mellan könssteroidhormoner och funktionen hos kroppsliga system som hjärt-kärlsystemet18, endokrina systemet8 och centrala nervsystemet 19,20,21. Samtidigt är det inte alltid nödvändigt med övervakning av estrouscykeln när kvinnliga gnagare är inblandade 22,23,24,25. Snarare är det viktigt att först överväga om könsskillnader har rapporterats inom det specifika studieområdet, vilket kan undersökas ytterligare i publicerade recensioner22,23. Även om estrous cykelövervakning är avgörande i ett brett spektrum av forskningsundersökningar, bör det inte ses som ett hinder för att inkludera kvinnliga gnagare i experiment. Även om denna teknik kan verka komplex och tidskrävande, kan själva proceduren ta mindre än 15 minuter att slutföra, beroende på utredaren, och är kostnadseffektiv. Sammantaget är inkluderingen av kvinnliga gnagare i vetenskapliga studier fördelaktig för förståelsen av kroppssystem, olika tillstånd och patologier och allmänt välbefinnande, eftersom denna utveckling huvudsakligen har baserats på den manliga kroppsmallen.
Universella parametrar och naturliga variationer hos gnagaren Att fastställa intervall för aspekter som ses som "typiska" är nödvändigt för att definiera standardcykelmönster, ställa in parametrar för jämförande och analytiska ändamål och upptäcka avvikelser och avvikelser. Samtidigt är det också viktigt att inse att varje råttas cykel är unik, och avvikelser baserade på djurstam, fysiologiska processer och miljöförhållanden förväntas. Faktum är att en av de mest "normala" aspekterna av estrouscykeln är variabilitet. Detta ses i den totala cykellängden, med ett intervall på 3-38 dagar26,27; åldern för sexuell mognad som kan sträcka sig från 32-34 dagar till flera veckor 28,29,30; vad som anses varaacykliskt 11, och de kategoriserande determinantmönstren11,13. Sammantaget finns det ingen universell mall för estrouscykeln, och att översätta det till både det vetenskapliga samfundet och allmänheten är en viktig del av experimentprocessen.
Experimentella tidpunkter och utvecklingsålder Att erkänna denna princip om variabilitet hjälper till att bygga en pålitlig och giltig experimentell design. Till exempel är starten av estrous cykelövervakning beroende av råttornas anatomiska och fysiologiska utveckling, som varierar beroende på miljömässiga och fysiologiska faktorer. Övervakningen kan inte börja förrän utvecklingen av vaginalöppningen (VO), som är den yttre vaginala öppningen omgiven av vulva som leder till den inre delen av vaginalkanalen (figur 3A-D). Medan VO ofta utvecklas fullt ut mellan 32 och 34 dagar, förblir den individualiserad för varje ämne, och mycket om processen är fortfarande okänt. Denna öppning har använts för att identifiera uppkomsten av sexuell mognad, som har kopplats till ökningen av östradiol31, mognaden av hypotalamus-hypofys-äggstocksaxeln32 och den första ägglossningen hos råttor 17,33,34,35. Nya publikationer har dock funnit att det bara är en indirekt markör för reproduktiv utveckling, eftersom den kan bli frikopplad från hormonella och utvecklingshändelser i ogynnsamma miljöer31 och kan representera förändringar i östradiolnivåer snarare än sexuell mognad33. Därför rekommenderas det att inte förlita sig enbart på VO för att bestämma utvecklingsålder och som en kvalificerare för estrouscykelövervakning36 utan att också använda utseendet på det första EST-steget och kornifiering av epitelcellerna30 för att markera uppkomsten av sexuell mognad.
Kroppsvikt är särskilt korrelerad med utvecklingsålder under tonårsperioden hos gnagare30,37 och kan därför också hjälpa till att bestämma utvecklingsåldern under denna period. Föreslagna mekanismer relaterade till detta fenomen inkluderar stimulering av hormoner som är nödvändiga för reproduktiv utveckling, såsom tillväxthormon, och hämning av hypotalamus-hypofys binjure (HPA) -axeln av aptitregulatorn, leptin30. Det rekommenderas dock inte att använda detta mått som den enda indikatorn på utvecklingsålder på grund av den stora variationen som ses mellan råttor mellan arter och leverantörsleverantörer38. Variationen som ses i utvecklingen av VO och kroppsvikt exemplifierar konceptets betydelse i den övergripande experimentella processen.
Översättning till människor: kulturella och vetenskapliga sammanhang Det translationella förhållandet mellan reproduktionsstudier mellan djur och människa är dubbelriktat. Resultaten från djurbaserade studier påverkar hur de mänskliga processerna bedöms, närmar sig och analyseras39. Uppfattningen av det mänskliga reproduktionssystemet och dess relaterade processer påverkar hur djur studeras. Faktum är att en av de högsta indikationerna för vidare forskning på detta område härrör från partiska sociokulturella övertygelser relaterade till hormonella cykler som påverkar den vetenskapliga processen. Många av dessa konventioner härrör från en allmän kulturell aversion mot att diskutera menstruation, vilket har lett till en datalucka i väl underbyggd kunskap40,41. Detta har ett spektrum av konsekvenser som sträcker sig från mindre till dödliga - från hyllhöjd och smarttelefonstorlek till polisens kroppspansarmontering och missade cancerdiagnoser42.
Beskrivningen av menstruation som ohälsosam, destruktiv och giftig - sett i vördade texter, media, ordböcker och medicinska läror - bevaras av vetenskapliga publikationer. Detta sker genom felaktiga och partiska beskrivningar av hormonella cykler, isoleringen av reproduktionssystemet från dess neuroendokrina motsvarigheter och miljöpåverkan och det reduktionistiska perspektivet på slutförandet av en cykel som ett "misslyckande att bli gravid"43,44. Detta leder till skapandet av osunda experimentella metoder, såsom utelämnande av externa variabler som påverkar hormonella cykler, bestämning av start och slutpunkter baserade enbart på anatomisk utveckling och mätning av cykelframsteg på ett linjärt snarare än cirkulärt sätt. Trots den direkta korrelationen mellan sociokulturella faktorer och biologiska konsekvenser beaktas det inte ofta i vetenskaplig litteratur. Genom inspektion av mer holistiska publikationer 43,44,45 kan forskare dekonstruera dessa stigmas och skapa mer tillförlitliga och giltiga experimentella mönster.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

Den nuvarande metoden etablerar ett reproducerbart, standardiserat och kostnadseffektivt tillvägagångssätt för att övervaka estrouscykeln hos kvinnliga Sprague Dawley (SD) ungdomsråttor. Denna studie visar komplexiteten i hormonella cykler och det breda spektrum av förståelse som krävs för att konstruera en pålitlig och giltig övervakningsteknik. Genom en fördjupad undersökning av huvudsakliga experimentella design- och procedurelement ger denna beskrivning av cykeln och dess grundläggande principer en ram för ytterligare förståelse och dekonstruerar missuppfattningar för framtida replikering.
Tillsammans med en översikt över provinsamlingsprocessen som använder vaginal sköljning beskriver proceduren mekanismen för datakategorisering i fyrstegsmodellen av proestrus, estrus, metestrus och diestrus. Dessa steg kännetecknas av ett nytt föreslaget tillvägagångssätt, som använder de 4 kategoriserande determinanterna för vaginalt vätsketillstånd, närvarande celltyp (er), cellarrangemang och cellkvantitet vid tidpunkten för insamlingen. Variationer av varje steg, gynnsamma och ogynnsamma prover, skillnaden mellan cyklicitet och acyklicitet och grafiska skildringar av de insamlade kategoriseringskomponenterna presenteras tillsammans med effektiva tolknings- och organisatoriska metoder för data. Sammantaget möjliggör dessa verktyg publicering av kvantifierbara dataområden för första gången, vilket leder till standardisering av kategoriseringsfaktorer vid replikering.

De aktuella uppgifterna återspeglar de för kvinnliga ungdomar SD International Genetic Standardization Program (IGS) i närvaro av manliga SD-råttor. Dessa djur var belägna vid både Pepperdine University och UCLA laboratorier som en del av en samarbetsstudie. Figur 5 visar flera variationer av de 4 cykelstegen. Figur 5A1 identifierades som ett diestrusprov med flera celltyper närvarande. Detta exempel visar att prover med ett större antal...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Denna studie beskriver de avgörande faktorerna att tänka på i experimentella mönster som involverar honråttor. I en större mening tjänar dessa data till att minska stigmatiseringen och hjälpa till att utveckla mer inkluderande diagnostiska och interventionsverktyg.

Gnagare Estrous cykelövervakning med vaginal sköljning: Inget sådant som en normal cykel

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Detta protokoll är viktigt eftersom det ger både en omfattande och lågkostnadseffektiv teknik. Den svarar på viktiga delar av translationell forskning och kategoriserar komponentdata på både individ- och gruppnivå. Denna teknik är fördelaktig på grund av den totala mängden information som kan extraheras om djurets övergripande profil.Detta inkluderar kategoriseringskomponenterna och de efterföljande slutsatserna. Denna teknik kan ge insikt i ett brett spektrum av forskningsområden, inklusive kardiologi, neurologi och farmakologi. Denna teknik är inte enbart tillämplig på reproduktionsstudier.Börja med att hantera råttan med ett åldersanpassat grepp, till exempel kompressionsstilen för unga råttor, genom att placera motivet mot det övre bröstområdet med näsan riktad ner mot marken. Exponera motivets vaginala kanal genom att försiktigt böja svansen innan du sätter in sprutan. Medan du håller sprutan stadigt med framfingret och långfingret för in sprutans spets i vaginalkanalen i en vinkel parallellt med den, släpp långsamt ut natriumkloriden i kanalen genom att trycka kolven inåt med tummen.Extrahera natriumkloriden från vaginalkanalen genom att dra bort sprutans kolv från epitelfodret. Använd kriterierna för varje celltyp för att karakterisera cellerna i provet och registrera resultaten. En kärnbildad keratiniserad epitelial eller kvantifierad epitelceller kommer att se taggiga eller vinklade kantade ut.Trots bristen på kärnor kan det visa ljusa runda områden i cellen som representerar var en kärna en gång var närvarande som kallas spökkärnor. De stora kärnbildade epitel- eller LNE-cellerna är vanligtvis runda till polygonala celler inneslutna av oregelbundna taggiga eller vinklade gränser. Deras kärnor kan sträcka sig från intakta till degenererade eller pyknotiska relaterade till irreversibel kondensation av kromatin i kärnan i en cell som genomgår död eller försämring.Kärnorna tar mindre plats än cytoplasman i cellen, med ett lägre kärn- till cytoplasmatiskt förhållande än de små epitelcellerna. Leukocyter är kompakta sfäriska celler. Den minsta jämfört med alla andra beskrivna celltyper.SNE-celler är icke-keratiniserade celler med runda kärnor som tar upp ett större utrymme än cytoplasman inuti cellen, vilket skapar ett högre förhållande mellan kärna och cytoplasma i förhållande till stora epitelceller. Använd den lägre objektifieringen, till exempel fyra X för att få en representativ bild av det övergripande cellarrangemanget. Registrera om cellerna är klumpade ihop, jämnt dispergerade eller slumpmässigt dispergerade och notera den specifika organisationen för varje celltyp.Uppskatta och registrera sedan visuellt den totala cellmängden, som en smidge, måttlig eller många, och de enskilda cellmängderna i procent av varje närvarande celltyp. Med dessa kategoriserande komponenter kombinerade, bestäm vilket estrouscykelsteg som presenteras. Inom diestrusstadiet kan man se att leukocyter är den dominerande eller den enda celltypen.Dessa är vanligtvis ordnade på ett klumpigt sätt i början av, men mer spridda i sena skeden. Den totala mängden celler kan vara jämförelsevis låg, oftast i de senare stadierna av diestrusperioden på den andra eller tredje dagen. Koncentrerade strängar av leukocyter kan observeras på grund av den höga mängden slem som kan vara närvarande i detta stadium.Små klumpar av cellulära strängar av SNE-celler som åtföljer leukocyterna kan ses under sena faser i övergången till proestrus. Vaginalvätskan, när den övergår till, helt övergick till och övergår från diestrus, verkar viskös och ogenomskinlig. Under proestrusstadiet är SNE-celler de dominerande cellerna medan leukocyter, LNE och AKE-celler kan hittas i låga antal.SNE-celler är vanligtvis ordnade i kluster, ark eller strängar under detta stadium och har ett granulärt utseende som kan observeras vid högre förstoring. Vaginalvätskan blir icke-viskös och transparent när ämnet helt övergår till proestrusstadiet. AKE-cellerna är dominerande under estrous-stadiet, med en minskning av SNE-cellerna och en total ökning av antalet och storleken på celler när estrous fortsätter.AKE-cellerna är ofta grupperade i form av keratinstänger. De kan också innehålla spökkärnor som kan bli mer spridda i övergången från proestrus till metestrus. Vaginalvätskan är icke viskös och transparent när råttorna övergår till, helt övergår till och övergår från estrous.När råttorna övergår till metestrus, leta efter alla celltyper, även om det ofta finns en högre mängd SNE- och LNE-celler jämfört med LEUs. En större mängd skräp observeras under metestrus och övergångarna på grund av epitelcellens sönderfall efter estrous. Under detta skede saknas det konsekvent arrangemang eftersom alla celltyper ses och i olika mängder.Leukocyterna som är packade i närheten av epitelcellerna i början kan emellertid återgå till det klumpiga arrangemanget vid övergång till diestrus. Vaginalvätskan verkar icke viskös och transparent i scenen. Och ändras till ett mer visköst och ogenomskinligt utseende när du flyttar in i diestrus.Inom varje steg kan många variationer ses, till exempel inom diestrusstadiet observerades både epitelceller och leukocyter. I arrangemangen sågs också klumpiga slemsträngar, bestående av leukocyter och initial klumpning av leukocyter, och en senare slumpmässig eller till och med utbetalning. Vid insamling av vaginalvätskeprovet fanns det icke-representerade samlingar som motiverade upprepade sköljningar, vilket inkluderade extraktion av skivepitelceller från vaginalkanalväggen på grund av felaktig sprutinsättning.En samling enbart skräp, ett cellantal som var för lågt för att kategorisera och de som var ur fokus. Det är vanligt att grafera scenens progressioner på stapeldiagram, vilket gör det möjligt för forskare att undersöka det övergripande cykelmönstret och identifiera a-cyklinitet. Och proverna kan sedan analyseras med cykellängd och stegprogressionsmönster.Estrous cykelprofiler kan skapas med hjälp av ett staplat stapeldiagram, som antingen spårar stadiumprogressionen per råtta eller per kohort. Där de kategoriserande komponenterna för varje dag visas antingen per dag eller per steg. Kategoriseringen av komponentdata kan också organiseras numeriskt för att skapa standardiserade intervall och samla in statistik.Öva tekniken så att den är minimalt invasiv och skanna mikroskopglaset efter representativa prover för att minska selektionsförspänningen. Sammantaget, kom ihåg att det inte finns något sådant som en normal cykel. Efter denna procedur kan experimentella variabler introduceras, såsom tränings- och beteendeparadigmer.Detta skulle göra det möjligt för forskning att fastställa baslinjecykling av djur i förväg och att upptäcka hormonella svar på specifika ingrepp efteråt. Denna metod gör det möjligt för forskare att utforska sambandet mellan könssteroidhormoner och andra kroppssystem. Ett exempel på detta är hur hjärtreceptorer för könssteroidhormoner relaterar till systemfunktionalitet.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Övervakning Kinase och fosfatas verksamhet genom cellcykeln genom Propportionell FRET

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Analys av cellcykeln Position i däggdjursceller

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Mätning Cell Kinetics cellcykelreglering med metabolisk märkning och flödescytometri

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Utföra Vaginal Lavage, Crystal Violet färgning och vaginal Cytologisk utvärdering för mus estrous cykel Staging Identifiering

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synkronisering av<em&gt; Caulobacter Crescentus</em&gt; För utredning av bakteriecellcykeln

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Temporal Spårning av cellcykelprogression med användning av flödescytometri utan behov av synkronisering

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Experimentella metoder för att studera mitokondrie Lokalisering och funktion av en kärnteknisk Cell Cycle kinas, Cdk1

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Tillämpning av genetiskt kodade fluorescerande kväveoxid (NO •) sonder, de geNOps, i realtid avbildning av NO • Signaler i enskilda celler

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Kombinera mitotiska Cell synkronisering och hög upplösning konfokalmikroskopi att studera rollen av multifunktionella cellcykelns proteiner under Mitos

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging av livscykeln för bakteriell Predator Bdellovibrio bacteriovorus med hjälp av Time-Lapse Fluorescens mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...