Name: rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle
Uploaded: 2021-08-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Bu çalışma, Kaliforniya Üniversitesi Los Angeles Beyin Hasarı Araştırma Merkezi (BIRC) arasında NIH tarafından finanse edilen bir işbirliği ile gerçekleştirildi.

Bu protokolde özetlenen tüm kullanım ve prosedür yöntemleri, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hayvan bakımı ve kullanımı kılavuzlarıyla uyumludur ve Pepperdine Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) ve UCLA Şansölyesi Hayvan Araştırma Komitesi (ARC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvan bakımı ve kullanımı
<ol><li>Güç analizine göre sayılarla dişi sıçanlar ve Whitten etkisini veya daha tutarlı döngüyü teşvik etmek için erkek...

Önemli adımlar ve dikkat edilmesi gereken önemli noktalar Sağlanan protokoldeki bazı kritik adımlar, özellikle vajinal hücrelerin toplanmasında vurgu gerektirir. Vajinal sıvı ekstraksiyonu sırasında, şırınga yerleştirmenin uygun açısını ve derinliğini sağlamak, tatmin edici sonuçlar vermenin ve sonuçta hayvana tahriş, yaralanma veya servikal stimülasyonu önlemenin anahtarıdır. Serviksin uyarılması, 12-14 günlük lökosit içeren vajinalsmear 11 ...

Yeni katkılar Kemirgen östrus döngüsü, sağlığın temel bir göstergesi olarak tanımlanmıştır. Bununla birlikte, araştırmacıların bilinçsiz önyargıları ve kadın bedeni ile ilgili yanlış yorumlar, bilim camiasını engellemektedir. "Estrous" kelimesinin etimolojisi, aşağılık ve olumsuzluk duygusunu ima eder. Euripides bu terimi "çılgınlık" ya da deliliği, Homeros paniği ve Platon da irrasyonel bir dürtüyü tanımlamak için kullanmıştır. Bu çalışma, bu ilkel perspektiflerin mevcut bilimsel topluluğu nasıl etkilediğini vurgulamakta ve bu endişeleri, daha kapsamlı bir yaklaşım için kapsamı genişletilmiş, daha önce çalışılan yöntemlerin güncellenmiş bir kombinasyonu olan yeni bir mozaik paradigması aracılığıyla ele almaktadır.
Bu tekniğin incelenmesi ve kullanılması, öncelikle, standartlaştırılmış ve kapsamlı bir izleme tekniği olmadığı ve veri yorumlama uygulamalarının belirsiz olabileceği için gereklidir. İkincisi, östrus döngüsü özellikleri, çalışılan bireysel sıçanlara bağlı olmasına rağmen, genellikle evrenselleştirilmiştir. Üçüncüsü, hormonal döngüler rutin ve faydalı süreçler olsa da, 'İnsanlara Çeviri' bölümünde araştırılan tehlikeli damgalama ile çevrilidir. Bu çalışma, bu üç konuyu üç şekilde ele almayı amaçlamaktadır: (A) derinlemesine bir östrus döngüsü izleme tekniğini tanımlayarak ve sonuçların nasıl yorumlanabileceğini açıklığa kavuşturarak, (B) her döngünün bütünlüğünü ve bireyselliğini koruyan yöntemleri ana hatlarıyla belirterek ve (C) kanıtlanmamış uygulamaları sürdüren yanlış anlamalara dikkat çekerek.
Bu çalışma aynı zamanda, yetişkinlikte çeşitli davranışsal, anatomik ve fizyolojik belirtilere ışık tutan önemli gelişimsel değişikliklerle işaretlenmiş bir dönem olan ergen sıçanlara odaklanması bakımından da benzersizdir1. Ortak önyargıları yapıbozuma uğratırken, az araştırılmış bir popülasyonda hormonal döngüleri izlemek için standartlaştırılmış bir deneysel tasarım oluşturmak, güvenilir ve geçerli hormonal korelasyonların geliştirilmesine izin verecektir 2,3,4 ve duruma bağlı döngü bozulmalarının belirlenmesi 5,6,7,8,9,10 . Nihayetinde, bu yenilikler çeşitli sağlık endişelerinin tanı kriterlerini, tedavilerini ve müdahalelerini genişletmeye hizmet eder.
Temel tanımlar ve kullanımlar Östrus döngüsü, üç salınımlı kadın cinsiyet steroid hormonuna yanıt olarak ortaya çıkan dinamik fizyolojik süreçlerin bir koleksiyonudur: östradiol, lötenize edici hormon (LH) ve progesteron (Şekil 1A, B). Endokrin ve merkezi sinir sistemi arasındaki etkileşimler, çoğunlukla 4-5 gün boyunca devam eden ve cinsel olgunlaşmanın başlangıcından üreme yaşlanmasına ve / veya kesilmesine kadar tekrarlayan döngüyü düzenler. Hormon seviyelerine göre ayrı kategorilere ayrılır - en yaygın olarak dairesel bir şekilde ilerleyen diestrus (DIE), proöstrus (PRO), östrus (EST) ve metestusun (MET) 4 aşamasına ayrılır. Bölüm sayısı, çalışmanın niteliğine bağlı olarak 3 aşama11 ila 13 aşama12 arasında değişebilir13. Daha düşük sayıda bölüm genellikle MET'i bir aşama olarak hariç tutar ve kısa süreli bir geçiş dönemi olarak sınıflandırır. Daha yüksek sayı tipik olarak, tümör gelişimi veya spontan psödogebelik, embriyonik implantasyon olmadan gebeliğin fizyolojik durumu12,14,15 gibi fenomenlerin daha yakından incelenmesine izin veren alt bölümleri içerir.
Bu çalışmada, evreler, mevcut 3 kategorize edici determinant-hücre tipi (ler), hücre düzenlemesi ve hücre miktarı olarak adlandırılan vajinal kanalın bileşenleri aracılığıyla tanımlanmıştır (Şekil 2A-D). Bu çalışmada vajinal sıvının durumu izlenmemiş olsa da, dördüncü kategorize edici bileşen olarak dahil edilmesi önerilmektedir. Vajinal sıvının incelenmesi hakkında daha fazla bilgi referans listesi16'da bulunabilir. Kategorize edici bileşenler, günümüzde östrus döngüsü izlemede önerilen birincil teknik olan vajinal lavaj yoluyla hücrelerin çıkarılmasıyla incelenebilir. Her evredeki derinlemesine fizyolojik süreçler bu çalışmanın kapsamı dışında kalırken, literatürde daha fazla bilgi bulunabilir17.
Bu östrus döngüsü izleme tekniğinin kullanımı ve sürekli gelişimi, seks steroid hormonları ile kardiyovasküler sistem 18, endokrin sistem 8 ve merkezi sinir sistemi19,20,21 gibi vücut sistemlerinin işlevi arasındaki bağlantılara dayanmaktadır. Aynı zamanda, dişi kemirgenler22,23,24,25 dahil olduğunda östrus döngüsü izleme her zaman gerekli olmayabilir. Daha ziyade, öncelikle belirli bir çalışma alanında cinsiyet farklılıklarının rapor edilip edilmediğini düşünmek önemlidir, bu da yayınlanmış incelemelerde daha fazla araştırılabilir22,23. Efroz döngü izleme, geniş bir araştırma araştırması yelpazesinde hayati öneme sahip olsa da, dişi kemirgenlerin deneylere dahil edilmesinin önünde bir engel olarak görülmemelidir. Bu teknik karmaşık ve zaman alıcı görünse de, araştırmacıya bağlı olarak prosedürün tamamlanması 15 dakikadan az sürebilir ve uygun maliyetlidir. Genel olarak, dişi kemirgenlerin bilimsel çalışmalara dahil edilmesi, vücut sistemlerinin, çeşitli koşulların ve patolojilerin ve genel sağlığın anlaşılması için avantajlıdır, çünkü bu gelişmeler esas olarak erkek vücudu şablonuna dayanmaktadır.
Kemirgenlerde evrensel parametreler ve doğal değişkenlikler Standart döngü modellerini tanımlamak, karşılaştırmalı ve analitik amaçlar için parametreleri ayarlamak ve anormallikleri ve aykırı değerleri tespit etmek için "tipik" olarak görülen yönler için aralıklar oluşturmak gereklidir. Aynı zamanda, her sıçanın döngüsünün benzersiz olduğunu ve hayvan suşuna, fizyolojik süreçlere ve çevresel koşullara dayalı sapmaların beklendiğini bilmek de önemlidir. Aslında, östrus döngüsünün en "normal" yönlerinden biri değişkenliktir. Bu, 3-38 gün aralığında26,27 olan toplam döngü uzunluğunda görülür; 32-34 gün ile birden fazla hafta arasında değişebilen cinsel olgunlaşma yaşı28,29,30; döngüsel olmayan11 ve kategorize edici belirleyici kalıplar11,13 olarak kabul edilir. Genel olarak, östrus döngüsü için evrensel bir şablon yoktur ve bunu hem bilimsel topluluğa hem de genel halka çevirmek deneysel sürecin önemli bir parçasıdır.
Deneysel zaman noktaları ve gelişim yaşı Bu değişkenlik ilkesini tanımak, güvenilir ve geçerli bir deneysel tasarım oluşturmaya yardımcı olur. Örneğin, östrus bisiklet izlemenin başlangıcı, sıçanların çevresel ve fizyolojik faktörlere bağlı olarak değişen anatomik ve fizyolojik gelişimine dayanır. İzleme, vajinal kanalın iç kısmına giden vulva ile çevrili dış vajinal delik olan vajinal açıklığın (VO) gelişmesine kadar başlayamaz (Şekil 3A-D). VO genellikle 32 ila 34 günlük yaşlar arasında tamamen gelişirken, her bir konu için bireyselleştirilmiş kalır ve süreç hakkında çok şey bilinmemektedir. Bu açıklık, östradiol 31'in artışı, hipotalamik-hipofiz-yumurtalık ekseninin olgunlaşması 32 ve sıçanlarda ilk yumurtlama 17,33,34,35 ile bağlantılı olan cinsel olgunlaşmanın başlangıcını tanımlamak için kullanılmıştır. Bununla birlikte, son yayınlar, olumsuz ortamlarda hormonal ve gelişimsel olaylardan ayrılabileceği için üreme gelişiminin yalnızca dolaylı bir belirteci olduğunu bulmuştur31 ve cinsel olgunlaşmadan ziyade östradiol seviyelerindeki değişiklikleri temsil edebilir33. Bu nedenle, gelişimsel yaşı belirlemek için sadece VO'ya güvenilmemesi ve östrus döngüsü izleme36 için bir niteleyici olarak değil, aynı zamanda cinsel olgunlaşmanın başlangıcını işaretlemek için ilk EST aşamasının görünümünü ve epitel hücrelerininkornifikasyonunu 30 olarak kullanmanız önerilir.
Vücut ağırlığı,kemirgenlerde 30,37 ergenlik döneminde gelişim yaşı ile özellikle ilişkilidir ve bu nedenle bu dönemde gelişim yaşının belirlenmesinde de yardımcı olabilir. Bu fenomenle ilgili önerilen mekanizmalar, büyüme hormonu gibi üreme gelişimi için gerekli hormonların uyarılmasını ve iştah düzenleyicisi leptin30 tarafından hipotalamik-hipofiz adrenal (HPA) ekseninin inhibisyonunu içerir. Bununla birlikte, türler arasında sıçanlar ve satıcı sağlayıcılar arasında görülen büyük varyans nedeniyle bu önlemin gelişim yaşının tek göstergesi olarak kullanılması önerilmez38. VO ve vücut ağırlığının gelişiminde görülen değişkenlik, kavramın genel deneysel süreçteki önemini örneklemektedir.
İnsanlara çeviri: kültürel ve bilimsel bağlamlar Hayvan-insan üreme çalışmalarının translasyonel ilişkisi çift yönlüdür. Hayvan temelli çalışmalardan elde edilen sonuçlar, insan süreçlerinin nasıl değerlendirildiğini, yaklaşıldığını ve analiz edildiğini etkiler39. İnsan üreme sisteminin algılanması ve bununla ilgili süreçler, hayvanların nasıl çalışıldığını etkiler. Aslında, bu alanda daha fazla araştırma için en yüksek sesli göstergelerden biri, bilimsel süreci etkileyen hormonal döngülerle ilgili önyargılı sosyokültürel inançlardan kaynaklanmaktadır. Bu sözleşmelerin çoğu, menstrüasyonu tartışmaya yönelik genel bir kültürel isteksizlikten türetilmiştir ve bu da iyi kanıtlanmış bilgilerde bir veri boşluğuna yol açmıştır40,41. Bunun, raf yüksekliğinden ve akıllı telefon boyutundan polis vücut zırhı takılmasına ve kaçırılan kanser teşhislerine kadar küçükten ölümcüllüğe kadar uzanan bir dizi sonucu vardır42.
Menstrüasyonun sağlıksız, yıkıcı ve toksik olarak tanımlanması - saygın metinlerde, medyada, sözlüklerde ve tıbbi öğretilerde görülür - bilimsel yayınlar tarafından korunmaktadır. Bu, hormonal döngülerin yanlış ve önyargılı tanımları, üreme sisteminin nöroendokrin muadillerinden ve çevresel etkilerden izole edilmesi ve bir döngünün tamamlanmasının "gebe kalmama" olarak indirgemeci bakış açısıyla ortaya çıkar43,44. Bu, hormonal döngüleri etkileyen dış değişkenlerin ihmal edilmesi, yalnızca anatomik gelişmelere dayanarak başlangıç ve bitiş noktalarının belirlenmesi ve döngü ilerlemesinin dairesel değil doğrusal bir şekilde ölçülmesi gibi sağlam olmayan deneysel uygulamaların yaratılmasına yol açmaktadır. Sosyokültürel faktörler ve biyolojik sonuçlar arasındaki doğrudan korelasyona rağmen, bilimsel literatürde sıklıkla dikkate alınmamaktadır. Daha bütünsel yayınların incelenmesi yoluyla43,44,45, araştırmacılar bu damgaları yapıbozuma uğratabilir ve daha güvenilir ve geçerli deneysel tasarımlar oluşturabilirler.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5</td>
			<td>https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&#38;amp; 
			keywords=usb+camera+for+microscope&#38;amp; 
			qid=1572477663&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&#38;amp;sr=1-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>14-815-526</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed O Cob 1/8</td>
			<td>NEWCO</td>
			<td>93009</td>
			<td>https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Plain Microscope Slides Plain water-white glass</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-7A</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#8482; Rectangular Cover Glasses</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12-553-464</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional&#8482; Kimtech Science&#8482; Kimwipes&#8482; Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001&#160;</td>
			<td>NEWCO Specialty and LabDiet</td>
			<td>5012</td>
			<td>https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>36UX10</td>
			<td>https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_ 
			LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7 
			zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4 
			cQAvD_BwE&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696 
			!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;ef_id= 
			CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW 
			1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ 
			Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo 
			Ci4cQAvD_BwE:G:s&#38;s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&#38;cm_mmc= 
			PPC:+Google+PPC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%</td>
			<td>Live Action Safety</td>
			<td>ABB079830939</td>
			<td>https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Sterile 1ml&#160; with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH Supplies</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>ASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821</td>
			<td>https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&#38;amp; 
			keywords=1ml+sterile+syringe&#38;amp;qid= 
			1572478649&#38;amp;s=industrial 
			&#38;amp;sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&#38;amp;sr=1-1-spons&#38;amp;psc=1&#38;amp;spLa= 
			ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy 
			PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm 
			VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ 
			yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy 
			eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM 
			0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h 
			bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja 
			1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2 
			xpY2s9dHJ1ZQ==</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10&#34; X 19&#34; x 8&#34;H )Overall dimen</td>
			<td>Allentown</td>
			<td>LV40326013</td>
			<td>https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17&#39; x 24&#39; Disposable Underpad</td>
			<td>Medline</td>
			<td>EAN: 0480196288558 
			&#160;Global Trade Identification Number: 40080196288558</td>
			<td>https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&#38;amp;qid=1572475853&#38;amp; 
			sr=8-4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rodent estrous cycle monitoring utilizing vaginal lavage: no such thing as a normal cycle

Mevcut metodoloji, dişi Sprague Dawley (SD) ergen sıçanlarının östrus döngüsünü izlemek için tekrarlanabilir, standartlaştırılmış ve uygun maliyetli bir yaklaşım ortaya koymaktadır. Bu çalışma, hormonal siklusların karmaşıklığını ve güvenilir ve geçerli bir izleme tekniği oluşturmak için gereken geniş anlayış spektrumunu göstermektedir. Temel deneysel tasarım ve prosedürel unsurların derinlemesine incelenmesi yoluyla, döngünün bu tanımı ve temel ilkeleri, gelecekteki çoğaltma için yanlış anlamaları daha iyi anlamak ve yapıbozuma uğratmak için bir çerçeve sağlar.
Vajinal lavaj kullanan numune toplama sürecinin bir taslağı ile birlikte, prosedür, dört aşamalı proöstrus, östrus, metestrus ve diestrus modeline veri kategorizasyon mekanizmasını açıklar. Bu aşamalar, vajinal sıvı durumunun, mevcut hücre tiplerinin, hücre düzenlemesinin ve toplama sırasındaki hücre miktarının 4 kategorize edici belirleyicisini kullanan yeni bir önerilen yaklaşımla karakterize edilir. Her aşamanın varyasyonları, olumlu ve olumsuz örnekler, döngüsellik ve asiklik arasındaki ayrım ve toplanan kategorizasyon bileşenlerinin grafik tasvirleri, verilerin etkili yorumlayıcı ve örgütsel uygulamalarının yanında sunulmaktadır. Genel olarak, bu araçlar ölçülebilir veri aralıklarının ilk kez yayınlanmasına izin vererek çoğaltma üzerine kategorizasyon faktörlerinin standartlaştırılmasına yol açar.

Mevcut veriler, erkek SD sıçanlarının varlığında kadın ergen SD Uluslararası Genetik Standardizasyon Programı'nın (IGS) verilerini yansıtmaktadır. Bu hayvanlar, işbirlikçi bir çalışmanın parçası olarak hem Pepperdine Üniversitesi hem de UCLA laboratuvarlarında bulundu. Şekil 5, 4 döngü aşamasının çoklu varyasyonlarını sunmaktadır. Şekil 5A1, çeşitli hücre tiplerinin mevcut olduğu bir diestrus örneği olarak...

Watch this Scientific Journal Video about Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle at JoVE.com

Rodent Estrous Cycle Monitoring Utilizing Vaginal Lavage: No Such Thing As a Normal Cycle

Bu çalışma, dişi sıçanları içeren deneysel tasarımlarda göz önünde bulundurulması gereken önemli faktörleri detaylandırmaktadır. Daha geniş anlamda, bu veriler damgalamayı azaltmaya ve daha kapsayıcı teşhis ve müdahale araçlarının geliştirilmesine yardımcı olmaya hizmet eder.

Vajinal Lavaj Kullanarak Kemirgen Östrus Döngüsünün İzlenmesi: Normal Bir Döngü Olarak Böyle Bir Şey Yok

The current methodology establishes a reproducible, standardized, and cost-effective approach to monitoring the estrous cycle of female Sprague Dawley ...

Bu protokol, hem kapsamlı hem de düşük maliyetli zaman etkili bir teknik sağlaması bakımından önemlidir. Translasyonel araştırmanın temel unsurlarını ve bileşen verilerini hem bireysel hem de grup düzeyinde kategorize etmeyi yanıtlar. Bu teknik, hayvanın genel profili ile ilgili olarak çıkarılabilecek toplam bilgi miktarı nedeniyle avantajlıdır.Bu, kategorize edici bileşenleri ve sonraki sonuçları içerir. Bu teknik, kardiyoloji, nöroloji ve farmakoloji dahil olmak üzere çok çeşitli araştırma alanlarına bakış açısı sağlayabilir. Bu teknik sadece üreme çalışmaları için geçerli değildir.Sıçanı, ergen yaşlı sıçanlar için sıkıştırma stili tutuşu gibi yaşa uygun bir tutuşla ele alarak, konuyu burnu yere bakacak şekilde üst göğüs bölgesine yerleştirerek başlayın. Şırıngayı takmadan önce kuyruğu hafifçe bükerek konunun vajinal kanalını ortaya çıkarın. Şırıngayı işaret parmağı ve orta parmakla sabit tutarken, şırınganın ucunu vajinal kanala paralel bir açıyla yerleştirin, pistonu başparmağınızla içeri doğru iterek sodyum klorürü yavaşça kanala atın.Şırınganın pistonunu epitel astarından uzağa çekerek sodyum klorürü vajinal kanaldan çıkarın. Numunede bulunan hücreleri karakterize etmek ve bulguları kaydetmek için her hücre tipi için ölçütleri kullanın. Çekirdekli keratinize epitel veya kantifiye epitel hücreleri pürüzlü veya açısal kenarlı görünecektir.Çekirdek eksikliğine rağmen, hücre içinde bir zamanlar hayalet çekirdek adı verilen bir çekirdeğin bulunduğu yeri temsil eden hafif yuvarlak alanlar gösterebilir. Büyük çekirdekli epitel veya LNE hücreleri, tipik olarak düzensiz pürüzlü veya açısal sınırlarla çevrili poligonal şekilli hücrelere yuvarlaktır. Çekirdekleri, ölüm veya bozulma geçiren bir hücrenin çekirdeğindeki kromatinin geri dönüşümsüz yoğunlaşmasıyla ilgili olarak bozulmamıştan dejenere veya piknotik olarak değişebilir.Çekirdekler, hücre içindeki sitoplazmadan daha az yer kaplar ve küçük epitel hücrelerinden daha düşük bir nükleer-sitoplazmik orana sahiptir. Lökositler kompakt küresel hücrelerdir. Tanımlanan diğer tüm hücre tipleriyle karşılaştırıldığında en küçüğü.SNE hücreleri, hücre içindeki sitoplazmadan daha büyük bir yer kaplayan yuvarlak çekirdekli keratinize olmayan hücrelerdir ve büyük epitel hücrelerine göre daha yüksek bir çekirdek-sitoplazma oranı oluşturur. Genel hücre düzenlemesinin temsili bir görünümünü elde etmek için dört X gibi daha düşük nesneleştirmeyi kullanın. Hücrelerin bir araya toplanmış, eşit dağılmış veya rastgele dağılmış olup olmadığını kaydedin ve her hücre türünün belirli organizasyonunu not edin.Ardından, toplam hücre miktarını, bir leke, orta veya sayısız olarak ve bireysel hücre miktarlarını mevcut her hücre türünün bir yüzdesi olarak görsel olarak tahmin edin ve kaydedin. Bu kategorize edici bileşenler bir araya getirildiğinde, hangi östrus döngüsü aşamasının sunulduğunu belirleyin. Diestrus evresinde lökositlerin baskın veya tek hücre tipi olduğu görülebilir.Bunlar tipik olarak başlangıçta kümelenmiş bir şekilde düzenlenir, ancak geç aşamalarda daha dağınıktır. Toplam hücre miktarı, çoğunlukla ikinci veya üçüncü günde diestrus döneminin sonraki aşamalarında, nispeten düşük olabilir. Bu aşamada mevcut olabilecek yüksek miktarda mukus nedeniyle konsantre lökosit iplikçikleri gözlenebilir.Lökositlere eşlik eden SNE hücrelerinin hücresel iplikçiklerinin küçük kümeleri, proöstrusa geçişin geç evrelerinde görülebilir. Vajinal sıvı, diestrusa geçiş yaparken, tamamen geçiş yaparken ve diestrustan çıkarken, viskoz ve opak görünür. Proöstrus evresinde, SNE hücreleri baskın hücrelerdir, lökositler, LNE ve AKE hücreleri düşük sayılarda bulunabilir.SNE hücreleri tipik olarak bu aşamada kümeler, tabakalar veya iplikçikler halinde düzenlenir ve daha yüksek büyütmede gözlemlenebilen granüler bir görünüme sahiptir. Vajinal sıvı, konu proöstrus aşamasına tamamen geçtikten sonra viskoz olmayan ve şeffaf hale gelir. AKE hücreleri, östrus aşamasında baskındır, SNE hücrelerinde bir azalma ve östrus devam ettikçe hücrelerin sayısında ve boyutunda genel bir artış vardır.AKE hücreleri genellikle keratin çubukları şeklinde kümelenir. Ayrıca proöstrustan metestrusa geçişte daha dağınık hale gelebilecek hayalet çekirdekler de içerebilirler. Vajinal sıvı viskoz değildir ve şeffaftır, çünkü sıçanlar estrousa geçiş yapar, tamamen geçiş yapar ve dışarı çıkar.Sıçanlar metestrusa geçerken, tüm hücre tiplerini arayın, ancak LEU'lara kıyasla genellikle daha yüksek miktarda SNE ve LNE hücresi vardır. Metestrus sırasında daha fazla miktarda enkaz gözlenir ve östrusu takiben epitel hücre çürümesine bağlı geçişler gözlenir. Bu aşamada, tüm hücre tipleri görüldüğü ve çeşitli miktarlarda olduğu için tutarlı bir düzenleme eksikliği vardır.Bununla birlikte, başlangıç aşamalarında epitel hücrelerine yakın olarak paketlenen lökositler, diestrusa geçerken kümelenmiş düzenlemeye geri dönebilir. Vajinal sıvı aşamada viskoz olmayan ve şeffaf görünür. Ve diestrusa geçerken daha viskoz ve opak bir görünüme dönüşür.Her aşamada, örneğin diestrus aşamasında, hem epitel hücreleri hem de lökositler gözlenen birçok varyasyon görülebilir. Düzenlemelerde, lökositlerden oluşan kümelenmiş mukus iplikçikleri ve lökositlerin ilk kümelenmesi ve daha sonra rastgele veya hatta bir ödeme de görülmüştür. Vajinal sıvı örneğini toplarken, yanlış şırınga yerleştirilmesi nedeniyle vajinal kanal duvarından skuamöz hücrelerin ekstraksiyonunu içeren tekrarlanan lavajları garanti eden temsil edilmeyen koleksiyonlar vardı.Sadece enkaz koleksiyonu, kategorize edilemeyecek kadar düşük bir hücre sayısı ve odak dışı olanlar. Evre ilerlemelerini çubuk grafikler üzerinde grafiklendirmek yaygındır, bu da araştırmacıların genel döngü modelini incelemelerine ve a-döngüselliği tanımlamalarına olanak tanır. Ve örnekler daha sonra döngü uzunluğu ve aşama ilerleme paterni ile analiz edilebilir.Östrus döngüsü profilleri, sıçan başına veya kohort başına aşama ilerlemesini izleyen yığılmış bir çubuk grafik kullanılarak oluşturulabilir. Her gün için kategorilere ayırma bileşenlerinin günlük veya aşama başına grafiklendirildiği yer. Bileşen verilerini kategorilere ayırma, standartlaştırılmış aralıklar oluşturmak ve istatistik toplamak için sayısal olarak da düzenlenebilir.Tekniği minimal invaziv olacak şekilde uygulayın ve seçim yanlılığını azaltmak için temsili numuneler için mikroskop slaytını tarayın. Genel olarak, unutmayın, normal bir döngü diye bir şey yoktur. Bu prosedürü takiben, egzersiz ve davranışsal paradigmalar gibi deneysel değişkenler tanıtılabilir.Bu, araştırmanın önceden hayvanların temel döngüsünü oluşturmasına ve daha sonra belirli müdahalelere hormonal tepkileri tespit etmesine izin verecektir. Bu yöntem, araştırmacıların seks steroid hormonları ve diğer vücut sistemleri arasındaki bağlantıyı keşfetmelerini sağlar. Bunun bir örneği, seks steroid hormonları için kardiyak reseptörlerin sistem işlevselliği ile nasıl ilişkili olduğudur.

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Kinase and Phosphatase Activities Through the Cell Cycle by Ratiometric FRET

Hücre Döngüsü FRET oranlı metrik sayesinde Kinaz ve Fosfataz Aktiviteleri İzleme

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET)-based reporters1 allow the assessment of endogenous kinase and phosphatase activities in living cells. Such ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Memeli Hücreler, Hücre Döngüsü Pozisyon Analizi

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Metabolik Etiketleme ve Flow Sitometri ile Hücre Döngüsü İlerleme Kinetik Ölçüm

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Synchronization of Caulobacter Crescentus for Investigation of the Bacterial Cell Cycle

Senkronizasyon<em&gt; Caulobacter crescentus</em&gt; Bakteriyel Hücre Döngüsü Soruşturma

The cell cycle is important for growth, genome replication, and development in all cells.  In bacteria, studies of the cell cycle have focused largely on ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

Senkronizasyon Need for olmadan Akım Sitometri Kullanımı Hücre Döngüsü ilerleme zamansal İzleme

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

Experimental Approaches to Study Mitochondrial Localization and Function of a Nuclear Cell Cycle Kinase, Cdk1

Deneysel Yaklaşımlar Mitokondriyal Yerelleşme ve Nükleer Hücre Döngüsü Kinaz, Cdk1 Fonksiyonu Eğitim için

Although mitochondria possess their own transcriptional machinery, merely 1% of mitochondrial proteins are synthesized inside the organelle. The ...

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide (NO&#8226;) Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NO&#8226; Signals in Single Cells

Application of Genetically Encoded Fluorescent Nitric Oxide NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Probes, the geNOps, for Real-time Imaging of NOÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬Ãƒâ€šÃ‚Â¢ Signals in Single Cells

Genetik Kodlanmış Floresan Nitrik Oksit Uygulama (• NO) Tek Hücrelerde YOK • Sinyallerin Gerçek zamanlı Görüntüleme için sondalar, geNOps,

Nitric Oxide (NO&#8226;) is a small radical, which mediates multiple important cellular functions in mammals, bacteria and plants. Despite the existence ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

Mitotik hücre eşitleme ve yüksek çözünürlüklü Confocal mikroskobu mitoz sırasında çok fonksiyonlu hücre döngüsü proteinlerin rolü çalışmaya birleştirme

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Zaman Atlamalı Floresan Mikroskopi kullanarak Bakteriyel Predator Bdellovibrio bakteriovorus Yaşam Döngüsünün Canlı Hücre Görüntüleme

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...